RECUENTO MICROSCOPICO DIRECTO: METODO DE BREED

1. INTRODUCCION:
Existen muchos mtodos para la cuantificacin de microrganismo,
incluyendo mtodos microscpicos, electrnicos (contador Coulter),
qumicos (para estimar masa celular), y conteo en placas donde se
forman y crecen las colonias de bacterias.
El
recuento microscopico directo trata de un mtodo para el
"recuento de totales", dado que se contabilizan los microorganismos
vivos y muertos. Cuando el mtodo solamente recuenta organismos
vivos se denomina "recuento de viables
Entre las principales desventajas del recuento directo tenemos: se
pueden contar clulas muertas y vivas, dificulta el conteo de
bacterias mviles, se requieren concentraciones de bacterias
adecuadas
En esta tcnica un volumen definido se coloca en un portaobjetos
para luego ser observado al microscopio. El mtodo de recuento de
Breed es muy usado en la industria lctea, en ste se colocan 0.01 ml
de muestra sobre un portaobjetos con un recuadro de 1 cm 2 que se
tie con un colorante para luego contar las clulas observadas con el
objetivo de 100X, al final el nmero de bacterias contadas se
multiplica por 100. Los recuentos microscpicos tambin se realizan
usando la cmara de Petroff-Hausser; estos mtodos no requieren
tiempo de incubacin.
Los estudios relacionados con el anlisis de muestras como agua,
alimentos, leche y aire requieren de una enumeracin cuantitativa de
los microorganismos presentes en estos compuestos, ya que la
calidad microbiolgica de estos productos est en relacin directa con
la calidad sanitaria y la seguridad para el consumo de ellos.
2. OBJETIVOS:
Adiestrar al estudiante con el manejo del metodo de extension
de Breed
Determinar el numero total de microorganismos presentes en
una muestra de alimento por el metodo de breed.
3. MATERIAL
MATERIAL BIOLOGICO
Agua
MATERIAL DE LABORATORIO
Lamina porta objetos
Pipeta graduada
Mechero
Asa bacteriologica
COLORANTE Y REACTIVO

Violeta de genciana


Safranina

Alcohol acetona

Lugol
EQUIPO
Microscopio
4. PROCEDIMIENTO
Sobre un porta objetos limpio y desengrasado se dibujo con
un lpiz un cuadrado de un centmetro cuadrado.
Se homogenizo la muestra problema y con una pipeta se
coloco una gota de la muestra (aproximadamente 0,01 ml)
sobre el cuadrado y extendio bien sin salirse de l.
Se fijo la muestra y se coloreo mediante la tecnica de Gram
Se observo al microscopio.
Se conto el nmero de microorganismos en varios campos, no
menos de 10 campos.
Luego se sac un promedio del nmero de microorganismos
por campo y se multiplic por el factor microscpico.
Luego, como la muestra usada fue de 0.01 mL,
multiplicaremos el resultado anterior obtenido por 1ml para
pasarlo a la misma unidad
5. RESULTADOS

ACM = r 2
2

ACM =3.1416 2500

ACM =7854 2

FM =

10
=12732.4
7854

10712732.40.01 ml
x1 ml

x=13 107
6. COMENTARIO
El metodo de Breed es un metodo de recuento directo que se puede
aplicar para el analisis de muestras en el campo de alimentos nos
indica en el numero de celulas o microorganismos esta alterando un
determinado alimento , pero el error de este metodo que cuenta
celulas vivas y muertas.
7. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

Atlas, R. M. Y R. Bartha. 2000. Microbial Ecology.

Fundamentals and Applications. 4a edicin.
Benjamin/Cummings Science Publishing .Collins C.H. y Lyne
Patricia M. 1989. Mtodos Microbiolgicos. ACRIBIA. 524 pp
Madigan, M. T., J.M. Martinko y J. Parker. 2003. Brock.
Biologa de los microorganismos. 10 Edicin en espaol.
Prentice may Iberia, Espaa.

