Caracterización de Materia Orgánica Disuelta Proveniente de Efluentes de Pisciculturas PDF

CARACTERIZACIN DE MATERIA ORGNICA DISUELTA PROVENIENTE DE
EFLUENTES DE PISCICULTURAS, MEDIANTE ESPECTROSCOPA DE

FLUORESCENCIA
PROFESOR PATROCINANTE
DR. JORGE NIMPTSCH MAASS
UNIVERSIDAD AUSTRAL DE CHILE
PROFESOR CO-PATROCINANTE
DR. STEFAN WOELFL
UNIVERSIDAD AUTRAL DE CHILE
PROFESOR INFORMANTE
DR. FRANCISCO ENCINA MONTOYA
UNIVERSIDAD CATOLICA DE TEMUCO
TESIS PRESENTADA COMO REQUISITO PARA

OPTAR AL TTULO DE BILOGO MARINO.
SEBASTIN IGNACIO OSORIO RUZ

Valdivia, Mayo 2014
Tabla de Contenido
1. Resumen ............................................................................................................................. 1
2. Abstract ............................................................................................................................... 2
3. Prologo ............................................................................................................................... 3
4. Introduccin ........................................................................................................................ 3
4.1 Salmonicultura en Chile ................................................................................................... 3
4.2 Ciclo de vida de salmnidos en cautiverio ....................................................................... 5
4.3 Sistemas actualmente en uso para la produccin de smolts de salmnidos en Chile ....... 7
4.4 Efectos de la contaminacin general de la piscicultura .................................................... 9
4.5 Materia orgnica en sistemas acuticos .......................................................................... 11
4.6 Materia Orgnica Disuelta (DOM) ................................................................................. 12
4.7 Materia Orgnica Disuelta Fluorescente ........................................................................ 13
4.8 Medicin e identificacin de DOM a travs de tcnicas de Espectroscopia de
Fluorescencia ........................................................................................................................ 19
4.8.1 Espectrofluormetros .................................................................................................. 20
4.8.2 Correccin espectral, correccin de filtro interno, normalizacin y sustraccin del
blanco para realizar mediciones de fluorescencia comparables entre las muestras, estudios y
espectrofluormetros ............................................................................................................ 22
4.9 ndices de Fluorescencia ................................................................................................. 28
4.10 PARAFAC .................................................................................................................... 30
4.11 Efectos ambientales sobre la fluorescencia de DOM y seguimiento de DOM en aguas
naturales y efectos de la contaminacin antropognica ....................................................... 32
5. Hiptesis ........................................................................................................................... 34
6. Objetivos........................................................................................................................... 34
6.1 Objetivo general ............................................................................................................. 34
6.2 Objetivos especficos ...................................................................................................... 34
7. Materiales y Mtodos ....................................................................................................... 36
7.1. Metodologa ................................................................................................................... 36
7.2. Preparacin de las muestras para el anlisis ptico y fluoromtrico de DOM, DOC y NP inorgnicos ........................................................................................................................ 38
7.3 Parmetros de calidad del agua ...................................................................................... 38

7.4 Experimentos de incubacin y dilucin.......................................................................... 40
7.5 Metodologa de anlisis ptico y fluoromtrico de DOM .............................................. 43
7.6 Anlisis PARAFAC........................................................................................................ 44
8. Resultados......................................................................................................................... 45
8.1 Validacin del modelo .................................................................................................... 45
8.2 Descripcin de los componentes .................................................................................... 51
8.2.1 Componente 1, Similar a Tirosina ............................................................................... 52
8.2.2 Componente 2, Similar a Triptfano ........................................................................... 53
8.2.3 Componente 4 .............................................................................................................. 54
8.2.4 Componente 3, Similar a cidos Hmicos ................................................................. 56
8.3 Relacin entre los componentes y los ndices de Fluorescencia .................................... 66
8.4 Correlacin entre los parmetros fsico-qumicos y los componentes ........................... 70
8.5 Correlacin entre las concentraciones de N y P, DOC y los componentes .................... 76
8.6 Experimentos de incubacin y dilucin.......................................................................... 86
9. Discusin .......................................................................................................................... 91
10. Conclusin .................................................................................................................... 102
11. Bibliografa ................................................................................................................... 105
11.1 Pginas web ................................................................................................................ 115
12. Anexos .......................................................................................................................... 116
ii
ndice de Figuras
Figura 1 . Ciclo de vida del salmn Atlntico (Salmo salar) (Fuente: Sistemas de
Produccin de Smolts en Chile Nieto et al. 2010. Basado en Atlantic Salmon Federation
2010). ...................................................................................................................................... 6
Figura 2. Etapas del desarrollo juvenil de Salmo salar. (a) Alevn con saco vitelino casi
absorbido, (b) Pez Fry, (c) Pez Fingerling, (d) Pez Parr y (e) Pez Smolt. (Fuente: Bjrnsson
et al. 2012) .............................................................................................................................. 6
Figura 3. Esquema de un proceso estndar de produccin de salmones (Salmo salar)
(Fuente: FAO 2014)2. ............................................................................................................. 7
Figura 4. Relacin entre la materia orgnica disuelta presente en los ecosistemas acuticos,
y la fraccin de la materia orgnica disuelta pticamente activa. ........................................ 14
Figura 5. Diagrama de los niveles electrnicos y vibracionales de una molcula (Fuente:
Hudson et al., 2007).............................................................................................................. 16
Figura 6. Estructuras de los compuestos orgnicos de triptfano, tirosina y fenilalanina
(Fuente: Hudson et al. 2007. Basado en A spectral database of organic fluorophores by
Colin A. Stedmon)3. ............................................................................................................. 17
Figura 7. Esquema de las categoras de las sustancias hmicas presentes en DOM y que se
definen qumicamente por su solubilidad a diferentes pH ................................................... 18
Figura 8. Estructuras tericas de los fluorforos orgnicos de (a) un cido hmico y (b) un
cido flvico (Fuente: Hudson et al., 2007. Basado en Aitken et al., 1985) ........................ 18
Figura 9. Ejemplo de una matriz tridimensional de excitacin y emisin (EEM) ............... 20
Figura 10. Componentes de un espectrofotmetro de fluorescencia .................................... 21
Figura 11. (a) Efectos de filtro interno primario y secundario en una muestra (b) Frmula
utilizada para la correccin de la absorbancia de la luz en una medicin de fluorescencia . 23
Figura 12. Estados vibracionales de una molcula y su respuesta frente a la interaccin con
un haz de luz. En Rayleigh no hay cambio en la energa de la luz incidente con la luz
emitida. En los Raman Stokes la luz dispersada tiene menor energa que la luz incidente
(menor frecuencia). En los Raman anti-Stokes, la luz dispersada tiene mayor energa que la
luz incidente (mayor frecuencia) .......................................................................................... 25
iii
Figura 13. (a) Tpico espectro de emisin de fluorescencia con los diferentes peaks
marcados. La escala de la abscisa superior es la longitud de onda en nm y la escala de la
abscisa inferior es la frecuencia en cm-1. (b) Grfico de contorno de un EEM con los
respectivos efectos de las dispersiones (Fuente: Larsson et al., 2007). ................................ 26
Figura 14. Peak de Raman visible en una muestra de agua fresca Milli-Q en unidades
arbitrarias (A.U.) (Fuente: Lawaetz et al., 2009).................................................................. 27
Figura 15. Ilustracin de la sustraccin del blanco, eliminando los ruidos de medicin, la
mayora de los efectos por dispersin y la interpolacin de los datos en las regiones de no
fluorescencia ......................................................................................................................... 28
Figura 16. Localizacin de los ndices basados en fluorescencia con respecto a sus
longitudes de onda de emisin y excitacin correspondientes ............................................. 30
Figura 17. : Ilustracin de los valores obtenidos por medicin de la espectroscopa de
fluorescencia, los resultados del modelo de anlisis PARAFAC y los residuos entre los
valores medidos y los resultados de un modelo ................................................................... 32
Figura 18. Balance teortico masas de carbono, nitrgeno y fsforo en sistemas de
pisciculturas (Fuente: Olsen et al, 2008). ............................................................................. 33
Figura 19. Mapa general del rea de estudio, con los respectivos puntos de muestreo
ubicados en el Rio Molco en la IX Regin de la Araucana, Chile. ..................................... 37
Figura 20. Experimento de dilucin y sus respectivos porcentajes ...................................... 41
Figura 21. Experimento de incubacin ................................................................................. 42
Figura 22. Espectrofluormetro Perkin Elmer Luminescence Spectrometer LS50B y
espectrofotmetro de absorbancia Spectroquant Pharo 300 Merck ..................................... 45
Figura 23. Validacin del modelo de 4 componentes, por medio de la funcin
SplitHalfValidation en MatLab mediante el DOMFluorToolbox. Esta funcin compara
automticamente las cargas de excitacin y de emisin de diferentes modelos de split-half y
determina si son iguales o no................................................................................................ 47
Figura 24. Evaluacin del ajuste de un modelo PARAFAC a travs de la comparacin entre
la medicin de una EEM (arriba a la izquierda), el modelo a validar (en medio a la
izquierda) y los residuos (diferencia entre lo medido y el modelado de datos) (abajo a la
izquierda). ............................................................................................................................. 47
iv
Figura 25. Comparacin entre un modelo de 4 componentes con outliers (muestra 148, 149
y 150) (a) y un modelo de 4 componentes sin outliers (b). .................................................. 48
Figura 26. Comparacin de los espectros de emisin y excitacin entre dos (a), tres (b) y
cuatro (c) componentes. ........................................................................................................ 49
Figura 27. Comparacin de la suma espectral de las desviaciones al cuadrado entre las
cargas de excitacin y emisin de los anlisis split-half para los modelos de 2, 3 y 4
componentes. ........................................................................................................................ 50
Figura 28. Forma en que la funcin SplitData divide los datos en dos mitades para el
anlisis split-half y usar el mejor ajuste para la validacin del modelo de componentes .... 50
Figura 29. Componente 1, grfico de contorno .................................................................... 52
Figura 30. Componente 1, grfico de superficie .................................................................. 53
Figura 37. Variacin espacial de DOM a lo largo del Rio Molco, durante el mes de Agosto
.............................................................................................................................................. 58
Figura 38. Variacin espacial de DOM a lo largo del Rio Molco, durante el mes de Octubre
.............................................................................................................................................. 59
Figura 39. Variacin espacial de DOM a lo largo del Rio Molco, durante el mes de
Noviembre ............................................................................................................................ 59
Figura 40. Variacin espacial de DOM a lo largo del Rio Molco, durante el mes de
Diciembre ............................................................................................................................. 60
Figura 41. Variacin espacial de DOM a lo largo del Rio Molco, durante el mes de Enero 60
Figura 42. Aporte porcentual de los componentes en el mes de Agosto .............................. 62
Figura 43. Aporte porcentual de los componentes en el mes de Octubre ............................ 62
Figura 44. Aporte porcentual de los componentes en el mes de Noviembre ....................... 63
Figura 45. Aporte porcentual de los componentes en el mes de Diciembre ........................ 63
Figura 46. Aporte porcentual de los componentes en el mes de Enero ................................ 64
v
Figura 47. Intensidades mximas de los fluorforos presentes en la estacin Molco

Efluente, a travs de los meses de monitoreo ....................................................................... 65
Figura 48. Variacin en los ndices de fluorescencia (FI, : y HIX), con respecto a las
estaciones en el mes de Agosto ............................................................................................ 66
estaciones en el mes de Octubre ........................................................................................... 67
estaciones en el mes de Noviembre ...................................................................................... 67
estaciones en el mes de Diciembre ....................................................................................... 68
estaciones en el mes de Enero .............................................................................................. 68
Figura 53. Correlacin entre la conductividad y los componentes similar a tirosina y similar
a triptfano en los meses de muestreo .................................................................................. 71
Figura 54. Correlacin entre el oxgeno disuelto y los 4 componentes validados por
PARAFAC en los meses de muestreo .................................................................................. 72
Figura 55. Correlacin entre la turbidez total y los componentes similar a tirosina y similar
a triptfano en los meses de muestreo .................................................................................. 74
Figura 56. Variabilidad de la conductividad monitoreada cada 10 minutos en la estacin
Molco Cabaas ..................................................................................................................... 75
Figura 57. Correlacin entre el ortofosfato y los componentes similar a tirosina y similar a
triptfano en los meses de muestreo ..................................................................................... 77
Figura 58. Correlacin entre el fosforo total y los componentes similar a tirosina y similar a
Figura 59. Correlacin entre el amonio y los componentes similar a tirosina y similar a
Figura 60. Correlacin entre el nitrito y los componentes similar a tirosina y similar a
Figura 61. Correlacin entre el nitrato y los componentes similar a tirosina y similar a
vi
Figura 62. Correlacin entre el nitrgeno inorgnico y los componentes similar a tirosina y
similar a triptfano en los meses de muestreo ...................................................................... 82
Figura 63. Correlacin entre el nitrgeno orgnico y los componentes similar a tirosina y
Figura 64. Correlacin entre el nitrgeno total y los componentes similar a tirosina y
Figura 65. Correlacin entre el carbono orgnico disuelto y los componentes similar a
tirosina y similar a triptfano en los meses de muestreo ...................................................... 85
Figura 66. Variacin de los componentes a travs de las horas que dur el experimento de
incubacin ............................................................................................................................. 86
Figura 67. Comparacin entre los resultados obtenidos en el experimento de dilucin y el
promedio de los componentes en el mes de Noviembre ...................................................... 87
componente similar a tirosina ............................................................................................... 87
componente similar a triptfano ........................................................................................... 88
componente similar a cidos hmicos .................................................................................. 88
componente similar a protena .............................................................................................. 89
ndice de Tablas
Tabla 1. Fechas y puntos muestreados en el Rio Molco, IX Regin de la Araucana, Chile.
.............................................................................................................................................. 36
Tabla 2. Coordenadas geogrficas de los puntos de muestreo en el Rio Molco en la IX
Regin de la Araucana, Chile. ............................................................................................. 37
Tabla 3. R2 de los 4 componentes validados por PARAFAC y su correlacin con el oxgeno
disuelto ................................................................................................................................. 73
vii
Agradecimientos
Se agradece a la Comisin Nacional de Ciencia y Tecnologa (CONICYT) y al proyecto
FONDECYT 1130132 como fuente de financiamiento.
En primer lugar quiero agradecer a mi madre por estar siempre conmigo brindndome ese
apoyo moral y fraternal que solo ellas pueden entregar, tambin a mi padre por ayudarme
cuando no tena con que sustentarme, por velar a que no pasara hambre ni frio. A mi
familia por estar siempre en las buenas y en las malas, por su constante alegra y siempre
tender ese abrazo incondicional y amigable que no busca nada a cambio, esa cosa que
llamamos de corazn. Les agradezco por ensearme a que no importa cuntas veces puedes
caerte en esta vida, mientras exista la unin y el cario ms all de las fronteras del rencor y
egocentrismo.
A la seora Anglica Aguilar directora de la DAE y al profesor, ex vicerrector de la
Universidad Austral, don Oscar Galindo, que sin su ayuda el culmine de esta etapa no
hubiera sido posible, gracias por la comprensin y el apoyo.
A mi profesor patrocinante, Jorge Nimptsch y al profesor co-patrocinante Stefan Woelfl,
por colaborar y traspasar conocimiento constante a quienes participan e interactan con
ellos en el laboratorio, por brindar apoyo y empata con las personas con quienes trabajan,
cosa que mucha falta hace hoy en da.
A mis compaeros de esta aventura universitaria, que sin duda, no hubiera sido tan
entretenida sin ellos. A las personas con las que comparto la conviccin de un mejor
maana, ms justo y ms noble, en donde la competencia por opacar al compaero o colega
sea cambiada por una visin ms holstica, de fraternidad y colaboracin. Donde el
viii
conocimiento sea traspasado a cualquier persona sin importar su condicin social o

econmica, ms all de una publicacin en una revista de prestigio o entre 4 paredes.
Y finalmente quiero agradecer al motor de mi vida, a mi hijo Salvador, que gatillo un
cambio sustancial en mi forma de ver el mundo, ese esfuerzo constante, el saber que todo lo
que merece la pena cuesta trabajo conseguirlo y que nada de lo que de verdad importa es
fcil. Gracias por ensearme algo fundamental en estos aos de vida... el amor no es
perfecto sino incondicional...
ix
1. Resumen
La alta calidad fsico-qumica del ambiente fluvial y lacustre presente en el Sur de Chile,
constituyen un rasgo fundamental en sus estructuras de equilibrio ecolgico y flujos de energa.
Sin embargo, el cultivo intensivo de peces en tierra por medio del sistema de flujo abierto
utilizado en la salmonicultura, prev una serie de efectos potenciales sobre el medio ambiente que
lo sustenta, siendo principalmente la contaminacin generada por los efluentes de las
pisciculturas, los cuales transportan heces, desperdicios de comida no consumida y subproductos
metablicos, aportando una fuerte entrada de materia orgnica e inorgnica disuelta hacia los
ros, contribuyendo directa e indirectamente al estado trfico del ecosistema acutico. La materia
orgnica disuelta (DOM) es un componente ubicuo en las aguas naturales, que afecta el
funcionamiento biogeoqumico de los sistemas acuticos. La espectroscopa de fluorescencia es
una herramienta de monitoreo ecolgica eficaz, precisa y representativa, capaz de brindar una
mayor informacin acerca de la composicin, concentracin y origen de DOM, permitiendo
observar sus reacciones y distribucin tras la incorporacin de residuos orgnicos provenientes en
este caso de una piscicultura, comparando las variaciones cuantitativas y cualitativas de los
componentes fluorescentes especficos evaluados mediante el anlisis estadstico PARAFAC
entre aguas naturales y las aguas contaminadas. El potencial para la caracterizacin y
cuantificacin de DOM, nos permite dar un enfoque de la naturaleza y comportamiento de DOM,
como tambin la importancia de la fuente que la precede, permitiendo tener una interpretacin y
validacin de los fluorforos obtenidos, y aplicarlos como un indicador de la calidad del agua y
facilitar la compresin de los datos fsicos, qumicos y biolgicos utilizados comnmente para
evaluar el estado ambiental de los cuerpos de agua, mediante programas de monitoreo.
2. Abstract
The high quality of the fluvial and lacustrine environment in terms of physic-chemical properties
in southern Chile, are a fundamental feature in their structures of ecological balance and energy
flow. However, intensive fish farming in land based flow-through aquaculture system used in the
salmon farming, provides a number of potential effects on the environment that sustains it, being
mostly pollution from the effluents of fish farms, which transport feces, uneaten food wastes and
metabolic byproducts, providing a strong influx of dissolved organic and inorganic matter into
rivers. This contributes directly and indirectly to the trophic state of the aquatic ecosystem. The
dissolved organic matter (DOM) is a ubiquitous component of natural waters, which affects the
biogeochemical functioning of aquatic systems. Fluorescence spectroscopy is an effective,
accurate, representative and ecological friendly tool for monitoring freshwater systems, being
able to provide information about the composition, concentration and origin of DOM, allowing to
observe their reactions and distribution after the incorporation of organic residues (i.e. fish
farming outfall), comparing the quantitative and qualitative variations in specific fluorescent
components evaluated by statistical analysis PARAFAC between natural waters and
contaminated waters. The potential for characterization and quantification of DOM, allows us to
approach the nature and behavior of DOM, including the importance of the source that precedes
it, allowing to have an interpretation and validation of the fluorophores obtained, apply as an
indicator of water quality and facilitate the understanding of the physical, chemical and biological
data commonly used to assess the environmental status of water bodies by monitoring programs.
3. Prologo
Es paradjico que una actividad que se inici hace 25 aos atrs para aprovechar la alta calidad
ambiental de los lagos y ros del sur de Chile constituya hoy una amenaza creciente para su
conservacin.
4. Introduccin
Los cuerpos de agua continentales presentes en el Sur de Chile, forman una extensa red de
sistemas hdricos con caractersticas ecolgicas distintivas y nicas (Armesto et al., 1996; Habit
et al., 2006), como as tambin altos niveles de endemismo de peces (Campos et al., 1993; Ruiz
& Berra, 1994; Vila et al., 1999; Dyer, 2000). La alta calidad del ambiente dulceacucola del Sur
de Chile, presente en sus ros y lagos, constituyen un rasgo fundamental en sus estructuras de
equilibrio ecolgico y flujos de energa. Sin embargo, estos sistemas lacustres extensos y
prstinos poseen un alto grado de vulnerabilidad ambiental, debido a su capacidad como
receptculo y reservorio de distintas fuentes de emisin de material orgnico y residuos qumicos,
los cuales aportan de manera abrupta y desmedida un flujo de nutrientes y otras sustancias que
afectan negativamente la calidad de las aguas y el sedimento de estos ecosistemas, generados
mayoritariamente por la agricultura, prdida de bosque nativo, ganadera, salmonicultura,
desechos domsticos e industriales, y las malas prcticas del turismo, entre otros (Len-Muoz et
al. 2007).
4.1 Salmonicultura en Chile

En Chile, una actividad que ha sometido a los ecosistemas lmnicos a una intensa modificacin
durante los ltimos 25 aos, es la salmonicultura, industria que genera altos niveles de
produccin y un dinmico desarrollo econmico a nivel nacional, registrando para el ao 1991,

140 mil toneladas de produccin (US$ 160 millones por concepto de exportaciones), mientras al
ao 2011,la produccin de salmn super las 650 mil toneladas (US$ 2,9 mil millones) cifras que
ubican a Chile como el segundo exportador mundial de salmnidos detrs de Noruega y
productor lder de productos de la acuicultura en Sur Amrica. Las mayores exportaciones
chilenas son a Japn, USA y Rusia y se basan en el cultivo de 4 especies: Salmn Atlntico,
Salmn Coho, Salmn Rey y Trucha (MultiExportsFood. 20121, Len-Muoz et al., 2013).
Las razones para el rpido crecimiento y expansin de esta industria, son las condiciones
hidrogrficas ptimas, como tambin las temperaturas del agua adecuadas y estacionalidad
inversa respecto al resto de zonas productoras, adems del modelo econmico y de desarrollo por
el que Chile lleva optando desde hace aos, en donde, la insercin internacional basada en la
apertura comercial y la iniciativa empresarial, impulsada desde sus inicios hasta el momento
actual por un intenso apoyo pblico, le otorga todo tipo de facilidades y ayuda directa al sector en
diversos mbitos, para producciones que tienen un porcentaje superior al 95% de su destino en el
mercado internacional de exportacin. Estas producciones se desarrollan en pases pobres o en las
zonas pobres de los pases, zonas con un alto porcentaje de poblacin rural, en donde estas
estrategias de desarrollo se implantan en los sectores ms vulnerables, con la esperanza de
mejorar las condiciones de vida de sus habitantes, pero que finalmente prioriza la implantacin de
empresas y el capital extranjero, haciendo caso omiso a los impactos socioambientales que esto
podra ocasionar (Garca Moreno, 2005).
En ese contexto la salmonicultura, al igual que otras actividades econmicas, usa y transforma los
recursos naturales, en productos con un valor econmico y social, disminuyendo la plusvala de
los terrenos por el emplazamiento de estos centros de cultivo y la consecuente contaminacin de

sus aguas.
4.2 Ciclo de vida de salmnidos en cautiverio

El Salmn al ser una especie introducida (andromo), necesita usar o reproducir distintas
caractersticas ecolgicas y silvestres, asociadas a condiciones de agua dulce para la fase ova alevn, hasta una condicin marina para los procesos de maduracin y engorda, es decir, el ciclo
de vida natural de estos peces es reproducido (Fig. 1). En este contexto, y en funcin de los
cambios fisiolgicos, morfolgicos y de comportamiento que registran los salmnidos, es
necesario realizar una etapa de transicin entre los ambientes dulceacucolas y ocenicos, esta
etapa es denominada smoltificacin, proceso en el cual el pez comienza a conformar todo una
complejo enzimtico y excretor a fin de eliminar el exceso de sales que ingresan al pez cuando
ste se encuentre en el mar. Se estima que la mayor parte de la produccin actual de smolts (Fig.
2) proviene de pisciculturas, principalmente de flujo abierto realizado en concesiones de ros,
lagos y estuarios en el Sur de Chile (Nieto el al. 2010, Tello et al., 2010).
Figura 1 . Ciclo de vida del salmn Atlntico (Salmo salar) (Fuente: Sistemas de Produccin de
Smolts en Chile Nieto et al. 2010. Basado en Atlantic Salmon Federation 2010).
Figura 2. Etapas del desarrollo juvenil de Salmo salar. (a) Alevn con saco vitelino casi
absorbido, (b) Pez Fry, (c) Pez Fingerling, (d) Pez Parr y (e) Pez Smolt. (Fuente: Bjrnsson et al.
2012)
4.3 Sistemas actualmente en uso para la produccin de smolts de salmnidos en Chile

