SERVICIO NACIONAL DE APRENDIZAJE

CENTRO NACIONAL DE HOTELERA, TURISMO Y ALIMENTOS

LABORATORIO DE MICROBIOLOGA

EVALUACIN DE MESFILOS AEROBIOS, MOHOS Y LEVADURAS EN AMBIENTES

1. OBJETIVO
Este procedimiento tiene por objeto explicar los pasos a seguir para realizar los ensayos: Mesfilos
aerobios, mohos y levaduras, empleando la tcnica sedimentacin en placa.

2. ALCANCE
Este procedimiento es aplicable para el anlisis de las siguientes matrices.

Ambientes hospitalarios.
reas de proceso.
Ambientes en los que se necesite estimar la calidad microbiolgica.
Secciones del laboratorio de microbiologa.

3. DEFINICIONES
AMBIENTE DE TRABAJO: Entorno de trabajo bajo el cual se desempea una labor, funcin o
actividad especfica, y que impacta directamente la calidad del producto o resultado final.
Generalmente los ambientes de trabajo son diferentes de acuerdo a la actividad econmica de la
empresa.
MESFILOS AEROBIOS: Denominacin asignada a todos los microorganismos capaces de
desarrollarse en presencia de oxgeno libre y a una temperatura entre 20 y 45 C, logrando alcanzar
temperaturas ptimas de crecimiento entre 30 y 40 C.
MOHOS Y LEVADURAS: Grupo de microorganismos indicadores de contaminacin microbiana, cuya
denominacin clasifica las clulas eucariotas pertenecientes al reino Fungi, con excepcin de las
setas. Son organismos oportunistas y se desarrollan en presencia de materia orgnica. Las
levaduras son organismos unicelulares, con forma redonda u ovalada, los mohos tienen una
estructura completamente multicelular que, vistos al microscopio, parecen hebras con muchas
ramificaciones o hifas. Los mohos tienden a ser ms coloridos y pueden tener una textura lanosa o
algodonosa, las colonias de levaduras son incoloras y generalmente lisas.
SEDIMENTACIN: Proceso por el cual las partculas presentes en el aire en movimiento descienden
en funcin del tiempo; por efecto de la gravedad.

4. DESARROLLO DE ACTIVIDADES
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4.1. FUNDAMENTO
La vigilancia y control microbiolgico de los ambientes de trabajo es de gran utilidad para evaluar la
eficacia de los procedimientos de limpieza y desinfeccin, identificar fuentes de contaminacin y
determinar la frecuencia requerida para los procedimientos de limpieza y sanitizacin. Un elevado
recuento de microorganismos dentro en un ambiente determinado puede indicar mtodos
inadecuados de limpieza y desinfeccin.

4.2. INTERFERENCIAS

Contaminacin cruzada en el transporte, recepcin y almacenamiento de las muestras.

Alta concentracin del analito.
Inadecuada homogeneizacin.
Temperatura de incubacin fuera del rango de especificacin para el analito.
Dilucin de nutrientes y pH inestable en los medios de cultivos.

4.3. TOMA Y PRESERVACIN DE MUESTRAS

Para tomar las muestras exponer en el ambiente a investigar; cajas petri estriles. Retirar las cajas,
conservar a temperatura entre 2 y 6 C y transportar de inmediato para incubar en el laboratorio.
4.4. EQUIPOS, MATERIALES, MEDIOS DE CULTIVOS Y REACTIVOS.
4.4.1. Equipos.

Cabina de flujo laminar.

Cuenta colonias.
Incubadora 35 C .
Incubadora 22 C.

4.4.2. Materiales.

Cajas Petri grandes.

Marcadores.
Toallas de papel absorbente.
Contenedores para transporte.

4.4.3. Medios de cultivos y reactivos.

Agar Plate Count.
Agar YGC.

4.5. CONSIDERACIONES DE SALUD, SEGURIDAD Y MANEJO AMBIENTAL.

Usar bata blanca, guantes, mascarilla, gorro y lentes de proteccin.
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Lavarse las manos antes y despus de manipular.

Desinfectar el rea de trabajo antes y despus de realizar una tarea.
No comer, beber, fumar, aplicarse maquillaje o cremas en el rea de trabajo.
No almacenar alimentos y bebidas en refrigeradores donde se encuentren los medios de cultivos,
reactivos, soluciones y materiales de trabajo.
Tener en cuenta los avisos de advertencia en lo relacionado con las lmparas UV. No ingresar al
rea mientras se encuentre encendida.
Al salir del laboratorio, verificar que las llaves del gas se encuentren cerradas.

4.6. PROCEDIMIENTO
Identificar las cajas con Agar Plate Count (Para evaluar Mesfilos aerobios) y YGC (Para
evaluar Mohos y Levaduras) con el nombre del rea, fecha y hora.
Prepare los controles de calidad.
Exponer en el rea que desea evaluar; una caja con Agar YGC y otra con Agar Plate Count,
durante 15 minutos.
Recoger las cajas y cubrir con sus respectivas tapas. Asegurar el cierre con cinta de empaque
transparente y trasladar de inmediato hasta el laboratorio.
Invertir las cajas Petri con Agar YGC e incubar a 22 +/- 2 C durante 5 a 7 das.
Invertir las cajas Petri con Agar Plate Count e incubar a 35 +/- 2 C durante 48 +/- 3 horas.

4.7. CALCULOS
Realice el recuento en las cajas con Agar Plate Count para Mesfilos aerobios (Colonias incoloras,
brillantes y lisas) y en las cajas con Agar YGC para Mohos y Levaduras (Mohos: Colonias grandes
coloridas, con textura algodonosa. Levaduras: Colonias incoloras, lisas y brillantes).
Expresar el resultado del ensayo como: UFC/15 minutos/rea de la caja Petri.
4.8. BIBLIOGRAFA.
Manual de tcnicas de anlisis para control de calidad microbiolgico de alimentos para
consumo humano INVIMA Santa Fe de Bogot, 1998.
FDA/BAM ON LINE 2001 Aerobios Plate Count Cap. 3, Levaduras y mohos Cap. 18.
NTC 4132 1997-05-28 Microbiologa. gua para el recuento de mohos y levaduras. tcnica de
recuento en placa.

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