Benemrita Universidad

Autnoma de Puebla
Estructura y funcin molecular I
Prctica de laboratorio: Cuantificacin de protenas por el
mtodo Bradford

INTRODUCCIN

Mtodo de Bradford
Consiste en la formacin de un compuesto de adsorcin de coloracin azul entre los
residuos de aminocidos bsicos de las protenas y el colorante Azul Coomassie. Absorbe
luz a 595 nm. El rango de determinacin de protena es de 1-10 mg/ml (ensayo micro) y de
0,5 -1,4 mg/ml (ensayo estndar). La intensidad de absorcin depende del contenido de
aminocidos bsicos y aromticos.
Blanco: Este tubo no contiene protena, se reemplaza la muestra por agua y se le agrega
el correspondiente volumen de reactivo. Se realiza para determinar la absorbancia del
reactivo, este valor se descuenta de la absorbancia del resto de los tubos.
Curva de calibracin: Para su realizacin se utilizar la solucin testigo de concentracin
conocida. Con la medida de absorbancia de cada tubo y conociendo la cantidad de protenas
que contiene cada uno de los tubos, es posible realizar una curva de calibracin (grfico A 595
vs g de protena). Es necesario realizarla cada vez que se procesen las muestras. La
concentracin del TESTIGO es 100 g/ml.
Muestra incgnita: se procesa en simultneo y en las mismas condiciones que la curva de
calibracin. El tubo contiene la muestra y la misma cantidad de reactivos que los anteriores.
Para conocer la cantidad de protenas de la muestra (g), se determina la absorbancia de la
misma y se interpola en la curva de calibracin.

OBJETIVOS
Aprender los pasos para utilizar el mtodo Bradford
Obtener la concentracin de protena en albmina bovina

MATERIALES Y MTODO

Tubos de ensaye.
Espectrofotmetro.
Gradilla.
Extracto libre de clulas.
Vaso de precipitado.
Tijeras.
Cinta masquin.
Reactivo Bradford.
1.-Etiquetar los tubos de ensaye por
triplicado para generar la curva patrn de albmina.

2.- Mezclar los reactivos de izquierda a derecha de la tabla que se

muestra a continuacin.
3.- Leer en el espectrofotmetro a 560nm.
6.-Anotar las lecturas en la tabla.
7.-Graficar los datos de absorbancia contra la concentracin de
albumina.
8.-Apliar una regresin lineal para obtener una lnea recta
9.-Extrapolar los datos de absorbancia de las muestras
desconocidas, para determinar la concentracin de protena,
expresar la concentracin en mg/ml.

Tubo
1a
1b
1c
2a
2b
2c
3a
3b
3c
Blanco
Z

Agua (ml)
90
90
90
80
80
80
60
60
60
100
95

BSA (ml)
10
10
10
20
20
20
40
40
40
0
0

RESULTADOS
DO560nm

Bradford

2 ml.

DO560nm
0.049
0.154
0.141
0.246
0.272
0.252
0.445
0.523
0.507
0.0
0.320

DISCUSIN Y CONCLUSIONES
Se logra analizar que la curva de calibracin sufri una alteracin, esto debido a la baja
cantidad de absorbancia obtenida de algunas muestras, otra alteracin que pudo haber
sufrido es la mala utilizacin de la Micropipeta o tal vez que el tubo no hubiese estado ceso
por completo.

En conclusin en la prctica realizada el objetivo era descubrir la concentracin desconocida

de una protena, la albmina bovina, para lo que utilizo el mtodo del Bradford. Este es un
mtodo muy confiable, siempre y cuando se tengan las precauciones del caso, como sera la
limpieza en el trabajo, el orden y la precisin. En la prctica realizada nos sirvi para valorar
este mtodo bioqumico, ya que es muy usado en la industria alimenticia.
Adems nos permiti darnos cuenta de la precisin y la dedicacin que se debe tener al
realizar este tipo de procedimientos, ya que cualquier error en el mtodo nos entregara un
resultado equivoco.

BIBLIOGRAFA

http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/Proteinas_8075.pdf