Introduccin

La esterilizacin es la eliminacin o muerte de todos los organismos vivos de un

material,

incluyendo

endosporas

(enlace)

bacterianas.

No

hay

grados

de

esterilizacin; un material est estril o no lo est. Para trabajar en el laboratorio de

Microbiologa es necesario que todo el material est estril y no vuelva a
contaminarse. Solo es posible manejando los microorganismos con tcnicas
aspticas
Los mtodos de esterilizacin se diferencian por los agentes esterilizantes
utilizados: se puede esterilizar matando los microorganismos o separndolos del
fluido en el que se encuentren (aire o lquidos). Para matar a los microorganismos
se pueden emplear: agentes fsicos (como calor o radiaciones) agentes qumicos
(como el xido de etileno). Para separarlos del aire o lquidos se emplea la filtracin
La prctica habitual del laboratorio emplea la esterilizacin por mtodos fsicos por
lo que sus mtodos se describen con detalle. La esterilizacin por mtodos qumicos
requiere de equipamiento especial. Los utensilios que deben esterilizarse con
agentes qumicos suelen comprarse esterilizados. Sigue una breve descripcin de la
esterilizacin con xido de etileno, el agente qumico ms comn.

Esterilizacin
La esterilizacin es la destruccin total de todos los microorganismos, incluyendo
las formas ms resistentes como las esporas bacterianas, las microbacterias, los
virus sin envoltura y los hongos
Esto se puede conseguir utilizando esterilizantes fsicos, vapor de gas o qumicos
Los esterilizantes fsicos
Como el vapor hmedo y seco son los mtodos de esterilizacin ms usados en los
hospitales y estn indicados en todos los materiales excepto aquellos sensibles al
calor.
La filtracin es til para eliminar bacterias y hongos del aire. No pueden eliminar
virus y algunas bacterias pequeas.
El oxido de etileno es un esterilizante mediante vapor de gas de uso habitual,
aunque no es eficiente, hay regulaciones estrictas que limitan su uso porque es
inflamable, explosivo y carcingeno para los animales de laboratorio.
La esterilizacin con gas formaldehido tambin est limitada porque el producto
qumico es carcingeno.
Los vapores de perxido de hidrogeno son estetizantes eficaces debido a la
naturaleza oxidante del gas. Se utiliza para la esterilizacin de instrumentos.
Tambin se utiliza la esterilizantes qumicos como acido peracetico y
glutaraldehido. El acido peracetico un oxidante, tiene una actividad excelente , y
los productos finales no son txicos .
Por el contrario, la seguridad es un problema con el glutaraldehido y se debe tener
cuidado cuando se manipule.

Desinfeccin

Los microorganismos tambin se destruyen mediante procedimientos

desinfeccin, aunque pueden sobrevivir los microorganismos ms resistentes.

de

Los procesos de desinfeccin se han categorizado como al nivel, nivel intermedio y

bajo.
1. Desinfectantes de alto nivel
Inactivan todas las formas vegetativas de los microorganismos, pero no destruyen
toda forma de vida microbiana, puesto que no eliminan todas las endosporas
bacterianas. Inactivan algunas esporas bacterianas, muchas esporas fngicas,
todas las bacterias vegetativas, los bacilos tuberculosos y todo tipo de virus (virus
medianos y lipdicos e incluso virus pequeos y no lipdicos)
La mayora requieren un tiempo de 20 minutos para ejercer una accin
desinfectante de alto nivel. Pueden tambin destruir las esporas bacterianas si el
tiempo de contacto es suficientemente prolongado (entre 6 y 10 horas, segn el
desinfectante), comportndose entonces como esterilizantes qumicos. As pues, el
tiempo de contacto es la nica variable que difiere entre esterilizacin y
desinfeccin de alto nivel cuando se utiliza alguno de estos desinfectantes.
Se consideran de alto nivel los siguientes desinfectantes:
- Glutaraldehdo 2%
- Glutaraldehdo fenolado (glutaraldehdo 2% + fenol
- Orto-ftalaldehdo 0,55%
- Aminas terciarias asociadas a compuestos de amonio cuaternario
- cido peractico 0,08% + Perxido de hidrgeno 1%
El tiempo mnimo necesario para eliminar completamente micobacterias
tuberculosas y no tuberculosas con glutaraldehdo al 2% es de 20 minutos (siempre
que el proceso sea precedido por una buena limpieza). Para algunos desinfectantes
este tiempo puede ser menor; el orto-ftalaldehdo al 0.5% puede alcanzar una
desinfeccin de alto nivel en 10 minutos. La limpieza inicial del objeto es
fundamental para que la desinfeccin sea eficaz, ya que muchos desinfectantes
pierden total o parcialmente su actividad en presencia de materia orgnica.

