Metabolismo Microbiano

Ana C. Colarossi
ana.colarossi@upch.pe
Universidad Peruana Cayetano Heredia
Dpto de Ciencias Celulares y Moleculares
Seccin Bioqumica Biologa Molecular y Farmacologa

Objetivos
Describir los procesos de produccin de
energa en microorganismos
Comparar el rendimiento energtico de los
procesos fermentativo y respiratorio
Importancia de estos procesos en el
aislamiento y la patogenicidad de los
microorganismos

Aspectos Generales del

Metabolismo
MSc. Ana Colarossi
Dpto.de Ciencias Celulares y Moleculares
Seccin Bioqumica, Biologa Molecular y
Farmacologa

Que es el Metabolismo?
Transformaciones qumicas que se realizan en
una clula u organismo
Metabolismo
celular:
Transformaciones
qumicas que se realizan mediante una serie de
reacciones que son catalizadas por enzimas de
una va metablica.
Funcin:
o Obtencin de energa
o Obtencin de precursores para generar
macromolculas.

Las clulas necesitan energa para realizar

trabajo.
La energa que necesita un organismo hetertrofo proviene
esencialmente de los nutrientes, particularmente de aquellos
que proveen caloras (conocidos tambin como combustibles
metablicos), los cuales son:
Carbohidratos,
Lpidos y
Protenas.

La energa que poseen estos nutrientes se encuentra

almacenada en forma qumica.

La molcula de ATP
Los seres vivos utilizan la molcula de ATP como
medio principal para almacenar energa potencial
proveniente de la degradacin de los alimentos

La manera de utilizarse la energa en la molcula de ATP es

mediante la separacin de un grupo fosfato el cual est unido
mediante un enlace covalente de alta energa

Metabolismo celular
Catabolismo: Degradacin
Libera energa

Principalmente oxidaciones
Anabolismo: Sntesis

Requiere energa
principalmente reducciones

C
c

a'

G
g

ATP
H

E
e

h
I

Degradacin

Sntesis
Lehninger. Principles of Biochemistry.

Las vas metablicas forman una red compleja que

debe ser finamente regulada

C FG

H D

Acetil CoA

Catabolismo:
Convergente

Anabolismo:
Divergente

Lehninger. Principles of Biochemistry.

Instrumentos para la regulacin metablica:

Rutas anablicas y catablicas son diferentes
Pasos enzimticos diferentes

Compartamentalizacin

Instrumentos para la regulacin metablica

Mecanismos alostricos

Instrumentos para la regulacin metablica

Enzimas constitutivas, enzimas inducibles Tasa de sntesis y degradacin de enzimas

 Instrumentos para la regulacin metablica

Modificacin covalente de enzimas
(accin de hormonas en organismos pluricelulares)

Vas generadoras de Energa

Ana C. Colarossi
ana.colarossi@upch.pe
Universidad Peruana Cayetano Heredia
Dpto de Ciencias Celulares y Moleculares
Seccin Bioqumica Biologa Molecular y Farmacologa

Metabolismo bacteriano

Las bacterias varian ampliamente en la forma que producen la

energa y en los materiales que necesitan para crecer.
Se clasifican en:

1.Auttrofos : No requieren compuestos orgnicos,pueden

sintetizar todos sus componentes a partir de CO2 y nitrgeno
inorgnico en presencia de elementos traza.
2. Hetertrofos: Degradan compuestos orgnicos.
Muchas cepas son autotrficos facultativos (autotrficos o
heterotrficos dependiendo de las condiciones del medio)

Las bacterias heterotrficas pueden dividirse en:

Heterotrficas aerbicas: Emplean el oxgeno molecular para
oxidar las molculas orgnicas que emplean como nutrientes.

Hetertroficas anaerbicas:
Anaerbias estrictas: Viven en ausencia de oxgeno
Anaerobias facultativas: Pueden vivir en presencia o ausencia
de oxgeno

Catabolismo: Generacin de la Energa

Aerbico: O2 es el aceptor final de los electrones. (Respiracin

celular)
Anaerbico:
- Fermentacin: El aceptor final de los electrones es un
compuesto orgnico
- Respiracin Anaerbica: El aceptor final de los electrones es un
compuesto inorgnico ( no el O2) .Ocurre en bacterias

ingreso de
nutrientes
a la clula

degradacin
enzimtica
energa

ADP
+
Pi

energa para
trabajo

ATP

sustancias
de desecho
energa liberada
23

Catabolismo aerbico de
carbohidratos, grasas y
protenas

Catabolismo de Carbohidratos
MSc. Ana Colarossi
Dpto. de Ciencias Celulares y Moleculares
Seccin Bioqumica, Biologa Molecular y
Farmacologa

Entrada de azcares a las clulas

bacterianas

METABOLISMO DE CARBOHIDRATOS

En las bacterias se encuentran las tres vas

centrales del metabolismo intermediario de
los hidratos de carbono para generar energa:

Va glucoltica o de Embden Meyerhof Parnas

Va de las pentosas fosfato o shunt de las

pentosas

Va de Entner-Doudoroff.

