FACULTAD DE CIENCIAS FARMACUTICAS Y BIOQUMICA

INTRODUCCIN

Existen mtodos que se han diseado para estudiar a los microorganismos,

los cuales permiten cultivarlos bajo condiciones artificiales y experimentales,
manejando incluso un solo tipo de microorganismo.
Estos mtodos permiten proveer el ambiente bioqumico y biofsico apropiado.
El ambiente bioqumico (nutricional) se hace disponible como medio de cultivo,
y dependiendo de las necesidades especiales de cada microorganismo en
particular se ha desarrollado una gran variedad y tipos de medios de cultivo con
diferentes propsitos y utilizaciones.
Los medios de cultivo son empleados para el aislamiento y mantenimiento de
cultivos puros de bacterias y tambin son utilizados para la identificacin de
stas de acuerdo a sus propiedades bioqumicas y fisiolgicas.
El modo en que las bacterias son cultivadas, y el propsito de los medios de
cultivo, varan ampliamente. Los medios lquidos son utilizados para el
crecimiento de lotes de cultivos puros mientras que los medios slidos son
ampliamente utilizados para el aislamiento de cultivos puros, para la estimacin
de poblaciones de bacterias viables, y una variedad de otros propsitos
A l efectuar este procedimiento, es necesario considerar que en el rea de
trabajo, existen muchos otros microorganismos; debido a esto, es necesario
tomar precauciones para impedir que stos penetren y contaminen los cultivos
en estudio. Por otra parte, para considerar no slo el aspecto nutricional, sino
tambin las condiciones ambientales de su hbitat natural, por lo que en el
medio de cultivo se debe ajustar el pH y concentracin de sales y durante la
incubacin condiciones tales como la temperatura, aireacin la luminosidad.

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1. MARCO TERICO
1. Tcnicas de siembra:
Las muestras a analizar pueden presentar poblaciones microbianas mixtas, por
esta razn se utilizan diversas tcnicas para separar un microorganismo de otro
y obtener as un cultivo puro que permita identificar al microorganismo aislado.
El diagnstico bacteriolgico se basa en el aislamiento de microorganismos a
partir de una muestra, por lo que es indispensable tener en cuenta las mximas
condiciones de asepsia, desde la toma de muestra hasta la siembra, la cual debe
efectuarse lo ms rpido posible.
Trminos importantes:
Siembra
Inculo
Cultivo puro
Cepa
Se denomina tcnica de siembra al procedimiento mediante el cual se pone en
contacto a los microorganismos con un medio de cultivo y despus de un perodo
de incubacin se produce el desarrollo de colonias bacterianas. Existen varios
tipos de siembra, entre los cuales estn los siguientes:
-

Siembra por dispersin y agotamiento

Siembra por puntura
Siembra por estra
Siembra por inoculacin
Siembra por incorporacin, en placa vertida, en masa o en todo el medio
Siembra por diseminacin o en superficie o con cayado

2. Desarrollo bacteriano
Algunas veces las especies bacterianas se pueden identificar basndose en el
aspecto que tienen sobre o dentro de los distintos medios de cultivo , es as que
la observacin de las caractersticas de crecimiento de las colonias de
microorganismos en medio slido (agar) y lquido (caldo), puede ser de gran
utilidad.
Estudio bacteriano en medio lquido:
- Velocidad de desarrollo (crecimiento): lento, moderado, rpido.
- Aspecto: turbio, claro o transparente, difuso, granulado. Se registran las
observaciones como: presencia o ausencia de: turbidez, sedimento y
pelcula.
- Produccin de gas: formacin de burbujas.
Estudio bacteriano en medio semislido:
- Movilidad
- Cambios metablicos
Estudio bacteriano en medio slido:
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- Caractersticas morfolgicas de las colonias en cuanto a: elevacin, forma,

borde, superficie, tamao, consistencia y color de pigmentacin.

