Amoxicilina Tri-hidratada

1- Farmacopia Brasileira
IDENTIFICAO
O teste de identificao A. pode ser omitido se forem realizados os testes B. e C.
A. O espectro de absoro no infravermelho (5.2.14) da amostra, dispersa em brometo
de potssio, apresenta mximos de absoro somente nos mesmos comprimidos de onda
e com as mesmas intensidades relativas daqueles observados no espectro de amoxicilina
tri-hidratada SQR, preparado de maneira idntica.
B. O espectro de absoro no ultravioleta (5.2.14), na faixa de 200 a 400 nm, de soluo
a 0,02% (p/v), em etanol, exibe mximos em 230 nm e em 274 nm, idnticos aos
observados em soluo similar de amoxicilina tri-hidratada SQR.
C. Proceder conforme descrito em Cromatografia em camada delgada (5.2.17.1),
utilizando slica-gel G 60, como suporte, e mistura de metanol, clorofrmio, gua e
acetona (9:8:3:1), como fase mvel. Aplicar, separadamente, placa, 5 L de cada uma
das solues descritas a seguir, que devem ser usadas em, no mximo, 10 minutos aps
sua preparao:
Soluo (1): soluo a 4 mg/mL da amostra em cido clordrico 0,1 M.
Soluo (2): soluo a 4 mg/mL de amoxicilina trihidratada SQR em cido clordrico
0,1 M.
Desenvolver o cromatograma. Remover a placa, deixar secar ao ar. Nebulizar com
ninidrina SR. Aquecer a placa em estufa a 110 C por 15 minutos. A mancha principal
obtida com a Soluo (1) corresponde em posio, cor e intensidade quela obtida com
a Soluo (2).
IDENTIFICAO
De acordo com a FB podem ser realizados testes de identificao atravs do espectro de
absoro do IV, assim como na USP (Procurar mtodos gerais USP), porm na FB
apresenta ainda outros testes de identificao atravs do espectro de absoro no
ultravioleta e atravs de cromatografia em camada delgada descritos na monografia. Na
BP apresenta um teste de identificao com espectro de absoro no IV, descrito
conforme a seguir.
IDENTIFICATION
First identificationA.
Second identificationB, C.
A. Examine by infrared absorption spectrophotometry (2.2.24), comparing with the spectrum
obtained with amoxicillin trihydrate CRS.
B. Examine by thin-layer chromatography (2.2.27), using TLC silanised silica gel plate R.
Test solutionDissolve 25 mg of the substance to be examined in 10 ml of sodium hydrogen
carbonate solution R.

Reference solution (a)Dissolve 25 mg of amoxicillin trihydrate CRS in 10 ml of sodium

hydrogen carbonate solution R.
Reference solution (b)Dissolve 25 mg of amoxicillin trihydrate CRS and 25 mg of ampicillin
trihydrate CRS in 10 ml of sodium hydrogen carbonate solution R.
Apply to the plate 1 l of each solution. Develop over a path of 15 cm using a mixture of 10
volumes of acetone R and 90 volumes of a 154 g/l solution of ammonium acetate R, the pH of
which has been adjusted to 5.0 with glacial acetic acid R. Allow the plate to dry in air and
expose it to iodine vapour until the spots appear. Examine in daylight. The principal spot in the
chromatogram obtained with the test solution is similar in position, colour and size to the
principal spot in the chromatogram obtained with reference solution (a). The test is not valid
unless the chromatogram obtained with reference solution (b) shows 2 clearly separated spots.
C. Place about 2 mg in a test-tube about 150 mm long and 15 mm in diameter. Moisten with
0.05 ml of water R and add 2 ml of sulphuric acid-formaldehyde reagent R. Mix the contents of
the tube by swirling; the solution is practically colourless. Place the test-tube in a water-bath for
1 min; a dark yellow colour develops.

