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MARCOS
Universidad del Per, DECANA DE AMRICA
FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUMICA
Departamento Acadmico de Qumica Bsica y
Aplicada
Profesora:
Dra. Norma Anglica Carlos Casas
Alumnos:
Chipana Lujn, Jaime Roberto
Limay De La Cruz, Edwin Carlos
Surez Su, Luis Alfredo
Lima
2015
I.-Introduccin
Determinacin de vitamina C
El cido ascrbico o vitamina C (C6H8O6) se puede determinar por medio de una
titulacin yodomtrica. La vitamina C es un agente reductor suave que reacciona
rpidamente con el in
-
triyoduro, en esta prctica se genera un exceso conocido de ion triyoduro (I3 ) por
reaccin de
yodato con yoduro, se deja reaccionar y luego el exceso de I3
- se titula por retroceso con una
solucin de tiosulfato. El mtodo se basa en las siguientes reacciones:
cido deshidroascrbico
tetrationato
I2 (s) + I- I3Experimentalmente se
ha comprobado que la
proporcin
ms
adecuada de KI e I2
para la disolucin de I2 es 20g de KI por cada 12.7gr de I2.
La valoracin de los analitos reductores se hace en medio cido o n eutro. Los
reductores fuertes como, los iones sulfuro, sulfito y tiosulfato se determinan en medio
cido. Los reductores un poco ms dbiles como los compuestos de arsnico (III) y
antimonio (III) se determinan en medio neutro.
Facultad de Farmacia y Bioqumica
Universidad Nacional Mayor de San Marcos
SO3= + H2O -> 2H + + SO4= + 2eI2 (s) + 2e- -> 2IControl de corrosin en lodos de
perforacin. La corrosin es el ataque
destructivo de un metal, causada por
una reaccin qumica o electroqumica
entre un metal y su ambiente.
Las causas principales de la corrosin
en las operaciones de perforacin son el oxgeno, el dixido de carbono, y el cido
sulfihdrico contenidos en el lodo. Cualquiera que sea su mecanismo de entrada, el
efecto corrosivo de esos gases es tambin una funcin de la cantidad de sales
disueltas, del pH, de la temperatura y de la velocidad de flujo del fluido involucrado.
Facultad de Farmacia y Bioqumica
Universidad Nacional Mayor de San Marcos
Clasificacin taxonmica
Divisin: Magnoliophyta
Clase: Magnoliopsida
Subclase. Magnolidae
Orden: Ranunculales
Familia: Berberidaceae
Gnero: Berberis
Especie: Berberis flexulosa R. & P.
Nombre vulgar: ayrampo
II.- Obejtivo
Determinar la cantidad de cido ascrbico presente en el extracto de Berberis
flexulosa ayrampo
IV.- Metodologa
V. Resultados
Preparacin de soluciones
Para KIO3 0,01 N (PM=214,001 g/mol)
Se pes 0,1071 g en balanza analtica, se agreg esta masa a una fiola de 50 mL y se
enras con agua destilada c.s.p. 50 mL.
0,1071 g de KIO3
10
Para almidn al 1%
Se pes 1,0002 g de almidn en balanza analtica y se agreg en una fiola de 100 mL y
se agreg agua destilada c.s.p. 100 mL.
1,0002 g de almidn
11
Na2S2O3
Gasto: 10,3 mL
1g de KI
10 mL KIO3 0,01 N
3mL H2SO4
2mL de almidn 1%
12
Ecuaciones en la titulacin
Gasto: 6,5 mL
3mL de extracto
10 mL KI 0,01 N
3mL H2SO4
2mL de almidn 1%
13
-3
+ I- I 3-
Es este triyoduro el cual es titulado por el tiosulfato, de manera que como el yodo
generado es proporcional a la cantidad de muestra oxidante se puede determinar la
equivalencia: #mEq Na2S2O3 = #mEq I2 = #mEq M.P.
14
VI.- Discusin
VII.- Conclusiones
15
IX.- Anexos
Docente:
Dr. CARLOS CASAS, Norma
INDICE
IDENTIFICACION DE ANTIOCIANINAS POR EL METODO DE HPLC......................3
INTRODUCCION ..................................................................................................... 3
OBJETIVOS............................................................................................................. 3
MARCO TERICO .................................................................................................. 4
I.
HPLC .......................................................................................................... 5
METODOLOGIA ...................................................................................................... 6
I.