En las pisciculturas los peces son mantenidos en balsas-jaulas o bien en granjas de tierra (Fig. 3),
las cuales son instalaciones especialmente diseadas para circular el agua a travs de las unidades
de produccin, por ejemplo, tanques, estanques y canales con flujo abierto o sistemas de
recirculacin de agua, en donde las condiciones emuladas permitan controlar las variables
biticas (patgenos) y abiticas (temperatura, concentraciones de oxgeno disuelto, pH)
posibilitando que estos sistemas de cultivo reduzcan rangos de mortalidad, obtengan menores
tasas de conversin de alimento, mejoren los ndices de crecimiento y realicen un mayor nmero
de rotaciones de cultivo por ao.
Figura 3. Esquema de un proceso estndar de produccin de salmones (Salmo salar) (Fuente:

FAO 2014)2.
En los cultivos intensivos de flujo abierto usados por la industria chilena, se utilizan cuerpos o
cursos de agua contiguos a los centros de produccin. El flujo del agua que ingresa pasa a travs
de los estanques donde se encuentran los peces, para posteriormente ser descargada nuevamente
al ro, estero o lago como efluente. Otra forma de cultivos intensivos en tierra utilizados por la
salmonicultura, pero no muy masificado son los sistemas de recirculacin el cual incorpora un
tratamiento y reutilizacin del agua considerando alrededor de un 10% de reemplazo de agua
diariamente, pudiendo variar entre el 5 al 20% dependiendo del estanque de cultivo y eficiencia
de filtracin. En estos sistemas el agua del efluente no es vertida directamente en su totalidad al
curso de agua adyacente, si no que se capta el agua de los efluentes de cada estanque de cultivo, y
se conduce a travs de una secuencia de procesos que la devolvern finalmente a los estanques en
tal calidad que los peces puedan seguir creciendo en condiciones favorables. Los procesos
utilizados para lograr esta recirculacin incluyen filtracin mecnica de fecas, materia orgnica,
alimento no consumido, nitrificacin, eliminacin de dixido de carbono, esterilizacin e
inyeccin de oxgeno. (Gooley y Gavine, 2003, Nieto et al., 2010).
Sin embargo, a pesar de ser esta una de las industrias con mayor tasa de crecimiento a nivel
nacional la informacin que se dispone en forma pblica, generada desde el gobierno o la misma
industria, es escasa, en temas tales como la distribucin espacial de las concesiones, sus
tendencias productivas y los impactos ambientales. Por lo tanto, es casi nula la posibilidad de
instaurar un debate de polticas pblicas en base a informacin cientfica, para reestructurar el
actual marco regulatorio, incluyndose niveles mximos de densidad y produccin, y
mejorndose los actuales protocolos de muestreos medioambientales, como para crear
herramientas educativas y de formacin en los distintos niveles de la sociedad en Chile.
4.4 Efectos de la contaminacin general de la piscicultura

La Regin de La Araucana (Patagonia Norte, Chile S39 - 41) posee un 25 % de los recursos de
aguas dulce del pas y actualmente un 70% de la produccin total de cras de salmnidos se
encuentra en esta Regin, debido a que los principales ros de bajo orden son usados para
mantener las granjas de peces en tierra. Estos ros son esenciales en el desarrollo de la industria,
debido a sus caractersticas fsico-qumicas como por ejemplo, un bajo nivel de perturbaciones
antropognicas, concentraciones optimas de nutrientes y rangos tolerables de temperatura del
agua, brindando de tal manera excelentes condiciones para la cra de alevines de salmn sensibles
a bajos niveles de oxgeno disuelto y contaminantes (Tello et al., 2010).
Las pisciculturas en tierra prev una serie de efectos potenciales sobre los ecosistemas lmnicos
que la sustentan, uno de estos impactos negativos es el que ha provocado sobre las especies
nativas cuando ocurren escapes de ejemplares (Seplveda et al., 2009), esto debido a que no
poseen depredadores naturales para su control. Estos peces desplazan o depredan la fauna nativa
que no puede competir con ellos (Buschmann, 2001). Otro problema presente y significativo que
conlleva el proceso de produccin de salmnidos en aguas continentales, proviene principalmente
de la contaminacin generada por los efluentes de las pisciculturas, los cuales transportan heces,
desperdicios de comida no consumida y subproductos metablicos, hacia los ros aportando una
fuerte entrada de materia orgnica e inorgnica disuelta (ej. principalmente nitrgeno, fosforo y
carbono), DBO, slidos suspendidos, agentes patgenos y residuos qumicos (Tello et al., 2010,
Oberdoff & Porcher, 1994) afectando directamente e indirectamente en los procesos ecolgicos
estructurales y funcionales, como la alteracin del hbitat, proliferacin de algas, influencia en el
ciclo del nitrgeno y generacin de condiciones de hipoxia y/o anoxia en el agua, produciendo
cambios significativos en la composicin de la biota, que disminuye tanto en cantidad como
diversidad. La magnitud de dichos efectos sobre el medio natural van a depender, por un lado, de
la tecnologa utilizada para el cultivo, el tipo y nivel de produccin, como tambin de la cantidad
y calidad de los mismos nutrientes y compuestos usados para el tratamiento de las enfermedades,
en relacin a las caractersticas y calidad del cuerpo de agua receptor, especialmente si ste
disminuye significativamente su caudal durante la poca de estiaje (Len-Muoz et al., 2013,
Nieto et al., 2010, Tello et al., 2010).
Como ya se haba mencionado las pisciculturas de flujo abierto, son las ms comunes dentro de
los procesos de cultivos smolt y alevines en los ros del Sur de Chile. Estos sistemas utilizan
grandes volmenes de agua que circulan permanentemente por el sistema generando altas tasas
de dilucin, condicin que resulta en el cumplimiento de la mayor parte de los parmetros
contenidos en la norma de emisin (D.S. 90 de 2000 del MINSEGPRES). Sin embargo, esta
regulacin slo se basa en las cargas por contaminante pero no en su carga total y adems para
los estndares de la OCDE no es suficiente para proteger y mantener la calidad de agua, el estado
trfico y la biota asociada a los sistemas fluviales (Len-Muoz et al., 2007; Nieto et al., 2010).
En especial no solo la concentracin sino la carga de materia orgnica tiene un gran potencial de
generar problemas y distrofias resultando en un enriquecimiento orgnico y efectos acumulativos
tanto en cercanas como lejos de la fuente emisora, debido a los altos volmenes de agua vertidos
a cuerpos de agua fluviales y lacustres (Nieto et al., 2010).
La adicin de nutrientes a los cuerpos acuticos ha sido reconocida internacionalmente como una
de las causas en el desequilibrio de los procesos productivos internos y el origen de los cambios
en el estado trfico de los cuerpos de agua afectados. Algunos efectos del aumento de la carga de
materia orgnica y concomitante de los nutrientes en la columna de agua y sedimentos del
10
ecosistema tienen el potencial de generar una disminucin de las concentraciones de oxgeno y

aumento de la demanda biolgica de oxgeno, promoviendo alteraciones en los ciclos normales
de los nutrientes (N y P) (Buschmann, 2001).
Tradicionalmente, como ya se haba mencionado la evaluacin de la contaminacin acutica de
las pisciculturas en Chile son regidas en trminos de cargas inorgnicas de N y P, y es limitada
solo a la determinacin de los efectos acumulativos y sinrgicos sobre el medio ambiente,
dejando completamente ausente la informacin sobre calidad y cantidad de la materia orgnica
disuelta (DOM) y de carbono orgnico disuelto (DOC).
Es por esto que debido a los cambios en el uso del suelo de los sectores aledaos y la
subsiguiente influencia de la salmonicultura en los sistemas lmnicos, se requieren enfoques de
estudios aplicados y de lneas bases con el fin de preservar la integridad ecolgica de los sistemas
acuticos, y as evitar la carencia con respecto a cmo administrar esta actividad bajo un enfoque
ecosistmico sostenible sin el deterioro del medio ambiente.
4.5 Materia orgnica en sistemas acuticos

La materia orgnica natural (NOM) es un componente universal en aguas naturales y afecta el
funcionamiento de los procesos geoqumicos de los ecosistemas acuticos al actuar como
donador o receptor de protones en reacciones redox y como un tampn de pH, afectando el
transporte y la degradacin de los contaminantes, y participando en la disolucin mineral y
reacciones de precipitacin (generacin de productos insolubles, por la combinacin de uno o
ms reactivos). La materia orgnica tambin controla la estructuracin de la comunidad bitica
11
de la corriente e influye en la dinmica de nutrientes del sistema (Bisson and Bilby, 1998,
Weishaar et al., 2003).
En las cuencas de los arroyos y ros, NOM es derivado principalmente por fuentes externas a los
sistemas acuticos (alctonas) proveniente de fracciones orgnicas de suelos y de la vegetacin
adjunta (Brooks et al., 1999), sin embargo, la NOM derivada del mismo sistema acutico
(autctona) compone una fraccin significativa de la reserva total de carbono orgnico disuelto
(COD) en los sistemas acuticos (Cole et al., 2000) y proviene de la produccin primaria del
cuerpo fluvial o lacustre.
En las aguas naturales existen estados de la materia orgnica en forma disuelta, coloidal y
particulada. Siendo la fraccin de la materia orgnica disuelta (DOM) la ms estudiada.
4.6 Materia Orgnica Disuelta (DOM)

La materia orgnica disuelta (DOM) se define como la parte del material orgnico que pasa a
travs de un filtro con un tamao de poro de menos de 0.45 m (0.22 - 1.22 m). DOM es un
componente ubicuo en las aguas naturales, y representa una importante fuente de nutrientes para
organismos heterotrficos, siendo adems una de las mayores fuentes de carbono orgnico
biolgicamente disponible en los ecosistemas acuticos, teniendo una amplia contribucin en los
flujos de carbono tanto a escala local como global (Battin et al., 2009). Al ser la principal forma
de la materia orgnica natural en estos ambientes, la composicin de DOM puede derivar de
fuentes alctonas, provenientes de la lixiviacin de sustancias hmicas de material vegetal y
orgnico del suelo, como tambin puede tener origen autctono, proviniendo de la produccin
primaria del fitoplancton o macrfitas, por lo que DOM juega un papel integral en la
12
estructuracin de los ecosistemas acuticos, influyendo tanto directa como indirectamente en la

biogeoqumica de estos ambientes (Stedmon et al., 2003).
Tanto la composicin como la concentracin de DOM, depende de la ubicacin y las condiciones
ambientales dentro y fuera del cuerpo de agua, por lo que la actividad humana, como ya se haba
mencionado es una importante una fuente de DOM, mucha de la cual se cree que es lbil (materia
orgnica fcilmente degradable), pudiendo entrar en el sistema acutico a travs de puntos de
descarga directa como efluentes, lixiviacin o dispersin area, interactuando con muchos
contaminantes orgnicos o inorgnicos, como los metales, pesticidas e hidrocarburos aromticos
policclicos (HAP) influyendo directamente en su transporte, estabilidad y biodisponibilidad
(Huguet et al., 2009, Hudson et al., 2007).
La heterogeneidad de DOM es producto de su amplia variedad de fuentes y reactividad frente a
procesos fsicos, qumicos y degradacin microbiana, por lo que la naturaleza de DOM puede ser
un poco difusa y compleja, sin embargo, se sabe que consiste de una mezcla heterognea de
polmeros alifticos y aromticos cuya composicin vara segn su reactividad y rol ecolgico en
el tiempo y espacio en funcin de la proximidad a las fuentes y la exposicin a los procesos de
degradacin (Fellman et al., 2010). Para comprenderla dinmica de DOM en los sistemas
acuticos, es esencial trazarlas diferentes fracciones de la reserva de DOM a travs del
ecosistema que lo sustenta.
4.7 Materia Orgnica Disuelta Fluorescente

Una caracterstica que presenta la materia orgnica disuelta, es su propiedad ptica que absorbe la
luz en un amplio intervalo de longitudes de onda visibles y UV, debido a la naturaleza qumica
13
que esta posee, por lo que es posible medir sus propiedades pticas como la fluorescencia, a
travs de tcnicas espectroscpicas que han mejorado nuestra comprensin de la dinmica de
DOM en los ecosistemas acuticos. Entre el 40 y el 60 % de la materia orgnica natural es
fluorescente (Fig. 4), y se le denomina materia orgnica disuelta coloreada o cromofrica
(CDOM) (Green & Blough, 1994).
Figura 4. Relacin entre la materia orgnica disuelta presente en los ecosistemas acuticos, y la
fraccin de la materia orgnica disuelta pticamente activa.
La fluorescencia se refiere principalmente a estados vibracionales y electrnicos, en este caso de
la materia orgnica y esta ocurre cuando una molcula absorbe energa, proveniente de un haz de
luz (generalmente ultravioleta), causando que un electrn en estado basal (S0) sea excitado a
estados singlete de energa superior (S1, S2), movindose a un orbital desocupado. Al perder
rpidamente cualquier exceso de energa vibracional la molcula se relaja y desciende luego a
uno de los distintos niveles de vibracin del estado electrnico basal, emitiendo un fotn en el
proceso. Como las molculas pueden descender a cualquiera de los diferentes niveles de
vibracin en el estado basal, los fotones emitidos tendrn diferentes energas y, por lo tanto,
frecuencias, as pues, la longitud de onda de la emisin de fluorescencia se determina por la
diferencia de energa entre los estados singlete ms bajo (S1) y el estado basal (S0). Cuanto mayor
14
sea la conjugacin de estructuras de doble enlace en la molcula, menor es la diferencia de

energa, que resulta en una mayor longitud de onda de la fluorescencia (Fig. 5). Por lo tanto, las
longitudes de onda de excitacin y emisin en las que se produce la fluorescencia son
caractersticas de estructuras moleculares especficas. Los compuestos aromticos con anillos de
carbono de alto peso molecular, son estructuras con electrones impares y que pueden pasar
fcilmente a un estado excitado y compartir energa, lo que hace un poco ms sencilla su
identificacin. En el estudio de la materia orgnica fluorescente, aquellos compuestos que
absorben la luz son llamados cromforos y los que absorben y re-emiten la energa luminosa se
llaman fluorforos (Baker A. 2001; Hudson et al., 2007; Mopper et al., 1996; Stedmon et al.,
2003).
15
Figura 5. Diagrama de los niveles electrnicos y vibracionales de una molcula (Fuente: Hudson
et al., 2007)
Los principales grupos de fluorforos orgnicos que se presentan en relacin a su seal de
fluorescencia son atribuidos a los grupos naturales de DOM similares a cidos hmicos y cidos
flvicos (con una fluorescencia azul), como tambin el grupo similar a protenas (con una
fluorescencia UV), este grupo consta de tres aminocidos disueltos fluorescentes el triptfano, la
tirosina y la fenilalanina (Fig. 6). Las posibles fuentes de estas emisiones de fluorescencia
similares a protenas incluyen ecosistemas que soportan una alta actividad biolgica y microbiana
16
y aguas que reciben las descargas de aguas residuales de plantas o algunos tipos de desechos
industriales antes ya mencionados. (Coble, 1996, Mopper and Schultz, 1993; Parlanti et al.,
2000).
Figura 6. Estructuras de los compuestos orgnicos de triptfano, tirosina y fenilalanina (Fuente:

Hudson et al. 2007. Basado en A spectral database of organic fluorophores by Colin A.
Stedmon)3.
Las sustancias hmicas pueden ser derivadas de la descomposicin de material vegetal mediante
procesos biolgicos y qumicos en los ambientes terrestres y acuticos (Steinberg et al., 2006).
Estas a su vez se pueden sub-dividir en tres categoras, que se definen qumicamente por su
solubilidad a diferentes pH (Fig. 7). Los cidos hmicos son insolubles en solucin acuosa a pH
inferior a 2, pero soluble a un pH ms alto (Fig. 8(a)). Los cidos flvicos son solubles en agua
bajo todas las condiciones de pH (Fig. 8(b)). Las huminas son insolubles en agua en todas las
condiciones de pH (Aiken et al., 1985). Este tipo de molculas polimricas se han considerado
qumica y biolgicamente como materia orgnica refractaria.
17
Figura 7. Esquema de las categoras de las sustancias hmicas presentes en DOM y que se
definen qumicamente por su solubilidad a diferentes pH
Figura 8. Estructuras tericas de los fluorforos orgnicos de (a) un cido hmico y (b) un cido
flvico (Fuente: Hudson et al., 2007. Basado en Aitken et al., 1985)
18
4.8 Medicin e identificacin de DOM a travs de tcnicas de Espectroscopia de

Fluorescencia
Los avances en la tecnologa, particularmente en los rangos de longitud de onda a travs de
fuente de luz y estabilidad, la velocidad de escaneo y la capacidad de procesamiento de datos,
han permitido a la espectroscopa de fluorescencia transformarse en una herramienta popular para
el estudio y seguimiento de la concentracin y la naturaleza de la materia orgnica disuelta
(DOM) (Murphy et al., 2010), proporcionando una alternativa a los mtodos tradicionales en
trminos de cargas inorgnicas de N y P, para la caracterizacin de DOM en los ecosistemas
acuticos. Esta tcnica es rpida, precisa y no invasiva, ideal para programas de muestreos
temporales y espacialmente extensos, ofreciendo la posibilidad de un seguimiento a la evolucin
de DOM fluorescente desde un punto de vista cualitativo y semi-cuantitativo, esto debido a que la
cuantificacin de la concentracin de un fluorforo exacta es difcil de lograr debido a la
interferencia con compuestos adicionales, la atenuacin y otros factores que influyen en el
rendimiento de fluorescencia (Mayer et al., 1999, Huguet et al., 2009).
Para la deteccin de las fracciones fluorescentes especficas de DOM, se utilizan matrices
tridimensionales de excitacin y emisin, denominados EEM (Fig. 9), este proceso implica en
excitar una muestra en un rango sucesivo de longitudes de onda y registrar la emisin de
fluorescencia sobre otra gama de mltiples longitudes de onda, todo esto de forma sincrnica
(Hudson et al., 2007), produciendo un grfico 3D por medio de las intensidades y las longitudes
de ondas utilizadas en la excitacin y emisin, permitiendo visualizar una variedad de fluorforos
en una muestra dada y sus posiciones relativas en el espacio ptico, logrando proporcionar
informacin muy detallada de las fuentes, el comportamiento y los ciclos biogeoqumicos de
DOM y de los compuestos fluorescentes.
19
El registro de las medidas de fluorescencia de DOM es un proceso relativamente sencillo, llevado

a cabo en espectrofotmetros de fluorescencia o espectrofluormetros, que permiten escanear y
visualizar la informacin de forma detallada en la identificacin de grupos fluorescentes, pero
mltiples pasos son requeridos para la calibracin y correccin de los instrumentos, ya que es
necesario corregir los sesgos especficos del instrumento, para lograr el espectro 'verdadero'
comparable e independiente de la mquina (Stedmon & Bro, 2008).
Figura 9. Ejemplo de una matriz tridimensional de excitacin y emisin (EEM)

4.8.1 Espectrofluormetros
Estos instrumentos (Fig. 10) utilizan una haz de luz (lser, fotodiodos, LED, arcos de xenn y
lmparas de vapor de mercurio) como fuente de excitacin, estos son generalmente tiles debido
a su alta intensidad en todas las longitudes de onda que van desde los 200 nm hacia arriba. La luz
emitida pasa a travs de un filtro o monocromador, e incide sobre la muestra ubicada en una
cubeta (comnmente de cuarzo) de 1cm3. Los monocromadores se utilizan para dispersar la luz
policromtica o blanca en un ngulo diferente que el de incidencia, desvindola en varios colores
20
o longitudes de onda a travs de rejillas de difraccin en lugar de prismas, lo cual disminuye la

luz difusa, es decir, la luz con longitudes de onda diferentes a la escogida. Una parte de la luz
incidente es absorbida por la muestra, y algunas de las molculas de la muestra producen una
fluorescencia. Parte de esta luz fluorescente pasa a travs de un segundo filtro o monocromador y
llega a un fotomultiplicador, el cual muy a menudo se encuentra a 90 con respecto al haz de luz
incidente para evitar la interferencia de la luz de excitacin transmitida. La salida se suele
presentarse en forma grfica y se almacena digitalmente (Lackowicz, 2006) 4.
En general, los espectros utilizados para registrar la fluorescencia de DOM tienen un amplio
rango de longitudes de onda, que va desde 240 a 450 nm para la excitacin y desde 300 a 600 nm
para la emisin, es decir, comprenden los espectros UV hasta el color azul (espectro visible por el
ojo humano). La ubicacin de los peaks de excitacin y emisin, la forma de los espectros de
fluorescencia y su intensidad vara con la composicin qumica y concentracin de DOM, as
como tambin la intensidad y la forma de los espectros de fluorescencia.
Figura 10. Componentes de un espectrofotmetro de fluorescencia
21
4.8.2 Correccin espectral, correccin de filtro interno, normalizacin y sustraccin del

blanco para realizar mediciones de fluorescencia comparables entre las muestras, estudios y
espectrofluormetros
Algunos de los problemas asociado a este tipo de anlisis pueden deberse a alteraciones derivadas
de la muestra o el mismo instrumento. Como punto de partida, la intensidad de las fuentes de luz
y las caractersticas de la longitud de onda varan con el tiempo durante cada experimento, y a su
vez ninguna lmpara tiene una intensidad constante en todas las frecuencias. Por lo que, los datos
en brutos del instrumento estn intrnsecamente sesgados debido a imperfecciones en los
componentes pticos o su alineamiento, mostrando variaciones en la eficiencia con la que las
diferentes longitudes de onda de la luz se transmiten a travs de los monocromadores. Esto da
lugar a espectros de excitacin o de emisin distorsionados, lo cual debe ser normalizado a travs
de la correccin espectral, este tipo de alteracin se conoce como efecto de filtro externo
(Murphy et al., 2013).
Otro tipo de interferencia asociado a este tipo de anlisis se observa en las muestras pticamente
densas, en donde la relacin entre la concentracin y la intensidad de la fluorescencia, se ve
alterado por efectos de filtro internos primarios y secundarios (EFI) (Fig. 11(a)). Esto ocurre
cuando la radiacin es absorbida por la matriz de la muestra al momento de entrar o salir de la
cubeta de medicin, reduciendo la cantidad de luz de excitacin absorbida por los cromforos en
el centro de la cubeta y de menor manera, la cantidad de luz emitida que incide sobre el detector.
Los cromforos que no presentan fluorescencia tambin contribuyen a este efecto. El resultado es
que la intensidad de excitacin de la luz no es constante a lo largo de la solucin. Como
resultado, slo un pequeo porcentaje de la luz de excitacin llega a los fluorforos que son
visibles para el sistema de deteccin. En general, hay dos maneras de reducir los EFI: por
22
dilucin o correccin matemtica de las intensidades. Si la dilucin aun no es significativa en la

reduccin de este efecto, existe un mtodo sencillo y popular para su disminucin, el cual utiliza
un espectro de absorcin de la muestra (medido en un espectrofotmetro de absorbancia a
longitudes de ondas determinadas) para calcular una matriz de factores de correccin, con un
factor de correccin separado correspondiente a cada par de longitudes de onda en el EEM (Fig.
11(b)), esta correccin a base de la absorbancia solo funciona para las muestras con una capacidad
de absorcin de <0,3 cm-1 a 254 nm y siempre y cuando la misma cubeta sea utilizada para medir
la fluorescencia y la absorbancia . (Lawaetz et al., 2009; Lakowicz, 2006; Stedmon & Bro, 2008;
Murphy et al., 2013).
Figura 11. (a) Efectos de filtro interno primario y secundario en una muestra (b) Frmula
utilizada para la correccin de la absorbancia de la luz en una medicin de fluorescencia
Despus de corregir el efecto de filtro interno y la correccin espectral de la lmpara, la

