MEDIOS DE CULTIVO SIMPLES , DIFERENCIALES Y

ENRIQUECIDOS

I.

INTRODUCCION

Las bacterias se encuentran en el ambiente junto con otros microorganismos,

razn por la cual es difcil aislarlas. A menudo nuestro inters es caracterizar una
especie bacteriana, para lo cual debemos estar preparados para aislar, cultivar e
identificar a la misma. Si bien el aislamiento es un paso crucial en este camino,
comenzaremos examinando los medios de cultivo, ya que en estos ltimos se
basan muchos de los principios del aislamiento.
Un medio de cultivo es un conjunto de nutrientes, factores de crecimiento y otros
componentes que crean las condiciones necesarias para el desarrollo de los
microorganismos. Es decir, es un soporte que proporciona sustancias nutritivas
que permitan el desarrollo y reproduccin de microorganismos. La diversidad
metablica de los microorganismos es enorme, por ello, la variedad de medios de
cultivo tambin lo es, no existiendo un medio de cultivo universal adecuado para
todos ellos. El conocimiento de las necesidades nutritivas y fsicas de los
microorganismos es fundamental para seleccionar un medio de cultivo adecuado.
Los requisitos que debe reunir el cultivo de un microorganismo tienden a
reproducir el ambiente natural en el que se desarrollan
Uno de los sistemas ms importantes para la identificacin de microorganismos es
observar su crecimiento en sustancias alimenticias artificiales preparadas en el
laboratorio. El material alimenticio en el que crecen los microorganismos es el
Medio de Cultivo y el crecimiento de los microorganismos es el Cultivo
.

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II.

MARCO TEORICO

Un medio de cultivo es un sustrato o una solucin de nutrientes que permite el

desarrollo de microorganismos. En las condiciones de laboratorio para realizar un
cultivo, se debe sembrar sobre el medio de cultivo elegido las muestras en las que
los microorganismos van a crecer y multiplicarse para dar colonias.
Los microorganismos son los seres ms abundantes de la tierra, pueden vivir en
condiciones extremas de pH, temperatura y tensin de oxgeno, colonizando una
amplia diversidad de nichos ecolgicos. Entre los requerimientos ms importantes
para su desarrollo estn el carbono, el oxgeno, nitrgeno, dixido de carbono e
hidrgeno. Muchas bacterias sin embargo necesitan del aporte extra de factores
de crecimiento especficos en forma de suero, sangre y extracto de levadura entre
otros.
Clasificacin de los medios de cultivo
Segn su origen:
a) NATURALES: son los preparados a partir de sustancias naturales de origen
animal o vegetal como ser extractos de tejidos o infusiones y cuya composicin
qumica no se conoce exactamente.
b) SINTTICOS: son los medios que contienen una composicin qumica definida
cuali y cuantitativamente. Se utilizan para obtener resultados reproducibles.
c) SEMISINTTICOS son los sintticos a los que se les aaden factores de
crecimiento bajo una forma de un extracto orgnico complejo, como por ejemplo
extracto de levadura.
Segn su consistencia
a) LQUIDOS: se denominan caldos y contienen los nutrientes en solucin acuosa.
b) SLIDOS: se preparan aadiendo un agar a un medio lquido (caldo) a razn
de 15g/litro. El agar es una sustancia inerte polisacrida (hidrato de carbono) que
se extrae de las algas. Como esta sustancia no es digerida por las bacterias no
constituye ningn elemento nutritivo. Este conjunto convenientemente esterilizado
puede ser vertido en placas de Petri o en tubos de ensayo y presentan la
posibilidad de aislar y diferenciar bacterias, "procesos que antes no eran posibles
en medio lquido".

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c) SEMISLIDOS: contienen 7,5 g de agar /litro de caldo. Se utilizan para
determinar la motilidad de las especies en estudio.
Actualmente se encuentran disponibles comercialmente con el agregado de agar.
Segn su composicin: A causa de los requerimientos qumicos del
mundo microbiano, a veces es necesario agregar o eliminar componentes
qumicos del medio.
a) COMUNES O UNIVERSALES: su finalidad es el crecimiento de la mayor parte
de los microorganismos poco existentes. Es el medio ms frecuentemente
utilizado para mantener colonias microbianas. Por ejemlo: agar comn o caldo
comn.
b) ENRIQUECIDOS: estn compuestos de un medio base como apoyo del
crecimiento al cual se le puede agregar un gran exceso de nutrientes como
suplementos nutritivos, por ejemplo: sangre, suero, lquido asctico, etc. Se utiliza
para microorganismos que tienen grandes exigencias nutricionales.
c) SELECTIVOS: son slidos en los que la selectividad se consigue alterando las
condiciones fsicas del medio o aadiendo o suprimiendo componentes qumicos
especficos con el fin de inhibir el crecimiento de especies qumicas cuyo
crecimiento no interesa. Este tipo de medio slo permite el crecimiento de un
grupo de microorganismos e inhibiendo el de otros. Se utiliza para seleccionar y
aislar microorganismos a partir de poblaciones mixtas. Por ejemplo Agar salado
manitol o Chapman (permite el crecimiento de ciertos estafilococos)
Entre los factores selectivos que alteran las condiciones del medio tenemos:
Cambio de pH: por ejemplo agregando cido actico para favorecer el
crecimiento de Lactobacillus (pH final: 5,4 que es hostil par la mayora de
las especies que crecen entre 6,5 y 7,2). Los hongos crecen entre pH 4 y 6
y S. faecalis a pH 9,6.
Cambio de temperatura: la mayora de las bacterias crece ptimamente
entre 20 C y 40 C. Los cultivos tpicos de S. Faecalis requieren 60 C de
temperatura y los de Listeria son capaces de desarrollarse y crecer a 4 C.
Alteraciones osmticas: se acrecientan las propiedades osmticas un
medio con el agregado de cloruro de sodio. Estos medios intensifican la
seleccin de bacterias halfilas como Staphylococcus spp. (7,5%).
Ajuste en la tensin de oxgeno: es importante en la seleccin de
aerobios y anaerobios.