DETECCION DE HUEVOS Y LARVAS DE PARASITOS

1. INTRODUCCION
Las infecciones parasitarias se encuentran entre los trastornos ms
generalizados que afectan a los nios en edad escolar y los residentes
de las zonas pobres de los centros urbanos La facilidad de la
contaminacin, la falta de saneamiento y las polticas estructurales
que se centraron en la vigilancia de las enfermedades parasitarias
contribuyeron a esta situacin.
La infeccin alimentaria por protozoos y helmintos transmitidos por la
ingestin de vegetales que se comen crudos, es uno de los factores
que conducen a la propagacin de estas enfermedades. El agua
contaminada por materia fecal de origen humano, a menudo es
utilizada para el riego de jardines y la contaminacin de los alimentos
por manipuladores infectados tambin puede ser una de las causas
de contaminacin de vegetales.
La mayora de los parsitos intestinales se transmiten por
contaminacin del ambiente y en este aspecto, el agua y los
alimentos juegan un papel importante. Si las heces no se eliminan de
manera apropiada, los quistes, ooquistes y huevos de los parsitos
intestinales pueden quedar en el ambiente de las casas o contaminar
fuentes de agua o cultivos regados con aguas residuales Por lo que se
estima que 4% del total de muertes en el mundo se deben a
problemas relacionados al agua, desage e higiene
Giardia duodenalis, causa giardiasis (GI-are-DIA-sis), ste es un
parsito unicelular microscpico que puede vivir en los intestinos de
los animales y de las personas. Se encuentra en cada regin
alrededor del mundo y est reconocido como una de las causas ms
comunes de enfermedades transmitidas por agua (y ocasionalmente
por alimentos)
Taenia saginata (gusano plano de carne de res) y Taenia solium
(gusano plano de carne de cerdo) son gusanos parsitos (helmintos).
Taeniasis es el nombre de la infeccin intestinal causada por gusanos
planos en la etapa adulta (gusanos planos de res y cerdo).
Cisticercosis es el nombre de la infeccin del tejido (adems de
intestinal) causada por esta etapa larval del gusano plano de cerdo
solamente. Es interesante notar que los humanos son los huspedes
definitivos de ambos organismos. Esto significa que su ciclo
reproductivo y la produccin de huevos por estos microorganismos,
slo ocurren dentro de los humanos. Los huevos pasan en las heces
fecales y pueden ser excretados al ambiente mientras los gusanos
permanezcan en el intestino (tanto como por 30 aos). En adicin, los
huevos pueden permanecer viables en el ambiente por muchos
meses. Estas enfermedades son prevalecientes en pases
subdesarrollados donde las prcticas de saneamiento son sub estndares y en reas donde la carne de cerdo y de res son
consumidas crudas o no cocidas completamente.

2. OBJETIVO:

Identificar los tipos d ehuevos de parasitos y algunas formas

larvarias.

3. MATERIAL
BIOLOGICO
Muestras conservadas
parasitos
DE

conteniendo

huevos

quistes

de

LABORATORIO:
Lamina portaobjetos
Lamina cubre objetos
Lugol
Gotero

EQUIPO
Microscopio
4. PROCEDIMIENTO
Se homogenizo la muestra 25 g en 225 ml de agua destilada se
lavo y se centrifugao para obtener el sedimento.
Se agrego lugol y se suspendio el sedimento y se observo en el
microscopio
5. RESULTADOS

Observacion: Ascaris sp
Aumento : 40 x

Observacion:
Entamoeba coli
Aumento : 40 x

Observacion:
Himenolepis sp
Aumento : 40 x

Observacion: Taenia sp
Aumento : 40 x

6. COMENTARIO
Los parasitos pueden ser transmitidos mediante la ingesta de
alimentos o agua contaminada ocasionando una serie de
enfermedades en las personas con malos habitos alimenticios e
higienicos.
7. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

Solarte Y, Pea M, Madera C. Transmisin de protozoarios

patgenos a travs del agua para consumo humano. Colomb Med.
2006; 37(1): 74-82.
Prs A, Kay D, Fewtrell L, Bartram j. Estimating the burden of
disease from water, sanitation, and hygiene at a global level.
Environ Health Perspect. 2002; 110(5): 537-42.
Feachmen RG, Bradley Dj, Garelick h, Mara DD. Sanitation and
disease: health aspects of excreta and wastewater management.
New York: John Wiley & Son; 1983.