SOLVENTES .................................................................................................. 6
OBJETIVOS
MARCO TERICO
I.
Arbusto conocido del centro del Per, de la vertiente del Pacfico y de valles
interandinos, en ambientes semixricos. El tipo de esta especie fue recolectada en la
cuenca alta del ro Huaura, una zona escasamente herborizada. Otras poblaciones
provienen de las cuencas del Santa, Palca y Rimac. Una de las poblaciones es
conocida de las laderas con bosques perennifolios en las alturas de Lima. Estas
laderas incluyen varios endemismos y deberan recibir atencin para su
conservacin.
II.
ANTOCIANINAS
III.
HPLC
METODOLOGIA
I.
SOLVENTES
Los frutos secos congelados de Lechler (2,996 g) fueron separados de sus semillas;
siendo licuados con una solucin agua /acetona (30:70 v/v) y luego se filtr usando
un embudo buchner. La torta residual del filtrado fue nuevamente re-extrada con la
solucin agua /acetona (30: 70 v/v) hasta obtener una solucin clara. Los filtrados
fueron combinados, llevados a una pera de decantacin, agregndose cloroformo.
La porcin acuosa (parte superior) fue colectada y colocada en un rotavapor Bchi a
40C durante 5 a 10 minutos, hasta que la acetona residual se evapora. El extracto
acuoso fue llevado hasta un volumen conocido (100mL) usando agua destilada.
Se extraen con metanol y los extractos resultantes se tratan con 0.1 % HCL. Los
compuestos no polares y flavonoides se separan mediante tratamientos sucesivos
con ter de petrleo y acetato de etilo. La solucin resultante se analiza en una
columna Bondapak C 18 (30 cm x 8 mm d.i.) usando una fase mvil compuesta de
agua/ cido actico/ metanol (71: 10:10) a un flujo de 1.5 mL/ min y la deteccin se
realiza a 530 nm. La delfidina 3.5 diglucsido y la malvidina glucsido fueron los
pigmentos mayoritarios encontrados en las cscaras de uvas, para un 69 % del
contenido total de las antocianinas. Este mtodo puede ser usado para determinar el
contenido de antocianinas en cualquier tipo de fruto o alimento.
El HPLC es el mtodo ms comn para realizar el anlisis de antocianinas. La
muestra fue semipurificada usando un cartucho C-18 y la fraccin fenlica
(conteniendo antocianinas) fue eluida con metanol acidificado con HCl 1%; se
evapor el metanol en un rotavapor Bchi, se utiliz agua acidificada con HCl 0,01%
para lograr un volumen conocido y se filtr usando un filtro de polipropileno
Whatman de 0,45 m antes de la inyeccin en el equipo HPLC.
II.
COLUMNAS
III.
DETERMINACIN
DE
LAS
ANTOCIANINAS
POR
CROMATOGRAFA LQUIDA DE ALTA RESOLUCIN (HPLCPDA)
IV.
DETERMINACIN
DE
LAS
ANTOCIANINAS
POR
CROMATOGRAFA LQUIDA DE ALTA RESOLUCIN (HPLCMS/MS)
RESULTADOS
Al someter el hidrolizado a un anlisis HPLC, se verific la presencia de 5 aglicones;
simultneamente, se realiz la hidrlisis y posterior anlisis HPLC de un extracto
concentrado de antocianinas, Vitis vinifera (Uva) para tener patrones de
comparacin que nos ayuden a identificar los picos del cromatograma. Todas las
muestras fueron analizadas bajo las mismas condiciones.
Al comparar los cromatogramas (figura 1), el perfil de elucin de las antocianidinas
presentes Berberis flexuosa R. & P. coincide exactamente con los frutos de Vitis
vinfera, que es una fuente muy conocida y bien estudiada de 5 aglicones: cianidina,
delfinidina, malvidina, peonidina y petunidina. Asimismo, se pudieron identificar slo
5 antocianinas como se muestra en el cromatograma, estas son: delfinidina-3glucsido, cianidina-3-glucsido, petunidina-3-glucsido, peonidina-3-glucsido y
malvidina-3-glucsido.
Berberis flexuosa R. & P.
10
Vitis vinfera
Imagen 06. Los cromatogramas obtenidos a diferentes longitudes de onda, nos muestra que
las antocianinas presentes en los frutos de Berberis flexuosa R. & P, estn casi puras,
debido a que a 280nm (C),que es longitud de onda a la cual se pueden identificar otros
11
componentes fenlicos slo aparecen las antocianinas, por lo que se puede considerar a
estos frutos como una fuente casi pura de antocianinas.