ENSAIOS DE PUREZA
Cristalinidade. Suspender algumas partculas da amostra em leo mineral, transferir
para uma lmina de vidro e examinar por meio de microscpio dotado de luz polarizada.
As partculas exibem birrefringncia, que se extingue ao movimentar a amostra por
meio de ajuste micromtrico.
pH (5.2.19). 3,5 a 6,0. Determinar em soluo aquosa a 0,2% (p/v).
gua (5.2.20.1). 11,5% a 14,5%. Determinar em 0,3 g de amostra.
Cinzas sulfatadas (5.2.10). Determinar em 1 g de amostra. No mximo 1%.
PUREZA
pH Descritos da mesma maneira na FB e USP, j na BP a faixa de pH descrita
encontra-se entre 3,5 e 5,5.
gua - Descritos da mesma maneira na FB e USP, j na BP percentual de gua o
mesmo porm determinado em 0,100g.
Cinzas Sulfatadas Descrito na FB e na BP pela mesma tcnica.
Dimetilanilina Descrito na USP e BP. (Olhar mtodos gerais USP)
Soluo S Descrito pela BP, com auxlio do ultrassom ou gentle heating, dissolver
0,100g de reagente dixido de carbono desidratado e diluir para 50,0mL com o mesmo
solvente.
Aparncia da soluo Descrito pela BP. Dissolver 1,0g em 10mL de cido
hidroclordrico 0,5M. Dissolver separadamente 1,0g em 10mL de Reagente de amnia
diluda. Imediatamente aps a dissoluo, a soluo no fica mais turva que a suspeno
de referncia II.

Rotao Otica Especfica Descrito pela BP. + 290 to + 315, determinada pela soluo S e
calculada com a referncia da substancia anidra.
Related substances Descrito pela BP.
Examine by liquid chromatography (2.2.29) adjusting the ratio A:B of the mobile phase and the
attenuation as described under Assay. Inject reference solution (d). Inject a freshly prepared
test solution (b) and start the elution isocratically with the chosen mobile phase. Immediately
after elution of the amoxicillin peak start a linear gradient elution to reach a mobile phase A:B of
0:100 over a period of 25 min. Continue the chromatography with mobile phase B for 15 min,
then equilibrate the column for 15 min with the mobile phase chosen originally. Inject mobile
phase A and use the same elution gradient to obtain a blank. In the chromatogram obtained
with test solution (b), the area of any peak, apart from the principal peak and any peak
observed in the blank chromatogram, is not greater than the area of the principal peak in the
chromatogram obtained with reference solution (d) (1 per cent).

DOSEAMENTO
Empregar um dos mtodos descritos a seguir. A. Proceder conforme descrito em Ensaio
microbiolgico de antibiticos (5.5.3.3.1) pelo mtodo de difuso em gar, utilizando
cilindros. Micro-organismo: Micrococcus luteus ATCC 9341.
Meios de cultura: meio nmero 1, para manuteno dos micro-organismos; soluo
salina estril, para a padronizao do inculo e meio nmero 11, para a camada base e
camada de inculo na placa.
Soluo amostra: pesar quantidade da amostra equivalente a 100 mg de amoxicilina e
transferir para um balo volumtrico de 100 mL. Completar com gua e agitar por cerca
de 30 minutos. Transferir 1 mL desta soluo para balo volumtrico de 100 mL,
completar com soluo tampo fosfato de potssio, estril, pH 8,0 (soluo 2) e agitar.
Diluir, sucessivamente, at as concentraes de 0,05 g/mL, 0,10 g/mL e 0,20 g/mL,
utilizando soluo tampo fosfato de potssio, estril, pH 8,0 (soluo 2) como diluente.
Soluo padro: pesar quantidade de amoxicilina trihidratada SQR equivalente a 25 mg
de amoxicilina e transferir para balo volumtrico de 50 mL. Completar o volume com
gua. Transferir 1 mL desta soluo para balo volumtrico de 100 mL, completar o
volume com soluo tampo fosfato de potssio, estril, pH 8,0 (soluo 2) e agitar.
Diluir, sucessivamente, at as concentraes de 0,05 g/mL, 0,10 g/mL e 0,20 g/mL,
utilizando soluo tampo fosfato de potssio, estril, pH 8,0 (soluo 2) como diluente.
Procedimento: adicionar 21 mL de meio de cultura nmero 11 em cada placa, esperar
solidificar, adicionar 4 mL de inculo a 0,5% e proceder conforme descrito em Ensaio
microbiolgico de antibiticos (5.5.3.3.1), adicionando aos cilindros, 0,2 mL das
solues recentemente preparadas. Calcular a potncia da amostra, em g de
amoxicilina por miligrama, a partir da potncia do padro e das respostas obtidas com
as Solues padro e amostra.
B. Por mtodo iodomtrico. Dissolver e diluir padro e amostra de amoxicilina trihidratada em gua, at aconcentrao de, aproximadamente, 1,25 mg/mL. Transferir 2
mL da soluo padro para erlenmeyer com tampa esmerilhada e adicionar 2 mL de
hidrxido de sdio M. Agitar e deixar em repouso por 15 minutos. Adicionar 2 mL de
cido clordrico 1,2 M e 10 mL de iodo 0,01 M SV. Deixar em repouso, por 15 minutos,
ao abrigo da luz. Titular com tiossulfato de sdio 0,01 M SV. Prximo ao ponto final,
adicionar tres gotas de amido SI e prosseguir com a titulao at o desaparecimento da