2. OBJETIVO:
Realizar diversas tcnicas de siembra para su cultivo y aislamiento
Aplica las tcnicas de aislamiento hasta la obtencin de cultivos puros
Describe sus observaciones usando la terminologa tcnica apropiada
3. MATERIALES Y EQUIPOS:
a) Tcnicas de Siembra en Medios Lquidos, Semislidos y
Slidos:
Placas petri con PLATE COUNT AGAR
Tubos con agar SIM y TSA en agar inclinado
Tubos con caldo TSB
Cultivos de: Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Bacillus
subtilis y Pseudomonas aeruginosa

b) Desarrollo bacteriano:
Utilizar los medios de cultivo preparados en la prctica anterior y
proceder a realizar los sembrados en los distintos medios segn
tcnicas.

4. PROCEDIMIENTO
Tcnicas de Siembra en Medios Lquidos, Semislidos y Slidos:
a) Con el asa en aro previamente esterilizada, tomar una asada de cada cultivo de
microorganismos (tubo 01, tubo 20, tubo 22) y sembrar por el mtodo de
dispersin y agotamiento en cada una de las placas con el medio de cultivo
preparadas la practica anterior ( PLATE COUNT AGAR)

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b) Rotular las placas y guardar en la incubadora por 48 horas

c) Con el asa en aro previamente esterilizada tomar una asada del cultivo, y
sembrar por el mtodo de inoculacin en el tubo con TSB.

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d) Con el asa en aro, toma el inculo del cultivo bacteriano y siembra en el tubo
con agar en pico de flauta o plano inclinado, por el mtodo de estra. Siempre
siguiendo los 11 pasos descritos en los grficos anteriores.

e) Con el asa en punta previamente esterilizada, tomar el inculo del cultivo de

bacterias (tubo 01) y sembrar en agar SIM, por el mtodo de puntura.

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Desarrollo bacteriano: Despus transcurrido 48 horas aproximadamente, se

obtuvieron los siguientes resultados.
a) Placas petri con PLATE COUNT AGAR
Antes

Despus de 48 h

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b) Despus de 48 horas: Tubo con TSB, TSA, SIM

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5. RESULTADOS:
En la placa Petri con Plate Count Agar:
- Con sembrado del tubo 01 se observa el crecimiento muy
marcado de microorganismos, por todo el recorrido que se hizo
con el asa de un color blanquecino, durante las 48 horas de
incubacin.
- Con sembrado del tubo 20 no se observa ninguna huella de
crecimiento de microorganismos, durante las 48 horas de
incubacin
- Con sembrado del tubo 22 se observa el crecimiento de
microorganismos, en forma de un pequeo crculo color crema.
En cultivo liquido TSB con sembrado del tubo 01
- Se observa una turbidez, con una especie de nata blanquecina
sobre la superficie y un precipitado color crema. Lo que indica que
si hubo crecimiento de microorganismos.
En cultivo de agar inclinado TSA con sembrado del tubo 01
- Se observa manchas blanquecinas sobre la superficie lo que
indica que si hubo crecimiento de microorganismos.
En cultivo con agar SIM con sembrado del tubo 01
- Se observa manchas sobre la superficie y tambin sobre el
recorrido que hizo el asa de siembra en el interior del tubo, lo que
indica el crecimiento de microorganismos.

Cuestionario:

1. Con qu propsito se emplean cada una de las diferentes tcnicas

de siembra?
El propsito de emplear diferentes tcnicas de siembra es facilitar su
estudio, caracterizacin, aplicacin y control de los mismos. Por ejemplo se
puede necesitar que el desarrollo del microorganismo se produzca de forma
masiva, mientras que en otras resulta indispensables que las colonias
queden aisladas o que las manifestaciones del metabolismo tengan lugar
con tensiones reducidas o privadas de oxgeno.