2. Desinfectantes de nivel intermedio

No eliminan necesariamente las esporas bacterianas, pero inactivan bacterias
vegetativas, incluido Mycobacterium tuberculosis (significativamente ms
resistente). Tambin son eficaces contra los hongos (incluidas las esporas
asexuales, aunque no necesariamente las esporas sexuales) y contra los virus.
Algunos desinfectantes de nivel intermedio pueden tener dificultades para inactivar
completamente algunos virus ms resistentes, como virus no lipdicos o virus de
pequeo tamao (poliovirus, coxsakievirus, rinovirus..).

Pertenecen a este grupo:

- Alcohol etlico 70%
- Alcohol isoproplico 70-90%
- Fenoles
- Asociaciones de aldehidos (glutaraldehdo + formol + glioxal)
El tiempo de contacto mnimo para una desinfeccin de nivel intermedio con estos
desinfectantes es de 10 minutos.
3. Desinfectantes de bajo nivel
No son capaces de destruir en un periodo prctico de tiempo endosporas
bacterianas, micobacterias ni todos los hongos y/o virus no lipdicos o de pequeo
tamao
Se consideran desinfectantes de bajo nivel:
- Hipoclorito sdico a 100 p.p.m.
- Compuestos de amonio cuaternario.
El tiempo de contacto mnimo para una desinfeccin de bajo nivel con estos
desinfectantes es de 10 minutos. Algunos desinfectantes de nivel intermedio a una
concentracin menor o con un menor tiempo de contacto pueden comportarse
como desinfectantes de bajo nivel.

Antisepsia

Los antispticos se utilizan para reducir el nmero de microorganismos en la

superficie cutneas.
Los alcoholes tienen una actividad excelente frente a todos los grupos de
microorganismo excepto las esporas y no son txicos aunque tienden a resecar las
superficies cutneas porque eliminan lpidos. Tampoco tienen actividad residual y
son inactivados por la materia orgnica. Por lo tanto se debe limpiar la superficie
cutnea antes de aplicar alcohol.
Los yodoforos tambin son antispticos cutneos excelentes y tienen un espectro
de actividad similar al de los alcoholes. Son ligeramente ms txicos para la piel
que el alcohol. Tienen una actividad residual escasa y son inactivados por la
materia orgnica.
La clorhexidina tienen una actividad antimicrobiana extensa, aunque destruye
organismo a una velocidad mucho menor que el alcohol. Su actividad persiste,
aunque la materia orgnica y los niveles de ph elevado reducen su eficacia.
La paraclorometaxilenol (PCMX) se limita principalmente a bacterias
grampositivas. Como no es toxico y tiene una actividad residual se ha utilizado en
productos para lavado de manos.
El triclosan es activo frente a bacterias pero no a otros organismos. es un
antisptico de uso habitual en jabones desodorantes y algunos dentfricos.