cor azul. Proceder ao mesmo ensaio com a soluo amostra. Realizar prova em branco,
da amostra e do padro, por meio da titulao de 2 mL de ambas solues, adicionadas
de 10 mL de iodo 0,01 M SV e 0,1 mL de cido clordrico M. Prximo ao ponto final,
adicionar tres gotas de amido SI e prosseguir com a titulao at o desaparecimento da
cor azul. Titular com tiossulfato de sdio 0,01 M SV. Calcular a potncia da amostra
segundo a frmula a seguir:
Em que: P
= potncia da amostra (g/mg); Vba = volume de titulante gasto na
titulao do branco da amostra (mL); Va = volume de titulante gasto na titulao da
amostra (mL); Vbp = volume de titulante gasto na titulao do branco do padro (mL);
Vp = volume de titulante gasto na titulao do padro (mL); P = potncia do
padro (g/mg); Pp = peso do padro (mg); Pa = peso da amostra (mg).
Doseamento USP (Olhar na USP)
Diluente Dissolver 13,6g de fosfato de potssio monobsico em 2000mL de gua, e
ajustar para 45% (v/v) de soluo de hidrxido de potssio para pH de 5.0 0,1.
Fase Mvel Doseamento
A FB utiliza um mtodo microbiolgico de potncia de antibitico e outro teste atravs
de titulao empregando iodo. J a BP e a USP utilizam cromatografia lquida de alta
eficincia e dois mtodos diferente para obteno do doseamento.
ASSAY
Examine by liquid chromatography (2.2.29).
Test solution (a)Dissolve 30.0 mg of the substance to be examined in mobile phase A and
dilute to 50.0 ml with the same mobile phase.
Test solution (b)Dissolve 30.0 mg of the substance to be examined in mobile phase A and
dilute to 20.0 ml with the same mobile phase.
Reference solution (a)Dissolve 30.0 mg of amoxicillin trihydrate CRS in mobile phase A and
dilute to 50.0 ml with the same mobile phase.
Reference solution (b)Dissolve 4.0 mg of cefadroxil CRS in mobile phase A and dilute to 50
ml with the same mobile phase. To 5.0 ml of this solution add 5.0 ml of reference solution (a)
and dilute to 100 ml with mobile phase A.
Reference solution (c)Dilute 1.0 ml of reference solution (a) to 20.0 ml with mobile phase A.
Dilute 1.0 ml of this solution to 50.0 ml with mobile phase A.
Reference solution (d)Dilute 2.0 ml of reference solution (a) to 20.0 ml with mobile phase A.
Dilute 5.0 ml of this solution to 20.0 ml with mobile phase A.
The chromatographic procedure may be carried out using:

a stainless steel column 0.25 m long and 4.6 mm in internal diameter packed with
octadecylsilyl silica gel for chromatography R (5 m),

as mobile phase at a flow rate of 1.0 ml/min:

Mobile phase AA mixture of 1 volume of acetonitrile R and 99 volumes of buffer solution pH
5.0,
Mobile phase BA mixture of 20 volumes of acetonitrile R and 80 volumes of buffer solution
pH 5.0,
Prepare the buffer solution as follows: to 250 ml of 0.2 M potassium dihydrogen phosphate R
add dilute sodium hydroxide solution R to pH 5.0 and dilute to 1000.0 ml with water R,
as detector a spectrophotometer set at 254 nm,
a 50 l loop injector.
Equilibrate the column with a mobile phase with ratio A:B of 92:8. Inject reference solution (b).
The assay is not valid unless the resolution between the 2 principal peaks is at least 2.0. If
necessary, adjust the ratio A:B of the mobile phase. The mass distribution ratio for the 1 st peak
(amoxicillin) is 1.3 to 2.5. Inject reference solution (c). Adjust the system to obtain a peak with a
signal-to-noise ratio of at least 3. Inject reference solution (a) 6 times. The test is not valid
unless the relative standard deviation for the area of the principal peak is at most 1.0 per cent.
Inject alternately test solution (a) and reference solution (a).