CONCLUSIONES
Se obtuvo antiocianinas del ayrampu por el mtodo de HPLC
Se demostr y cuantifico las antiocianinas del ayrampu por los mtodos de
HPLC- MS/MS y HPLC-PDA.
Se compar las antiocianinas del ayrampu con la uva por el mtodo de HPLCMS/MS.
12
ANEXOS
FICHA DE CLASIFICACION TAXONMICA DE LA MUESTRA VEGETAL
13
REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS
Miranda A, Martn O. Cromatografa Lquida (HPLC). [WebSite] [Disponible
en:
http://www.ucm.es/data/cont/docs/650-2013-12-02gases%20l%C3%ADquidos.pdf] [Citado el 24 de noviembre 2015]
Leal Guadarrama,
Esquivel
Soto.
CROMATOGRAFA
DE
FASE REVERSA.
UNAM
2004.
[WebSite]
[Disponible
en:
http://www.ibt.unam.mx/computo/pdfs/met/cromatografia_de_fase_reversa.
pdf] [Citado el 24 de noviembre 2015]
Lpez Ramrez, Winston Quiones, Fernando Echeverri. PERFIL
CROMATOGRFICO DE LAS ANTOCIANINAS PRESENTES EN
ALGUNOS FRUTOS COLOMBIANOS. Scientia et Technica Ao XIII, No
33, Mayo de 2007
Aguilera Ortz, Reza Vargas, Chew Madinaveitia, Meza Velzquez.
PROPIEDADES FUNCIONALES DE LAS ANTOCIANINAS. Facultad de
Ciencias Qumicas. Universidad Jurez del Estado de Durango. Av.
Artculo 123 s/n. Fracc. Filadelfia. 35010. Gmez Palacio, Durango,
Mxico.
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Y COMPUESTOS BIOACTIVOS. Acta biol. Colomb., Vol. 13 No. 3, 2008.
Biswas, G; Sarkar, S.; Chatterjee, T.K.; Mukherjee, S.P. Determination of
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quantitative and qualitative pigment composition of juices from 39
genotypes. J. Sci. Food. Agric. 64 (1): p. 31-37, 1994.
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13(2): 171s - 173s (Diciembre 2006). Carmen Ulloa Ulloa , Abundio
Sagstegui e Isidoro Snchez. El libro rojo de las plantas endmicas del
Per. Ed.: Blanca Len et al. Facultad de Ciencias Biolgicas UNMSM
14
1L de Etanol de 70
Cloruro de potasio al 25 %
Pipeta de 10 mL.
Bureta de 10 mL
Bureta de 50 mL
Mtodos
2
2. Mtodo de anlisis
El mtodo de anlisis para la
determinacin
de
calcio
espectrofotmetro de absorcin atmica.
Para la realizacin de este trabajo, se
inici con una revisin documental del
mtodo, posteriormente se hicieron
ensayos con patrones y muestras con el
objeto
de
operar
el
equipo
adecuadamente.5
2.1 Procedimiento estndar
Se prepararn sustancias patrn para
la curva de calibracin de calcio a
las cuales se le agregara cido
ntrico al 65% para la conservacin
de la muestra y cloruro de potasio al
25% para evitar las interferencias de
otros analitos en la lectura de las
muestras, a la muestra (muestra
natural) que se le va a medir calcio
6. Digestin de la muestra
Moler y homogeneizar la muestra.3 Si la
digestin es muy fuerte puede
presentarse prdida de muestra y por
consiguiente de analito o se puede
presentar sequedad de la muestra y el
analito queda adherido al envase
contenedor y se ocasione disminucin en
su concentracin.6
7. Medicin por Espectrofotometra de
Absorcin Atmica:
Antes de realizar la determinacin de la
muestra mediante Absorcin atmica
debemos
verificar
el
buen
funcionamiento del equipo a utilizar.
Para ello debemos calibrar el equipo
8. Parmetros instrumentales para la
determinacin de Calcio
Longitud de Onda (): 422.7 nm.
Ancho de Banda: 0.5 nm.
Corriente de lmpara (CH):
100% uso normal.
Correccin de Fondo: Ninguno
Tipo de llama recomendada:
xido Nitroso/Acetileno*.