Mtodos de esterilizacin

METODOS FISICOS
1.- CALOR HUMEDO: La utilizacin del calor y su eficacia depende de dos factores:
El tiempo de exposicin y la temperatura. Todos los microorganismos son
susceptibles en distinto grado a la accin del calor. El calor provoca
desnaturalizacin de protenas, fusin y desorganizacin de las membranas y/o
procesos oxidativos irreversibles en los microorganismos. El calor hmedo produce
desnaturalizacin y coagulacin de protenas por dos razones:
1) El agua es una especie qumica muy reactiva y muchas estructuras biolgicas
son producidas por reacciones que eliminan agua y
2) El vapor de agua posee un coeficiente de transferencia de calor mucho mas
elevado que el aire.
Ventajas:

Rpido calentamiento y penetracin

Destruccin de bacterias y esporas en corto tiempo

No deja residuos toxicos

Hay un bajo deterioro del material expuesto

Desventajas:

No permite esterilizar soluciones que formen emulsiones con el agua

Es corrosivo sobre ciertos instrumentos metlicos.

Dentro del Calor Hmedo tenemos:

EBULLICIN: Se requiere un recipiente con agua. Es la aplicacin del calor mediante
la ebullicin del agua a presin atmosfrica (100C). Mediante este mtodo se
esterilizan agujas e instrumentos de ciruga menor. No es confiable este mtodo por
cuanto quedan las esporas.
PASTEURIZACIN: Es la aplicacin de una temperatura inferior a 110C por 30
minutos. La aplicacin del calor va seguida de un rpido enfriamiento. Se usa para
prevenir las infecciones de origen lcteo y retrasar la descomposicin de la leche,
ya que las bacterias de la leche no forman esporas (bacilo tuberculoso, salmonella,
streptococo y brucela).
VAPOR A PRESIN (AUTOCLAVE): Se realiza la esterilizacin por el vapor de agua a
presin. El modelo ms usado es el de Chamberland. Esteriliza a 121C a una
atmsfera de presin, estas condiciones pueden variar y se deja el material de 15 a
30 minutos. El vapor a presin proporciona temperaturas altas con penetracin y
humedad en abundancia que facilitan la coagulacin de las protenas.
Equipo: Consta de una caldera de cobre sostenida por una estructura metlica que
en la parte inferior recibe calor por combustin de gas o una resistencia elctrica,
esta
se
cierra
en la parte
superior con
una tapa
de
bronce.
Funcionamiento: Se coloca agua en la caldera, procurando que su nivel no
alcance los objetos que se disponen sobre una rejilla de metal. Se cierra asegurando
la tapa sin ajustar los bulones (tornillos grandes de cabeza redondeada) y se da

calor dejando abierta la vlvula de escape hasta que todo el aire se desaloje y
comience la salida de vapor en forma de chorro continuo y abundante.
2.- CALOR SECO: La esterilizacin por calor seco se produce por la destruccin
de los microorganismos por oxidacin de sus componentes celulares.
Ventajas:

No es corrosivo para materiales e instrumentos

Permite la esterilizacin de sustancias no acuosas y en polvo, y tambin

sustancias viscosas no voltiles.

Desventajas:

Requiere mayor tiempo de esterilizacin respecto al calor hmedo, debido a

la baja penetracin de calor.

Entre los mtodos que utilizan el calor seco como medio de esterilizacin tenemos:
a) FLAMEADO: Exposicin
directa
del
instrumento
a
una
flama.
b) INCINERACIN: Consiste en someter el material contaminado a altas
temperaturas en hornos especiales practicamente hasta reducirlo a cenizas. Su fin
es
evitar
el
vertido
de
material
de
alto
riesgo
en la basura.
c) AIRE CALIENTE: El aire caliente es uno de losmetodos de esterilizacin por calor
seco ms utilizado. Se lleva a cabo en hornos especiales que permiten la
distribucin uniforme del calor en su interior donde el material se expone a
temperaturas de 170C durante dos horas. El tiempo de esterilizacin se debe
determinar para cada material por ejemplo en el caso de materiales muy
resistentes al calor se pueden usar temperaturas ms altas por tiempos ms cortos.

ESTERILIZACIN CON AGENTES FSICOS

Los agentes fsicos que consiguen la esterilizacin

materiales son el calor , las radiaciones y la Filtracin

de

El calor desnaturaliza estructuras y macromolculas

ESTERILIZACIN (membranas, protenas, etc.). Todos los microorganismos son
POR CALOR
susceptibles a la accin del calor. Su sensibilidad vara con la
especie y con el estado en que se encuentren.