intensidad de la seal de fluorescencia an no est calibrada, los datos deben ser espectralmente
comparables entre los instrumentos y en el tiempo. Diferentes instrumentos tienen diferentes
23
sistemas de deteccin y / o utilizan diferentes fotomultiplicadores; por lo tanto, a menudo se

utilizan diferentes escalas para registrar la intensidad de fluorescencia. Adems, la intensidad de
fluorescencia es casi siempre (excepto para sistemas de conteo de fotones) dada en unidades
arbitrarias (A.U) (Lawaetz et al., 2009).
La seal de luz que incide en la muestra (independiente de la fuente) al interactuar con las
molculas de agua, induce o provoca una dispersin de la fluorescencia transmitida. Los efectos
de dispersin ms comunes del espectro de luz se llaman dispersin de Rayleigh (de primer y
segundo orden) y la dispersin Raman. La dispersin Rayleigh, ocurre en la misma longitud de
onda que el haz de excitacin, siendo una dispersin directa de la fuente de luz. Esta dispersin se
debe a partculas cuyo tamao es mucho menor que la longitud de onda de los fotones incidentes,
producindose una dispersin elstica de las molculas que se han excitado a un estado de
energa virtual. Tpicamente, una muestra es iluminada con un rayo lser. La luz del punto
iluminado es recogida con un lente y es enviada a un monocromador. Sin embargo, las longitudes
de onda cercanas a la lnea del lser son filtradas o enmascaradas, dando como resultado una
intensidad mucho mayor en magnitud que la fluorescencia real y que por ende es recogido y
almacenado en el detector (fotomultiplicador). La dispersin de Rayleigh en las EEM's es una
estructura exactamente diagonal que ocurren en em = exc (Larsson et al., 2007, Rinnan et al.,
2005, Zeep et al., 2004).
La dispersin Raman, al igual que Rayleigh, ocurre por la interaccin de la luz de excitacin con
las molculas de agua, pero en este caso, la molcula se relaja a un nivel de energa de vibracin
diferente al del estado basal, es decir, la dispersin ocurre de forma inelstica. Cuando la
molcula se relaja a un nivel de vibracin ms alta, la luz emitida tiene una frecuencia ms baja
24
que la luz de excitacin, y para el caso en que la molcula se relaja a un nivel de vibracin ms
baja, la luz emitida tendr una frecuencia ms alta que la luz de excitacin. Este cambio o
diferencia de energa se denomina cambio de Stokes. Los desplazamientos Stokes de una
determinada molcula sern constante independientemente de la frecuencia de la luz de
excitacin. Esta es una manifestacin ptica de las propiedades de dispersin del agua debido a la
vibracin de los enlaces moleculares covalentes O-H con la aplicacin de energa lumnica, en
donde la luz emitida tiene una prdida de energa con frecuencia fija (Fig. 12) (Larsson et al.,
2007; Hudson et al., 2007).
Figura 12. Estados vibracionales de una molcula y su respuesta frente a la interaccin con un
haz de luz. En Rayleigh no hay cambio en la energa de la luz incidente con la luz emitida. En los
Raman Stokes la luz dispersada tiene menor energa que la luz incidente (menor frecuencia). En
los Raman anti-Stokes, la luz dispersada tiene mayor energa que la luz incidente (mayor
frecuencia)
25
La identificacin de estos fenmenos de dispersin, fue un avance fundamental en la

espectroscopa de fluorescencia (Fig. 13). Al identificarse que Raman tiene baja intensidad, se
reconoci que la nica molcula de concentracin suficiente para producir dispersin Raman
visible e identificable es el agua (normalmente ubicado a los 350 nm de excitacin) (Fig. 14). Por
lo tanto, la dispersin Raman proporciona la base ms apropiada para un mtodo de correccin ya
que es mucho menos dependiente de la composicin de la muestra (Lawaetz et al., 2009).
Figura 13. (a) Tpico espectro de emisin de fluorescencia con los diferentes peaks marcados. La
escala de la abscisa superior es la longitud de onda en nm y la escala de la abscisa inferior es la
frecuencia en cm-1. (b) Grfico de contorno de un EEM con los respectivos efectos de las
dispersiones (Fuente: Larsson et al., 2007).
Un mtodo simple y que es directamente proporcional a la medicin del agua, es el uso del rea
del peak de Raman (Arp). (Arp) se puede utilizar para calibrar las mediciones realizadas en
diferentes instrumentos, o hechas con diferentes ajustes instrumentales que pueden variar en
consecuencia la altura o el ancho del peak. Esto equivale a que cada punto de la matriz de
excitacin-emisin se divide por (Arp), dando como resultado una nueva unidad comparable, la
unidad Raman (R.U) (Lawaetz et al., 2009).
26
Figura 14. Peak de Raman visible en una muestra de agua fresca Milli-Q en unidades arbitrarias
(A.U.) (Fuente: Lawaetz et al., 2009)
Finalmente, la normalizacin de la seal medida del peak Raman y el uso de espectros de

correccin para la excitacin y emisin eliminan de forma efectiva todos los sesgos especficos
de los instrumentos. Sin embargo, para poder visualizar de forma especfica y detallado los
fluforos dentro de las matrices de excitacin-emisin, es necesario realizar una sustraccin del
espectro del blanco (agua), esencial para cualquier experimento de fluorescencia, ya que son
idnticos a la muestra pero no contienen el fluforo, corrigiendo los valores de esta y eliminando
definitivamente los ruidos de la medicin y los efectos debido a las dispersiones Raman y
Rayleigh (Fig. 15) (Lakowicz, 2006; Zepp et al., 2004). Seguido a esto se realiza una
interpolacin de los datos, en donde la excitacin es mayor a la emisin (regin de no
fluorescencia), utilizando una "triangulacin de ceros" en la regin de los datos faltantes (mtodo
de triangulacin de Delaunay) (Stedmon et al., 2003; McKnight et al., 2001).
27
Figura 15. Ilustracin de la sustraccin del blanco, eliminando los ruidos de medicin, la mayora
de los efectos por dispersin y la interpolacin de los datos en las regiones de no fluorescencia
4.9 ndices de Fluorescencia
A travs de los anlisis de fluorescencia por medio de la espectroscopa, las diferentes longitudes
de ondas presentes en las matrices de excitacin-emisin, permiten identificar el origen de los
fluorforos y cuantificar las diferencias en las propiedades de fluorescencia de DOM,
denominados ndices de fluorescencia. En este contexto usaremos 3 ndices que utilizan
diferentes posiciones en los espectros de excitacin y emisin para brindar informacin anexa al
anlisis cuantitativo y cualitativo que efecta PARAFAC (seccin 4.10 PARAFAC) de los
fluorforos presentes.
El ndice FI, es uno de los ms simples y utilizados, este proporciona informacin acerca de la
fuente (por ejemplo, microbiano o de plantas superiores derivados de la materia orgnica
terrestre) o el grado de degradacin de DOM, ya que refleja la contribucin relativa de los DOM
aromticos vs los no aromticos. Este ndice es una relacin de intensidades de emisin a
longitud de onda 450 nm y 500 nm a una excitacin de 370 nm. Su variabilidad va desde valores
28
altos ~1,9 para derivados por liberacin extracelular y los lixiviados de las bacterias y algas y un
valor de ~1,4 para los derivados planta terrestre y la materia orgnica del suelo (McKnight, 2001;
Fellman et al, 2010)
El ndice HIX, indica el grado de humificacin o de sustancias hmicas contenidas en el

fluorforo. Este se basa en la idea de que los espectros de emisin de molculas fluorescentes se
desplazarn hacia longitudes de onda ms largas (debido a las bajas proporciones H:C) como de
donde procede la humificacin de DOM. Los valores ms altos indican un mayor grado de
humificacin. Se calcula a travs del rea bajo los espectros de emisin de 435 a 480 nm dividida
por el rea del pico de 300 a 345 nm + 435 a 480 nm, a la ex 255 nm. Los valores sobre 10
corresponden a extractos de cidos flvicos valores debajo de 2 corresponde a material vegetal no
humificado
El ndice :, es un indicador de la contribucin recientemente producida de DOM, donde

representa a DOM derivado recientemente (autctono) y representa a DOM ms descompuesto
(alctono). Este se calcula a travs de la relacin entre la intensidad de emisin a 380 nm dividida
por la intensidad mxima de emisin observada entre 420 y 435 nm, obtenidos a una excitacin a
29
310 nm (Parlanti et al., 2000; Fellman et al., 2010). Los valores > 1 indica que DOM es
autctono, los valores <0,6 indica que DOM es alctono.
Figura 16. Localizacin de los ndices basados en fluorescencia con respecto a sus longitudes de
onda de emisin y excitacin correspondientes
4.10 PARAFAC
Una vez que los datos se han corregido las matrices de excitacin-emisin pueden ser analizadas
utilizando mtodos estadsticos de anlisis de datos de mltiples vas. Un tipo de anlisis que ha
demostrado proporcionar una considerable ventaja en la interpretacin de la naturaleza
multidimensional de los conjuntos de datos de EEM, es el anlisis de factores paralelos
PARAFAC (Bro, 1997; Cory y McKnight., 2005; Stedmon et al., 2003; Stedmon and Markager,
2005; Fellman et al., 2008), este mtodo descompone la matriz de datos de seales de
30
fluorescencia en un conjunto de componentes trilineales y vectores residuales, permitiendo la

identificacin de los diferentes grupos de fluorescencia, logrando separar la seal compleja
medida en sus fenmenos fluorescentes subyacentes individuales con excitacin especfica y
espectros de emisin, proporcionando estimaciones de la contribucin relativa de cada
componente de fluorescencia en la reserva total de DOM. Por lo tanto, los componentes
generados por la modelacin mediante PARAFAC proporcionan informacin sobre la
composicin bioqumica, origen, y el papel biogeoqumico del DOM acutico (Fellman et al.,
2010). Un modelo PARAFAC de vectores de tres vas est dada por tres matrices de carga, A, B
y C con los elementos aif, bjf, y ckf. El principio detrs del modelo trilineal se encuentra en
minimizar la suma de cuadrados del residuo, eijk entre el modelo y los valores medidos (Fig. 17)
Donde i= 1, ...., I; j= 1,...., J; k= 1,....., K

En la ecuacin, xijk es la intensidad de la fluorescencia de la muestras ith a longitudes de ondas de
emisiones jth y a longitudes de ondas de excitaciones kth, y eijk es el residuo que representa la
variabilidad no explicada por el modelo (Fig. 16). Estos componentes del modelo tienen una
interpretacin qumica directa en un modelo vlido. El parmetro aif es directamente proporcional
a la concentracin del fluorforo fth en la muestra i; los vectores bjf y ckf estn linealmente
relacionadas con la eficiencia cuntica de fluorescencia (fraccin de energa absorbida-emitida
como fluorescencia) del fluorforo fth. Para tener una descomposicin exitosa de datos de
mltiples vas usando PARAFAC, se debe tener en cuenta: Primero, la variabilidad, no hay dos
componentes qumicos que puedan tener intensidades de fluorescencia perfectamente covariando
31
o espectros idnticos. Segundo, la trilinearidad, los espectros de emisin son invariantes a travs
de longitudes de onda de excitacin, los espectros de excitacin son invariantes a travs de
longitudes de onda de emisin, y la fluorescencia aumenta aproximadamente de forma lineal con
la concentracin. Tercero, aditividad, la seal total es debido a la superposicin lineal de un
nmero fijo de componentes (Bro, 1997; Murphy et al., 2013; Guo et al., 2010).
Figura 17. : Ilustracin de los valores obtenidos por medicin de la espectroscopa de

fluorescencia, los resultados del modelo de anlisis PARAFAC y los residuos entre los valores
medidos y los resultados de un modelo
4.11 Efectos ambientales sobre la fluorescencia de DOM y seguimiento de DOM en aguas
naturales y efectos de la contaminacin antropognica
Finalmente, y a modo de resumen, es posible desarrollar por medio de la espectroscopia de
fluorescencia ptica una investigacin aplicada sobre las fuentes, caractersticas y reacciones de
la materia orgnica disuelta en aguas naturales, como tambin para la deteccin de DOM
originado por diferentes fuentes de contaminacin en las corrientes de agua dulce.
Como ya se haba mencionado, se espera que los sistemas de produccin acucola como lo son las
pisciculturas produzcan un alto aporte de materia orgnica disuelta (DOM) en el curso de agua
asociada a la descarga. Esta se originara a partir de alimentos no consumidos, las heces y los
32
subproductos metablicos de los peces. Teniendo en cuenta que la composicin media de pellets
es 40% de protena, 17% de grasa, 19% de carbohidratos, 14% de cenizas, 7% de agua, 50% de
carbono, 6% de nitrgeno y 1% de fsforo (Olsen et al., 2008), y considerando que en la
eliminacin de desechos slidos, se espera una entrada de 3,2% de carbono orgnico disuelto, 3%
de nitrgeno orgnico disuelto y 7,5% de fsforo orgnico disuelto hacia el cuerpo de agua
asociado, en forma de molculas de diversa complejidad (Fig. 18). Aportando de manera
significativa fracciones de materia orgnica disuelta a la cuenca hidrogrfica y afectando
directamente e indirectamente los procesos ecolgicos estructurales y funcionales de los ros.
Figura 18. Balance teortico masas de carbono, nitrgeno y fsforo en sistemas de pisciculturas
(Fuente: Olsen et al, 2008).
Sin embargo, el potencial para la caracterizacin y cuantificacin de la materia orgnica en las
aguas naturales, de origen alctono y autctono, es cada vez ms comn en los anlisis de agua
dulce (Fellman et al., 2010). De particular inters son los vnculos entre los anlisis de
fluorescencia y las tcnicas de monitoreo de calidad del agua. Si se pueden encontrar
correlaciones vlidas, la fluorescencia podra ser utilizada como una rpida herramienta para
33
evaluar la calidad del agua y como tcnica de monitoreo a largo plazo de la contaminacin en los
sistemas acuticos (Hur and Cho, 2012).
5. Hiptesis
La espectroscopa de fluorescencia ptica es una herramienta de monitoreo ecolgica eficaz,
precisa y representativa, capaz de brindar una mayor informacin acerca de la composicin,
concentracin y origen de la materia orgnica disuelta, permitiendo observar sus variaciones y
distribucin tras la incorporacin de residuos orgnicos provenientes de una piscicultura que
afectan a los ecosistemas de agua dulce, comparando los componentes fluorescentes especficos
evaluados mediante el anlisis PARAFAC entre aguas naturales y las aguas contaminadas.
6. Objetivos
6.1 Objetivo general

El objetivo del presente trabajo es realizar un seguimiento de la contaminacin orgnica de una
piscicultura en el Sur de Chile, centrndose sobre el contenido y composicin de DOM, a travs
de la caracterizacin y evaluacin de la variacin de los componentes de fluorescencia de DOM,
presentes en el sistema lotico.
6.2 Especficos
1. Evaluar el grado de correlacin entre los parmetros de monitoreo fsico-qumicos y los
componentes validados por PARAFAC
34
2. Evaluar el grado de correlacin entre los componentes similares a protena validados por
PARAFAC y las concentraciones de N y P
3. Evaluar el grado de correlacin entre los componentes validados por PARAFAC y los ndices
de Fluorescencia
4. Evaluar el grado de correlacin entre los componentes validados por PARAFAC y el carbono
orgnico disuelto (COD)
5. Encontrar si existen variaciones cuantitativas y cualitativas entre los componentes validados
por PARAFAC a lo largo del cauce fluvial
6. Observar los procesos degradativos que afectan a DOM proveniente del efluente, bajo
condiciones de laboratorio controladas, mediante experimentos de incubacin y dilucin
35
7. Materiales y Mtodos
7.1. Metodologa
Las muestras de agua utilizadas para efecto de la caracterizacin de la materia orgnica disuelta
(DOM) fueron recolectadas entre los meses de Agosto y Diciembre del ao 2013, y Enero del ao
2014, a lo largo del Rio Molco (en Mapudungun; significa planta de agua) (3925884 S,
7210098 E) ubicado entre las ciudades de Villarrica y Pucn, en la IX regin de la Araucana,
Chile (Fig.19). El ro se extiende por unos 3,8 km, influenciado principalmente por las descargas
del efluente de la Piscicultura Molco de Multiexport, desembocando en el lago Villarrica. La
piscicultura present una produccin de 91.023 Kg de peces y 963 Kg de alimento en promedio
durante los meses de muestreo, con una descarga promedio de 277 litros por segundo (lps). Un
total de 183 muestras fueron colectadas, por medio de 16 puntos monitoreados intermitentemente
a lo largo del ro en el presente estudio. Las fechas y estaciones de los muestreos se encuentran en
la tabla 1 y las coordenadas GPS de los puntos muestreados se encuentran en la tabla 2.
Tabla 1. Fechas y puntos muestreados en el Rio Molco, IX Regin de la Araucana, Chile.
Fecha
Estaciones
01-08-2013 Molco Control
Molco Efluente
Molco Puente Arriba
Molco Cabaas
Molco Puente Madera
Molco Puente Pucon
Molco Efluente
Post Efluente 1
Post Efluente 2
Post Efluente 3
Molco Bifurcacin
Post Efluente 4
Post Efluente 5
Post Efluente 6
Molco Puente Arriba
Puente Molco 1 Arroyo Lateral
Molco Cabaas
Molco Puente Madera
Chosco
Molco Puente Pucon
Fecha
Estaciones
Molco Efluente
Molco Puente Arriba
Molco Puente Pucon
Molco Efluente
Molco Puente Arriba
Molco Puente Madera
Chosco
Molco Puente Pucon
Molco Efluente
Chosco
Molco Puente Pucon
Fecha
Estaciones
Molco Efluente
Molco Puente Arriba
Molco Cabaas
Molco Puente Pucon
Molco Efluente
Post Efluente 1
Post Efluente 2
Post Efluente 3
Post Efluente 4
Post Efluente 5
Post Efluente 6
Afluente
Molco Puente Arriba
Molco Puente Madera
Molco Puente Pucon
36
Figura 19. Mapa general del rea de estudio, con los respectivos puntos de muestreo ubicados en
el Rio Molco en la IX Regin de la Araucana, Chile.
Tabla 2. Coordenadas geogrficas de los puntos de muestreo en el Rio Molco en la IX Regin de
la Araucana, Chile.
Punto
Puente Molco-Pucon
GPS
39.29915 S
72.10150 W
Chosco
39.310240 S
72.099400 W
Molco Puente Madera
39.313516 S
72.101040 W
Cabaas Millaleufu
39.32603 S
72.09782 W
Puente Molco 1 Arriba
39.33226 S
72.09465 W
Puente Molco 1 Arroyo Lateral 39.33226 S
72.09465 W
Post Efluente 6
39.33273 S
72.09437 W
Post Efluente 5
39.33352 S
72.09432 W
Post Efluente 4
39.33403 S
72.09443 W
Punto
GPS
Post Efluente 5 39.33352 S
72.09432 W
72.09443 W
Bifurcacin
39.33427 S
72.09454 W
Afluente
39.334870 S
72.094230 W
72.09414 W
72.09411 W
72.09425 W
Efluente
39.335780 S
72.094270 W
Control
39.336300 S
72.094230 W
37
7.2. Preparacin de las muestras para el anlisis ptico y fluoromtrico de DOM, DOC y NP inorgnicos
Las muestras recogidas se depuraron a travs de filtros de jeringa Millex -GP Hydrophilic PES
0,22 M previamente acondicionado con 100 ml de agua (Desionizada) para obtener la fraccin
disuelta y eliminar los slidos suspendidos, y luego guardadas en frascos de borosilicato mbar IChem (Merck). Por cada punto de muestreo se generaron 3 replicados de 40 ml de muestra de
agua filtrada para la medicin de fluorescencia de DOM y 3 replicados de 40 ml de muestra de
agua filtrada adicionando 100 l de HCl fumante (Merck) para la medicin de DOC. En la
recoleccin de muestras se utilizaron botellas plsticas comerciales de agua mineral (PET) de 0.5
L, que se acondicionaron 3 veces con el agua de la muestra para posteriormente rellenarlas, con
el fin de medir las cargas de N y P presentes, paralelamente se midieron parmetros
fisicoqumicos como oxgeno disuelto, temperatura, conductividad, turbidez y pH. Se utilizaron y
rellenaron botellones de vidrio mbar de 5 L con agua proveniente del efluente para realizar
experimentos de incubacin y dilucin, posteriormente en el laboratorio. El transporte de las
muestras se efectu a T = 4 - 7 C dentro de coolers con hielo para su posterior anlisis. Todas las
mediciones pticas de DOM se hicieron dentro de 2 das, para evitar la degradacin y
subestimacin de DOM.
7.3 Parmetros de calidad del agua

Los parmetros de calidad del agua como oxgeno disuelto, temperatura, conductividad, turbidez
y pH, fueron registrados en el mismo momento que se realizara la toma de muestra para efecto de
caracterizacin de la materia orgnica disuelta. A travs de una sonda multiparamtrica Multi
38
3420 SET H WTW, WeilHemm, Alemania, Mientras que la turbidez fue medida a travs de un
turbidmetro AL250T-IR AquaLytic.
Los anlisis de nitrgeno y fosforo se realizaron en el laboratorio de anlisis de aguas, Instituto
de Ciencias Marinas y Limnolgicas de la Universidad Austral de Chile, responsable Dr. S.
Woelfl, a travs de mtodos y lmites de deteccin especficos para cada fraccin inorgnica de
nitrgeno (NH4+, NO2-, NO3-), nitrgeno total y nitrgeno orgnico, el fsforo total y el
ortofosfato (PO4).
Nitrato: 4500-NO3 E Standard Methods Edicin 2005; Segmented flow anlisisModul
SKALAR, L.D.: 0,002 mg N/L
Nitrito: 4500-NO2 B Standard Methods Edicin 2005; Segmented flow anlisisModul
SKALAR, L.D.: 0,002 mg N/L
Amonio: 4500-NH4 F Standard Methods Edicin 2005, L.D.: 0,003 mg N/L
Nitrgeno total: Mtodo de digestin bsica con Hidrxido de Sodio y Persulfato de Potasio
segn Koroleff (1983) y 4500-N/C y 4500-NO3 E Standard Methods Edicin 2005; Segmented
flow anlisis Modul SKALAR, L.D.: 0,015 mg N/L
Nitrgeno orgnico: Norg. = NT (N-NO3 + N-NO2 + N-NH4). L.D.: 0,015 mg N/L
Fsforo soluble: Mtodo azul del cido ascrbico segn 4500-P E. Standard Methods APHA
(2005). L.D.: 0,002 mg P/L
El anlisis de carbono orgnico disuelto (DOC) fue medido a travs de un Elementar high TOC
de combustin cataltica a altas temperaturas, en el laboratorio de anlisis de aguas, Instituto de
39
Ciencias Marinas y Limnolgicas de la Universidad Austral de Chile, responsable Dr. Jorge

Nimptsch.
7.4 Experimentos de incubacin y dilucin

Se realizaron experimentos de laboratorio bajo condiciones controladas con el fin de comparar
tanto el grado de dilucin o mezcla del ro, como tambin los posibles procesos de degradacin o
actividad biolgica que ocurren en DOM proveniente del efluente a medida que transcurre un
periodo de horas establecidas.
Estos experimentos se llevaron a cabo, con las muestras obtenidas del efluente el da 25 de
Noviembre del 2013. Los ensayos de incubacin y dilucin fueron realizados de manera paralela.
El experimento de dilucin se desarroll en botellas plsticas (HDPE) de 1 L previamente
lavadas y acondicionadas. Se utilizaron 5 botellas, cada una corresponda a un porcentaje de
dilucin del efluente, siendo la primera un 100% de las aguas residuales, a continuacin en la
segunda botella se mezcl 500 mL de agua desionizada con 500 mL de efluente, es decir, la
muestra del efluente quedo ahora a un 50% de dilucin, para la tercera botella se utiliz 500 mL
de la mezcla previamente homogenizada de la botella de 50% de dilucin, y se le adiciono
nuevamente 500 mL de agua desionizada quedando ahora en un 25% de dilucin. Este
procedimiento se realiz hasta llegar a un 6.25 % de dilucin de las aguas residuales proveniente
de las descargas de la piscicultura (Fig. 20). Una vez que las mezclas se encontraban en las 5
botellas, se efectu el mismo procedimiento que en la seccin 7.2 Preparacin de las muestras
para el anlisis ptico y fluoromtrico de DOM, a excepcin de los replicados para la medicin
de DOC, los cuales no se realizaron.
40
Figura 20. Experimento de dilucin y sus respectivos porcentajes

