Cultivo in vitro: principios y aplicaciones

Aunque las pruebas de deteccin rpida de antgenos microbianos y las pruebas

moleculares de deteccin de cidos nucleicos han sustituido a los medios de cultivo en
la deteccin de muchos grmenes, los cultivos siguen siendo importantes en todos los
laboratorios clnicos. En muchas enfermedades, los cultivos constituyen el mtodo
definitivo para identificar la causa de la infeccin.
El xito de los cultivos depende de la naturaleza de los microrganismos, de los sitios
infectados, de las respuestas inmunitarias del paciente y de la calidad de los medios
de cultivo. Algunos microrganismos pueden cultivarse nicamente en medios ricos en
nutrientes especficos, a temperaturas especiales o en determinados tipos de clulas.
En muchas infecciones, los patgenos responsables de la enfermedad estn asociados
a diferentes grmenes que forman parte de la flora microbiana normal de la regin
infectada. En estos casos, los medios de cultivo deben suprimir estos grmenes para
facilitar la deteccin nicamente de los microrganismos clnicamente relevantes.
Cuando las respuestas inmunitarias suprimen los agentes patgenos, los medios de
cultivo deben ser sumamente sensibles para permitir detectarlos a partir de
poblaciones extremadamente reducidas.
Casi todos los medios de cultivo son producidos por empresas especializadas en ello.
Esto implica que la mayora de estos medios se utiliza mucho despus de haberse
producido. Aunque esto no suele representar ningn problema, puede condicionar la
recuperacin de algunos grmenes complicados, como Bordetella pertussis. Por lo
tanto, algunos laboratorios emplean frmulas deshidratadas para preparar sus medios
de cultivo justo cuando estos van a utilizarse.

Tipos de medios de cultivo

Los medios de cultivo pueden clasificarse en cuatro grupos: medios
enriquecidos no selectivos, medios selectivos, medios diferenciales y medios
especializados.

Medios de cultivo no selectivos enriquecidos

Los medios enriquecidos no selectivos permiten el crecimiento de la mayora
de los microrganismos que no necesitan condiciones especiales.
Agar sangre
Los medios de agar sangre se componen de un medio base (como la soya
trptica y las infusiones tisulares) y sangre animal. Estos medios pueden ser
enriquecidos con suplementos para ampliar su potencial de cultivo.
Agar chocolate
Cuando se aade sangre o hemoglobina al medio base calentado, este se vuelve
marrn (de ah su nombre). Los medios agar chocolate permiten el crecimiento de la
mayora de las bacterias, incluso de aquellas que no crecen en el agar sangre (como
Haemophilus y algunas cepas de Neisseria).
Agar Mueller-Hinton

Los medios agar Mueller-Hinton se emplean para estudios de susceptibilidad

bacteriana. Estn compuestos por extractos de ternera y casena, sales, cationes
divalentes y almidn.
Medio de tioglicolato
Estos medios de cultivo se usan para recuperar pequeas poblaciones de
bacterias aerobias y anaerobias. Sus principales componentes son casena, glucosa,
extracto de levadura y tioglicolato sdico.
Agar dextrosa de Sabouraud
Los medios de agar dextrosa de Sabouraud estn enriquecidos con casena,
tejidos animales digeridos y glucosa. Al reducir el pH y aadir antibiticos, estos
medios pueden utilizarse para cultivar selectivamente hongos.