En general las formas vegetativas bacterianas mueren por

calentamiento a 50-70C. Las endosporas, ( las formas de
vida ms termoresistentes), requieren mayores temperaturas
y tiempo de exposicin. El calor puede utilizarse de dos
formas en presencia(esterilizacin por calor humedo) o
ausencia de humedad (esterilizacin por calor seco).

CALOR
HMEDO.

Fundamento

Autoclave
vapor:

los materiales hmedos conducen mejor el calor que los

secos : el agua tiene mayor coeficiente de transferencia de
calor que el aire. Por eso el vapor de agua es ms eficaz que el
calor seco matando a los microorganismos. As la esterilizacin
en presencia de vapor de agua requiere menos temperatura y
tiempo que sin agua. El autoclave de vapor utiliza calor
hmedo para la esterilizacin.

de Trabaja a presin superior a la atmosfrica. El agua a presin

atmosfrica hierve a 100C. A presiones superiores, la
temperatura de ebullicin aumenta por lo que se pueden
calentar soluciones acuosas (como los medios de cultivo-) a
temperaturas superiores a 100C. El autoclave permite elevar
la presin de una a dos atmsferas sobre la presin
atmosfrica. .

El dispositivo trabaja aislado del exterior. En un sistema

aislado del exterior, cada elevacin de temperatura provoca
un aumento de presin. La relacin entre temperatura y
presin depende de la composicin de la atmsfera incluida en
el sistema

Presi Temperat
n
ura (C)
(atm)
en el
interio
r

0.5

112

121

Cuando en el autoclave el aire es reemplazado por

vapor de agua purgado del autoclave), La relacin
entre temperatura y presin en atmsfera saturada
de agua es la indicada en lka tabla de la izquierda.

133

Si quedan restos de aire son necesarias temperaturas mayores

para provocar la misma presin en el interior

Empleo del
autoclave:

El autoclave de vapor es el aparato ms utilizado para la

esterilizacin de medios de cultivo, soluciones, ropa de
laboratorio, y emulsiones que no se desnaturalicen a
temperaturas superiores a 100C.. En general la esterilizacin
de estos materiales se realiza a (112-121C) durante 30-20
minutos. Estas condiciones pueden variar en funcin del tipo
de material, carga microbiana y volmenes a esterilizar.

Ventajas del
autoclave

Rpido calentamiento y penetracin del calor, destruccin de

bacterias y endosporas en corto tiempo, no deja residuos
txicos, poco deterioro del material expuesto, es econmico.

Inconvenientes

Corrosivo sobre ciertos materiales metlicos, no til para

material termosensible.

-Tindalizacin o
esterilizacin
fraccionada a
vapor fluente

El material se calienta a 80-100 durante 30 minutos, en das

sucesivos, con periodos de incubacin entre ellos. De esta
manera se destruyen las clulas vegetativas pero no las
endosporas termorresistentes.

Las endosporas que sobrevivieron pueden germinar en el

periodo de incubacin. Desdiferenciadas como clulas
vegetativas son destruidas en el calentamiento posterior.

Esta tcnica se puede emplear para esterilizar medios de

cultivo que no se pueden calentar a temperaturas superiores a
100 sin alterar sus propiedades. El principal inconveniente de
esta tcnica es el consumo de tiempo. Actualmente tiene muy
poco uso

-Pasteurizacin

Es
un
mtodo
que
reduce
la
cantidad
de
microorganismos viables. No es un mtodo de esterilizacin
pues no destruye esporas bacterianas. Es utilizada en la
industria alimentaria. Hay dos tipos de tratamiento: la
pasterurizacin a baja temperatura y mayor tiempo (63C/30
minutos) y la pasteurizacin a alta temperatura y corto tiempo
(72C/15 segundos).