El experimento de incubacin, se desarroll en un vaso Schott Duran de 1000 mL, en el cual se
coloc 600 mL del efluente proveniente de la piscicultura. El vaso precipitado se almacen en un
refrigerador a 10 C y mediante un agitador magntico a 250 rpm, se pudo mantener la
homogenizacin del medio lquido. Se utiliz Film plstico adherente para cubrir el vaso y evitar
la evaporacin del medio acuoso. Al momento de comenzar el experimento se tom la primera
muestra, registrndola como hora 0, posterior a esto, se realiz cada un intervalo de 1 hora por 6
horas una toma de muestra y despus a las 24 y 48 horas de haber comenzado la incubacin (Fig.
21). El protocolo para la toma de muestra se efectu de la misma manera que en la seccin 7.2
Preparacin de las muestras para el anlisis ptico y fluoromtrico de DOM, a excepcin de los
replicados para la medicin de DOC, los cuales tampoco se realizaron.
41
Mediante la inclusin de estas muestras se puede verla variabilidad que experimenta DOM en
condiciones controladas, y establecer una gradiente de datos ms robusta para caracterizar de
manera ms clara los procesos que intervienen en el comportamiento de DOM.
Figura 21. Experimento de incubacin
42
7.5 Metodologa de anlisis ptico y fluoromtrico de DOM

Previo a los anlisis pticos y fluoromtricos de DOM, las muestras se aclimataron a temperatura
ambiente (25 C). Para la identificacin de fluorforos caractersticos del sistema lmnico y del
efluente, se realiz un anlisis fluoromtrico y ptico de las muestras se utilizando un espectro fluormetro Perkin Elmer Luminescence Spectrometer LS50B (Fig. 22(a)), el funcionamiento de
este instrumento se explica en la seccin 4.8.1 Espectrofluormetros, del presente trabajo. Las
longitudes de onda que se establecieron para generar la matriz de excitacin y emisin fueron de
300 a 600 nm (ancho de banda 0.5 nm) para la emisin y de 240 a 450 nm (ancho de banda 5 nm)
para la excitacin. Los espectros de fluorescencia se corrigieron para efectos de filtro interno. Por
medio de un espectro de absorcin de la muestra medido en un espectrofotmetro de absorbancia
(Fig. 22(b)) en una cubeta de cuarzo de 1cm3, preferentemente la misma que se utiliz para la
medicin del espectro de fluorescencia. Esta correccin representa la absorcin por parte de la
muestra en la cubeta de las longitudes de excitacin (efecto primario de filtro interno) y las
longitudes de emisin (efecto secundario de filtro interno). Posteriormente se realiz una
normalizacin bajo rea del peak de Raman (Arp) a base de agua desionizada a una excitacin de
350 nm (Lawaetz et al. 2009), medida el mismo da que se realizan los anlisis pticos. A
continuacin a las matrices de excitacin-emisin se le aplica una sustraccin del espectro del
blanco (agua desionizada), para remover los ruidos de la medicin y los efectos debido a las
dispersiones Raman y Rayleigh, seguido por una interpolacin de los espectros de fluorescencia.
La normalizacin Raman y los procedimientos de correccin espectral y de filtro interno, dan
como resultado espectros estandarizados en unidades Raman (R.U.), permitiendo observar
cuantitativamente la intensidad de la seal, proporcionando datos espectrales directamente
comparables entre los instrumentos y en el tiempo.
43
7.6 Anlisis PARAFAC

Para la identificacin cualitativa y cuantitativa de los fluforos presentes en las EEM se realiz
un anlisis PARAFAC. El anlisis se realiza con frecuencia en el software comercial MATLAB
(Mathworks, Inc) que gestiona de manera eficaz las matrices de excitacin-emisin mediante el
DOMFluorToolbox. PARAFAC descompone el conjunto de matrices en modelos de
componentes que representan los grupos fluorescentes. Se utilizaron todas las EMM medidas
tanto las de los muestreos realizados en la cuenca hidrogrfica del Rio Molco, como los
experimentos de incubacin y dilucin realizados en el laboratorio, para proporcionar un
conjunto de datos robusto
y facilitar el modelado de PARAFAC. El modelo se us con
restricciones de no negatividad aplicadas a cada dimensin (excitacin, emisin y concentracin).

Inicialmente se realizaron modelos simples de dos o tres componentes para identificar los datos
"outliers" (datos extremos), longitudes de onda ruidosas u otros problemas potenciales del
conjunto de datos que no son fcilmente identificados por anlisis visual de los grficos EEM.
Identificadas la existencia de problemas potenciales, se comienza la exploracin del correcto
nmero de componentes (rango del modelo) aplicando el algoritmo de PARAFAC a las
intensidades de fluorescencia presentes en los EEM. La determinacin del nmero de
componentes del modelo se realiz mediante el anlisis split-half y el anlisis de residuos y
loadings. El anlisis split-half consiste en dividir el conjunto de datos a la mitad en diferentes
maneras, produciendo modelos PARAFAC idnticos de submuestras independientes del conjunto
de datos. Si se elige el nmero correcto de componentes, las cargas de ambos modelos ser el
mismo, debido a la singularidad del modelo PARAFAC (Bro 1997). La intensidad de
fluorescencia de cada componente es representado por Fmax (R.U., unidades Raman) (Stedmon
and Markager, 2005). Como cada componente de PARAFAC probablemente representa un grupo
44
de fluorforos con caractersticas de fluorescencia muy similares (Stedmon et al. 2003); nos
referiremos a los grupos naturales de cidos hmicos como componentes similares a cidos
hmicos o componentes similares a cidos flvicos, y a los grupos de origen proteico como
componentes similares a protenas.
Figura 22. Espectrofluormetro Perkin Elmer Luminescence Spectrometer LS50B y

espectrofotmetro de absorbancia Spectroquant Pharo 300 Merck
8. Resultados
8.1 Validacin del modelo

Cada EEM presente en este estudio representa una enorme cantidad de informacin
espectroscpica perteneciente a la composicin qumica de cada muestra. Un nmero de 225
EEM fueron analizados, incluyendo los datos obtenidos a lo largo del ro en sus diferentes puntos
y rplicas, adems de los experimentos de incubacin y dilucin del efluente, efectuados en el
laboratorio, generando un modelo robusto y con gradiente de composicin. El modelo validado
por PARAFAC (Fig. 23), mediante el anlisis split-half y el anlisis de residuos y loadings
45
(Seccin 3.5 Anlisis PARAFAC), identific 4 componentes fluorescentes. Los EEM residuales
mostraron principalmente el ruido del instrumento, lo que confirma que el modelo PARAFAC
represent todos los fluorforos discernibles dentro del modelo (Fig. 24). Sin embargo, para
lograr de forma concisa y clara la validacin fue necesario remover 3 muestras (outliers), del
conjunto de datos, debido a que cuando estaban presentes solo un modelo de 3 componentes era
validado (Fig. 25). Luego de esto se compararon los espectros de excitacin y emisin de los
componentes a validar para verificar cual era el ms representativo y coherente (Fig. 26). Paralelo
a esto se compar la suma espectral de las desviaciones al cuadrado entre las cargas de excitacin
y emisin de los anlisis split-half para cada componente de los modelos de 2, 3 y 4 componentes
(Fig. 27). Finalmente los resultados del anlisis split-half sern ajustados a una serie de datos
enteros usando una inicializacin aleatoria del modelo, para asegurar que este deriva en realidad
de los resultados mnimos cuadrados y no de un mnimo local (Fig. 28). Realizando 1000
iteraciones (repeticiones) de diferentes modelos con el mismo nmero de componentes, de modo
que nos encontremos con el verdadero resultado de mnimos cuadrados (mejor ajuste), para llegar
a un modelo slido en este caso de 4 componentes.
Sin embargo, los resultados del anlisis split-half y el anlisis residual nos permiten concluir que
un modelo de cuatro componentes es adecuado para los datos. Esto no quiere decir que las EEM
slo contengan cuatro grupos fluorforos diferentes, sino ms bien que estos cuatro grupos
fluorescentes estaban presentes en la mayora de estas muestras, y podan ser modelados (y
validados) por el anlisis trilineal y por ende explicar la mayor parte de la variacin. Otros grupos
fluorescentes evidentemente podran estar presente en las muestras, pero su influencia es tan
dbil que no se pudieron distinguir del ruido de medicin.
46
Figura 23. Validacin del modelo de 4 componentes, por medio de la funcin SplitHalfValidation
en MatLab mediante el DOMFluorToolbox. Esta funcin compara automticamente las cargas de
excitacin y de emisin de diferentes modelos de split-half y determina si son iguales o no.
Figura 24. Evaluacin del ajuste de un modelo PARAFAC a travs de la comparacin entre la
medicin de una EEM (arriba a la izquierda), el modelo a validar (en medio a la izquierda) y los
residuos (diferencia entre lo medido y el modelado de datos) (abajo a la izquierda).
47
Figura 25. Comparacin entre un modelo de 4 componentes con outliers (muestra 148, 149 y 150) (a) y un modelo de 4
componentes sin outliers (b). En la primera columna se encuentran las muestras y las intensidades de los componentes (arriba),
seguido por la carga de emisin (mitad) y la carga de excitacin. En la segunda columna se observan las muestras (arriba), la carga
de emisin (mitad) y la carga de excitacin por medio de grficos leverages.
48
Figura 26. Comparacin de los espectros de emisin y excitacin entre dos (a), tres (b) y cuatro (c) componentes.
49
Figura 27. Comparacin de la suma espectral de las desviaciones al cuadrado entre las cargas de
excitacin y emisin de los anlisis split-half para los modelos de 2, 3 y 4 componentes.
Figura 28. Forma en que la funcin SplitData divide los datos en dos mitades para el anlisis
split-half y usar el mejor ajuste para la validacin del modelo de componentes
50
8.2 Descripcin de los componentes

Se identificaron 4 componentes fluorescentes del conjunto de datos modelado por PARAFAC.
Estos representan diferentes grupos de fluorforos presentes en las muestras, exhibiendo peak
redondeados, mltiples mximos de excitacin y un mximo individual de emisin.
Los componentes 1, 2 y 4 (Fig. 29, 30, 31, 32, 33 y 34) presentan caractersticas similares a los
peak asociados a material del tipo proteico. Mientras que el componente 3 (Fig. 35 y 36) presenta
peak similares a sustancias hmicas.
Los Componentes 1, 2 y 4 presentan propiedades de fluorescencia del tipo proteico, los cuales
probablemente derivan de fluorescencias de aminocidos aromticos libres, unidos a protenas o
de otros materiales orgnicos de bajo peso molecular con caractersticas de fluorescencia
similares (Maie et al., 2007; Coble, 1996). Estos componentes exhiben fluorescencia a longitudes
de onda distintivos en las aguas naturales. Se caracterizan por ser indicadores de una alta
actividad biolgica y dar un acercamiento sobre la magnitud de la carga orgnica,
biodisponibilidad de DOM e indirectamente de la elevada actividad microbiana asociada a los
sistemas (Fellman et al. 2010). Su origen puede deberse a entradas desde un sistema alctono
(descargas de aguas residuales de plantas de tratamientos o de vertidos industriales) o ser creado
de forma autctona (excreciones celulares de fitoplancton y bacterias). Poseen un potencial
considerable para su uso como trazadores biogeoqumicos, ya que se han utilizado para predecir
la labilidad de DOM y como huellas digitales de DOM que derivan de fuentes microbianas o
antropognicas (Baker and Spencer, 2004; Fellman et al., 2009a; Hood et al., 2009; Parlanti et al.,
2000).
51
8.2.1 Componente 1, Similar a Tirosina

El componente 1 presento peaks a Ex 275 y Em 315. Los rangos mximos de excitacin y
emisin para similar a Tirosina, segn Fellman et al. (2010) son: Ex 270275, Em 304312
Los componentes similares a tirosina indican aminocidos libres o unidos a protenas, es un
indicador de material peptdico ms degradado. Sus probables fuentes pueden ser de plantas
terrestres o materia orgnica del suelo, produccin autctona, procesos microbianos o descargas
industriales o de plantas de tratamiento de aguas residuales (Fellman et al., 2010)
Figura 29. Componente 1, grfico de contorno
52
Figura 30. Componente 1, grfico de superficie

8.2.2 Componente 2, Similar a Triptfano
El componente 2 present peaks a Ex 285 y Em 347.5. Los Rangos mximos de excitacin y
emisin para similar a triptfano, segn Fellman et al. (2010) son: Ex 270280 (<240), Em 330
368
Los componentes similares a triptfano indican protenas intactas o materiales pptidos menos
degradados y con un alto potencial de oxidacin. Su principal fuente proviene de la materia
orgnica procedente de la actividad microbiana o de descargas industriales y residuales de origen
antropognicos (Hudson et al., 2008).
53

8.2.3 Componente 4
El componente 4 present peaks a Ex 265 y Em 339. El fluorforo no est bien caracterizado en
la literatura a pesar de que vive en el espacio ptico en una posicin parecida a la de un similar
proteico (Fellman et al. (2010): Ex 240 (300), Em 338) y, por tanto, la identificacin de sus peaks
54
separados en mezclas tales como aguas naturales puede no ser fcil de dilucidar. Segn
experimentos de laboratorio se debera a una degradacin del material proteico por accin
microbiana presente en aguas naturales, pero que aumentara por accin antropognica.
55
El componentes 3 presenta propiedades de fluorescencia del tipo similar a sustancias hmicas.

Su principal fuente proviene de la degradacin microbiana o de plantas vasculares, lignina,
celulosa, terpenos, y de fuentes externas derivadas del sedimento terrestre. Son mezclas
heterogneas complejas de compuestos orgnicos de alto peso molecular, tanto aromticos y
alifticos, que son ricos en grupos funcionales que contienen oxgeno, representando la fraccin
de peso molecular ms alto de la reserva de DOM (Coble et al., 1998; Jarafshan et al., 1996).
8.2.4 Componente 3, Similar a cidos Hmicos

El componente 3 present peaks a Ex 240 y Em 426.5. Los Rangos mximos de excitacin y
emisin para similar a cidos hmicos, segn Fellman et al. (2010) son: Ex <250, Em 388425
Los componentes similares a cidos hmicos son una fraccin de cido orgnico de peso
molecular moderado con un bajo contenido de N y soluble a todos los valores de pH, presentes en
las reacciones biogeoqumicas en las aguas naturales. Probablemente oxidado, correlacionado
con el contenido de carbono aliftico y asociado con producciones autctonas (degradacin
microbiana) o de un potencial fotoproducto de DOM terrestre. Se pueden encontrar diferencias
significativas en las propiedades de fluorescencia de estos componentes, dependiendo de la
naturaleza de sus fuentes (Fellman et al, 2010; Findlay and Sinsabaugh, 2003).
56
57
El anlisis PARAFAC, adems de entregar informacin cualitativa, nos proporciona estimaciones

de la contribucin relativa de cada componente de fluorescencia (FMax) en la reserva total de
DOM. Una visin sobre las caractersticas de DOM y su variabilidad dentro de la cuenca del Rio
Molco, se pueden observar en las figuras 37, 38, 39, 40 y 41. Adems se puede obtener una
nocin sobre el comportamiento de DOM y la influencia que tienen las distintas fuentes sobre las
intensidades de fluorescencia de los componentes, permitiendo trazar y caracterizar la huella
digital de DOM en sistemas loticos que sustentan descargas de pisciculturas.
Variacin de DOM Mes de Agosto

2 km
2 km
1.5
R.U.
1
Similar a Tirosina
Similar a Triptfano
0.5
Similar a cidos hmicos

Similar a Protena
0
Molco
Control
Molco
efluente
Molco
Puente
arriba
Molco
Cabaas
Molco
Puente
Madera
Molco
Puente
Pucon
Estacion
Figura 37. Variacin espacial de DOM a lo largo del Rio Molco, durante el mes de Agosto
58
Variacin de DOM Mes de Octubre

1 km
3 km
Similar a
Tirosina
0.5
Molco Puente Pucon
Chosco
Molco Puente Madera
Similar a
Triptfano
Molco Cabaas
Molco Puente arriba
Post Efluente 6
Post Efluente 5
Post Efluente 4
Molco bifurcacion
Post Efluente 3
Post Efluente 2
Post Efluente 1
Molco efluente
Molco Control
Puente Molco 1 Arroyo
R.U.
Similar a cidos
hmicos
Similar a
Protena
Estacion
Figura 38. Variacin espacial de DOM a lo largo del Rio Molco, durante el mes de Octubre
Variacin de DOM Mes de Noviembre

2
2 km
2 km
R.U.
1.5
Similar a Tirosina
Similar a Triptfano
0.5

Similar a Protena
0
Molco
Control
Molco
efluente
Molco
Puente
arriba
Molco
Puente
Madera
Chosco
Molco
Puente
Pucon
Estacion
Figura 39. Variacin espacial de DOM a lo largo del Rio Molco, durante el mes de Noviembre
59
Variacin de DOM Mes de Diciembre

3.5
1 km
3 km
R.U.
2.5
2
Similar a Tirosina
1.5
Similar a Triptfano
0.5
Similar a Protena
0
Molco Control Molco efluente
Chosco
Molco Puente
Pucon
Estacion
Figura 40. Variacin espacial de DOM a lo largo del Rio Molco, durante el mes de Diciembre
Variacin de DOM Mes de Enero

1 km
3 km
1.5
R.U.
Similar a Tirosina
1
Similar a
Triptfano
0.5
Similar a cidos
hmicos
Molco Puente Pucon
Molco Puente Madera
Molco Cabaas
Molco Puente arriba
Afluente
Post Efluente 6
Post Efluente 5
Post Efluente 4
Post Efluente 3
Post Efluente 2
Post Efluente 1
Molco efluente
Molco Control
Similar a Protena
Estacion
Figura 41. Variacin espacial de DOM a lo largo del Rio Molco, durante el mes de Enero
60
La distribucin de los resultados y la precisin del modelo analtico se determin por medio de la
desviacin estndar que presentan los datos, con el fin de que la interpretacin de estos sea
coherente y no se induzca a una visin errnea o sesgada de los resultados.
A lo largo de los muestreos, se observa claramente el aporte proveniente del efluente al curso de
agua natural. Este aporte notoriamente es de tipo proteico, con intensidades variables a lo largo
de los meses, pero aun as mayoritaria con respecto a las dems estaciones. La intensidades
mximas de fluorescencia de los componentes similares a tirosina y similares a triptfano, se
encontraron en el mes de Diciembre (Fig. 40). Mientras que la intensidad mxima para el
componente similar a cidos hmicos se encontr en el post-efluente 1, del mes de Enero (Fig.
41). El componente similar a protena mostr su mxima intensidad en el post-efluente 2, del mes
de Octubre (Fig. 38). La variacin de DOM en la cuenca del Rio Molco, presenta una marcada
disminucin de los componentes similares a protena, con respecto a las proporciones de DOM
proveniente del efluente hasta su desembocadura al Lago Villarrica. La estacin Molco Control,
exhibe intensidades bajas y casi imperceptibles de los componentes similares a tirosina y
triptfano, siendo el componente similar a cidos hmicos el que predomina, pero de manera
local, ya que su intensidad es considerablemente baja si se desea comparar con las estaciones
influenciadas por el efluente (Fig. 37 a 41).
61
Porcentaje Componentes en el Mes de Agosto

100%
90%
80%
70%
60%
50%
40%
30%
20%
10%
0%
Molco Control Molco efluente Molco Puente Molco Cabaas Molco Puente Molco Puente
arriba
Madera
Pucon
Similar a Tirosina
Similar a Triptfano
Similar a cidos Hmicos
Similar a Proteina
Figura 42. Aporte porcentual de los componentes en el mes de Agosto
Porcentaje Componentes en el Mes de Octubre
Similar a Tirosina
Similar a Triptfano
Molco Puente Pucon
Chosco
Molco Puente Madera
Molco Cabaas

Lateral
Molco Puente arriba
Post Efluente 6
Post Efluente 5
Post Efluente 4
Molco bifurcacion
Post Efluente 3
Post Efluente 2
Post Efluente 1
Molco efluente
Molco Control
100%
90%
80%
70%
60%
50%
40%
30%
20%
10%
0%
Similar a Proteina
Figura 43. Aporte porcentual de los componentes en el mes de Octubre
62
Porcentaje Componentes en el Mes de Noviembre

100%
90%
80%
70%
60%
50%
40%
30%
20%
10%
0%
Molco Control Molco efluente Molco Puente Molco Puente
arriba
Madera
Similar a Tirosina
Similar a Triptfano
Chosco
Molco Puente
Pucon
Similar a Proteina
Figura 44. Aporte porcentual de los componentes en el mes de Noviembre
Porcentaje Componentes en el Mes de Diciembre

100%
90%
80%
70%
60%
50%
40%
30%
20%
10%
0%
Molco Control
Similar a Tirosina
Molco efluente
Similar a Triptfano
Chosco
Molco Puente Pucon

Similar a Proteina
Figura 45. Aporte porcentual de los componentes en el mes de Diciembre
63
Porcentaje Componentes en el Mes de Enero
Similar a Tirosina
Similar a Triptfano
Molco Puente Pucon
Molco Puente Madera
Molco Cabaas
Molco Puente arriba
Afluente
Post Efluente 6
Post Efluente 5
Post Efluente 4
Post Efluente 3
Post Efluente 2
Post Efluente 1
Molco efluente
Molco Control
100%
90%
80%
70%
60%
50%
40%
30%
20%
10%
0%
Similar a Proteina
Figura 46. Aporte porcentual de los componentes en el mes de Enero

Los grficos de aporte porcentual de los componentes, nos dan informacin complementaria
acerca de cmo se compone DOM en cada muestra y una aproximacin a la cantidad
representativa de cada componente en el espectro total del sector muestreado. En los grficos de
FMax (Figuras 36 al 40), la intensidad de fluorescencia de los componentes que libera el efluente
de la piscicultura son tan altos, que no permiten apreciar de forma clara la composicin de la
estacin control. Sin embargo, a travs de los grficos de porcentajes se puede observar
claramente el predominio de los componentes similares a cidos hmicos en las muestras sin
"intervencin" antropognica, como lo son las muestras control a lo largo de todos los meses y la
muestra afluente del mes de enero. En estos casos, en el efluente nuevamente sobresale el
material proteico (tirosina y triptfano) como fluorforos predominantes, contemplndose la
degradacin progresiva que afecta al material proteico a lo largo de la cuenca. El componente
64
cidos hmicos presenta un leve aumento en las estaciones Puente Molco Madera a Puente
Molco Pucn antes de la desembocadura del ro. El mayor aporte porcentual del componente
similar a protena se encuentra en las muestras Molco Control del mes de Octubre y Enero, y en
la estacin Puente Molco Pucn del mes Octubre. La accin de las propiedades de DOM,
expulsadas por los desechos residuales del cultivo de salmnidos en tierra, tienen una influencia
significativa a lo largo del ro, predominando tanto cualitativa como cuantitativamente en casi
todos los puntos de muestreos.
Estacin Molco Efluente y sus componentes