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Ajuste en la tensin de anhdrido carbnico: muchos patgenos
importantes pueden ser cultivados a menos que se eleve la tensin ms
all de la atmosfrica.

Entre los factores que inhiben el crecimiento de bacterias indeseables tenemos:

Antispticos: sustancias antibacterianas inespecficas que pueden actuar

como inhibidores. Por ejemplo: el medio de cultivo comercial S - S
(Salmonella - Shigella) que contiene verde brillante (inhibe las bacterias
gram positivas) y sales biliares (que inhiben un gran nmero de gram
negativas menos entero bacterias). Otro ejemplo es el medio de Mc
Conkey que contiene cristal violeta (inhibe las gram positivas pero no las
enterobacterias)

Antibiticos: sustancias antibacterianas especficas que impiden el

crecimiento de aquellos microorganismos que no nos interesa que crezcan
en ese medio. Un ejemplo es el medio de Thayer - Martin con VCN
(vancomicina, colistina y nistatina) que se utiliza para el aislamiento de
gonococos. La penicilina en una concentracin de 5,50 unidades/ ml
inhibe la mayora de las grampositivas. Otro ejemplo es el medio de
Sabourand - cloranfenicol para el aislamiento de Cndida albicans.

d) DIFERENCIALES: son medios de cultivos que nos permiten distinguir entre

varios gneros y especies de microorganismos. Por ejemplo si al medio se le ha
aadido un carbohidrato y un indicador y la bacteria que se cultiva es capaz de
fermentar dicho carbohidrato, se produce una acidificacin del medio con el
consiguiente viraje de color del indicador por el cambio de pH. El citrato de
Simmons es un medio cuya nica fuente de carbono es el citrato sdico, entonces
en l solo crecern las bacterias capaces de desarrollarse utilizando como nica
fuente de carbono ese componente. A menudo la separacin se basa en la
diferencia de color de las colonias aisladas, como en el agar con azul de metileno eosina que permite diferenciar E. coli (colonias oscuras y de brillo metlico) de
Enterobacter aerogenes (colonias rosadas de centro azul sin brillo). Estos dos
microorganismos en agar nutritivo producen colonias de color gris blancuzco.
Suelen ser a la vez selectivos, por lo tanto solo crecern determinadas bacterias
(pueden ser dos o ms tipos) que al actuar sobre alguno de los componentes
especficos del medio, demuestran algunas de sus propiedades o caractersticas y
nos permite diferenciar entre ambos tipos.
e) DE ENRIQUECIMIENTO: son medios lquidos que contienen un agente que
inhibe las especies no deseadas pero que favorece el crecimiento irrestricto del
agente infeccioso. El medio de Muller - Kauffman, permite el crecimiento de
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Salmonella inhibiendo a su vez el de numerosos coliformes. Esto es de gran
importancia ya que en ciertas muestras, por ejemplo fecales, el agente infeccioso
(Salmonella) es frgil y puede ser superado en nmero por agente bacterianos
indgenas como E. coli; por lo tanto antes de realizar las pruebas de laboratorio es
necesario aumentar su nmero con respecto a sta en un caldo de
enriquecimiento. Ejemplo de este tipo son los caldos de tetrationato y selenito. El
agua de peptona alcalina se utiliza para Vibrio cholerae.
El enriquecimiento es una tcnica que utiliza un medio selectivo lquido para
permitir el desarrollo de un microorganismo a partir de una muestra que contiene
una gran variedad de microorganismos. As, aquellos microorganismos para los
que el ambiente sea ms favorable crecern ms que los otros y finalmente sern
predominantes
f) DE TRANSPORTE: son utilizados para asegurar la viabilidad de la bacteria sin
multiplicacin significativa de los microorganismos desde el momento de su
extraccin hasta su posterior estudio. Se utilizan generalmente cuando las
muestras deben ser enviadas de un laboratorio a otro. Se recomienda un lmite de
dos horas desde la recoleccin de las muestras y su estudio en el laboratorio, pero
este lmite de tiempo es superado (frecuentemente cuando se trata de muestras
tomadas en un consultorio). Esta demora hace necesario el uso de medios de
transporte adecuados. Los medios de transporte ms frecuentemente utilizados
son los de Stuart, Amies y Carey - Blair. Existe una unidad descartable de cultivo
de transporte llamada Culterette que consiste en un tapn estril de poliestireno y
un ampolla en la parte inferior que se rompe cuando se ejerce presin liberando el
medio de transporte de Stuart alrededor del extremo del tapn impregnado en la
muestra.
Hasta hace algunos aos los componentes orgnicos mencionados deban ser
obtenidos por el microbilogo y el medio de cultivo se preparaba en el laboratorio.
Actualmente se dispone comercialmente de la mayor parte de los medios e incluso
de sus componentes adicionales.
Un gran nmero de medios de cultivo usados en el laboratorio de microbiologa
son mixtos, es decir que tienen como finalidad la de varios grupos de los
mencionados, por ejemplo, el agar S- S es selectivo (pues tiene un inhibidor: el
verde brillante) y es a la vez un medio diferencial (lleva lactosa y un indicador) que
permite diferenciar las bacterias fermentadoras o no de dicho polisacrido. El
medio de Thayer y Martin para Neisseria es un medio enriquecido (contiene
plasma) y es selectivo (tiene 3 antibiticos inhibidores de la flora bacteriana y
fngica: colistina, vancomicina y nistatina).