-Uperizacin

Variante de la pasteurizacin (ultrarrpida) en la que la

temperatura se eleva por encima de 150 oC durante unos
segundos

CALOR SECO

Su accin letal se debe a la oxidacin de componentes

celulares. El aire es mal conductor del calor y el aire caliente
entra ms lentamente que el vapor en los materiales. Por ello
se requiere ms temperatura y tiempo de exposicin que en la
esterilizacin
con
calor
hmedo.
Puede
utilizarse
mediante flameado (incineracin) o con hornos de aire
caliente .

Flameado e
incineracin

Se aplica directamente la llama de un mechero. Se

utiliza para la esterilizacin de asas e hilos de
siembra, pinzas as como las bocas de tubos y
matraces antes y despus de utilizarlos. La
incineracin se emplea para destruir materiales de
desecho contaminados.

Hornos de aire Alcanzan temperaturas mayores a 150C. Las condiciones

caliente
usuales de esterilizacin son de 160-180C durante 1-2 horas.
Las ventajas son que penetra en materiales insolubles en agua
(aceites, grasas) y es menos corrosivo sobre metales que el
calor hmedo. Se utiliza para la esterilizacin de materiales
secos, grasas, aceites y material de vidrio y metales
termorresistentes

ESTERILIZACION POR RADIACIN

Las radiaciones de distinto tipo se utilizan tambin en microbiologa con la finalidad
de la esterilizacin. La ms utilizada en el laboratorio de microbiologa es la
radiacin ultravioleta (UV) de una longitud de onda de unos 260 nm. Aunque
suele ser poco eficaz debido a su escaso poder de penetracin en los materiales,
tales como vidrio, agua, pelculas de suciedad, sin embargo, es muy til para
esterilizar el aire y las superficies, as, se suelen colocar en cabinas de flujo
laminar, en habitaciones estriles, quirfanos, etc.
Otras radiaciones, como los rayos gamma, radiaciones electromagnticas ms
penetrantes, por su menor longitud de onda (<0,1 nm), suelen ser ms efectivas
como agentes esterilizantes, pero suelen tener menor uso en el laboratorio
microbiolgico y sin embargo, un uso industrial muy extendido. Son la opcin
adecuada para esterilizar equipos o medios sensibles al calor, as se emplean por
ejemplo para la esterilizacin de material plstico de un solo uso o para material
quirrgico desechable, para ciertos alimentos, etc.
Su accin depende de:

Tipo de radiacin

Tiempo de exposicin

Dosis

RADIACIN IONIZANTE
La radiacin ionizante es altamente letal, puede ajustarse su dosis para producir
efectos pasteurizantes o esterilizantes y su poder de penetracin es uniforme.
Es letal por destruccin de molculas vitales de los microorganismos, esto lo
consigue sin produccin de calor, por lo que los alimentos se conservan frescos. La
mayora de los daos son a nivel ADN.
Producen iones y radicales libres que alteran las bases de los cidos
nucleicos, estructuras proteicas y lipdicas, y componentes esenciales para la
viabilidad de los microorganismos.
Tienen gran penetrabilidad y se las utiliza para esterilizar materiales termolbiles
(termosensibles) como jeringas descartables, sondas, etc. Se utilizan a escala
industrial por sus costos. No se utilizan para medios de cultivo o soluciones
proteicas porque producen alteraciones de los componentes.
La sensibilidad a la radiacin de los microorganismos difiere segn las especies e
incluso segn las cepas, aunque las diferencias de resistencia entre cepas de una
misma especie son generalmente lo suficientemente pequeas para no tenerlas en
cuenta a efectos prcticos.
Las bacterias Gram-negativas son generalmente ms sensibles a la irradiacin
que las Gram-positivas y las esporas an ms resistente.
En general la resistencia a la radiacin de los hongos es del mismo orden que la de
las formas vegetativas bacterianas. Los virus son an ms resistentes que las
bacterias a la radiacin
Tipos de Radiaciones Ionizantes:

Rayos gamma. Son radiaciones ionizantes que se usan en la industria de

artculos mdicos, odontolgicos y farmacuticos. Se caracterizan por una
alta energa y gran penetracin. Es un mtodo costoso.
Las radiaciones gamma tienen mucha energa y son emitidas por ciertos
istopos radiactivos como es el Co60 pero son difciles de controlar ya que
este istopo emite constantemente los rayos gamma en todas direcciones.
Estos rayos gamma pueden penetrar los materiales por lo que un producto
se puede empaquetar primero y despus esterilizar.
Rayos beta. Se usan principalmente en la industria. Su poder de
penetracin es menor que el de las radiaciones gamma .