RECUENTO POR EL MTODO DEL NMERO MS PROBABLE

1. INTRODUCCIN
El mtodo de nmero ms probable (NMP) es una estrategia
eficiente de Estimacin de densidades poblacionales especialmente
cuando una evaluacin cuantitativa de clulas individuales no es
factible. La tcnica se basa en la determinacin de presencia o
ausencia en rplicas de diluciones consecutivas de atributos
particulares de microorganismos presentes en muestras de suelo u
otros ambientes. Por lo tanto, un requisito importante de este
mtodo es la necesidad de poder reconocer un atributo particular de
la poblacin(es) en el medio de crecimiento a utilizarse. El estimado
de densidad poblacional se obtiene del patrn de ocurrencia de ese
atributo en diluciones seriadas y el uso de una tabla probabilstica.
Algunas de las ventajas del NMP son: (i) la capacidad de estimar
tamaos poblacionales basados en atributos relacionados a un
proceso (selectividad); por ejemplo se puede determinar la densidad
poblacional de organismos que pueden nodular leguminosas en una
muestra de suelo usando el mtodo de infeccin de plantas, (ii)
provee una recuperacin uniforme de las poblaciones microbianas
de suelos diversificados, (iii)
determina slo organismos
vivos y activos metablicamente, y (iv) suele ser ms rpido e igual
de confiable.
El mtodo requiere la realizacin de una serie de diluciones en serie
de la muestra de cultivo, en un medio lquido adecuado para el
crecimiento de dicho organismo de un volumen diez veces mayor.
Luego, se incuban las muestras de esos tubos y, pasado un tiempo,
se examinan los tubos. Aquellos tubos que recibieron una o ms
clulas microbianas procedentes de la muestra, se pondrn turbios,
mientras que los tubos que no recibieron ninguna clula
permanecern transparentes.
Al aumentar el factor de dilucin, se alcanza un punto en el que
algunos tubos contendrn tan slo un microorganismo y otros tubos
no contendrn ninguno. Al calcular la probabilidad de que los tubos
no hayan recibido ninguna clula, se puede estimar el nmero ms
probable de microorganismos presentes en la muestra original, a
partir de una tabla estadstica.
La precisin del mtodo del nmero ms probable aumenta con el
nmero de tubos que se usan; cinco tubos por dilucin se consideran
como una relacin adecuada entre precisin y economa.

2. OBJETIVOS

Determinar el numero aproximado de bacterias viables

presentes en una muestra de alimento.

3. MATERIAL
BIOLOGICO
Muestra (agua)

DE LABORATORIO
Tubos de ensayo
Pipetas de 10 y 1 ml

Campana
Durhanhttps://riunet.upv.es/bitstream/handle/10251/
38380/Eva%20Garc%C3%ADa.%20Calidad
%20leche-2014.pdf?sequence=1

Gradilla
Mechero

MEDIOS DE CULTIVO
Caldo lactosa bilis verde brillante (BRILLA)
Caldo triptonado
REACTIVO
Kovacs
EQUIPOS
Estufa reguladora a 35 -37C
Bao Maria a 44 C
4. PROCEDIMIENTO

Se desinfecto la mesa de trabajo con alcohol yodado.

Se procedio a tomar la muestra (agua) y se agito para
homogenizar la muestra.
Se pipeteo 10 ml de muestra original a cada uno de los tres
primeros tubos conteniendo 10 ml de caldo BRILLA doble
concentrado, 1ml a los tres siguientes tubos conteniendo
BRILLA a concentracion normal y 0.1 ml a los tres tubos
restantes con BRILLA a concentracion normal.
Se homogenizo la siembra adecuadamente y se incubo los
tubos a 35-37 C durante 24 a 48 horas.
De cada tubo positivo (presencia de gas) se sembro una
alicuota en caldo BRILLA y otra alicuota en caldo triptonado.
Se incubo en bao maria a 44C durante 24- 48 horas.
Luego del tiempo de incubacion efectuar la prueba del indol en
los tubos con caldo triptonado para lo cual se adiciono 2 a 3
gotas de reactivo de kovacs.

5. RESULTADOS

1 TRIADA = 3 POSITIVOS
2 TRIADA = 1 POSITIVO
3 TRIADA = NINGUN POSITIVO
COLIFORMES TOTALES= 43
NMP/ 100ml

No hay coliformes fecales ni

E.coli fecal

6. COMENTARIO
El numero mas probable (NMP/ml : 43) de coliformes totales en la
muestra de agua.
El crecimiento bacteriano de coliformes en los tubos es reflejado
mediante el cambio de apariencia en el medio que se enturbia y la
presencia de gas que se observa en la campana Durham.
7. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

CCAYAC-M-004 (2006) Estimacin de la densidad microbiana

por la tcnica del nmero ms probable, deteccin de coliformes
totales, cliformes fecales y Escherichia coli por el nmero ms
probable
Food and Drug Administration (2003) Bacteriological Analytical
Manual. 9thed. Arlington, VA: AOAC.
Madigan, M T y Martinko, J M., Brock, Biology of Microorganisms,
11a ed. 2006, pp 935-936.

