DESARROLLO

DE

BIO-PROCESOS

PARA

LA

PRODUCCIN

DE

ANTIOXIDANTES (CIDO GLICO, CIDO TNICO Y CIDO ELGICO) DE

ALTO VALOR COMERCIAL A PARTIR DE SUBPRODUCTOS DE LA NUEZ
Resumen ejecutivo
El presente trabajo de investigacin fue realizado en tres etapa:s la primera fue
la produccin de la enzima tanin acil hidrolasa, utilizando una cepa aislada de
la regin semidesrtica de Coahuila y bajo condiciones de manipulacin
establecidas por Cruz-Hernndez (2002). Para la segunda etapa se llevo a
cabo la purificacin parcial de la enzima, usando el protocolo desarrollado por
Mata-Gmez (2006) y en la tercera etapa se llev a cabo el estudio de
estabilidad de esta enzima en cuanto a pH y temperatura.
En la primera etapa, para la produccin de la enzima se utiliz la cepa de
Aspergillus niger GH1 perteneciente a la coleccin del Departamento de
Investigacin en Alimentos de La Facultad de Ciencias Qumicas de la
Universidad Autnoma de Coahuila (DIA-UAC), la cual fue conservada en
tubos eppendorf en una solucin que contena leche descremada al 5% y
glicerol al 10% a -40 C.
En la segunda etapa se establecieron las condiciones de reaccin de la tanasa
para hidrolizar los taninos extrados de la nuez para la liberar los antioxidantes
monofenlicos. Se establecieron las constantes cinticas de la tanasa libre e
inmovilizada, ya que se evalu el efecto de la concentracin de la enzima y del
sustrato. El efecto del pH y de la temperatura sobre la actividad de la tanasa
libre tambin fueron determinados.
La tercera etapa consisti en la produccin de la enzima tanasa utilizando la
cepa de Aspergillus niger GH1 perteneciente a la coleccin del Departamento
de Investigacin en Alimentos de la Facultad de Ciencias Qumicas de la
Universidad Autnoma de Coahuila y bajo condiciones de manipulacin
establecidas por Cruz-Hernndez (2002). Despus se llev a cabo la
purificacin parcial de la enzima, usando dilisis, concentracin por
polietilenglicol y cromatografa en gel; sigui la inmovilizacin de la enzima
tanasa utilizando alginato de calcio como soporte y finalmente en la cuarta
etapa el estudio cintico de la enzima.

Para obtener la tanasa intracelular se realizaron dos fermentaciones en las

cuales se utilizaron cuatro matraces Erlenmeyer de 1000 mL cada uno con 250
mL del medio lquido a una concentracin de 12.5 g/L de cido tnico y un
inoculo de 1 x 107 esporas/mL. El tiempo de incubacin fue de 24 horas a una
temperatura y agitacin constante de 30 C y 250 rpm respectivamente. De
dichas fermentaciones se obtuvo una concentracin de biomasa de 1.166 g. La
tanasa intracelular fue extrada por la lisis de las clulas mediante la
maceracin de la biomasa previamente congelada en nitrgeno lquido por un
tiempo de 30 minutos. La enzima fue recuperada con buffer de acetatos 100
mM, pH=5.5 logrando obtener un volumen de extracto enzimtico crudo de
200.5 mL con una actividad de 15.68 U/L y una actividad especifica de7.29
U/mg.
Las conclusiones a que llega el investigador a partir de los resultados que
obtuvo fueron: el extracto enzimtico crudo obtuvo una actividad enzimtica de
81.9 U/L y una actividad especfica de 4.3 U/mg.; en el extracto enzimtico
purificado se observ una actividad enzimtica de 582.9 U/L y una actividad
especfica de 23.5 U/mg; el pH ptimo de la enzima tanasa de A. niger GH1 es
de 6, mantenindose estable desde pH 2 hasta pH 8; la temperatura ptima, a
la que se obtuvo la mayor velocidad enzimtica es de 60 C, con un rango de
estabilidad desde los 20 hasta los 65 C; se logr conocer la mejor
concentracin de sustrato para que la enzima obtenga su mayor actividad es
de 0.75 g/L, utilizando metilgalato; el mejor tiempo de reaccin para la TAH es
de 20 minutos bajo las condiciones ptimas; la KM y Vmax para la tanasa de
Aspergillus niger GH1 es de 4.1 x 10-3 M y 11.03

mol min-1, respectivamente.

Demanda o problemtica que atiende

A partir de subproductos de la nuez, investigar las condiciones de reaccin de
la tanasa para hidrolizar los taninos extrados de la nuez, con el fin de liberar
los antioxidantes monofenlicos, de alto valor comercial.
Resultados obtenidos y/o descripcin. Caractersticas de la tecnologa
generada

Determinacin de las condiciones para la produccin de la enzima tanasa de

Aspergillus niger GH1 en un sistema de Fermentacin en Estado Slido (FES).
Evaluacin del efecto del pH inicial del medio y el tiempo de incubacin para la
produccin de tanasa en FES.
Impactos
Los resultados ms importantes derivados del proyctodieron lugar a la
elaboracin de documentos, entre ellos un artculo internacional y tres captulos
que formaron parte de un libro sobre fitoqumicos. Lo anterior, considerando la
importancia que tiene socializar el conocimiento cientfico.
Costos estimados de la aplicacin de los resultados y/o tecnologa generada
Derivado de este proyecto surgi un avance cientfico del que no es posible
cuantificar costos por su posible aplicacin.

mbito de aplicacin
Comunidad cientfica nacional.
Informacin adicional o comentario
El investigador seala que se evaluaron los fenmenos de inhibicin de la
enzima, y se compararon los parmetros cinticos de la tanasa producida bajo
dos sistemas diferentes de produccin, el cultivo sumergido y el cultivo en
estado slido.
Clave del proyecto: SAGARPA 2005-C01-12385
Sistema Producto y/o lnea estratgica de atencin: nuez; fitomejoramiento
gentico.
Investigador:
Institucin: Universidad Autnoma de Coahuila