Medios de cultivo selectivos y diferenciales

Los medios de cultivo selectivos se emplean para aislar microrganismos
especficos. Estos medios estn enriquecidos con sustancias que inhiben el
crecimiento de los microrganismos no deseados. Los medios de cultivo selectivos se
hacen diferenciales al aadir ingredientes especiales que permiten la identificacin
del microrganismo deseado, como al aadir lactosa y un indicador de pH para
identificar microrganismos fermentadores de lactosa.
Agar MacConkey
El agar MacConkey es selectivo para bacterias gramnegativas y diferencial
para bacterias fermentadoras de lactosa. Este medio incluye peptonas digeridas, sales
biliares, lactosa, rojo neutro y violeta cristal. Las sales biliares y el violeta cristal
eliminan las bacterias grampositivas. Los cidos producidos por la fermentacin
precipitan las sales biliares y se colorean de rojo con el indicador.
Agar sal manitol
El agar sal manitol permite aislar selectivamente estafilococos. El medio
incluye extractos de casena y tejidos digeridos, manitol, sales y rojo fenol. Los
estafilococos pueden crecer en medios con concentraciones elevadas de sal. S. aureus
puede fermentar manitol, produciendo colonias amarillas en este agar.
Agar xilosa-lisina-desoxicolato (XLD)
El agar XLD se utiliza para detectar Salmonella y Shigella en cultivos entricos.
El medio est compuesto por un extracto de levaduras con xilosa, lisina, lactosa,
sacarosa, desoxicolato sdico, tiosulfato sdico, citrato amnico frrico y rojo fenol. El
desoxicolato sdico impide el crecimiento de la mayora de las bacterias no patgenas.
Las bacterias que fermentan los carbohidratos del medio forman colonias amarillas.
Shigella, que no fermenta dichos azcares, forma colonias rojas. Salmonella s
fermenta la xilosa, pero tambin descarboxila la lisina, produciendo cadaverina. Este
producto neutraliza los productos de la fermentacin, por lo que las colonias de
Salmonella tambin son rojas. Como Salmonella produce cido sulfhdrico a partir del
tiosulfato sdico, sus colonias se vuelven negras en presencia de citrato amnico
frrico. Esto permite diferenciar Salmonella de Shigella.

Medio de Lowenstein-Jensen (LJ)

El medio LJ, utilizado para aislar micobacterias, contiene glicerol, harina de
papa, sales y huevo (para solidificar el medio). Al aadir verde malaquita se eliminan
las bacterias grampositivas.
Agar Middlebrook
Este medio, usado tambin para aislar micobacterias, contiene sales,
vitaminas, cido oleico, albumina, glicerol, glucosa y verde malaquita (para eliminar
bacterias grampositivas). A diferencia del medio LJ, este medio se solidifica con agar.
CHROMagar
El medio CHROMagar es un medio diferencial para aislar e identificar algunas
especies de Candida. Contiene cloranfenicol, para eliminar bacterias, y sustratos
cromognicos especiales. Las distintas especies de Candida emplean uno o varios de
los cromgenos, generando colonias coloreadas. Candida albicans, por ejemplo,
produce colonias verdes. Candida tropicalis, por otro lado, forma colonias moradas.
Agar de levaduras inhibidor
Este medio enriquecido se utiliza para aislar hongos patgenos no
dermatofitos. Al aadir cloranfenicol, se inhibe el crecimiento bacteriano.

Medios especializados
Los medios especializados se emplean para detectar grmenes especficos que
coexisten con muchos otros microrganismos.

Cultivo celular
Los virus y algunas bacterias son grmenes intracelulares estrictos, o sea,
que solo pueden cultivarse en clulas vivas. Los cultivos celulares pueden ser clulas
que crecen y se multiplican sobre una superficie (es decir, una monocapa de clulas)
o clulas suspendidas en un medio de cultivo. Algunos cultivos celulares pueden
comprarse, aunque otros deben prepararse justo en el momento en el que van a
usarse.

Principios generales
Los signos clnicos de casi todas las enfermedades estn asociados a muchos
grmenes distintos. Solo algunos padecimientos son producidos por patgenos
especficos (como el carbunco, causado por Bacillus anthracis). Por tanto, los
laboratorios de diagnstico deben seleccionar medios de cultivo adecuados para
detectar grmenes comunes y medios especializados cuando se sospecha de un
microrganismo especfico. En general, las muestras obtenidas de sitios normalmente
estriles (como la sangre) se cultivan en medios no selectivos. Las muestras
contaminadas con la flora normal del paciente, en cambio, deben cultivarse en medios
diferenciales y selectivos. Los medios de cultivo deben seleccionarse cuidadosamente
para minimizar los mrgenes de error del anlisis y para evitar desperdiciar o diluir
las muestras con estudios intiles.

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