3
FMax (R.U.)
2.5
2
Agosto
1.5
Octubre
Noviembre
Diciembre
0.5
Enero
0
Similar a
Tirosina
Similar a
Triptfano
Similar a
cidos
Hmicos
Similar a
Protena
Componentes
Figura 47. Intensidades mximas de los fluorforos presentes en la estacin Molco Efluente, a
travs de los meses de monitoreo
El componente similar a tirosina es el que predomina todos los meses en esta estacin. Sus
mximos valores se presentaron el mes de Diciembre, lo mismo para el componente similar a
triptfano, por lo que se puede observar que estos componentes se ven influidos en mayor medida
65
a partir del efluente de la piscicultura y por tanto, sujetos a una mayor variabilidad dentro de la
cuenca. El componente similar a protena presenta una homogeneidad constante a lo largo de los
meses por lo que se puede predecir que no es directamente producida por las descarga de material
residual, pero que si se ve indirectamente influenciado por la materia orgnica disuelta
proveniente del cultivo de salmnidos. Molco Octubre presento los niveles ms bajos de similar a
tirosina y triptfano a lo largo del monitoreo.
8.3 Relacin entre los componentes y los ndices de Fluorescencia
ndices de Fluorescencia Mes de Agosto

3
2.5
1.5
Indice FI
Indice :
Indice HIX
0.5
0
Molco
Control
Molco
efluente
Molco Puente
arriba
Molco
Cabaas
Molco Puente Molco Puente

Madera
Pucon
Estacin
Figura 48. Variacin en los ndices de fluorescencia (FI, : y HIX), con respecto a las estaciones
en el mes de Agosto
66
ndices de Fluorescencia Mes de Octubre

3
2.5
Indice
FI
2
1.5
Indice
:
1
0.5
Molco Puente Pucon
Chosco
Molco Puente Madera
Molco Cabaas

Lateral
Molco Puente arriba
Post Efluente 6
Post Efluente 5
Post Efluente 4
Molco bifurcacion
Post Efluente 3
Post Efluente 2
Post Efluente 1
Molco efluente
Molco Control
Indice
HIX
Estacin
en el mes de Octubre
ndices de Fluorescencia Mes de Noviembre

4
3.5
3
2.5
2
Indice FI
1.5
Indice :
Indice HIX
0.5
0
Molco
Control
Molco
efluente
Molco Puente Molco Puente

arriba
Madera
Chosco
Molco Puente
Pucon
Estacin
en el mes de Noviembre
67
ndices de Fluorescencia Mes de Diciembre

3
2.5
2
Indice FI
1.5
Indice :
1
Indice HIX
0.5
0
Molco Control
Molco efluente
Chosco
Estacin
Molco Puente Pucon
en el mes de Diciembre
ndices de Fluorescencia Mes de Enero

3
2.5
2
Indice
FI
1.5
1
Indice
:
0.5
Indice
HIX
Molco Puente
Pucon
Molco Puente
Madera
Molco Cabaas
Molco Puente
arriba
Post Efluente 6
Post Efluente 5
Post Efluente 4
Afluente
Post Efluente 3
Post Efluente 2
Post Efluente 1
Molco efluente
Molco Control
Estacin
en el mes de Enero
68
A travs de los diferentes meses de muestreo, el ndice FI nos indica que la fuente principal de
Molco Efluente y su respectiva influencia en los dems puntos rio abajo son de origen
microbiano. Sin embargo Molco Control, presenta fuentes de origen microbiano en los meses de
Octubre y Noviembre, mientras que en el mes de Agosto presenta una fuente derivada de origen
terrestre. La variabilidad de este ndice a lo largo de la cuenca no es tan significativa y ms bien
es algo homognea en cada muestreo. El mes de Agosto registro las intensidades ms bajas en
este ndice con respecto a los otros meses de muestreo. El ndice : nos indica que en la estacin
Molco Control de todos los meses (a excepcin de octubre), la fuente de DOM es alctona y por
ende es un DOM ms descompuesto. En cambio para la estacin Molco Efluente y sus
influencias post descarga, indican segn el ndice : una fuente de origen autctono, y una
contribucin de origen reciente a la corriente, explicando de manera grfica el origen biolgico y
reciente de esta materia orgnica disuelta. El mes de Agosto presento las intensidades ms bajas
de este ndice con respecto a los meses posteriores de muestreo. La estacin Puente Madera del
mes de Noviembre, presenta una variable a la tendencia con respecto a lo que presenta el ndice
al transcurrir el cauce en los otros meses. El ndice HIX nos indica el grado de humificacin que
presenta el fluorforo dentro de las estaciones. Molco Control y Molco Puente Pucn presentan la
constante de un grado de humificacin mayor que el resto de los puntos, sin embargo, el punto
Molco Puente Madera del mes de Noviembre mostro el valor ms alto de los ndices HIX durante
todos los meses de muestreo. La trama comprendida entre el Molco Efluente y Molco Cabaas
presento el menor grado de humificacin segn el ndice HIX durante los todos los meses. Este
ndice nos muestra de manera grfica que el contenido de DOM en el control y cerca de la
desembocadura del ro, se encuentra influenciado por degradacin de plantas terrestres o
sedimento, pero que sin embargo, no es significativamente predominante como para generar un
69
ndice HIX contundente y preciso, pero que a grandes rasgos nos da una nocin de cmo se
conforma DOM en cada estacin.
8.4 Correlacin entre los parmetros fsico-qumicos y los componentes

Para tener una visin crtica de las propiedades qumicas y biolgicas de los sistemas acuticos,
se emplean una serie de parmetros que nos permiten observar el grado de alteracin de las
caractersticas naturales de los cuerpos de agua, y determinar si estos pueden sostener los
procesos bioqumicos necesarios para la vida de las plantas y animales. Los parmetros
principales de la calidad del agua reflejan la funcin fsica y biolgica del medio ambiente con
el que el agua tiene interaccin.
Para una mayor informacin sobre el estado de la calidad del agua, se realiz una correlacin
entre los parmetros usados comnmente para clasificar los posibles factores de estrs que
inciden sobre el estado trfico del cuerpo de agua fluvial y posibles distrofias que actan sobre el
sistema acutico y los componentes obtenidos por el anlisis PARAFAC, para verificar si las
variables que ayudan a caracterizar la calidad del agua y a determinar los posibles impactos en la
vida acutica tienen relacin directa con la composicin de la materia orgnica disuelta presente
y a la vez, ver cul de los diferentes tipos de componentes fluorescentes presentes exhibe mejor
correlacin con los parmetros vinculados con la contaminacin ambiental en aguas naturales.
Los parmetros utilizados en los monitoreos fueron la temperatura, la conductividad, la turbidez,
el pH y el oxgeno disuelto. Las variantes de temperatura y pH, no se consideraron porque su
variabilidad dentro del tramo de los puntos y la relativa poca distancia del ro antes de su
desembocadura, no fue significativa como para lograr observar de forma grfica una correlacin.
70
Figura 53. Correlacin entre la conductividad y los componentes similar a tirosina y similar a
triptfano en los meses de muestreo
71
Figura 54. Correlacin entre el oxgeno disuelto y los 4 componentes validados por PARAFAC
en los meses de muestreo
72
Tabla 3. R2 de los 4 componentes validados por PARAFAC y su correlacin con el oxgeno

disuelto
Componente
Similar a Tirosina
Similar a Triptfano
Similar a Protena
Agosto
Octubre
Noviembre Diciembre
R = 0.2669
R = 0.2269
R = 0.0066
R = 0.0383
Enero
R = 0.2148
R = 0.2942
R = 0.2178
R = 0.0036
R = 0.0436
R = 0.2128
R = 0.2914
R = 0.4491
R = 0.0015
R = 0.0819
R = 0.0712
R = 0.2884
R = 0.2614
R = 8E-05
R = 0.1256
R = 0.1921
En general las correlaciones entre la conductividad y los componentes asociados a la actividad

biolgica, muestran de manera clara el comportamiento proporcional entre estas variantes a
travs de todos los meses. Denotando de manera concisa su relacin y por ende futura utilizacin
en controles de monitoreo.
De manera totalmente inversa a lo resultado entre la correlacin de la conductividad y los
componentes tirosina y triptfano, el oxgeno disuelto present una relacin inversamente
proporcional, observndose una tendencia que a menores valores de contenido de oxgeno
mayores intensidades de fluorescencia.
73
Figura 55. Correlacin entre la turbidez total y los componentes similar a tirosina y similar a
No se realizaron anlisis de turbidez, en los meses de Agosto y Diciembre. La correlacin ms
baja se present en el mes de Octubre. Mientras que en los meses de Noviembre y Enero la
correlacin fue bastante alta, permitiendo dilucidar que estas dos variantes pueden tomarse como
un potencial valido a la hora de dar una acercamiento de lo que sucede en la columna de agua y
observar qu puede estar afectando las caractersticas fisicoqumicas del ecosistema.
74
Conductividad
250
S/cm
200
150
100
50
Figura 56. Variabilidad de la conductividad monitoreada cada 10 minutos en la estacin Molco

Cabaas
Finalmente, lo que nos muestra la figura 66, es la variacin que presenta a lo largo del cauce
fluvial, la conductividad y las caractersticas del agua, con respecto a la hora, da y mes del
monitoreo, presentando peaks diferidos de este parmetro en incluso tiempos cortos de medicin
(10 minutos) en una misma estacin. Aproximando a una variabilidad y posible sesgo de los
resultados si solo se muestrean los parmetros principales en una hora o da determinado, en
donde las posibles cargas provenientes del efluente no sean significativas o representativas justo
en ese instante de muestreo.
75
8.5 Correlacin entre las cargas de N y P, DOC y los componentes

El aporte orgnico en el curso de agua asociada a la descarga del efluente de la piscicultura,
determina una potencial contribucin de fuentes de nitrgeno, carbono y fsforo de manera
abrupta y constante, afectando directamente e indirectamente los procesos ecolgicos
estructurales y funcionales del ro.
El carbono, el nitrgeno y el fsforo son componentes fundamentales en la productividad
primaria de un ecosistema acutico. Sin embargo el nitrgeno y el fsforo pueden tener el
carcter de limitantes para la produccin primaria, el carbono normalmente presenta
concentraciones en el medio mayores a los requerimientos metablicos (Conde et al., 2002).
76
Figura 57. Correlacin entre el ortofosfato y los componentes similar a tirosina y similar a
77
Figura 58. Correlacin entre el fosforo total y los componentes similar a tirosina y similar a
78
El origen biolgico de los componentes similar a tirosina y similar a triptfano muestra una
correlacin directa y proporcional con el ortofosfato y el fosforo total respectivamente,
proporcionando informacin sobre el papel que puede jugar DOM en la biodisponibilidad de los
nutrientes y la influencia de la actividad humana al desequilibrio del ecosistema fluvial aportando
cantidades altas de este elemento y por ende afectando la trama trfica presente en la columna de
agua.
Figura 59. Correlacin entre el amonio y los componentes similar a tirosina y similar a triptfano
79
Figura 60. Correlacin entre el nitrito y los componentes similar a tirosina y similar a triptfano
80
Figura 61. Correlacin entre el nitrato y los componentes similar a tirosina y similar a triptfano
81
Figura 62. Correlacin entre el nitrgeno inorgnico y los componentes similar a tirosina y similar
a triptfano en los meses de muestreo
82
Figura 63. Correlacin entre el nitrgeno orgnico y los componentes similar a tirosina y similar a
83
Figura 64. Correlacin entre el nitrgeno total y los componentes similar a tirosina y similar a

Los distintos grados de oxidacin del nitrgeno y las concentraciones orgnicas, inorgnicas y
total, en general presentan una correlacin directa y en el mayor de los casos significativa. El
nitrito fue el estado que no present correlacin alguna con los componentes de origen proteico,
en ninguno de los meses, pero el nitrgeno inorgnico a excepcin del mes de Octubre, exhibi
estrecha relacin. El mes de Octubre tambin no presento correlacin positiva con el amonio y
84
con el nitrato, sin embargo los dems meses y los diferentes estados del nitrgeno aclararon el rol
de DOM como fuente importante de nutrientes.
Figura 65. Correlacin entre el carbono orgnico disuelto y los componentes similar a tirosina y
similar a triptfano en los meses de muestreo

La correlacin entre el carbono orgnico disuelto y los componentes fluorescentes asociados a
actividad bacteriana, muestran una clara correlacin positiva, a excepcin del mes de Octubre.
Relacionando de manera concisa el carcter de fuente de carbono orgnico biolgicamente
85
disponible en los ecosistemas acuticos y la influencia en la productividad primaria que posee

DOM (Battin et al. 2009).
No hubo mediciones de nitrgeno en el mes de Agosto. No hubo mediciones de carbono orgnico
disuelto en el mes de Enero.
8.6 Experimentos de incubacin y dilucin
Experimento Incubacin
FMax (R.U.)
2.5
2
1.5
1
0.5
0
0
10
20
30
40
50
60
Horas
Similar a Tirosina
Similar a Triptfano
Similar a Protena
Figura 66. Variacin de los componentes a travs de las horas que dur el experimento de
incubacin
Por medio del experimento de incubacin, se observa claramente el proceso de degradacin que
afecta a la materia orgnica proveniente del efluente de la piscicultura. El componente similar a
tirosina presenta el proceso ms claro de degradacin debido a su origen biolgico, mientras el
componente similar a cidos hmicos, no presenta variacin relevante a lo largo del experimento.
86
Experimento Dilucin y Promedio Componentes
120
y = 93.02x + 0.020
R = 0.999
% Dilucin
100
100
80
Exp. Dilucin
60
Muestreo 26 Noviembre
50
40
25
20
12.5
6.25
0
0
0.2
0.4
0.6
0.8
1.2
FMax (R.U.)
promedio de los componentes en el mes de Noviembre
Experimento Dilucin Similar a Tirosina

120
y = 41.71x + 0.38
R = 0.999
% Dilucin
100
80
60
Exp. Dilucin Similar a

Tirosina
40
Similar a Tirosina
20
0
0
FMax (R.U.)
componente similar a tirosina
87
Experimento Dilucin Similar a Triptfano

120
y = 97.45x + 6.250
R = 0.999
% Dilucin
100
80
60

Triptfano
40
Similar a Triptfano
20
0
0
0.2
0.4
0.6
0.8
1.2
FMax (R.U.)
componente similar a triptfano
Experimento Dilucin Similar a cidos Hmicos

y = 465.8x - 16.64
R = 0.993
120
% Dilucin
100
80
60
Exp. Dilucin Similar a cidos

Hmicos
40
20
0
0
0.1
0.2
0.3
FMax (R.U.)
componente similar a cidos hmicos
88
Experimento Dilucin Similar a Protena

120
y = 150.6x - 5.418
R = 0.999
% Dilucin
100
80
60

Protena
40
Similar a Protena
20
0
0
0.2
0.4
0.6
0.8
FMax (R.U.)
componente similar a protena

El experimento de dilucin a diferencia del de incubacin, fue realizado 1 da despus de la toma
de muestra en el ro. Los procesos degradativos en los componentes similar a tirosina y similar a
triptfano, produjeron una decada en la concentracin del componente con respecto a la
intensidad registrada del efluente el mismo da del monitoreo. Por otro lado, el componente
similar a cidos hmicos denoto un aumento con respecto, a la medicin del monitoreo, lo mismo
sucede para el componente similar a protena, esta diferencia puede deberse a procesos de
humificacin por parte de los componentes, disminuyendo los similares a tirosina y triptfano por
accin degradativa y aumentando el componente similar a cidos hmicos por accin
humidificante. Otra evidencia que deja el experimento de dilucin, es lo concentrado de las
muestras proveniente de la estacin Molco Efluente, en comparacin con las muestras de Molco
Control, llegando a diferir en un 97% la concentracin del componente similar a tirosina y un
89
94% en el caso del componente similar a triptfano, es decir an ms bajo que la dilucin mnima
que se utiliz para observar la reduccin de la concentracin del efluente en la columna de agua,
denotando los rpidos y fuertes procesos que envuelven a la materia orgnica presente en las
descargas de las pisciculturas y la variacin que presenta en procesos de dilucin e incubacin, ya
sea en condiciones naturales o en ambientes controlados como laboratorios.
90
9. Discusin
El potencial para la caracterizacin y cuantificacin de la materia orgnica disuelta en aguas
naturales, modelado por PARAFAC nos permite el rastreo de algunas de las diferentes fracciones
de la reserva de DOM en los ecosistemas acuticos, y observar los diferentes grupos de
fluorforos presentes en la cuenca fluvial. Los resultados obtenidos a lo largo del Ro Molco, nos
permite dar un enfoque de cmo se comporta la materia orgnica disuelta y facilitar nuestra
comprensin sobre los procesos biogeoqumicos involucrados en los cambios a lo largo del
cauce.
El componente similar a cidos hmicos (Ex 240 y Em 426.5) que se encuentra en los arroyos y
ros sin "intervencin" antropognica es uno de los principales constituyentes de la reserva de
DOM junto a los componentes similares a cidos flvicos, estas molculas polimricas se han
considerado tanto qumica como biolgicamente refractarias (Findlay and Sinsabaugh, 2003).
Las figuras 42 a la 46, proporcionan un acercamiento de la conformacin de DOM en aguas
naturales, en donde, la estacin Molco Control, representa al ro sin la intervencin del efluente
de la piscicultura, y se compone mayoritariamente de cidos hmicos, constituyendo sobre el
50% del material disuelto fluorescente en la estacin. Estos fluorforos se caracterizan por
presentar ncleos aromticos altamente sustituidos, extensas conjugaciones y compuestos de alto
peso molecular, que son capaces de reaccionar con muchas sustancias qumicas, ya sea con un
compuesto en la columna de agua o en un organismo (Steinberg et al., 2006). En cursos de agua
naturales la alta concentracin de las sustancias hmicas compensa las tasas ms lentas de
catabolismos, y su oferta y abundancia puede proporcionar un grado de estabilidad a los
ecosistemas (Wetzel, 1992), ya que estos biopolmeros son relativamente resistentes a la
degradacin microbiana, actuando como complemento importante para el metabolismo de los
91
hetertrofos (Findlay and Sinsabaugh, 2003). En la estacin Molco Control, la intensidad de

fluorescencia similar a cidos hmicos, es casi imperceptible, en comparacin con las estaciones
posteriores al efluente, pero la influencia de la descarga de residuos por parte de la piscicultura,
permite apreciar un aumento en la intensidad de este fluorforo, tal vez porque parte de este
material lbil compuesto principalmente por carbohidratos, lpidos y protenas es remineralizado
por accin bacteriana, aportando una entrada de material refractario no degradado proveniente del
efluente a la reserva natural de sustancias hmicas. Esto se puede apreciar en el experimento de
incubacin realizado en el laboratorio en condiciones controladas (Fig. 66), en donde, los
componentes de origen proteico fueron degradados en cuestin de horas (Spitzy and lenheer,
1991), y al transcurso de 48 horas la materia orgnica disuelta fluorescente similar a cidos
hmicos, present un ndice de fluorescencia ms alto que los grupos proteicos, no significativo,
pero observable. Lo mismo se puede corroborar con el experimento de dilucin (Fig. 70), en
donde, al cabo de 1 da, el fluorforo similar a cidos hmicos, aumento un 38% con respecto a
lo obtenido en el muestreo del 26 de noviembre, observndose una humificacin por parte de la
materia orgnica disuelta presente, respaldando la accin de que la reserva lbil de DOM puede
sustentar de manera leve pero apreciable la reserva de DOM refractario y de difcil degradacin.
El ndice HIX, que denota el grado de humificacin de un fluorforo, tambin nos da una visin
de la conformacin de DOM en la estacin Molco Control, presentando los ndices ms altos
junto con la estacin Molco Puente Pucn, que se encuentra cerca de la desembocadura del ro, el
ndice no cumple en su totalidad con el grado de humificacin ms alto referenciado por Zsolnay
et al., 1999, pero nos da un panorama de cmo se constituye DOM dependiendo de sus fuentes y
la accin de los procesos biticos y abiticos que ocurren en la columna de agua. El ndice :
nos indica que el componente similar a cidos hmicos tiene un origen alctono a la cuenca
92
hidrogrfica y el ndice FI sustenta que este material de origen alctono es aromtico (Fig. 48),
sin embargo esto no se cumple a lo largo de todos los monitoreos (Fig. 49 y 50), al presentarse
una fuente ms de origen microbiano que un DOM ms degradado, relacionando de manera
directa lo que nos presentan los ndices de fluorescencia y el tipo de materia orgnica
predominante en la estacin y en el mes correspondiente.
En ambientes naturales, aunque en concentraciones bajas, los componentes de origen proteico
pueden ser suficiente para soportar una gran proporcin de crecimiento bacteriano y comprenden
una fraccin considerable del flujo de DOM lbil (Findlay and Sinsabaugh, 2003). Este DOM
puede provenir a travs del pastoreo y la excrecin del zooplancton o la lisis viral de bacterias y
microalgas. El componente similar a protena (Ex 265 y Em 339), se presenta en estaciones sin
influencia del efluente de la piscicultura y muestra caractersticas de origen proteico diferentes a
los componentes similar a tirosina y triptfano modelados por PARAFAC. En las figuras 37 a 41
correspondientes a las intensidades mximas de los fluorforos (FMax), este componente se
encuentra en la estacin Molco Control, de manera inapreciable, debido a las altas intensidades
pertenecientes al DOM proveniente del efluente. Sin embargo, de igual forma que el componente
similar a cidos hmicos la influencia de la descarga de residuos orgnicos por parte de la
piscicultura, genera un aumento en la intensidad de este fluorforo, tal vez porque parte de esta
gran entrada de material lbil al flujo de agua puede sustentar e intensificar la fluorescencia de
este componente relacionado con la biodisponibilidad de DOM en aguas no "intervenidas". La
estacin Afluente, correlaciona el hecho de que este componente bioreactivo de DOM, tiene
origen microbiano, presentando en el mes de Enero ms del 30% del DOM contenido en la
muestra (Fig. 46), denotando a su vez, un alto ndice de FI, y un bajo ndice HIX (Fig. 52), es
decir, un origen ms bien proteico y menos aromtico. El mismo caso sucede con la estacin
93
Molco Puente Pucn del mes de Octubre (Fig. 43), en donde, la fluorescencia de este componente
es mayor que la de los cidos hmicos y componentes proteicos (similar a tirosina y triptfano), y
adems los ndices de fluorescencia sustentan que la materia orgnica presente es de origen
autctono (:), microbiano (FI) y con poca humificacin (HIX) (Fig. 49). En el experimento de
incubacin (Fig. 66), este fluorforo presento degradacin leve en comparacin a los otros dos
componentes de origen proteico, mostrando su procedencia lbil y biodisponibilidad a la
actividad bacteriana. En el experimento de dilucin (Fig. 71) el comportamiento de este
fluorforo aumento con respecto a lo obtenido en los resultados del muestreo del 26 de
noviembre, variando casi en un 70% en comparacin a la intensidad presentada en la muestra, y
mostrando las intensidades ms altas de este fluorforo con respecto a las matrices de excitacinemisin de los muestreos y los experimentos. Proporcionando informacin vlida acerca de cmo
afecta a los diferentes grupos de fluorforos presentes, en este caso, la fuerte entrada de materia
orgnica reciente y de origen biolgico por parte de la piscicultura, aproximando a que esta
fraccin lbil de DOM puede sustentar el procesamiento de las diferentes reservas de la materia
orgnica disuelta durante el transporte, dilucin o incubacin de los distintos componentes
fluorescentes, modificando la composicin y comportamiento de porciones de DOM por la
degradacin selectiva que presenta este fuerte aumento de material de origen proteico.
La estacin Molco Efluente, lugar de la descarga de las aguas residuales proveniente de la
piscicultura, produce la mayor entrada de DOM proteico al flujo de agua, de manera abrupta y
concentrada presentando un alto potencial de generar una distrofia funcional en el ecosistema del
ro, modificando claramente las caractersticas fsico-qumicas del sistema fluvial. Los
componentes similar a tirosina (Ex 275 y Em 315) y similar triptfano (Ex 285 y Em 347.5)
(Stedmon & Markager, 2005), son los fluorforos ms caractersticos e influenciados por la
94
descarga. Estos componentes se encuentran asociados a una alta actividad microbiana (Parlanti
et al., 2000; Determann et al., 1994) y pueden representar la presencia de un sustrato orgnico
biodisponible y lbil (Hudson et al. 2008). Debido a las caractersticas e intensidades de estos
fluorforos, diversos estudios han utilizado a estos componentes como trazadores de DOM
proveniente de contaminacin antropognica en aguas naturales (Reynolds, 2002; Baker &
Inverarity, 2004; Baker et al., 2004). A lo largo del cauce fluvial del Ro Molco, la influencia de
los peak de similar a tirosina y triptfano son notorias en los distintos meses de muestreo. Sin
embargo, la diferencia entre los estudios nombrados anteriormente que utilizan a los
componentes de origen proteico como trazadores de DOM, es que el grado de interferencia
debido a la actividad humana contiene un mayor ndice de fluorescencia en el espectro
correspondiente al componente similar a triptfano, causado por biomasa biolgica producida
durante el tratamiento de descargas residuales en aguas dulces (Henderson et al., 2009; Wu et al.,
2003). No obstante, nos da una aproximacin del comportamiento de la materia orgnica disuelta
originada de manera reciente, menos degradada y con un alto potencial de oxidacin (Hudson et
al., 2008), proveniente del efluente de la piscicultura. El alto grado de impacto que ejerce la
influencia de esta fuerte entrada orgnica a la corriente de agua, se observa en las figuras 42 a 46
las cuales presentan los aportes porcentuales de los componentes a lo largo del cauce fluvial, en
donde, el componente similar a tirosina predomina tanto cualitativa como cuantitativamente
desde la irrupcin del efluente, presentando una progresiva degradacin hasta la estacin Molco
Puente Pucn. Lo mismo ocurre con el componente similar a triptfano, pero a una menor
escala, mantenindose constante en casi la mayor parte del cauce, a excepcin de la estacin
Molco Puente Madera del mes de Noviembre (Fig. 44), en donde su aporte, disminuyo
considerablemente, por aportes de un DOM mas humificado, correlacionado con los ndices de
95
fluorescencia que presenta esta estacin (Fig. 50), con una entrada de DOM alctono mas
descompuesto y con un alto grado de humificacin. En el mes de Diciembre y Enero (Fig. 40 y
41), la estacin Chosco y Molco Puente Madera, respectivamente, se presenta un leve aumento
del componente similar a triptfano en comparacin al componente similar a tirosina,
predominante en casi todas las estaciones contiguas al efluente, esto puede deberse, a los
desechos provenientes de las aguas servidas de origen antropognico que sustenta el ro aguas
abajo, antes de desembocar al lago, proporcionando informacin anexa al comportamiento de
DOM dependiendo de la fuente que la sustenta. Los ndices de fluorescencia con respecto a la
estacin Molco Efluente (figuras 48 a 52), nos denota de forma clara el bajo grado de
humificacin que presenta el material orgnico disuelto derivado de los alimentos no
consumidos, las heces y los subproductos metablicos de los peces en cautiverio, este DOM de
acuerdo al ndice : es de origen autctono y reciente, y segn el ndice FI de fuente microbiana.
A medida que la visin del comportamiento de DOM es dilucidada, es fundamental recordar que
los ros son importantes sitios para el transporte, remocin y transformacin de los nutrientes, por
lo que los factores de estrs que afectan el flujo y la estabilidad de la columna de agua es
reflejado tanto fsica como qumicamente, es por esto, que es necesario sealar la distincin entre
los componentes similares a protena si se quiere investigar la dinmica espacial de DOM, y
detectar el rastro biolgico especifico de cada fuente que la prev.
Los resultados obtenidos en este trabajo sealan que la intensidad ms fuerte que presenta la
descarga residual proveniente del efluente corresponde al espectro del componente similar a
tirosina (Fig. 47). Resultado que tiene relacin con lo obtenido por Fellman et al., 2008b, en el
cual encontr que los peak relacionados con este componente, fueron producto de la
96
descomposicin de cadveres de salmones que retornaron a zonas riparias para desovar,