Va Glucoltica
La Glucolisis o va de Embden-Meyerhoff es la
principal va de degradacin de los
carbohidratos.
Es un proceso por el cual 1 mol de glucosa es
convertida en 2 moles de piruvato, generando 2
moles de ATP.
Ocurre en el citosol de la clula

10 reacciones enzimticas

Regulacin de la glucolisis

Entrada de otros glcidos a la va glucoltica

Va de Entner Doudoroff
Se encuentra presente en un grupo muy diverso de
microorganismos, en especial microorganismos patgenos para el
hombre.
Constituye una alternativa a al va glucoltica en el uso de
carbohidratos
La funcin primordial es aportar piruvato a la clula, importante para
los procesos de biosntesis
Primera enzima de la va: gluconato-6-fosfato dehidratasa que
forma 2 ceto-3 deoxi-6 fosfogruconato.
Luego una aldolasa forma piruvato y gliceraldehido-3- fosfato

Va de Entner Doudoroff en P.aeruginosa

Es la ruta central junto con la va de las pentosa fosfato.
Esta va es constitutiva y opera de manera cclica junto con la va
de la gluconeognesis. De manera que el gliceraldehdo 3 fosfato
regenera el 6 fosfogluconato.

Va de Entner Doudoroff en E.coli

Es inducida por gluconato extracelular
Opera de manera lineal

Es inducida por gluconato que es introducido a la clula en simporte

con protones y fosforilado por la enzima gluconato quinasa para
formar gluconato-6 fosfato.

Rol de la va en E.coli
El gluconato es una fuente de alimento importante, presente en el
intestino de mamferos.
Se considera que esta va es importante y hace capaz a la bacteria
de colonizar el intestono de mamferos utilizando como sustratos Dgluconato, D-glucoronato, D-galacturonato entre otros presentes en
la mucosa intestinal.

Las enzimas son inducidas rpidamente cuando hay limitaciones de

nitrgeno

Via de las pentosas fosfato

Fermentaciones
Bajo condiciones anaerbicas se dar la
fermentacin
Ej:
Fermentacin lctica
Fermentacin alcohlica

Fermentacin lctica

DESCARBOXILACION OXIDATIVA DEL

PIRUVATO
Y
CICLO DE KREBS

Estructura de la mitocondria, principal sitio de consumo de oxgeno en

Clulas eucariotas

Descarboxilacion oxidativa del piruvato

Ciclo de Krebs

Naturaleza anfiblica del Ciclo de Krebs:

Intermediarios de la va sirven de precursores para la biosntesis de
otros compuestos

Fosforilacin Oxidativa

Mecanismo de la Fosforilacin oxidativa mitocondrial

Metabolismo de bacterias patgenas

de importancia clnica
MSc Ana Colarossi S.
ana.colarossi@upch.pe
Departamento de Ciencias Celulares y Moleculares
Seccin Bioqumica, Biologa Molecular y
Farmacologa

Caractersticas Generales de las

Bacterias entricas
Microorganismos heterogneo (el contenido de G+C del grupo vara
del 40 al 60%)

Son anaerobios facultativos:

- Desarrollan un metabolismo respiratorio en condiciones
aerobias
- Un metabolismo fermentativo en condiciones anaerobias.

Caractersticas Generales de las

Bacterias entricas
Todos son microorganismos quimioorganotrofos con pocos
requerimientos nutricionales por lo que pueden crecer en medios de
cultivo relativamente simples.
Morfolgicamente son bacilos cortos y cocobacilos Gram-negativos.

Caractersticas Generales de las

Bacterias entricas
Presentan dos grandes grupos:
- 1 Grupo entrico formado por bacterias que presentan
caractersticas
comunes
con
las
bacterias
intestinales
(contaminacin por alimentos)
- 2 Grupo de bacterias relacionadas cuyos componentes
presentan en comn con los primeros su metabolismo anaerobio
facultativo y la capacidad de colonizar ambientes intestinales en
situaciones patolgicas (Yersinia, Aeromonas, Vibrio)

Caractersticas Generales de las

Bacterias entricas
El grupo entrico puede subdividirse, a su vez, en dos:
1 Bacterias coliformes: gneros Escherichia, Enterobacter,
klebsiella y Citrobacter
Estas bacterias tienen un tiempo de supervivencia reducido en
agua u otros ambientes extracorporales
2 Bacterias no-coliformes cuyo hbitat natural es el agua o el
suelo pero que ocasionalmente pueden encontrarse en ambientes
intestinales.
Las caractersticas metablicas de las bacterias del grupo de nocoliformes son muy similares a las del grupo de coliformes y la
diferenciacin se basa principalmente en su hbitat.