RADIACIN ULTRAVIOLETA
Son radiaciones no ionizantes. Afectan a las molculas de DNA de los
microorganismos debido a que forman dmeros de pirimidinas adyacentes que
inducen errores en la duplicacin y por lo tanto la prdida de la viabilidad de las
clulas.
No tienen efecto esterilizante sobre algunos microorganismos. Son de baja energa
y escasa penetracin. Su accin es superficial y se usan para mantener una

baja tasa de
microorganismos en el
quirfano y para mantener estril el
instrumental una vez que ha sido ya
esterilizado.
El mayor valor del tratamiento con
radiaciones U.V. se encuentra en el
saneamiento del aire, aunque tambin
pueden aplicarse para esterilizar superficies
de alimentos o para el equipo de los
manipuladores de alimentos.
Las longitudes de onda alrededor de 265 nm son las que tienen mayor eficacia
como bactericidas (200 - 295 nm). Se usan para reducir la poblacin microbiana en
quirfanos, cuartos de llenado aspticos en la industria farmacutica y para tratar
superficies contaminadas en la industria de alimentos y leche. La luz UV tiene poca
capacidad para penetrar la materia por lo que slo los microorganismos que se
encuentran en la superficie de los objetos que se exponen directamente a la accin
de la luz UV son susceptibles de ser destruidos.
RAYOS CATDICOS
(Radiacin con haz de electrones): Se usan para esterilizar material quirrgico,
medicamentos y otros materiales. Una ventaja es que el material se puede
esterilizar despus de empaquetado (ya que stas radiaciones penetran las
envolturas) y a la temperatura ambiente.
ONDAS SUPERSNICAS:
Este aparato est formado por un foco emisor de alta frecuencia que causa
vibraciones en las molculas de los microorganismos. Dichas vibraciones se
transforman, por friccin interna, en calor y de esta forma se altera y se
desactiva todo tipo de estructura viva. El instrumental se coloca en un
contenedor cubierto por bolitas de vidrio humedecidas con un lquido (ortobencil
paraclorofenato de sodio). El tiempo de esterilizacin es de 90 segundos.

ESTERILIZACION POR MTODOS SIN MUERTE MICROBIANA: LA FILTRACIN

Las aplicaciones de la esterilizacin por filtracin son diversas en el campo de la
microbiologa, se puede aplicar para eliminar microorganismos de soluciones,
fluidos o gases o para la esterilizacin del ambiente de trabajo, en todos los
casos los microorganismos no son destruidos sino que son retenidos fsicamente o
adsorbidos por los filtros con un tamao de poro adecuado. El tamao de poro que
se considera en la actualidad esterilizante es el de 0,22 m aunque ms
recientemente se tiende a la utilizacin de poros de 0.1 m. Se describen
acontinuacin los tipos de filtros ms utilizados y sus aplicaciones ms relevantes.

Filtros de membrana. Se utilizan para esterilizar soluciones termolbiles

como son antibiticos, vitaminas, medios de cultivo lquidos que contienen
azcares a concentraciones elevadas que pueden caramelizar, o protenas
que pueden desnaturalizarse por el calor, de tal forma que los
microorganismos quedan retenidos en el filtro, y el lquido filtrado se
encuentra estril.