generando potenciales fuentes de nutrientes al ecosistema acutico. Sin embargo, solo un estudio
ha visto la influencia de un efluente de planta acucola sobre una cuenca fluvial (Stedmon et al.,
2003), pero las caractersticas de los fluorforos difieren al no presentar a los salmnidos como
especie particular del cultivo intensivo. Este componente ha sido identificado como una entrada
rica en protenas qumicamente diferente del DOM derivado de fuentes terrestres, caractersticas
que permiten obtener informacin sobre la dinmica de esta materia orgnica disuelta lbil en los
cauces fluviales (Fellman et al., 2009b; Hood et al., 2007). El componente similar a tirosina
representa por si solo ms del 40% total de la fluorescencia de la materia orgnica disuelta
presente en el ro en los monitoreos mensuales, y el que presenta el proceso biodegradativo mas
considerable entre las estaciones, disminuyendo aguas abajo por medio del aporte materia
orgnica terrestre a travs de lixiviados del suelo en el arroyo, lo que producira un aumento
sustancial de la fluorescencia del componente similar a cidos hmicos (Fig. 42 a 46) (Fellman et
al., 2009b). Estos procesos biodegradativos se observan por otra parte, en los experimentos de
incubacin y dilucin (Fig. 66 y 68), corroborando la efectividad de DOM lbil, reciente y de
origen proteico como una fuente de energa y nutrientes para la actividad bacteriana, donde los
fluorforos similares a protenas disminuyen sustancialmente, y otros como los componentes
similares a cidos hmicos aumentan en su abundancia relativa (Wickland et al., 2007). Otra
aproximacin entre los resultados obtenidos, es el hecho de que las propiedades qumicas de
DOM derivada del cultivo de salmn, altera las caractersticas de la reserva de DOM proveniente
de fuentes terrestres, exhibiendo un elevado valor del ndice de fluorescencia FI (Hood et al.,
2007), por la accin de los componentes proteicos (en su mayora similar a tirosina)
estructuralmente menos compleja que la DOM proveniente de la degradacin de plantas
97
superiores y que se liberan en la columna de agua por la actividad biolgica reciente (Mopper and
Schultz, 1993; Fellman et al., 2010).
Para un mayor entendimiento acerca de los factores que intervienen en la abundancia de DOM, se
compararon las intensidades de fluorescencia de los componentes similares a protena (tirosina y
triptfano) provenientes de la descarga del cultivo intensivo de salmones, entre la poca de
primavera (meses de Agosto, Octubre y Noviembre) y la poca de verano (meses de Diciembre y
Enero). Los resultados obtenidos fueron para la poca de primavera un mayor caudal promedio
(609 L/s) y una menor intensidad de fluorescencia promedia (6.94 R.U.), y para la estacin de
verano un menor caudal promedio (451 L/s) y una mayor intensidad de fluorescencia promedia
(8.45 R.U.). Para obtener una proporcin entre las variables, utilizamos la razn entre el caudal
de primavera y el caudal de verano obteniendo una diferencia de factor de 1.35, lo mismo se hizo
entre las intensidades de fluorescencia de primavera y verano obteniendo una diferencia de factor
de 1.26. Esto, nos aproxima a una cierta correlacin por parte de las razones calculadas, de que el
patrn estacional tiene una implicancia fundamental en la interaccin dinmica de las fuentes de
DOM, en su composicin y en su abundancia, en donde los componentes derivados de la
salmonicultura estn controlados por procesos hidrolgicos (abiticos) y procesos biolgicos
(biticos), que afectan su comportamiento dentro del cauce fluvial (Jaffe et al., 2008), y por ende
un potencial de impacto significativo en la contribucin de los componentes de origen terrestre
(similar a cidos hmicos) y la dinmica de la red alimentaria acutica.
La interpretacin y validacin de los componentes obtenidos mediante el anlisis PARAFAC,
pueden aplicarse como un indicador de la calidad del agua y facilitar la comprensin de los datos
fsicos, qumicos y biolgicos utilizados comnmente para evaluar el estado ambiental de los
98
cuerpos de agua, mediante programas de monitoreos. Esto a base de los resultados obtenidos de
las correlaciones de los componentes similares a protena (tirosina y triptfano) como trazadores
de contaminacin ambiental en aguas naturales. En la figura 53, la correlacin entre la
conductividad y los componentes asociados a actividad bacteriana es positiva a lo largo de los
distintos meses de monitoreo, denotando el aumento de la concentracin inica por la fuerte
carga de aminocidos libres, carbohidratos y formas orgnicas de bajo peso molecular (Parlanti et
al., 2000) presentes en el sistema fluvial por accin del vertido de aguas residuales por parte de la
piscicultura. La correlacin con el oxgeno disuelto (Fig. 54), presenta una leve tendencia
negativa, ya que se observ que a mayor fluorescencia menor concentracin de oxgeno. Esta
disminucin en la demanda de oxgeno originada por el aporte de materia orgnica proveniente
de la piscicultura posiblemente es contrarrestada por la reoxigenacin de las aguas por medio de
las caractersticas morfolgicas propias del lecho del ro. El grado de relacin entre las partculas
suspendidas en la columna de agua y los componentes de origen proteico (Fig. 55), fue
significativo, evidenciando que la entrada de material orgnico provoca una alteracin en los
procesos fsicos y estructurales en el sistema lmnico.
La composicin elemental de DOM es tambin un indicador de su biodisponibilidad, por lo que
las relaciones entre las caractersticas generales de la reserva de DOM y sus propiedades
fluorescentes, nos permiten establecer la conducta y distribucin espacial de los componentes
presentes, como as tambin comprender los procesos que controlan los ciclos del carbono y los
nutrientes. Esto resulta consistente con la idea que los aminocidos y materiales pptidos ms
degradados son una fuente fcilmente disponible de C, N, P y energa para los hetertrofos
acuticos (Fellman et al., 2009b; Aminot & Krouel, 2004). Los fosfatos y compuestos del
fsforo se encuentran en las aguas naturales en pequeas concentraciones y son comnmente
99
considerados la fraccin limitante para la produccin primaria en sistemas lmnicos, sin embargo
la excesiva entrada de este nutriente por parte de los efluentes de pisciculturas puede causar
problemas ambientales llegando a promover la eutrofizacin en las aguas que la reciben. Las
correlaciones con fsforo y ortofosfato con respecto a los componentes provenientes de la
descarga (similar a tirosina y triptfano), sealan una alta correlacin durante todos los meses que
duro el monitoreo (Fig. 57 a 58), conectando de manera directa las fuentes de DOM proteico con
la disponibilidad de fosforo presente en la columna de agua (Baker & Inverarity, 2004).
La correlacin entre las concentraciones de N y DOC es significativa, tanto para la fraccin
orgnica como para la inorgnica del nitrgeno, a excepcin del nitrito tal vez por la inestabilidad
que presenta este ion en ambientes naturales (Fig. 59 a 64), lo que sugiere que DOM derivada de
sustancias similares a protena y aminocidos por actividad microbiana pueden ser buenos
indicadores para materias orgnicas lbiles y biodegradables en ros de bajo orden (Hur and Cho,
2012). Mientras que la fraccin de carbono orgnico disuelto biodegradable (Fig. 65) presenta
una estrecha relacin y proporcionalidad con los peaks de fluorescencia proteicos provenientes
del efluente (Fellman et al., 2009a; Hood et al., 2009), lo que sugiere que los componentes
similares a protena pueden constituir una fraccin dominante de la materia orgnica total (Hur
and Cho, 2012), afectando las concentraciones y la exportacin del carbono orgnico disuelto en
los ros.
Los resultados de este estudio, por tanto, apoyan la idea de que las altas concentraciones de DOM
lbil arrojados por el efluente de la piscicultura (i.e. experimento de degradacin), denotan una
alta demanda bacteriana de la fraccin proteica de DOM, que junto a los procesos de dilucin y
transporte pueden producir cambios significativos en la composicin de las tramas trficas
100
presentes en el ecosistema fluvial, como tambin en los procesos geoqumicos del sector
influenciado, presentando elevadas demandas de nutrientes y parmetros de calidad de agua que
contrastan totalmente con las aguas naturales no influenciadas por la actividad acucola,
caracterizadas por una influencia de DOM de origen terrestre y alctono, en mayor medida por
los componentes similares a cidos hmicos y en menor medida por un DOM ms microbiano y
autctono, relacionado al componente similar a protena.
101
10. Conclusin
- Los resultados obtenidos entre los componentes validados por el anlisis PARAFAC y los
parmetros de monitoreo fsico-qumicos, presentaron correlaciones positivas principalmente con
los fluorforos con caractersticas similares a protenas, lo que sugiere que estos componentes se
pueden utilizar como un buen indicador para el grado de contaminacin orgnica en un
ecosistema fluvial.
- Los ndices de fluorescencia obtenidos mediante respectivas longitudes de onda de excitacin y
emisin contenidas en las EEM, nos brindaron informacin acerca de la composicin, origen y la
dinmica de la materia orgnica disuelta en el caudal hidrolgico, permitindonos identificar el
origen de los fluorforos y cuantificar las diferencias en las propiedades de fluorescencia de
DOM, siendo una herramienta til en los estudios relacionados con la calidad del agua, ayudando
en la comprensin de los ciclos biogeoqumicos y los procesos ecolgicos que afectan a DOM en
los sistemas lmnicos.
- La localizacin de la dinmica de fluorescencia de DOM, en particular de los componentes
similares a protenas (por ejemplo, similares a tirosina y triptfano), prev informacin relevante
sobre el papel que juega la materia orgnica disuelta en las reservas de N y P, y las alteraciones
que provocan las entradas abruptas y con alto contenido orgnico en los ciclos normales de los
nutrientes. Esto se puede dilucidar por las correlaciones significativas obtenidas en este estudio
con las concentraciones inorgnicas y orgnicas de N y P, y la reserva lbil de DOM proveniente
de la descarga de residuos de la piscicultura.
- Una gran parte de la reserva natural del carbono orgnico disuelto lo constituyen
compuestos refractarios como cidos
los
hmicos y flvicos, sin embargo la fraccin lbil
102
(carbohidratos y aminocidos) juega un importante papel como fuente de energa para los
microorganismos presentes en la columna de agua, nivel trfico esencial en numerosos procesos
de los sistemas lticos. Las concentraciones de COD entre las aguas naturales (estacin Molco
Control) y las aguas procedentes del efluente de la piscicultura (estacin Molco Efluente),
presentan diferencias de ms de un 95%, lo que indica la alta repercusin que puede provocar
esta abrupta adicin de carbono al sistema en grandes cantidades, produciendo un cambio radical
en la biota local. Mismo motivo por el cual se encontr directa correlacin entre los componentes
similar a tirosina y triptfano y el carbono orgnico disuelto biodegradable a lo largo del
monitoreo.
- Las variaciones cuantitativas y cualitativas de los componentes validados por PARAFAC,
fueron caracterizadas con xito a lo largo del cauce fluvial, identificndose 4 fracciones
diferentes de DOM fluorescentes presentes en el ro, los cuales dependen activamente de la
fuente que las precede y de los procesos de degradacin y transporte que afectaron las
intensidades de los fluorforos y las concentraciones en las diferentes estaciones monitoreadas.
- La fraccin de DOM de origen proteico, caracterizada por presentar bajos niveles complejidad
aromtica y peso molecular, present la mayor variabilidad dentro de los experimentos de
incubacin y dilucin, lo que refleja los fuertes procesos degradativos que afectan a esta reserva
lbil de DOM, y su rol como sustrato orgnico para la actividad microbiana. Mientras que el
componente similar a cidos hmicos, present un aumento leve con respecto al inicio del
experimento de incubacin y un aumento de forma ms apreciable en el experimento de dilucin,
comparando a lo obtenido en el muestreo del 26 de noviembre, respaldando la accin de que la
reserva lbil de DOM, puede sustentar de manera leve pero apreciable la reserva de DOM
103
refractario y de difcil degradacin, correlacionando directamente la biodegradabilidad de DOM

con su complejidad estructural.
En conclusin la espectroscopa de fluorescencia ptica junto con el anlisis de datos
multivariados PARAFAC ha demostrado ser una herramienta til, ecolgica y no invasiva para el
monitoreo de la dinmica de DOM en los ecosistemas naturales afectados por contaminacin
orgnica procedente de una piscicultura, permitiendo obtener conocimiento potencial sobre esta
subfraccin de DOM e identificar grupos de fluorforos de relevancia ecolgica a travs de su
caracterizacin y cuantificacin, que junto a los parmetros de calidad del agua fisicoqumicos
permiten un anlisis tanto espacial como temporal en programas de muestreo, siendo necesario
que esta actividad acucola disminuya o termine con su nocivo impacto ambiental, con el fin de
preservar la integridad ecolgica de los sistemas acuticos, y as evitar la carencia con respecto
de cmo administrar esta actividad bajo un enfoque ecosistmico sostenible sin el deterioro del
medio ambiente.
104
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11.1 Pginas web

[1]http://www.multiexportfoods.com/site/presentaciones/Multiexport%20Presentation%20(Serfin
co%20Conference,%20Colombia%20%20Aug-2012).pdf
[2] http://www.fao.org/fishery/culturedspecies/Salmo_salar/es
[3] http://www.models.kvl.dk/~domfluor/domfluor.htm
[4] http://www.espectrometria.com/espectrometra_de_fluorescencia
115
12. Anexos
Imgenes PLOTSurfby1 PARAFAC en MATLAB (Experimento Dilucin Efluente 100% a 6.25%)
116
117
Imgenes PLOTSurfby1 PARAFAC en MATLAB (Experimento incubacin 0hrs a 48hrs)
118
119
120
121
Imgenes PLOTSurfby1 PARAFAC en MATLAB (Muestreo Molco Agosto)
122
123
124
Imgenes PLOTSurfby1 PARAFAC en MATLAB (Muestreo Molco Octubre)
125
126
127
128
129
130
131
132
Imgenes PLOTSurfby1 PARAFAC en MATLAB (Muestreo Molco Noviembre)
133
134
135
136
Imgenes PLOTSurfby1 PARAFAC en MATLAB (Muestreo Molco Diciembre)
137
138
139
Imgenes PLOTSurfby1 PARAFAC en MATLAB (Muestreo Molco Enero)
140
141
142
143
144
145
146
Tabla promedio FMax por mes

Mes
Agosto
Estacin
Molco Control
Molco efluente
Molco Puente arriba
Molco Cabaas
Molco Puente Madera
Molco Puente Pucon
Octubre
Molco Control
Molco efluente
Post Efluente 1
Post Efluente 2
Post Efluente 3
Molco bifurcacion
Post Efluente 4
Post Efluente 5
Post Efluente 6
Molco Puente arriba
Molco Cabaas
Molco Puente Madera
Chosco
Molco Puente Pucon
Noviembre Molco Control

Molco efluente
Molco Puente arriba
Molco Puente Madera
Chosco
Molco Puente Pucon
Similar a Tirosina
Similar a Triptfano
Similar a Proteina
0.007779196
0
0.026412765
0.011023716
1.377527235
0.670804768
0.148893853
0.156924121
0.336818568
0.17346588
0.080464609
0.043718687
0.225695715
0.155285577
0.154398785
0.047597312
0.14347397
0.099214364
0.099456377
0.034520297
0.018670283
0.006257106
0.068991708
0.009247259
2.85828E-05
0.635276796
1.010255205
0.918488776
0.496044594
0.324874759
0.354008091
0.370934223
0.375215311
0.20789975
0.136099586
0.098718518
0.049178702
0.054587119
0.004603808
0
0.340583649
0.545846628
0.56711157
0.3050285
0.215147395
0.183773304
0.194723385
0.212603372
0.122030728
0.097416624
0.070470275
0.037274359
0.036561768
0.030546701
0.031576325
0.161808854
0.174733651
0.191029637
0.107089487
0.078554244
0.088524287
0.094700379
0.094578666
0.075304668
0.074653276
0.071334374
0.084609285
0.116345077
0.080766922
0.027921507
0.112089801
0.111764839
0.364189951
0.178419582
0.059280269
0.055900442
0.063355974
0.06709983
0.087145152
0.052778559
0.047751597
0.062460333
0.049787304
0.111397846
0.003044456
1.54194314
0.267479265
0.02018003
0.021864247
0.028503415
0.000954622
0.630980609
0.129085488
0.000635151
0.011692466
0.014686478
0.017598434
0.129999319
0.057243318
0.065398176
0.062983387
0.056983114
0.004545871
0.098580069
0.022005207
0.005280495
0.003769673
0.01092899
Diciembre
Molco Control
Molco efluente
Chosco
Molco Puente Pucon
0
2.949802895
0.1588
0.0898
0
1.56061788
0.1797
0.1210
0.010611012
0.242483564
0.0779
0.0710
0.000388159
0.199054468
0.0169
0.0256
Enero
Molco Control
Molco efluente
Post Efluente 1
Post Efluente 2
Post Efluente 3
Post Efluente 4
Post Efluente 5
Post Efluente 6
Afluente
Molco Puente arriba
Molco Cabaas
Molco Puente Madera
Molco Puente Pucon
0.001443231
1.2237
1.833752699
0.743157923
0.716367156
0.60908122
0.602812325
0.572743111
0.000893601
0.216209395
0.220314405
0.063411408
0.020937743
0
0.8323
1.303221897
0.565416388
0.504420911
0.429423778
0.406372987
0.401915402
0.001446322
0.209164901
0.172490239
0.141649747
0.044938168
0.016585216
0.4994
0.655139355
0.285779965
0.247695429
0.184088126
0.161440179
0.151340784
0.088251443
0.185396975
0.136420132
0.206207702
0.182261594
0.011628871
0.1701
0.234187714
0.264266837
0.117491473
0.102217979
0.088298743
0.064385599
0.055517675
0.066135041
0.039506922
0.067905525
0.034029299
147
Tabla promedio FMax por muestras

Muestra
Dilucin Efluente 100% 5.1.xlsx
Dilucin Efluente 12.5% 2.1.xlsx
Incubacin Molco 0 hrs 0.1.xlsx
Incubacin Molco 1 hr 1.1.xlsx
Molco Agosto Cabaas Millaleufu 3.1.xlsx
Molco Agosto Control 6.1.xlsx
Molco Agosto Efluente 5.1.xlsx
Molco Agosto Puente Madera 2.1.xlsx
Molco Agosto Puente Molco 1 4.1.xlsx
Molco Agosto Puente Molco-Pucon 1.1.xlsx
Similar a Tirosina
Similar a Triptfano Similar a cidos Hmicos Similar a Proteina
2.385825869
0.951804024
0.246131082
0.720992464
2.418939897
0.958325954
0.248508141
0.709522463
2.388451289
0.993692118
0.251959486
0.680463602
0.274443507
0.058905942
0.050915356
0.121054451
0.296931708
0.057615823
0.054979335
0.124987317
0.300067669
0.061315439
0.054709528
0.123113811
0.573482292
0.186245238
0.097169916
0.194227976
0.613553895
0.186186298
0.098431119
0.185039697
0.582950239
0.188398488
0.098360398
0.196575928
1.143730539
0.433086209
0.139999721
0.361590255
1.18287461
0.439197484
0.141940176
0.356735009
1.180248317
0.442648633
0.144503474
0.368115544
0.145093356
0.018466408
0.050693084
0.081287909
0.154573048
0.011533383
0.052137634
0.088288579
0.157298681
0.015009103
0.053169134
0.085142759
2.380542583
1.021103074
0.230719741
0.686787807
2.431448886
1.02802484
0.234638123
0.687740992
2.444759954
1.046269688
0.232899475
0.689954459
2.277601875
0.992230715
0.236413884
0.585318282
2.299830225
0.98389959
0.230920145
0.599654009
2.30988662
1.00307177
0.238882345
0.591966446
2.120990528
1.052556477
0.251372785
0.416530425
2.098422059
1.03486115
0.253205248
0.389612617
2.170755218
1.032488189
0.262981697
0.410668376
0.216042841
0.26311041
0.255693196
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Molco Enero 23 Molco-Pucon 1.1.xlsx
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Molco Enero 24 Afluente 11.1.xlsx
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150
Muestra
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Molco Octubre 15 Cabaa Millaleufu 5.1.xlsx
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151
Tabla FMax de componentes y T, pH y Conductividad