Particularidades metablicas de las

Bacterias entricas
Desarrollan la gluclisis usando la ruta de Embden-Meyerhoff,
utilizando el piruvato en el ciclo de Krebs cuando estn en
condiciones aerobias o por diferentes rutas fermentativas cuando se
encuentran en condiciones anaerobias.

Con excepcin de Erwinia no degradan azcares complejos.

Particularidades metablicas de las

Bacterias entricas
Escherichia, Salmonella, Yersinia y Vibrio
- Tienen una fermentacin cido-mixta con formacin de cantidades
variables de cido succnico, actico y frmico; as como
compuestos neutros como etanol, CO2 y H2.
- Las cantidades de cada uno de los productos depende de las
actividades relativas de los diferentes enzimas de utilizacin del
piruvato
- y la formacin de cido frmico o de CO2 y H2 depende de la
presencia de la hidrogenoliasa frmica.

VIA ACIDO MIXTA Y BUTILENGLICLICA DE LA GLUCOSA

GLUCOSA
-12H

Embden-Meyerhof

Acido Pirvico

Fermentacin butilengliclica

+4H
Acido
acetico

3 CO2

Fermentacin cido mixta

Alcohol
etilico

+CO2
+4H

Acetolactato

Acido frmico

cido lctico

oxalacetato

3 CO2

+4H

cido actico

Acetil metil carbinol

(Acetoina)

+6H

2,3 -Butilenglicol

H2

CO2

Diacetilo KOH + aire

Naftol + creatinina

cido formico

cido
succinico

H2

pH< 4,4 convierte al

indicador rojo de metilo

Complejo rojo
(Prueba de VP positiva)

Serie de reacciones
Reacciones de un solo paso

CO2

Alcohol
etilico

Color rojo
(prueba positiva de RM)

Prueba de Rojo de Metilo (RM)

E.coli

Los productos finales son

cidos orgnicos (cidos
frmico, actico, lctico y
succnico)

Provocan un fuerte descenso

del pH inicial del medio.

Se detecta por el viraje del

indicador de rojo de metilo
que permanece amarillo por
encima de pH 5,1 y rojo por
debajo de 4,4.

Particularidades metablicas de las

Bacterias entricas
Las bacterias del grupo entrico no coliforme: Enterobacter,
Klebsiella, Erwinia y Serratia ,realizan fermentacin butanodilica
porque se forma ste producto final.

En el caso de producirse la fermentacin butanodilica se genera,

como paso intermedio, acetona detectable por la reaccin de
Voges-Proskauer que permite la identificacin de bacterias de este
grupo

Prueba de Voges Proskauer (VP)

Grupo Klebsiella-Enterobacter

Los productos finales son

compuestos neutros como el
butanodiol y el etanol,
producindose acetona como
intermediario

Se detecta aadiendo al medio

KOH y alfa-naftol que
reaccionarn con este
compuesto produciendo un
color rojo caracterstico.

Particularidades metablicas de las

Bacterias entricas
Tiene importancia taxonmica en este grupo la capacidad de
fermentacin de lactosa que presenta Escherichia, Citrobacter y
otras bacterias coliformes.

La capacidad de fermentacin de lactosa depende de la presencia

de la enzima b -galactosidasa en las bacterias.

Grupo de Enterobacter- SerratiaErwinia

Bacterias del suelo y del agua aunque pueden encontrarse en
hbitats intestinales y del tracto respiratorio (Klebsiella pneumoniae)
Algunas como Enterobacter y Klebsiella pueden fijar nitrgeno en
condiciones anaerobias.

Hay algunas patgenas vegetales. Erwinia es una excepcin en el

grupo de las bacterias entricas porque es capaz de degradar
fermentativamente polisacridos complejos como la pectina,
causando enfermedades en plantas.

Grupo de Proteus-Providencia
Son habitantes del suelo especializados en la
descomposicin de la materia orgnica. Pueden ser
fcilmente identificados por la presencia de la enzima
ureasa.

Grupo de Yersinia
Patgeno de roedores que puede pasar a humanos causando
enfermedades serias (peste bubnica o peste neumnica causada
por Yersinia pestis) y procesos diarricos (Yersinia enterocolitica).