Los filtros son de muy variada composicin dependiendo de su aplicacin,

normalmente son de steres de celulosa (acetato de celulosa, nitrato de
celulosa) politetrafluoretileno (PTFE o tefln), fluoruro de polivinilo
hidrofbico (PVDF), etc. Dependiendo del volumen a esterilizar son de
distinto tamao (dimetro) y se utilizan en distintos mecanismos. Para
volmenes grandes, la solucin se pasa a travs del filtro montado sobre un
soporte y conectado a una bomba de vaco que facilita la succin.
Previamente a la filtracin se debe esterilizar todo el equipo que va a estar
en contacto con la solucin a esterilizar, como el soporte y embudo para
filtros y el kitasato que recibir el medio estril. Todo este material puede ser
de vidrio o de policarbonato o polietileno esterilizables.

Los microorganismos son retenidos en el filtro y por lo tanto el fluido filtrado

est estril. La retencin se hace en funcin del tamao de poro existiendo
filtros de diferente tamao, los ms habituales en microbiologa han sido los
de0,45 y los de 0,22 m.

Filtros de profundidad. Son columnas de materiales fibrosos o porosos

(tierra de diatomeas, lana de vidrio, materiales cermicos porosos) que
permiten retener las partculas, en este caso microorganismos y que
normalmente se utilizan para la esterilizacin de gases o como pre filtros
para otros filtros esterilizantes. Los filtros de seguridad son importantes para
las aplicaciones de bioseguridad. Estas pueden desarrollarse en una cabina
de seguridad biolgica con flujo de aire que pasa previamente a travs de un
filtro de profundidad llamado filtro de aire particulado de alta eficacia (HEPA).
Filtros HEPA. Buena parte de las manipulaciones propias de la
microbiologa deben realizarse en condiciones de esterilidad total para evitar
la contaminacin de los medios o cultivos y la seguridad de los trabajadores,
para ello se usan las cabinas de seguridad biolgica con flujo de aire
campanas o cmaras de flujo laminar, se trata de equipos que crean un rea
de trabajo libre de partculas contaminantes, pasando el aire ambiente a
travs de filtros y produciendo un flujo laminar sobre la zona de trabajo que
provoca una presin positiva constante que previene la infiltracin de aire
contaminado y se mantiene as la zona en esterilidad.

La esterilidad en estas cmaras se consigue mediante el sistema de

filtracin del aire, generalmente filtros HEPA (High Efficiency
Particulate Air), formados por una matriz de fibras de fibra de vidrio. Estos
filtros retienen partculas de hasta 0,3-0,12 micrmetros (m) de
dimetro y pueden estar montados en cmaras de flujo laminar de distinto
tipos, en funcin del riesgo para el manipulador. En stas el aire ambiente se
pasa a travs de un prefiltro y un filtro HEPA antes de entrar en la zona de
trabajo manteniendo una velocidad media del aire en esa zona entre 0,4 y
0,5 m/s que produce una barrera o cortina de aire estril.
Filtros de huella de nucleacin (Nucleoporo): son pelculas muy
delgadas de policarbonato que son perforadas por un tratamiento conjunto
con radiacin y sustancias qumicas. Son filtros con orificios muy regulares
que atraviesan la membrana verticalmente. Funcionan como tamices,
evitando el paso de toda partcula con un tamao mayor al del poro.

La filtracin se utiliza para emulsiones oleosas o soluciones termolbiles.

Se usa para esterilizar aceites, algunos tipos de pomadas, soluciones oftlmicas,
soluciones intravenosas, drogas diagnsticas, radiofrmacos, medios para cultivos
celulares, y soluciones de antibiticos y vitaminas.

METODOS QUIMICOS

Se lleva a cabo mediante el uso de sustancias qumicas y se utilizan con mas

frecuencia en la desinfeccin y la antisepsia, para la efectividad influyen factores
como:

Clase

de

microorganismos
Concentracin y naturaleza del agente
Tiempo de exposicin, temperatura, etc.
Los ms utilizados son: Los fenoles,
alcoholes, cloro, yodo, metales pesados
(mercurio) detergentes, gases (oxido de
etileno).
Condiciones ideales para
antimicrobiano qumico:

un

agente

- No txico para el ser humano, animales ni

medio ambiente
- Actividad antimicrobiana
- No debe de reaccionar con la materia orgnica o corroer
- Estable y homogneo

Modo de accin:
- Bacteriostticos: Inhibidores de sntesis proteica por unin al ribosoma, que es
reversible, pues se disocia de este cuando disminuye en concentracin.