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III.

OBJETIVOS
Conocer la clasificacin, preparacin, esterilizacin y distribucin de los
medios de cultivo.
Adquirir conciencia de la importancia que tiene la correcta preparacin del
medio de cultivo en la prctica microbiolgica.
Adquirir prctica en el preparado de algunos medios de cultivo a partir de
sus componentes individuales.
Reconocer la necesidad de evitar la contaminacin tanto de los medios de
cultivo como de los dems elementos utilizados en el laboratorio de
microbiologa.
Realizar el cultivo de microorganismos con diferentes muestras para su
multiplicacin e identificacin.

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IV.

DESARROLLO DE LA EXPERIMENTAL
MATERIALES:

Tubos de ensayo
Muestra de sarro
Muestra de piel
Muestra de moneda
Hisopo esterilizado
Agar inclinado en tubo
Mechero de bunsen
Algodn
Placas Petri
Asa de kolle
Hojas bond, plumn indeleble.
Estufa
Caldo nutritivo

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AGAR NUTRITIVO: MUESTRA DE SARRO

PROCEDIMIENTO:
1.- Se introduce el hisopo al caldo nutritivo, luego se procede a hacer
extraer la muestra del raspado bucal

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2.- luego esta muestra se coloca en la caja Petri y el hisopo se coloca al caldo
nutritivo

3.- el Aza de koss se coloca en el mechero para la esterilizacin de este

instrumento, luego se procede a la extensin de la muestra en forma de six sax
que se encuentra en la caja Petri

4.- Se coloca el aza de koss en el mechero y luego se procede al sellado de la

caja Petri

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AGAR MACONQUE: MUESTRA DE RASPADO DE PIEL

1.- Se introduce el hisopo al caldo de nutritivo , luego se procede a hacer extraer la

muestra del raspado de piel

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2.- luego esta muestra se coloca en la caja Petri, se coloca el aza de koss al
mechero

3.- Se extiende la muestra con el aza de koss en la caja Petri y luego se procede
al sellado

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AGAR MANITOR SALADO: MUESTRA DE LLAVE

1.- Se introduce el hisopo al caldo de nutritivo luego se frotar el hisopo por la

llave, luego esta muestra se coloca en la caja Petri

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2.-Esta muestra se coloca en la caja Petri, calienta el aza de koss

3.- luego se procede hacer el extendido de la muestra que se encuentra en la

caja Petri, el aza de koss se vuelve a colocar en el mechero

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4.- Por ltimo se procede a ser el sellado del cultivo

V.

CONCLUSIONES:

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Los medios de cultivo son uno de los mtodos ms usados para el anlisis
de microorganismos con varios fines, como el de multiplicacin,
identificacin, antibiograma, entre otros, y puede ofrecer informacin
valiosa sobre los mismos si se realiza de manera adecuada e higinica
para evitar la contaminacin del medio y la alteracin de los resultados.
En esta prctica se aprendi la importancia de preparar medios de cultivo,
de que materiales pueden ser hechos, los distintos tipos de cultivos que
pueden desarrollarse en el laboratorio, as como su clasificacin, sus
caractersticas principales, los distintos tipos que pueden servir para
identificar diferentes bacterias, as como las condiciones que estos deben
de reunir.

VI.

BIBLIOGRAFIA :

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http://es.scribd.com/doc/5203044/Medios-de-Cultivo-y-PruebasBioquimicas
http://www.biologia.edu.ar/microgeneral/tp4.pdf
http://www.odon.uba.ar/uacad/Pagina%20Microbiologia/micro
%202013/guias%20tp/medios%20de%20cultivos.pdf

http://www.itescam.edu.mx/principal/sylabus/fpdb/recursos/r91
252.PDF

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