Helicobacter pilory
El H. pylori es un patgeno que afecta crnicamente al 50% de la
poblacin mundial.
La presencia de la bacteria en la mucosa gstrica est asociada con
desordenes severos gstricos, tales como gastritis crnica atrfica,
ulceracin pptica, carcinoma gstrico y linfoma MALT (tejido linfoide
asociado a mucosa).

Cmo el H. pylori obtiene la energa para

su metabolismo?
El H. pylori, es una bacteria, espiralada, gram-negativa,
microaeroflica con la extraordinaria capacidad de
establecer una infeccin en la mucosa gstrica.
Al no utilizar el oxgeno el ciclo de Krebs tal como lo
describimos, no seria operativo

Bajo condiciones microaerfilas, las enzimas del ciclo de

Krebs funcionara como un proceso no cclico, donde la
rama oxidativa y la rama reductora estaran unidas por cetoglutarato oxidasa.

Metabolismo de Bacterias
Intracelulares

Bacterias intracelulares patgenas

Mycobacterium tuberculosis
Mycobacterium leprae
Listeria monocytogenes
Salmonella typhi
Shigella dysenteriae
Brucella species
Legionella pneumophila
Rickettsiae
Chlamydia

Tuberculosis
Lepra
Listeriosis
Fiebre tifoidea
Disentera bacilar
Brucellosis
Pneumonia
Typhus
Trachoma

 Los parsitos intracelulares sobreviven dentro de los fagocitos en

virtud de mecanismos que intervienen con la actividad bactericida
de la clula hospedera.
Algunos de estos mecanismos son:
Inhibicin de la unin de los lisosomas con el fagosoma
Supervivencia dentro del fagolisosoma
Escape desde el fagosoma

Mycobacterium tuberculosis: Ciclo

del Glioxilato como factor de
virulencia

El fagolisosoma

Presenta un ambiente precario y hostil para el microoganismo

Tiene compuestos antimicrobianos y pH acido
Carece de nutrientes necesarios para el metabolismo y divisin
Los patgenos intracelulares deben tener habilidades para contra
restar este estrs
Deben encontrar los nutriente requeridos para la sntesis de
macromolculas complejas y la energa necesaria para sintetizarlos

Mycobacterium tuberculosis
Reside por periodos prolongados dentro del macrfago, en el cual
puede proliferar y posteriormente esparcirse por todo el organismo

Por qu se induce Ciclo del Glioxalato

en organismos fagocitados?
Representa una respuesta a la carencia de nutrientes en el
fagosoma.
La fuente de carbono provendra de la degradacin de cidos
grasos.
Se requiere ciclo de glioxalato para la virulencia de organismos
patgenos aunque esto no sea suficiente para convertir a un
organismo en patgeno.

Metabolismo de Azcares como

factor de Virulencia en Bacterias
Orales

Las cepas bacterianas encontradas en la placa dental son

aerbias , anaerbicas facultativas y anaerbicas obligadas.
En el catabolismo anaerbico de los sustratos no hay consumo de
oxgeno, y las transformaciones metablicas se denominan
fermentaciones.
Numerosas bacterias prefieren los carbohidratos para la
fermentacin , pero algunas bacterias pueden utilizar los
aminocidos como alternativa

PLACA DENTAL

Microscopa electrnica de barrido de microorganismos coadherentes en la placa dental.

Se observa un agregado de organismos, apilados uno sobre el otro.
Barra de escala = 10 micrometros.

MECANISMO DE
PRODUCCION DE CARIES
La caries es un proceso patlogico, localizado
caracterizado por una serie de reacciones qumicas y
microbiolgicas que acaban destruyendo el diente.
Se acepta que esta destruccin es el resultado de la
accin de cidos producidos por bacterias en el medio
ambiente de la pieza dental

 Estreptococos:
Bacteria Gram positiva,anaerobia facultativa.
Alta capacidad para fermentar carbohidratos

Capacidad de producir reserva de carbohidratos

(glucgeno intracelular)
Producen polisacridos extracelulares (glucanos)
Principalmente a partir de sacarosa.

Colonizacin
Las bacterias de la placa contienen dos enzimas
muy especficas que utilizan la sacarosa para formar
polmeros extracelulares, son:
1. Dextrn sacarasa o glucosiltransferasa: sintetiza
y elonga dextranos segn la reaccin:
Sacarosa+ (glucosa)n(glucosa)n+1 + fructosa
2. Levn sacarasa o fructosiltransferasa: sintetiza y
elonga levanos :
Sacarosa+ (fructosa)n(fructosa)n+1 + glucosa

Colonizacin

Streptococo mutans es cariognico y produce

mutanos insolubles (polimeros de glucosa con
enlaces 13).