PASTEURIZACION
1. INTRODUCCION
La pasteurizacin o pasterizacin, es el proceso trmico realizado
a lquidos (generalmente alimentos) con el objetivo de reducir la
presencia
de agentes
patgenos (como
por
ejemplo
ciertas bacterias, protozoos, mohos, levaduras, etc.) que puedan
contener. Este proceso de calentamiento recibe el nombre del que lo
llev a cabo por primera vez, el cientfico-qumico francs Louis
Pasteur (1822-1895). La primera pasteurizacin fue realizada el 20
de abril de 1864 por el propio Pasteur y su colega Claude Bernard.
Uno de los objetivos del tratamiento trmico es una "esterilizacin
parcial" de los alimentos lquidos, alterando lo menos posible su
estructura fsica, sus componentes qumicos y sus propiedades
organolpticas. Tras la operacin de pasteurizacin, los productos
tratados se enfran rpidamente y se sellan hermticamente con
fines de seguridad alimentaria; por esta razn, es bsico en la
pasteurizacin el conocimiento del mecanismo de la transferencia
de calor en los alimentos. A diferencia de la esterilizacin, la
pasteurizacin
no
destruye
totalmente
las esporas de
los microorganismos,
ni
elimina
todas
las clulas de microorganismos termoflicos.
Louis Pasteur mejor la calidad de vida al hacer posible que
productos alimenticios bsicos, como la leche, se pudieran
transportar
largas
distancias
sin
ser
afectados
por
la descomposicin. En la pasteurizacin, el objetivo primordial no es
la "eliminacin completa de los agentes patgenos" sino la
disminucin sustancial de sus poblaciones, reducindolas a niveles
que no causen intoxicaciones alimentarias a los humanos (siempre
que
el
producto
pasteurizado
se
mantenga
refrigerado
correctamente y que se consuma antes de la fecha de
caducidad indicada). En la actualidad, la pasteurizacin es objeto de
cada vez ms polmicas por parte de ciertas agrupaciones de
consumidores en todo el mundo, debido a las cuestiones existentes
sobre la destruccin de vitaminas y alteracin de las propiedades
organolpticas (sabor y calidad) de los productos alimenticios
tratados con este procedimiento.

2. OBJETIVOS

Saber la importancia de la

pasteurizacion en los procesos de

fabricacion de alimentos.

3. MATERIAL
BIOLOGICO

Muestra (agua)

DE LABORATORIO

Pipetas

Placas petri

Mechero

Gradilla

Termometro

Vaso de precipitacion

MEDIOS DE CULTIVO:

PCA

EQUIPOS:
Estufa
4. PROCEDIMIENTO

A partir de la muestra original se siembra 1 ml por incorporacion

en dos placas y se agrega el medio PCA se deja solidificar y se
lleva a incubar 24 a 48 horas .

La muestra se llevo a tratamiento termico a 64C por 30 min y se

sembro 1 ml en dos placas por incorporacion , se agrega el medio
PCA y se dejo solidificar y se llevo a incubar 24 a 48 horas.

5. RESULTADOS
Muestra original
Placa 1= 94
Placa 2 = 106

X =100=10 x 101 UFC/ml

Pasteurizacion
No hubo crecimiento microbiano en ninguna de las placas
6. COMENTARIO
Si se redujo las poblacion microbiana de la muestra de agua lo que
demuestra que este tratamiento es efectivo para eliminar la flora
vegetativa presente en los alimentos.
7. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS
"Microbiologa e higiene de los alimentos", Hayes P.R., Ed. Acribia
S.A., Zaragoza, Espaa, 1993.