Fecha
01-08-2013
01-08-2013
01-08-2013
01-08-2013
01-08-2013
01-08-2013
01-08-2013
01-08-2013
01-08-2013
01-08-2013
01-08-2013
01-08-2013
01-08-2013
01-08-2013
01-08-2013
15-10-2013
15-10-2013
15-10-2013
14-10-2013
14-10-2013
14-10-2013
15-10-2013
15-10-2013
15-10-2013
15-10-2013
15-10-2013
15-10-2013
14-10-2013
14-10-2013
14-10-2013
15-10-2013
15-10-2013
15-10-2013
15-10-2013
15-10-2013
15-10-2013
15-10-2013
15-10-2013
15-10-2013
15-10-2013
15-10-2013
15-10-2013
05-11-2013
05-11-2013
05-11-2013
26-11-2013
26-11-2013
26-11-2013
05-11-2013
05-11-2013
05-11-2013
26-11-2013
26-11-2013
26-11-2013
26-11-2013
26-11-2013
26-11-2013
05-11-2013
05-11-2013
05-11-2013
26-11-2013
26-11-2013
26-11-2013
Estaciones
Molco Control
Molco Control
Molco Control
Molco efluente
Molco efluente
Molco efluente
Molco Puente arriba
Molco Puente arriba
Molco Puente arriba
Molco Puente Madera
Molco Puente Madera
Molco Puente Madera
Molco Puente Pucon
Molco Puente Pucon
Molco Puente Pucon
Molco Control
Molco Control
Molco Control
Molco efluente
Molco efluente
Molco efluente
Molco efluente
Molco efluente
Molco efluente
Molco efluente
Molco efluente
Molco efluente
Chosco
Chosco
Chosco
Molco Puente arriba
Molco Puente arriba
Molco Puente arriba
Molco Puente Madera
Molco Puente Madera
Molco Puente Madera
Molco Puente Pucon
Molco Puente Pucon
Molco Puente Pucon
Molco bifurcacion
Molco bifurcacion
Molco bifurcacion
Molco Control
Molco Control
Molco Control
Molco Control
Molco Control
Molco Control
Molco efluente
Molco efluente
Molco efluente
Molco efluente
Molco efluente
Molco efluente
Chosco
Chosco
Chosco
Molco Puente arriba
Molco Puente arriba
Molco Puente arriba
Molco Puente arriba
Molco Puente arriba
Molco Puente arriba
Rplica
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R2
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T [C] Conductividad [S/cm]

8.60
43.1
8.60
43.1
8.60
43.1
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790
9.20
790
9.20
790
9.80
200
9.80
200
9.80
200
9.30
114.1
9.30
114.1
9.30
114.1
9.10
78.3
9.10
78.3
9.10
78.3
8.50
51
8.50
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8.50
51
11.80
156.7
12.10
156.6
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158
12.50
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11.80
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11.10
152.2
11.10
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11.10
175.9
10.20
159.2
10.20
159.2
10.20
159.2
9.50
87
9.50
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9.50
87.7
10.20
92.7
10.20
92.7
10.20
92.7
10.10
79.5
10.10
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10.10
78.5
9.40
88.7
9.40
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9.40
84.1
13.90
50
13.90
50
13.90
50
7.90
50
7.90
49.9
7.90
49.9
16.10
136.8
16.10
136.8
16.10
136.8
9.60
344
9.60
308
9.60
281
8.70
95.5
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89
8.70
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81.3
18.00
81.3
18.00
81.3
8.80
86.8
8.80
86.8
8.80
89.2
pH
7.40
7.40
7.40
7.13
7.13
7.13
7.52
7.52
7.52
7.90
7.90
7.90
7.59
7.59
7.59
6.87
6.86
7.02
7.19
7.05
7.03
7.07
7.11
7.08
6.32
6.72
6.63
7.82
7.82
7.82
7.44
7.43
7.47
7.08
7.08
7.08
7.83
7.82
7.75
7.36
7.32
7.30
6.92
6.92
6.92
6.63
6.55
6.53
6.62
6.62
6.62
6.44
6.52
6.55
7.22
7.13
7.19
7.17
7.17
7.17
6.72
6.81
6.64
C1
C2
C3
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Molco Puente Madera
Molco Puente Madera
Molco Puente Madera
Molco Puente Pucon
Molco Puente Pucon
Molco Puente Pucon
Molco Puente Pucon
Molco Puente Pucon
Molco Puente Pucon
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Molco Control
Molco Control
Molco efluente
Molco efluente
Molco efluente
Molco efluente
Molco efluente
Molco efluente
Molco efluente
Molco efluente
Molco efluente
Molco efluente
Molco efluente
Molco efluente
Chosco
Chosco
Chosco
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Molco Puente Pucon
Molco Puente Pucon
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Molco efluente
Molco efluente
Molco efluente
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Molco Puente arriba
Molco Puente arriba
Molco Puente arriba
Molco Puente arriba
Molco Puente arriba
Molco Puente Madera
Molco Puente Madera
Molco Puente Madera
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96.3
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247
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13.20
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7.59
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153
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24-01-2014
24-01-2014
24-01-2014
23-01-2014
23-01-2014
23-01-2014
Estaciones
Post Efluente 1
Post Efluente 1
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Post Efluente 3
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Post Efluente 4
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Post Efluente 5
Post Efluente 5
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Post Efluente 6
Post Efluente 6
Afluente
Afluente
Afluente
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Molco Cabaas
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0.719968584 0.502861561 0.248476223 0.114954901
0.601765866 0.423143769 0.183694709 0.102465358
0.624624513 0.427633867 0.182687651 0.094589816
0.600853280 0.437493697 0.185882018 0.109598765
0.605687298 0.409555204 0.160273254 0.081689605
0.595439001 0.397677823 0.160761872 0.087018877
0.607310675 0.411885934 0.163285411 0.096187748
0.580042580 0.408268992 0.145558969 0.064203177
0.581646986 0.399170601 0.152347722 0.051778264
0.556539767 0.398306612 0.156115659 0.077175355
0.000000000 0.000000000 0.084419939 0.036683794
0.002680802 0.004338966 0.093565120 0.093447492
0.000000000 0.000000000 0.086769269 0.036421738
0.227197546 0.172139898 0.133653091 0.036833595
0.210555096 0.168668785 0.142269145 0.063471706
0.223190573 0.176662036 0.133338161 0.018215466
154
Tabla FMax Componente 1 y 2, y turbidez

Fecha
15-10-2013
15-10-2013
15-10-2013
14-10-2013
14-10-2013
14-10-2013
15-10-2013
15-10-2013
15-10-2013
15-10-2013
15-10-2013
15-10-2013
15-10-2013
15-10-2013
15-10-2013
15-10-2013
15-10-2013
15-10-2013
15-10-2013
15-10-2013
15-10-2013
15-10-2013
15-10-2013
15-10-2013
14-10-2013
14-10-2013
14-10-2013
15-10-2013
15-10-2013
15-10-2013
15-10-2013
15-10-2013
15-10-2013
05-11-2013
05-11-2013
Estacin
Molco Control
Molco Control
Molco Control
Molco efluente
Molco efluente
Molco efluente
Molco efluente
Molco efluente
Molco efluente
Molco efluente
Molco efluente
Molco efluente
Molco bifurcacion
Molco bifurcacion
Molco bifurcacion
Molco Puente arriba
Molco Puente arriba
Molco Puente arriba
Molco Cabaas
Molco Cabaas
Molco Cabaas
Molco Puente Madera
Molco Puente Madera
Molco Puente Madera
Chosco
Chosco
Chosco
Chosco
Chosco
Chosco
Molco Puente Pucon
Molco Puente Pucon
Molco Puente Pucon
Molco Control
Molco efluente
Rplica Total turbidez [ntu]

R1
0.192
R2
0.5
R3
0.398
R1
1.23
R2
0.876
R3
1.116
R1
2.986
R2
2.998
R3
2.674
R1
1.718
R2
2.564
R3
R1
0.776
R2
0.85
R3
0.494
R1
0.688
R2
0.626
R3
0.742
R1
0.616
R2
0.492
R3
0.528
R1
0.888
R2
1.328
R3
1.244
R1
1.66
R2
1.262
R3
2.628
R1
1.97
R2
1.208
R3
1.516
R1
1.328
R2
1.384
R3
1.254
R1
0.486
R1
1.11
C1
0
0.000171497
0
0.129663162
0.128225581
0.13134435
0.731895712
0.718071632
0.740555493
1.036559555
1.042258729
1.058916953
0.323365295
0.322346118
0.328912866
0.22187868
0.203846206
0.197974366
0.097358061
0.101442791
0.097354702
0.051588079
0.052363504
0.043584522
0.077670328
0.044393083
0.03707642
0.051417206
0.055003467
0.061962212
0
0
0.013811425
0
0.41062602
C2
Total C1 Y C2
0
0
0 0.000171497
0
0
0.108768856 0.238432017
0.085233088 0.213458668
0.096577723 0.227922073
0.40408534 1.135981052
0.39720964 1.115281273
0.406254187 1.146809681
0.5337836 1.570343154
0.53662473 1.578883459
0.496715673 1.555632625
0.214719145 0.53808444
0.214232385 0.536578503
0.216490654 0.545403519
0.130358726 0.352237406
0.115755836 0.319602042
0.119977623 0.317951989
0.072901149 0.17025921
0.065849527 0.167292318
0.072660149 0.170014851
0.036837942 0.088426021
0.035433464 0.087796968
0.03955167 0.083136192
0.056576512 0.13424684
0.032913082 0.077306165
0.029336973 0.066413393
0.034927014 0.086344221
0.033864999 0.088868466
0.031752029 0.093714241
0.034056645 0.034056645
0.032730327 0.032730327
0.024853131 0.038664556
0
0
0.217688518 0.628314537
155
Fecha
05-11-2013
05-11-2013
05-11-2013
05-11-2013
26-11-2013
26-11-2013
26-11-2013
26-11-2013
26-11-2013
26-11-2013
26-11-2013
26-11-2013
26-11-2013
26-11-2013
26-11-2013
26-11-2013
26-11-2013
26-11-2013
26-11-2013
26-11-2013
26-11-2013
26-11-2013
23-01-2014
23-01-2014
23-01-2014
24-01-2014
24-01-2014
23-01-2014
23-01-2014
23-01-2014
24-01-2014
24-01-2014
23-01-2014
24-01-2014
Estacin
Molco Puente arriba
Molco Puente Pucon
Molco Puente Pucon
Molco Puente Pucon
Molco Control
Molco Control
Molco Control
Molco efluente
Molco efluente
Molco efluente
Molco Puente arriba
Molco Puente arriba
Molco Puente arriba
Molco Puente Madera
Molco Puente Madera
Molco Puente Madera
Chosco
Chosco
Chosco
Molco Puente Pucon
Molco Puente Pucon
Molco Puente Pucon
Molco Control
Molco Control
Molco Control
Molco Control
Molco efluente
Molco efluente
Molco Cabaas
Molco Puente arriba
Molco Puente arriba
Molco Puente Madera
Molco Puente Pucon
Molco Puente Pucon
Rplica Total turbidez [ntu]

R1
1.354
R1
0.730
R2
0.730
R3
0.730
R1
0.092
R2
0.078
R3
0.104
R1
4.360
R2
5.456
R3
6.562
R1
0.626
R2
0.670
R3
0.536
R1
0.448
R2
0.738
R3
0.642
R1
0.722
R2
0.930
R3
0.808
R1
0.804
R2
0.518
R3
0.478
R1
1.103
R2
0.643
R3
0.350
R1
0.295
R1
7.923
R1
1.243
R1
1.360
R1
0.938
R1
1.498
R1
0.418
R1
1.788
R1
0.685
C1
C2
Total C1 Y C2
0.18061567 0.104975122 0.285590792
0.033245768 0.017448278 0.050694047
0.027110177 0.019439831 0.046550008
0.029354741 0.017820511 0.047175251
0.006349962 0.000164999 0.006514961
0
0
0
0.003718133 0.005562735 0.009280868
2.631564461 1.037711636 3.669276097
2.658804728 1.047127675 3.705932403
2.69216962 1.044463715 3.736633335
0.335801007 0.154127718 0.489928725
0.354215075 0.153909514 0.508124589
0.34834894 0.148488662 0.496837602
0.014795955 4.13862E-05 0.014837341
0.024364796 0.000182995 0.024547791
0.02137934 0.001681073 0.023060412
0.016425096 0.010400442 0.026825538
0.01959644 0.01080646
0.0304029
0.029571205 0.013870496 0.043441701
0.011487208 0.017321125 0.028808333
0.04079497 0.006489828 0.047284798
0.029027624 0.009599295 0.038626919
0
0
0
0.008659387
0 0.008659387
0
0
0
0
0
0
1.706745513 1.19326636 2.900011873
0.234716336 0.173898028 0.408614364
0.227197546 0.172139898 0.399337444
0.069954121 0.053143342 0.123097463
0.379124775 0.347681235 0.72680601
0.068179411 0.132754921 0.200934333
0.045760784 0.037095996 0.08285678
0.015493469 0.067699676 0.083193145
156
Tabla FMax Componentes y Oxgeno Disuelto

Fecha
01-08-2013
01-08-2013
01-08-2013
01-08-2013
01-08-2013
01-08-2013
14-10-2013
14-10-2013
14-10-2013
14-10-2013
14-10-2013
14-10-2013
15-10-2013
15-10-2013
15-10-2013
15-10-2013
15-10-2013
15-10-2013
15-10-2013
15-10-2013
15-10-2013
15-10-2013
15-10-2013
15-10-2013
15-10-2013
15-10-2013
15-10-2013
15-10-2013
15-10-2013
15-10-2013
15-10-2013
15-10-2013
15-10-2013
15-10-2013
15-10-2013
15-10-2013
05-11-2013
05-11-2013
05-11-2013
05-11-2013
05-11-2013
05-11-2013
26-11-2013
26-11-2013
26-11-2013
26-11-2013
26-11-2013
26-11-2013
26-11-2013
26-11-2013
26-11-2013
26-11-2013
26-11-2013
26-11-2013
26-11-2013
26-11-2013
26-11-2013
26-11-2013
26-11-2013
26-11-2013
12-12-2013
Estacin
Molco Control
Molco efluente
Molco Puente arriba
Molco Cabaas
Molco Puente Madera
Molco Puente Pucon
Molco efluente
Molco efluente
Molco efluente
Chosco
Chosco
Chosco
Molco Control
Molco Control
Molco Control
Molco efluente
Molco efluente
Molco efluente
Molco efluente
Molco efluente
Molco efluente
Molco bifurcacion
Molco bifurcacion
Molco bifurcacion
Molco Puente arriba
Molco Puente arriba
Molco Puente arriba
Molco Cabaas
Molco Cabaas
Molco Cabaas
Molco Puente Madera
Molco Puente Madera
Molco Puente Madera
Molco Puente Pucon
Molco Puente Pucon
Molco Puente Pucon
Molco Control
Molco efluente
Molco Puente arriba
Molco Puente Pucon
Molco Puente Pucon
Molco Puente Pucon
Molco efluente
Molco efluente
Molco efluente
Molco Puente Pucon
Molco Puente Pucon
Molco Puente Pucon
Molco Puente Madera
Molco Puente Madera
Molco Puente Madera
Molco Puente arriba
Molco Puente arriba
Molco Puente arriba
Molco Control
Molco Control
Molco Control
Chosco
Chosco
Chosco
Molco efluente
Rplica Oxigeno [mg/L] C1

C2
C3
C4
R1
11.79 0.006576756
0 0.025184751 0.00912302
R1
11.36 1.436300372 0.68967448 0.15047628 0.158871763
R1
11.28 0.339306062 0.171027494 0.081204208 0.045100999
R1
11.27 0.230227704 0.155965649 0.152866529 0.045920916
R1
12.06 0.136065776 0.096405656 0.098116228 0.038818164
R1
12.38 0.012505954 0.006446637 0.067064446 0.008332962
R1
10.32 0.129663162 0.108768856 0.112445345 0.052079483
R2
10.3 0.128225581 0.085233088 0.120861859 0.075697578
R3
10.26 0.13134435 0.096577723 0.123202641 0.067175385
R1
10.93 0.077670328 0.056576512 0.195215226 0.007658977
R2
10.93 0.044393083 0.032913082 0.113703064 0.030398026
R3
10.93 0.03707642 0.029336973 0.098812092 0.035106353
R1
11.25
0
0 0.032276469 0.038547672
R2
11.25 0.000171497
0 0.031820124 0.023163293
R3
11.25
0
0 0.026746379
0.0189084
R1
10.01 0.731895712 0.40408534 0.178643103 0.128961353
R2
10.32 0.718071632 0.39720964 0.173293507 0.123950985
R3
9.63 0.740555493 0.406254187 0.176563161 0.140610073
R1
10.44 1.036559555
0.5337836 0.186506961 0.121214065
R2
10.44 1.042258729 0.53662473 0.185102743 0.158541247
R3
10.44 1.058916953 0.496715673 0.199660362 0.140578035
R1
11.66 0.323365295 0.214719145 0.079820097 0.06090636
R2
11.66 0.322346118 0.214232385 0.07887452 0.056992398
R3
11.66 0.328912866 0.216490654 0.076968116 0.059942048
R1
10.98 0.22187868 0.130358726 0.081281012 0.073553112
R2
10.98 0.203846206 0.115755836 0.074301106 0.099801471
R3
10.98 0.197974366 0.119977623 0.070331887 0.088080871
R1
10.68 0.097358061 0.072901149 0.07106998 0.047464311
R2
10.68 0.101442791 0.065849527 0.069576555 0.042878688
R3
10.68 0.097354702 0.072660149 0.073356586 0.052911792
R1
10.84 0.051588079 0.036837942 0.084194051 0.06642454
R2
10.84 0.052363504 0.035433464 0.081991624 0.048214964
R3
10.84 0.043584522 0.03955167 0.087642179 0.072741494
R1
11
0 0.034056645 0.082213557 0.126280843
R2
11
0 0.032730327 0.082372556 0.119600325
R3
11 0.013811425 0.024853131 0.077714655 0.08831237
R1
9.2
0
0 0.013239263
0
R1
8.38 0.41062602 0.217688518 0.084985432 0.040614737
R1
8.07 0.18061567 0.104975122 0.066184336
0.0441878
R1
8.24 0.033245768 0.017448278 0.064217921 0.015671707
R2
8.24 0.027110177 0.019439831 0.062582821 0.010074076
R3
8.24 0.029354741 0.017820511 0.063464073 0.008768564
R1
10.71 2.631564461 1.037711636 0.175796723 0.174613425
R2
10.71 2.658804728 1.047127675 0.174500372 0.161594679
R3
10.71 2.69216962 1.044463715 0.177830888 0.138594142
R1
11.19 0.011487208 0.017321125 0.049945853 0.000270872
R2
11.19 0.04079497 0.006489828 0.049916953 0.023739396
R3
11.19 0.029027624 0.009599295 0.051771065 0.007049328
R1
10.86 0.014795955 4.13862E-05 0.063166922 0.003651624
R2
10.86 0.024364796 0.000182995 0.065246862 0.002466833
R3
10.86 0.02137934 0.001681073 0.067780743 0.009723028
R1
10.99 0.335801007 0.154127718 0.051600831 0.013652055
R2
10.99 0.354215075 0.153909514 0.051270559 0.008084143
R3
10.99 0.34834894 0.148488662 0.05007377 0.015430991
R1
11.29 0.006349962 0.000164999 0.019723687 0.004224056
R2
11.29
0
0 0.017355828
0
R3
11.29 0.003718133 0.005562735 0.024617494 0.023051173
R1
11.23 0.016425096 0.010400442 0.061448618 0.002715969
R2
11.23 0.01959644 0.01080646 0.062522988 0.003349593
R3
11.23 0.029571205 0.013870496 0.064978556 0.005243458
R1
11.34 3.563236957 1.898586506 0.28694372 0.196552188
157
Fecha
12-12-2013
12-12-2013
12-12-2013
12-12-2013
12-12-2013
12-12-2013
12-12-2013
23-01-2014
23-01-2014
23-01-2014
23-01-2014
23-01-2014
23-01-2014
23-01-2014
23-01-2014
23-01-2014
23-01-2014
23-01-2014
23-01-2014
23-01-2014
23-01-2014
23-01-2014
24-01-2014
24-01-2014
24-01-2014
24-01-2014
24-01-2014
24-01-2014
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24-01-2014
24-01-2014
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24-01-2014
24-01-2014
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24-01-2014
24-01-2014
24-01-2014
24-01-2014
24-01-2014
24-01-2014
24-01-2014
24-01-2014
24-01-2014
24-01-2014
24-01-2014
24-01-2014
Estacin
Molco efluente
Molco efluente
Molco efluente
Molco Control
Chosco
Chosco
Chosco
Molco Cabaas
Molco Cabaas
Molco Cabaas
Molco Puente Pucon
Molco Puente Pucon
Molco Puente Pucon
Molco Puente arriba
Molco Puente arriba
Molco Puente arriba
Molco efluente
Molco efluente
Molco efluente
Molco Control
Molco Control
Molco Control
Molco Control
Molco Control
Molco Control
Molco efluente
Molco efluente
Molco efluente
Molco efluente
Molco efluente
Molco efluente
Molco Puente arriba
Molco Puente arriba
Molco Puente arriba
Post Efluente 1
Post Efluente 1
Post Efluente 1
Post Efluente 2
Post Efluente 2
Post Efluente 2
Post Efluente 3
Post Efluente 3
Post Efluente 3
Post Efluente 4
Post Efluente 4
Post Efluente 4
Post Efluente 5
Post Efluente 5
Post Efluente 5
Post Efluente 6
Post Efluente 6
Post Efluente 6
Afluente
Afluente
Afluente
Molco Puente Madera
Molco Puente Madera
Molco Puente Madera
Molco Puente Pucon
Molco Puente Pucon
Molco Puente Pucon
Rplica Oxigeno [mg/L] C1

C2
C3
C4
R1
8.52 2.908046565 1.616744779 0.256373404 0.218809321
R1
9.14 2.847009808
1.4177224 0.240729766 0.197671078
R1
9.85 2.535835524 1.321012953 0.167997488 0.196609889
R1
11
0
0 0.00649596
0
R1
9.95 0.178902277 0.178764729 0.077424219 0.041274268
R2
9.95 0.149115123 0.179109916 0.078171089 0.005392752
R3
9.95 0.148381823 0.181105887 0.077976823 0.004083364
R1
10.85 0.227197546 0.172139898 0.133653091 0.036833595
R2
10.85 0.210555096 0.168668785 0.142269145 0.063471706
R3
10.85 0.223190573 0.176662036 0.133338161 0.018215466
R1
10.46 0.045760784 0.037095996 0.210583393 0.023447688
R2
10.46 0.03390239 0.02672314 0.217068577 0.017132407
R3
10.46 0.027321441 0.030369203 0.210885848 0.009151947
R1
11.01 0.069954121 0.053143342 0.140989061 0.020475579
R2
11.01 0.079443755 0.055575676 0.139614067 0.055566574
R3
11.01 0.065880912 0.058605712 0.134029809 0.021184713
R1
10.89 0.234716336 0.173898028 0.165117142 0.052014373
R2
10.89 0.230610029 0.169406162 0.181046467 0.07080347
R3
10.89 0.244514002 0.177638645 0.169957489 0.063979359
R1
11.05
0
0 0.017000451 0.000758818
R2
11.05 0.008659387
0 0.016199933 0.004709957
R3
11.05
0
0 0.016952497 0.00334111
R1
10.48
0
0 0.017951699 0.042382909
R2
10.48
0
0 0.015698224 0.00318618
R3
10.48
0
0 0.015708489 0.015394253
R1
10.49 1.739686394 1.122726885 0.530486218 0.207380328
R2
10.49 1.729230324 1.130023912 0.534405543 0.202675328
R3
10.49 1.745542116 1.153158528 0.53840569 0.195023133
R1
10.47 1.706745513 1.19326636 0.784602623 0.219983278
R2
10.47 1.693282189 1.211394542 0.798573153 0.28986807
R3
10.47 1.688631296 1.158778219 0.791747576 0.228758751
R1
10.75 0.379124775 0.347681235 0.223284772 0.031493861
R2
10.75 0.324799784 0.380244798 0.242058471 0.190862909
R3
10.75 0.378053021 0.35973864 0.232405672 0.07722661
R1
9.18 1.846479218 1.31736577 0.664009764 0.20505929
R2
9.18 1.829032818 1.299187535 0.650229323 0.225676278
R3
9.18 1.825746061 1.293112386 0.651178979 0.271827573
R1
9.82 0.763836394 0.52909208 0.284717597 0.184329525
R2
9.82 0.70283688 0.580920491 0.284312315 0.357201949
R3
9.82 0.762800495 0.586236593 0.288309984 0.251269035
R1
9.57 0.709190068 0.493097378 0.245240799 0.120362787
R2
9.57 0.719942816 0.517303794 0.249369265 0.11715673
R3
9.57 0.719968584 0.502861561 0.248476223 0.114954901
R1
9.62 0.601765866 0.423143769 0.183694709 0.102465358
R2
9.62 0.624624513 0.427633867 0.182687651 0.094589816
R3
9.62 0.60085328 0.437493697 0.185882018 0.109598765
R1
9.42 0.605687298 0.409555204 0.160273254 0.081689605
R2
9.42 0.595439001 0.397677823 0.160761872 0.087018877
R3
9.42 0.607310675 0.411885934 0.163285411 0.096187748
R1
9.68 0.58004258 0.408268992 0.145558969 0.064203177
R2
9.68 0.581646986 0.399170601 0.152347722 0.051778264
R3
9.68 0.556539767 0.398306612 0.156115659 0.077175355
R1
10.02
0
0 0.084419939 0.036683794
R2
10.02 0.002680802 0.004338966 0.09356512 0.093447492
R3
10.02
0
0 0.086769269 0.036421738
R1
10.65 0.068179411 0.132754921 0.213330655 0.090301309
R2
10.65 0.064165648 0.140559448 0.201909797 0.062037627
R3
10.65 0.057889166 0.151634871 0.203382654 0.05137764
R1
10.62 0.015493469 0.067699676 0.14893547 0.039070538
R2
10.62 0.001864383 0.048528744 0.152447539 0.067162399
R3
10.62 0.001283987 0.059212249 0.153648737 0.048210817
158
Tabla FMax y Concentraciones de P