Estos polisacaridos proporcionan a la placa

propiedades gelatinosas y adhesivas,
restringiendo el intercambio de materiales entre
la placa y la saliva y favoreciendo las
fermentaciones

Glucanos
Insolubles en agua (-1,3 glycosidic bonds) = mutan- --- 70% de
la placa dental -- Agregacin o aglutinacin de la clula

MEDIO SIN SUCROSA

MEDIO CON SUCROSA

MICROBIOLOGICAL REVIEWS, June

1980,

Fermentacin de los carbohidratos

Glucosa, galactosa y fructosa son metabolizados por
glicolisis y vas anlogas en las bacterias. Son equivalentes
como fuente de energa.
Hay dos destinos alternativos para el piruvato:

-La reduccin a lactato

- Formacin de formato y Acetil CoA mediante la intervencin
de la enzima piruvato formato liasa (PFL), seguida por la
conversin del acetil CoA en acetato y etanol
En S. Mutans, en ausencia de carbohidratos se produce
menos lactato y mas etanol, formato y acetato

Metabolismo de azcares en
Streptococcus mutans
El metabolismo en el interior de la clula bacteriana depende de las
condiciones:
Si el suministro es alto, la glicolisis anaebica permite que las
concentraciones de F16BP y G3P sean altas
F1,6BP activa LDH
G3P inhibe a la formiato liasa
Aumenta la produccin de cido lctico
El lactato es excretado al exterior bajando el pH.
El lactato puede ser utilizado por Veillonella para transformarlo en actico
y propinico

Metabolismo de Streptococcus
mutans
Si el suministro de azcar es escaso, se activa la acetato quinasa y
favorece la formacin de cido frmico.

En abundancia de carbohidratos PFL es inhibida por G3P y

LDH es estimulada por FDP

Es ventajoso desde el punto de vista energtico porque obtiene un ATP

extra al hidrolizarse el acetil fosfato.

Condiciones diferentes de Crecimiento: Desviacin a partir de la

fermentacin homolactica

Piruvato Formato Liasa

(PFL)

Acetato + Etanol

Lactato Deshidrogenasa
(LDH)

METABOLISMO DE LA SACAROSA DEL Streptococcus

mutans

(Maltosa, lactosa, sorbitol,

xilitol, manitol y otros)

Glucosa

Fructosa

S. mutans es capaz de metabolizar una amplia variedad de

carbohidratos, mas que otras bacterias Gram positivas.
Se han encontrado genes para el transporte de glucosa, fructosa,
sucrosa, lactosa, galactosa, manosa, celobiosa, maltodextrina,
rafinosa, ribulosa, almidn.
Adems, es capaz de convertir varios azcares-alcohol a
intermediarios de la glicolisis.
El hallazgo de un sistema de transporte de azcares de tipo
fosfotransferasa para pentosas sugiere que puede utilizar ciertas
pentosas.

 S. mutans posee un ciclo de Krebs incompleto. El rol primario de

estas enzimas del ciclo seria la sntesis de precursores para la
sntesis de aminocidos

Polisacaridos de Almacenaje
El polisacarido mas comn es el glucgeno.
Se sintetiza cuando la concentracin externa de
carbohidratos fermentables es mas abundante de lo que
se requiere en las demandas de energa para el
desarrollo
El mecanismo de sntesis y degradacin es semejante a
los de los mamferos.
El sustrato es el ADP-glucosa en vez de UDP-glucosa.

Capacidad de almacenamento
Strptococos: 37%

de

glucogeno

en

PLACA DENTAL MOSTRANDO TINCION DE POLISACARIDOS

(J.D. Ruby y V.F. Gerencser)

La placa dental fue expuesta a sucrosa 5%in situ por 5 minutos. Luego se aplic tincin de iodo de
Gram. La solucin de sucrosa fue aplicada al incisivo central izquierdo, el derecho sirvi como control.
El iodo se une selectivamente a los alfa-1,4 glucanos sintetizados por las bacterias de la placa,
dando un color marrn, que puede llegar hasta morado, segn la concentracin.

PLACA DENTAL MOSTRANDO TINCION DE POLISACARIDOS

(J.D. Ruby y V.F. Gerencser)

Magnificacin a 1000X de un
raspado de la misma placa dental
Las clulas teidas son bacterias
que presentan polisacridos
intracelulares, tipo glucgeno .

Metabolismo de S. mutans,favorece crecimiento

secundario de otras bacterias