- Bactericidas: Causa la muerte celular pero no la lisis. No se eliminan por dilucin.

- Bacteriolticos: Inducen la lisis celular al inhibir la sntesis de la pared celular o

daan la membrana citoplasmtica.

AGENTES ANTIMICROBIANOS QUMICOS:

a. Fenoles:
El primer desinfectante y antisptico utilizado, en
1867 Joseph Lister los emple para reducir el riesgo
de infeccin en las cirugas. Hasta ahora los fenoles y
sus derivados (cresol, xilenol) son utilizados como
desinfectantes en laboratorios y hospitales. Elimina
micobacterias, eficaz an en presencia de materia orgnica y permanece activo en
la superficie despus de mucho tiempo de su aplicacin. Desnaturaliza protenas y
altera la membrana. Tiene olor desagradable y puede producir irritaciones
cutneas.

b. Alcoholes:
No elimina esporas pero son bactericidas y fungicidas y algunas veces viricida (virus
que contienen lpidos), son comnmente utilizados principalmente el etanol y el
isopropanol en concentraciones de 70-80%. Tienen el mismo modo de accin de los
fenoles.

c. Metales pesados:
Mercurio, arsnico, plata, zinc y cobre. Son
bacteriostticos ya que el metal se combina con los
grupos sulfihidrilos de las protenas inactivndolas o
precipitndolas. Son txicos. Ejemplos: sulfato de cobre
(alguicida) y nitrato de plata (gonorrea oftlmica en
nios)

d. Halgenos:
- Yodo: antisptico cutneo. Oxida componentes celulares y forma complejos con
las protenas. En altas concentraciones puede destruir algunas esporas. Puede
lesionar la piel, dejar manchas y desarrollar alergias.
- Cloro: oxida componentes celulares, requiere un tiempo de exposicin de unos 30
minutos.El producto clorado ms
utilizado en desinfeccin es el
hipoclorito de sodio, que es activo
sobre
todas
las
bacterias,
incluyendo esporas, y adems es
efectivo en un
amplio rango de temperaturas.
La
actividad
bactericida
del
hipoclorito de sodio se debe al cido
hipocloroso (HClO) y al Cl2 que se
forman cuando el hipoclorito es
diluido en agua. La actividad germicida del in
hipocloroso es muy reducida debido a que por su
carga no puede
penetrar fcilmente en la clula a travs de la
membrana
citoplasmtica. En cambio, el cido hipocloroso es
neutro y penetra
fcilmente en la clula, mientras que el Cl2 ingresa como gas.

Su actividad est influida por la presencia de materia orgnica, pues puede haber
en el medio sustancias capaces de reaccionar con los compuestos clorados que
disminuyan la concentracin efectiva de stos.

e. Compuestos cuaternarios de amonio (detergentes):

Molculas
orgnicas
emulsificantes
porque contienen extremos polares y no
polares, solubilizan residuos insolubles y
son
agentes
limpiadores
eficaces.
Solo los catinicos son desinfectantes,
alteran
membrana
y
pueden
desnaturalizar protenas. No destruyen
micobacterias ni esporas. Se inactivan con
el agua dura y el jabn.

f. Aldehdos:
Formaldehdo y glutaraldehdo, se combinan con las protenas y las inactivan.
Eliminan esporas (tras 12 horas de exposicin) y pueden usarse como agentes
esterilizantes.
g. Gases esterilizantes:
Esterilizacin de objetos termosensibles.
- Oxido de etileno: microbicida y esporicida,
se combina con las protenas celulares. Alto
poder penetrante. En concentraciones de 1020%
mezclado
con
CO2
o
diclorodifluorometano. Se debe de airear
ampliamente los materiales esterilizados para eliminar el gas residual porque es
muy txico.