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Tambin ha permitido propagar a los microorganismos en cultivos mixtos,

as como su aislamiento y la obtencin de cultivos puros.
2. Describe las caractersticas del crecimiento de cada uno de los
cultivos bacterianos proporcionados en la prctica .
a) PLATE COUNT AGAR :
Recomendado para la determinacin y recuento de microorganismos en
alimentos, aguas y aguas residuales.
FORMULA:
Casena enzimtica hidrolizada 5.0 gr
Extracto de levadura 2.5 gr
Dextrosa 1.0 gr
Agar 15.0 gr
pH final 7.0 +/- 0.2

b) Tryptic Soy Broth

TSB (medio de digerido de soja y casena) es un medio lquido para
enriquecimiento de uso general utilizado en procedimientos cualitativos
para la prueba de esterilidad y para el enriquecimiento y cultivo de
microorganismos aerobios no exigentes en exceso.
Es un medio nutritivo que favorece el crecimiento de una amplia variedad
de microorganismos, en especial las bacterias anaerobias facultativas y
aerobias comunes. Debido a su capacidad para favorecer el crecimiento,
esta frmula fue adoptada por la Farmacopea de Estados Unidos (USP) y
la Farmacopea Europea (EP) como medio de prueba de esterilidad.

Bacto Tryptone (digerido pancretico de casena)

Bacto Soytone (digerido pptico de harina de soja)

10

17,0 g
3,0

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Glucosa (dextrosa)
Cloruro sdico
Fosfato dipotsico de hidrgeno

2,5
5,0
2,5

Frmula por
litro de agua
purificada

CONTROL DE CALIDAD
Cepa de prueba
Staphylococcus aureus ATCC 6538
Bacillus subtilis ATCC 6633

Resultados de crecimiento esperados (turbidez)*

+++ o ms
+++ o ms

Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027

Candida albicans ATCC 10231

+++ o ms
+++ o ms

Aspergillus niger ATCC 16404

Sin inocular

+++** o ms
Ambar claro a mediano, transparente, sin precipitacin

c) Tripteina Soya Agar

TSA es un medio utilizado para propsitos generales, favorece el desarrollo
y aislamiento de una gran variedad de microorganismos aerobios, y
anaerobios facultativos y estrictos.
El agregado de sangre, permite el aislamiento y cultivo de microorganismos
aerobios y anaerobios nutricionalmente exigentes y la observacin de
reacciones de hemlisis.
Tambin, este medio de cultivo, puede utilizarse como medio base para
preparar el medio agar chocolate.
FRMULA

CONTROL DE CALIDAD

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d) SIM Medio
Es un medio semislido destinado a verificar la movilidad, produccin de
indol y de sulfuro de hidrgeno en un mismo tubo.
Es til para diferenciar miembros de la familia Enterobacteriaceae.
FRMULA

CONTROL DE CALIDAD

3. Describe el mtodo de siembra por incorporacin y seala en qu

casos se emplea
La siembra por incorporacin puede tener ciertas ventajas como por ejemplo
Menor error en el recuento, mejor aprovechamiento de nutrientes por parte de
los microorganismos, Se puede utilizar para el recuento de organismos
anaerobiospero puede presentar desventajas como la dificultad para
subcultivar colonias, difcil visualizacin de colonias y la temperatura del agar
puede afectar a ciertos microorganismos

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Fuentes de informacin

PREGUNTAS Y RESPUESTAS SOBRE LA MICROBIOLOGIA DE LA

LECHE Y LOS PRODUCTOS LCTEOS, RICHARD ELLNER,
EDICIONES DAS DE SANTOS S.A., MADRID-ESPAA,
https://es.scribd.com/doc/21943852/Tecnicas-Basicas-Para-El-Cultivode-Microorganismos
http://www.britanialab.com.ar/esp/productos/b02/simedio.htm
http://www.labmedibac.com/medio-caldo-tsb-medio-de-cultivo-caldo-tsbtriptic-soya-broth/
http://www.mastgrp.com/IFUS/IFU342_SPA.pdf

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