Intervalo flujo de combustible:
4.0 a 4.4 L/min.
*Se recomienda la utilizacin de este
tipo de llama puesto que este elemento
(calcio - Ca) tiene un punto de ebullicin
muy alto y puede formar xidos con el
aire muy estables y difciles de disociar,
por lo que este tipo de llama provee una
temperatura entre (2500 a 3100) C
capaz de romper los enlaces formados
por este elemento y el aire (oxigeno) y
as poder cuantificar calcio en su estado
inico elemental.6
RESULTADOS
5
PRUEBA
ESPECIFICACIN
MTODO
RESULTADO
3,25 mg
CUANTIFICACIN:
ABSORCIN
CALCIO
ATMICA
Ca/100ml de
extracto
etanlico de
Ayrampo
DISCUSIN
CONCLUSIN
Es importante la determinacin y
cuantificacin del Calcio en especies
vegetales que posiblemente tengan un
contenido ptimo de calcio para as
poder aprovechar las ventajas de este
mineral al consumir plantas como la
Berberis Flexuosa conocida como
Ayrampo.
Se determin y cuantifico el calcio por
espectroscopia de absorcin atmica en
la muestra de Berberis Flexuosa que
tiene un valor de 3,25 mg Ca/100Ml de
extracto etanlico.
Al determinar la existencia de calcio
en la Berberis Flexuosa es posible
aprovechar estos datos para as poder
6
2.
3.
4.
5.
6.
7.
2015
OBJETIVOS
Introduccin
METODOLOGA
1. MATERIALES
INSTRUMENTOS
Fiola de100 ml
Fiola de 25 ml
Pipetas de 5ml y 1 ml
Espectrofotmetro Uv vis
Celdas de vidrio
Celdas de cuarzo para Uv - visible
Agua destilada
SOLVENTES
Cloruro de aluminio
Metanol
HCl 1N
Metoxido de sodio
PARTE EXPERIMENTAL
1. EXTRACCIN DE ANTOCIANINAS
Para la extraccin de antocianinas del fruto
de Berberis flexuosa ms conocida como
ayrampo se pes 100 g para macerarlo
en etanol 76 se dej reposar por 2 das,
se redujo el tamao para maximizar el nivel
de extraccin, se procedi a filtrar
el
licuado, conservando el extracto en frascos
ambar y cubiertos alejados de la luz, para
que las antocianinas no se desnaturalicen
por la presencia de stas.
Extracto de
Berberis flexuosa
Secadora
Extracto en estufa a 30C
Espectrofotmetro marca
Genesys modelo 100S UVVisible
Metanol
Tricloruro de
aluminio (AlCl3) al
5% en metanol
HCl 1N
3. ANLISIS ESPECTRAL
Se preparan 2 celdas de cuarzo una usada para la muestra
matriz antes de su uso se lava con unos pocos ml de la
solucin de reserva matriz y para la solucin blanco se
vierte 10 ml de metanol, el espectro muestra un pico a 535
nm con una absorcin de 0.755.
Medicin de volumen de
flavonoide
Medicin de metanol
RESULTADOS
Como consecuencia de las interacciones soluto disolvente se originan con
frecuencia desplazamientos espectrales, ensanchamientos de bandas y otros
fenmenos que pueden provocar desviaciones en la ley de Beer. En este
sentido, no es posible hacer predicciones de forma general. nicamente
mencionar algunos trminos relacionados con los desplazamientos espectrales:
desplazamiento batocrmico o desplazamiento hacia el rojo, consiste en un
desplazamiento del mximo de absorcin hacia longitudes de onda mayores
(este efecto suele producirse en disolventes de alta constante dielctrica).
Desplazamiento hipsocrmico o desplazamiento hacia el azul, es el
desplazamiento hacia longitudes de onda ms cortas.
Discusiones:
Figura 1
Figura 2
CONCLUSIONES
1. Las antocianinas presentan el mximo de absorcin cerca de 500550nm, las cuales tuvieron un movimiento batocrmico o
hipsocrmico al momento de aadir los reactivos conocidos como
tambin como solventes. Los cuales determinaron un desplazamiento
a nivel de la banda de absorcin. Las cuales varan con el pH del
medio y esto permite la determinacin de antocianinas.
REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS
ed.
Domnguez. Mtodos de
Proyecto Ciencia,1973.
ed.
investigacin
Fitoquimica,1