Fecha
01-08-2013
01-08-2013
01-08-2013
01-08-2013
01-08-2013
01-08-2013
01-08-2013
01-08-2013
01-08-2013
01-08-2013
01-08-2013
01-08-2013
01-08-2013
01-08-2013
01-08-2013
15-10-2013
15-10-2013
15-10-2013
14-10-2013
14-10-2013
14-10-2013
15-10-2013
15-10-2013
15-10-2013
15-10-2013
15-10-2013
15-10-2013
15-10-2013
15-10-2013
15-10-2013
15-10-2013
15-10-2013
15-10-2013
15-10-2013
15-10-2013
15-10-2013
15-10-2013
15-10-2013
15-10-2013
14-10-2013
14-10-2013
14-10-2013
15-10-2013
15-10-2013
15-10-2013
15-10-2013
15-10-2013
15-10-2013
05-11-2013
05-11-2013
05-11-2013
26-11-2013
26-11-2013
26-11-2013
05-11-2013
05-11-2013
05-11-2013
26-11-2013
Estacin
Molco efluente
Molco efluente
Molco efluente
Molco Puente arriba
Molco Puente arriba
Molco Puente arriba
Molco Cabaas
Molco Cabaas
Molco Cabaas
Molco Puente Madera
Molco Puente Madera
Molco Puente Madera
Molco Puente Pucon
Molco Puente Pucon
Molco Puente Pucon
Molco Control
Molco Control
Molco Control
Molco efluente
Molco efluente
Molco efluente
Molco efluente
Molco efluente
Molco efluente
Molco efluente
Molco efluente
Molco efluente
Molco bifurcacion
Molco bifurcacion
Molco bifurcacion
Molco Puente arriba
Molco Puente arriba
Molco Puente arriba
Molco Cabaas
Molco Cabaas
Molco Cabaas
Molco Puente Madera
Molco Puente Madera
Molco Puente Madera
Chosco
Chosco
Chosco
Chosco
Chosco
Chosco
Molco Puente Pucon
Molco Puente Pucon
Molco Puente Pucon
Molco Control
Molco Control
Molco Control
Molco Control
Molco Control
Molco Control
Molco efluente
Molco efluente
Molco efluente
Molco efluente
Rplica FINAL P_PO4 g/L Final P-TOTAL g/L C1

C2
C3
C4
R1
262.13
639.79 1.436300372 0.68967448 0.15047628 0.158871763
R2
320.33
535.01 1.27715127 0.631807404 0.142745125 0.126387907
R3
459.76
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R2
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R3
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R1
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R2
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R3
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R1
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R2
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R3
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R3
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R3
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R2
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R1
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R2
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R1
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R2
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R3
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R3
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159
Fecha
26-11-2013
26-11-2013
26-11-2013
26-11-2013
26-11-2013
05-11-2013
05-11-2013
05-11-2013
26-11-2013
26-11-2013
26-11-2013
26-11-2013
26-11-2013
26-11-2013
26-11-2013
26-11-2013
26-11-2013
12-12-2013
12-12-2013
12-12-2013
12-12-2013
12-12-2013
12-12-2013
12-12-2013
12-12-2013
12-12-2013
12-12-2013
12-12-2013
12-12-2013
23-01-2014
23-01-2014
23-01-2014
24-01-2014
24-01-2014
24-01-2014
23-01-2014
23-01-2014
23-01-2014
24-01-2014
24-01-2014
24-01-2014
24-01-2014
23-01-2014
23-01-2014
23-01-2014
24-01-2014
24-01-2014
24-01-2014
23-01-2014
23-01-2014
23-01-2014
24-01-2014
24-01-2014
24-01-2014
23-01-2014
23-01-2014
23-01-2014
24-01-2014
24-01-2014
24-01-2014
Estacin
Molco efluente
Molco efluente
Molco Puente arriba
Molco Puente arriba
Molco Puente arriba
Molco Puente arriba
Molco Puente arriba
Molco Puente arriba
Molco Puente Madera
Molco Puente Madera
Molco Puente Madera
Chosco
Chosco
Chosco
Molco Puente Pucon
Molco Puente Pucon
Molco Puente Pucon
Molco Control
Molco Control
Molco Control
Molco efluente
Molco efluente
Molco efluente
Molco efluente
Chosco
Chosco
Molco Puente Pucon
Molco Puente Pucon
Molco Puente Pucon
Molco Control
Molco Control
Molco Control
Molco Control
Molco Control
Molco Control
Molco efluente
Molco efluente
Molco efluente
Molco efluente
Molco efluente
Molco efluente
Molco efluente
Molco Puente arriba
Molco Puente arriba
Molco Puente arriba
Molco Puente arriba
Molco Puente arriba
Molco Puente arriba
Molco Cabaas
Molco Cabaas
Molco Cabaas
Molco Puente Madera
Molco Puente Madera
Molco Puente Madera
Molco Puente Pucon
Molco Puente Pucon
Molco Puente Pucon
Molco Puente Pucon
Molco Puente Pucon
Molco Puente Pucon
Rplica FINAL P_PO4 g/L Final P-TOTAL g/L C1

C2
C3
C4
R2
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R2
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R1
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0
R2
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R1
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R3
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R1
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0
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R2
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R3
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R2
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R3
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R2
96.34
143.40 0.210555096 0.168668785 0.142269145 0.063471706
R3
146.03
138.44 0.223190573 0.176662036 0.133338161 0.018215466
R1
174.38
179.47 0.068179411 0.132754921 0.213330655 0.090301309
R2
138.90
190.19 0.064165648 0.140559448 0.201909797 0.062037627
R3
152.51
202.91 0.057889166 0.151634871 0.203382654 0.05137764
R1
74.29
104.85 0.045760784 0.037095996 0.210583393 0.023447688
R2
67.73
117.83 0.03390239 0.02672314 0.217068577 0.017132407
R3
69.81
118.60 0.027321441 0.030369203 0.210885848 0.009151947
R1
110.48
156.79 0.015493469 0.067699676 0.14893547 0.039070538
R2
125.96
150.86 0.001864383 0.048528744 0.152447539 0.067162399
R3
101.94
176.67 0.001283987 0.059212249 0.153648737 0.048210817
160
Tabla FMax componentes 1 y 2, y concentraciones inorgnicas de N

Fecha
14-10-2013
15-10-2013
15-10-2013
15-10-2013
15-10-2013
15-10-2013
15-10-2013
15-10-2013
05-11-2013
26-11-2013
26-11-2013
26-11-2013
26-11-2013
26-11-2013
26-11-2013
12-12-2013
12-12-2013
12-12-2013
12-12-2013
23-01-2014
23-01-2014
23-01-2014
23-01-2014
23-01-2014
24-01-2014
24-01-2014
24-01-2014
24-01-2014
24-01-2014
Estacin
Chosco
Molco Control
Molco efluente
Molco bifurcacion
Molco Puente arriba
Molco Cabaas
Molco Puente Madera
Molco Puente Pucon
Molco Puente Pucon
Molco efluente
Molco Puente Pucon
Molco Puente Madera
Molco Puente arriba
Molco Control
Chosco
Molco efluente
Molco Control
Molco Puente Pucon
Chosco
Molco Cabaas
Molco Puente Pucon
Molco Puente arriba
Molco efluente
Molco Control
Molco Control
Molco efluente
Molco Puente arriba
Molco Puente Madera
Molco Puente Pucon
Rplica N-NH4 g/L N-NO3 g/L N-NO2 g/L C1

C2
R1
60.30
299.20
11.80 0.077670328 0.056576512
R1
5.60
46.30
0.30
0
0
R1
165.36
264.42
4.51 0.731895712 0.40408534
R1
131.00
135.00
2.30 0.323365295 0.214719145
R1
127.90
162.30
3.50 0.22187868 0.130358726
R1
184.00
224.50
10.40 0.097358061 0.072901149
R1
52.60
186.30
11.10 0.051588079 0.036837942
R1
36.70
202.30
12.90
0 0.034056645
R1
118.00
348.30
28.70 0.033245768 0.017448278
R1
902.62
971.77
15.31 2.631564461 1.037711636
R1
22.40
183.20
7.30 0.011487208 0.017321125
R1
33.00
178.50
7.50 0.014795955 4.13862E-05
R1
239.30
164.90
5.60 0.335801007 0.154127718
R1
9.90
35.30
0.10 0.006349962 0.000164999
R1
40.20
242.00
9.40 0.016425096 0.010400442
R1
1684.74
802.60
9.46 3.563236957 1.898586506
R1
12.00
34.70
0.30
0
0
R1
121.30
367.10
33.20 0.108482355 0.126852444
R1
270.30
407.40
34.90 0.178902277 0.178764729
R1
249.80
401.10
31.70 0.227197546 0.172139898
R1
64.20
333.30
19.70 0.045760784 0.037095996
R1
191.50
976.80
15.30 0.069954121 0.053143342
R1
583.50
1487.31
17.86 0.234716336 0.173898028
R1
3.10
0.90
0.00
0
0
R1
1.60
1.10
0.00
0
0
R1
930.02
8528.07
53.26 1.739686394 1.122726885
R1
402.90
4148.30
23.60 0.379124775 0.347681235
R1
191.90
3120.40
55.70 0.068179411 0.132754921
R1
125.00
2255.30
54.10 0.015493469 0.067699676
161
Tabla FMax componentes 1 y 2, y concentracin inorgnica, Total y orgnica de N

Fecha
14-10-2013
15-10-2013
15-10-2013
15-10-2013
15-10-2013
15-10-2013
15-10-2013
15-10-2013
05-11-2013
26-11-2013
26-11-2013
26-11-2013
26-11-2013
26-11-2013
26-11-2013
12-12-2013
12-12-2013
12-12-2013
12-12-2013
23-01-2014
23-01-2014
23-01-2014
23-01-2014
23-01-2014
24-01-2014
24-01-2014
24-01-2014
24-01-2014
24-01-2014
Estacin
Chosco
Molco Control
Molco efluente
Molco bifurcacion
Molco Puente arriba
Molco Cabaas
Molco Puente Madera
Molco Puente Pucon
Molco Puente Pucon
Molco efluente
Molco Puente Pucon
Molco Puente Madera
Molco Puente arriba
Molco Control
Chosco
Molco efluente
Molco Control
Molco Puente Pucon
Chosco
Molco Cabaas
Molco Puente Pucon
Molco Puente arriba
Molco efluente
Molco Control
Molco Control
Molco efluente
Molco Puente arriba
Molco Puente Madera
Molco Puente Pucon
Rplica N_Inorgnico g/l N-TOTAL g/L N_Orgnico g/l C1

C2
R1
371.30
623.90
252.60 0.077670328 0.056576512
R1
52.20
79.40
27.30
0
0
R1
434.29
1958.87
1524.20 0.731895712 0.40408534
R1
268.20
594.10
325.90 0.323365295 0.214719145
R1
293.70
610.10
316.40 0.22187868 0.130358726
R1
418.90
697.80
278.90 0.097358061 0.072901149
R1
250.00
442.20
192.20 0.051588079 0.036837942
R1
251.80
391.70
139.90
0 0.034056645
R1
512.30
559.50
47.20 0.033245768 0.017448278
R1
1889.70
3270.51
1380.81 2.631564461 1.037711636
R1
212.90
283.00
70.10 0.011487208 0.017321125
R1
219.00
292.90
73.90 0.014795955 4.13862E-05
R1
409.90
518.90
109.10 0.335801007 0.154127718
R1
45.40
62.10
16.70 0.006349962 0.000164999
R1
291.60
356.10
64.50 0.016425096 0.010400442
R1
2583.59
3275.44
691.85 3.563236957 1.898586506
R1
47.10
64.20
17.10
0
0
R1
521.60
558.10
36.40 0.108482355 0.126852444
R1
712.60
785.00
72.40 0.178902277 0.178764729
R1
707.10
823.20
116.10 0.227197546 0.172139898
R1
417.20
579.80
162.60 0.045760784 0.037095996
R1
1183.50
1330.20
146.60 0.069954121 0.053143342
R1
2286.68
2559.91
273.23 0.234716336 0.173898028
R1
3.60
62.20
58.60
0
0
R1
2.30
59.80
57.50
0
0
R1
9511.35
11236.78
1725.43 1.739686394 1.122726885
R1
4574.80
4824.90
250.10 0.379124775 0.347681235
R1
3339.60
3396.70
57.20 0.068179411 0.132754921
R1
2422.10
2613.50
191.40 0.015493469 0.067699676
162
Tabla FMax componentes 1 y 2, y DOC

Fecha
01-08-2013
01-08-2013
01-08-2013
01-08-2013
01-08-2013
14-10-2013
14-10-2013
15-10-2013
15-10-2013
15-10-2013
15-10-2013
15-10-2013
15-10-2013
15-10-2013
15-10-2013
15-10-2013
15-10-2013
15-10-2013
15-10-2013
15-10-2013
15-10-2013
15-10-2013
15-10-2013
15-10-2013
05-11-2013
05-11-2013
05-11-2013
05-11-2013
26-11-2013
26-11-2013
26-11-2013
26-11-2013
26-11-2013
26-11-2013
12-12-2013
12-12-2013
12-12-2013
12-12-2013
12-12-2013
12-12-2013
12-12-2013
Estacin
Molco efluente
Molco Puente arriba
Molco Cabaas
Molco Puente Madera
Molco Puente Pucon
Molco efluente
Chosco
Molco Control
Molco Control
Molco efluente
Molco efluente
Post Efluente 1
Post Efluente 2
Post Efluente 3
Molco bifurcacion
Post Efluente 4
Post Efluente 5
Post Efluente 6
Molco Puente arriba
Molco Cabaas
Molco Puente Madera
Chosco
Molco Puente Pucon
Molco Control
Molco efluente
Molco Puente arriba
Molco Puente Pucon
Molco efluente
Molco Puente Pucon
Molco Puente Madera
Molco Puente arriba
Molco Control
Chosco
Molco efluente
Molco efluente
Molco efluente
Molco efluente
Molco Control
Molco Puente Pucon
Chosco
Rplica DOC R3 (mg/L)

R1
5.41
R1
1.37
R1
1.19
R1
0.67
R1
0.5
R1
1.27
R1
0.5
R1
0.5
R1
0.5
R1
11.24
R1
4.99
R1
2.66
R1
4.63
R1
2.46
R1
1.05
R1
1.45
R1
1.48
R1
1.5
R1
1.45
R1
0.84
R1
0.68
R1
1.54
R1
1.58
R1
1.2
R1
0.5
R1
2.09
R1
1.16
R1
0.5
R1
7.15
R1
0.5
R1
0.5
R1
1.01
R1
0.5
R1
0.5
R1
9.24
R1
7.34
R1
4.29
R1
2.51
R1
0.5
R1
0.5
R1
0.55
C1
C2
1.436300372 0.68967448
0.339306062 0.171027494
0.230227704 0.155965649
0.136065776 0.096405656
0.012505954 0.006446637
0.129663162 0.108768856
0.077670328 0.056576512
0
0
0
0
0.731895712 0.40408534
1.036559555
0.5337836
1.019212736 0.541021834
0.893552919 0.558794211
0.498417924 0.297857736
0.323365295 0.214719145
0.352126012 0.18633785
0.364605248 0.194508861
0.388100002 0.211799128
0.22187868 0.130358726
0.1422509 0.100732201
0.097358061 0.072901149
0.051588079 0.036837942
0.051417206 0.034927014
0 0.034056645
0
0
0.41062602 0.217688518
0.18061567 0.104975122
0.033245768 0.017448278
2.631564461 1.037711636
0.011487208 0.017321125
0.014795955 4.13862E-05
0.335801007 0.154127718
0.006349962 0.000164999
0.016425096 0.010400442
3.563236957 1.898586506
2.908046565 1.616744779
2.847009808
1.4177224
2.535835524 1.321012953
0
0
0.108482355 0.126852444
0.178902277 0.178764729
163
Tabla ndices de Fluorescencia por muestras

Fecha
01-08-2013
01-08-2013
01-08-2013
01-08-2013
01-08-2013
01-08-2013
01-08-2013
01-08-2013
01-08-2013
01-08-2013
01-08-2013
01-08-2013
01-08-2013
01-08-2013
01-08-2013
01-08-2013
01-08-2013
01-08-2013
15-10-2013
15-10-2013
15-10-2013
15-10-2013
15-10-2013
15-10-2013
14-10-2013
14-10-2013
14-10-2013
15-10-2013
15-10-2013
15-10-2013
15-10-2013
15-10-2013
15-10-2013
15-10-2013
15-10-2013
15-10-2013
15-10-2013
15-10-2013
15-10-2013
15-10-2013
15-10-2013
15-10-2013
15-10-2013
15-10-2013
15-10-2013
15-10-2013
15-10-2013
15-10-2013
15-10-2013
15-10-2013
15-10-2013
15-10-2013
15-10-2013
15-10-2013
15-10-2013
15-10-2013
15-10-2013
15-10-2013
15-10-2013
Estacin
Molco Control
Molco Control
Molco Control
Molco efluente
Molco efluente
Molco efluente
Molco Puente arriba
Molco Puente arriba
Molco Puente arriba
Molco Cabaas
Molco Cabaas
Molco Cabaas
Molco Puente Madera
Molco Puente Madera
Molco Puente Madera
Molco Puente Pucon
Molco Puente Pucon
Molco Puente Pucon
Molco Control
Molco Control
Molco Control
Molco Control
Molco Control
Molco Control
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Molco Puente Madera
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Molco Control
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Molco efluente
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Molco Puente arriba
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Molco Puente Madera
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Molco Control
Molco Control
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Chosco
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Molco Control
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Molco Puente Pucon
Molco Puente Pucon
Molco Puente Pucon
Rplica
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R3
Indice FI
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Indice :
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Indice HIX
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1.091167143
166

Caracterización de Materia Orgánica Disuelta Proveniente de Efluentes de Pisciculturas PDF

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CARACTERIZACIN DE MATERIA ORGNICA DISUELTA PROVENIENTE DE

EFLUENTES DE PISCICULTURAS, MEDIANTE ESPECTROSCOPA DE

TESIS PRESENTADA COMO REQUISITO PARA

SEBASTIN IGNACIO OSORIO RUZ

7.3 Parmetros de calidad del agua ...................................................................................... 38

Figura 47. Intensidades mximas de los fluorforos presentes en la estacin Molco

conocimiento sea traspasado a cualquier persona sin importar su condicin social o

4.1 Salmonicultura en Chile

produccin y un dinmico desarrollo econmico a nivel nacional, registrando para el ao 1991,

los terrenos por el emplazamiento de estos centros de cultivo y la consecuente contaminacin de

4.2 Ciclo de vida de salmnidos en cautiverio

4.3 Sistemas actualmente en uso para la produccin de smolts de salmnidos en Chile

Figura 3. Esquema de un proceso estndar de produccin de salmones (Salmo salar) (Fuente:

4.4 Efectos de la contaminacin general de la piscicultura

ecosistema tienen el potencial de generar una disminucin de las concentraciones de oxgeno y

4.5 Materia orgnica en sistemas acuticos

4.6 Materia Orgnica Disuelta (DOM)

estructuracin de los ecosistemas acuticos, influyendo tanto directa como indirectamente en la

4.7 Materia Orgnica Disuelta Fluorescente

sea la conjugacin de estructuras de doble enlace en la molcula, menor es la diferencia de

Figura 6. Estructuras de los compuestos orgnicos de triptfano, tirosina y fenilalanina (Fuente:

4.8 Medicin e identificacin de DOM a travs de tcnicas de Espectroscopia de

El registro de las medidas de fluorescencia de DOM es un proceso relativamente sencillo, llevado

Figura 9. Ejemplo de una matriz tridimensional de excitacin y emisin (EEM)

o longitudes de onda a travs de rejillas de difraccin en lugar de prismas, lo cual disminuye la

Figura 10. Componentes de un espectrofotmetro de fluorescencia

4.8.2 Correccin espectral, correccin de filtro interno, normalizacin y sustraccin del

dilucin o correccin matemtica de las intensidades. Si la dilucin aun no es significativa en la

Despus de corregir el efecto de filtro interno y la correccin espectral de la lmpara, la

sistemas de deteccin y / o utilizan diferentes fotomultiplicadores; por lo tanto, a menudo se

La identificacin de estos fenmenos de dispersin, fue un avance fundamental en la

Finalmente, la normalizacin de la seal medida del peak Raman y el uso de espectros de

El ndice HIX, indica el grado de humificacin o de sustancias hmicas contenidas en el

El ndice :, es un indicador de la contribucin recientemente producida de DOM, donde

fluorescencia en un conjunto de componentes trilineales y vectores residuales, permitiendo la

Donde i= 1, ...., I; j= 1,...., J; k= 1,....., K

Figura 17. : Ilustracin de los valores obtenidos por medicin de la espectroscopa de

6.1 Objetivo general

7.3 Parmetros de calidad del agua

Ciencias Marinas y Limnolgicas de la Universidad Austral de Chile, responsable Dr. Jorge

7.4 Experimentos de incubacin y dilucin

Figura 20. Experimento de dilucin y sus respectivos porcentajes

Figura 21. Experimento de incubacin

7.5 Metodologa de anlisis ptico y fluoromtrico de DOM

7.6 Anlisis PARAFAC

y facilitar el modelado de PARAFAC. El modelo se us con

restricciones de no negatividad aplicadas a cada dimensin (excitacin, emisin y concentracin).

Figura 22. Espectrofluormetro Perkin Elmer Luminescence Spectrometer LS50B y

8.1 Validacin del modelo

8.2 Descripcin de los componentes

8.2.1 Componente 1, Similar a Tirosina

Figura 29. Componente 1, grfico de contorno

Figura 30. Componente 1, grfico de superficie

Figura 31. Componente 2, grfico de contorno

Figura 32. Componente 2, grfico de superficie

Figura 33. Componente 4, grfico de contorno

Figura 34. Componente 4, grfico de superficie

El componentes 3 presenta propiedades de fluorescencia del tipo similar a sustancias hmicas.

8.2.4 Componente 3, Similar a cidos Hmicos

Figura 35. Componente 3, grfico de contorno

Figura 36. Componente 3, grfico de superficie

El anlisis PARAFAC, adems de entregar informacin cualitativa, nos proporciona estimaciones

Variacin de DOM Mes de Agosto