RECUENTO EN PLACA
1. INTRODUCCION :
En diversos estudios microbiolgicos (como anlisis de alimentos, de
agua de bebida, de productos farmacuticos o del medioambiente
entre otros), se requiere conocer el nmero de microorganismos
presentes en un material con objeto de determinar su calidad. El
procedimiento es esencialmente el mismo que para la medida del
crecimiento de las poblaciones de bacterias El crecimiento de
poblaciones microbianas puede determinarse mediante mtodos de
medida de la masa total celular, que generalmente es directamente
proporcional al nmero de clulas, (mtodos de determinacin del
peso, de la actividad del cultivo o mtodos turbidimtricos) o por la
determinacin del nmero de clulas. Es un mtodo muy utilizado
cuando se necesita determinar el tamao de la poblacin bacteriana
de una muestra.
El recuento de microorganismos, en este caso, se basa en que cada
uno desarrollar una colonia visible. Pero debido a que una muestra

no es totalmente homognea con respecto a su composicin

microbiolgica, es
posible que una colonia se origine de un
microorganismo o de cientos de ellos, dando en este ltimo caso un
recuento menor del real. Tambin es posible que muchas de las
bacterias presentes en la muestra no puedan crecer en las
condiciones elegidas (pH, temperatura, medio de cultivo, tiempo,
etc.). En este caso el recuento tambin ser inferior al real. Lo que si
se sabe es que cada colonia observada se form a partir de por lo
menos un microorganismo. Esta es una condicin necesaria y
suficiente. Entonces la colonia es considera una unidad formadora de
colonia (ufc) a los efectos de los clculos.
Se admite, por lo tanto, que en los mtodos de recuento de
microorganismos vivos, son inevitables los errores. Especialmente
cuando se examinan muestras pequeas, es posible cometer grandes
errores.
La tcnica se basa en contar las unidades formadoras de colonias o
UFC presentes en un gramo o mililitro de muestra. Se considera que
cada colonia que desarrolla en el medio de cultivo de eleccin
despus de un cierto tiempo de incubacin a la temperatura
adecuada, proviene de un microorganismo o de un agregado de ellos,
de la muestra bajo estudio; ese microorganismo o microorganismos
son capaces de formar la colonia, es decir una UFC. Para que las
colonias puedan contarse de manera confiable, se hacen las
diluciones decimales necesarias de la muestra, antes de ponerla en el
medio de cultivo; la tcnica para realizar este procedimiento se
describe en Preparacin y dilucin de muestras de alimentos para su
anlsis microbiolgico.
2. OBJETIVO :

Determinar el numero de microorganismos viables presentes en

una muestra de alimentos.

3. MATERIAL
BIOLOGICO
Muestra (agua)
DE LABORATORIO
Placas petri esteriles
Pipetas
Mechero
Tubo de ensayo
MEDIO DE CULTIVO
Agar cuenta germenes (pca)

Solucion salina fisiologica

EQUIPOS
Incubadora regulada a 35- 37 C
4.

PROCEDIMIENTO
Se procedio a tomar la muestra de agua y se coloco un 1 ml
apartir de la muestra original en 2 placas.
Se coloco 1ml de la muestra original en 9ml de SSF (10 -1) a partir
de la dilucion se sembro por incorporacion 1ml en 2 placas.
Se licuo el medio PCA y se agrego a todas las placas y se dejo
solidificar.
Se llevo a incubar a 37C por 24-48 horas.

5. RESULTADOS

Dilucion 10-1 :
Placa 1= 18 UFC/ml
Placa 2= 7 UFC/ml

7x101
UFC/ml

Muestra original :
Placa 1= 156 UFC/ml

14x101
Placa 2= 131 UFC/ml UFC/ml

6. COMENTARIO
Los resultados obtenidos en la practica estan dentro del rango
establecido de 30-300 UFC/ml , al momento de la lectura se observo

contaminantes es decir que no se trabajo de una manera aseptica,

mala manipulacion al momento de tomar la muesta, las ventanas al
estar abiertas el aire pudo arrastar tierra y eso contamina el medio,
etc.
7. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

Secretara de Salud. NOM-109-SSA1-1994. Bienes y Servicios.

Procedimiento para la Toma, Manejo y Transporte de Muestras de
Alimentos para su Anlisis Microbiolgico. Norma Oficial Mexicana.
Mxico.

Secretara de Salud. NOM-110-SSA1-1994. Bienes y Servicios.

Preparacin y Dilucin de Muestras de Alimentos para su Anlisis
Microbiolgico. Norma Oficial Mexicana. Mxico.

Secretara de Salud. NOM-092-SSA1-1994. Bienes y Servicios.

Mtodo para la cuenta de Bacterias Aerobias en Placa. Norma
Oficial Mexicana. Mxico.