UNIVERSIDADE DE SO PAULO

ESCOLA DE ENGENHARIA DE LORENA

SARAH DE MENEZES VIANA

Utilizao de bactrias produtoras de biossurfactantes em tcnicas de

biorremediao de petrleo

Lorena
2015

SARAH DE MENEZES VIANA

Utilizao de bactrias produtoras de biossurfactantes em tcnicas de

biorremediao de petrleo

Trabalho de concluso de curso apresentado

Escola de Engenharia de Lorena - Universidade de
So Paulo como requisito parcial para concluso da
Graduao do curso de Engenharia Bioqumica.
Orientador: Prof. Rita de Cssia Lacerda
Brambilla Rodrigues

Lorena
2015

AUTORIZO A REPRODUO E DIVULGAO TOTAL OU PARCIAL DESTE TRABALHO, POR QUALQUER MEIO
CONVENCIONAL OU ELETRNICO, PARA FINS DE ESTUDO E PESQUISA, DESDE QUE CITADA A FONTE

Ficha catalogrfica elaborada pelo Sistema Automatizado

da Escola de Engenharia de Lorena,
com os dados fornecidos pelo(a) autor(a)

Viana, Sarah de Menezes

Utilizao de bactrias produtoras de
biossurfactantes em tcnicas de biorremediao de
petrleo / Sarah de Menezes Viana; orientadora Rita
de Cssia Lacerda Brambilla Rodrigues . - Lorena,
2015.
67 p.
Monografia apresentada como requisito parcial
para a concluso de Graduao do Curso de Engenharia
Bioqumica - Escola de Engenharia de Lorena da
Universidade de So Paulo. 2015
Orientadora: Rita de Cssia Lacerda Brambilla
Rodrigues
1. Petrleo . 2. Biorremediao. 3.
Biossurfactantes. 4. Bactrias. 5. Imobilizao. I.
Ttulo. II. Rodrigues , Rita de Cssia Lacerda
Brambilla , orient.

A todos que acreditaram em mim e me

apoiaram ao longo dessa jornada.

AGRADECIMENTOS

Agradeo primeiramente Deus, por sempre me presentear com momentos e pessoas

especiais, por iluminar meu caminho e amparar nos momentos de felicidade e de fracasso, pois
sem Ele nada seria possvel.
Agradeo minha famlia pelo suporte, pelo carinho, pelo amor que me foi dado e por
possibilitar a realizao dos meus sonhos, apesar de toda a distncia e saudade.
Agradeo ao meu professor de cincias biolgicas no ensino mdio, Prof. Dr. Gerson
Catanozi, cujas aulas sempre me inspiraram a querer mudar o mundo e me levaram a escolher
este curso de graduao e o tema desta Monografia.
Agradeo minha orientadora Prof. Rita de Cssia Lacerda Brambilla Rodrigues pela
pacincia e prontido para ajudar, por todo o apoio, pelas sugestes, correes e boas conversas
oferecidas ao longo desse caminho.
Agradeo aos meus amigos que foram minha famlia fora do lar, que proporcionaram
diversos momentos inesquecveis e que minimizaram os efeitos da distncia, em especial Thales
de Sousa Faria, que sempre despertou a melhor verso de mim e me estimulou a seguir meus
sonhos.
Agradeo toda equipe da EEL, professores e servidores, que possibilitaram meus
estudos e desenvolvimento, tanto pessoal quanto profissional, e contriburam para a formao
do ser humano que sou hoje.
A todos que possibilitaram minha chegada at o final deste curso de Graduao, meus
sinceros agradecimentos.

RESUMO

VIANA, S. M. Utilizao de bactrias produtoras de biossurfactantes em tcnicas

de biorremediao de petrleo. 2015. 67 f. Monografia (Trabalho de concluso de curso)
Escola de Engenharia de Lorena, Universidade de So Paulo, Lorena, 2015.
O desenvolvimento de tcnicas que combatam os prejuzos ambientais e financeiros
vinculados cadeia produtiva do petrleo, desde sua produo ao consumo, est associado
crescente demanda por seus derivados e sua explorao intensiva. A utilizao de mecanismos
naturais e biolgicos para limpeza e remoo de leos se mostra uma alternativa
ambientalmente amigvel e de baixo custo, que vem chamando a ateno de muitos
pesquisadores. No entanto, a velocidade pela qual a biodegradao de petrleo ocorre
naturalmente no ambiente marinho insuficiente para remediar, em curto prazo, vazamentos
causados por acidentes, o que pode ser resolvido atravs de tcnicas como bioestimulao,
bioventilao, bioamplificao, adio in situ de biossurfactantes, dentre outras. Nesse
contexto, um entendimento maior das reaes degradativas de microrganismos utilizados por
mtodos de biorremediao de petrleo, assim como sua aplicabilidade e eficincia, contribui
para avanos para o aperfeioamento de tcnicas de descontaminao. Como uma das mais
recentes inovaes nesta rea pode citar a utilizao de bactrias produtoras de biossurfactantes
imobilizadas, o que facilita o controle do processo e dos microrganismos, alm de aumentar sua
eficincia. Um polmero de baixo custo e fcil produo para utilizao em suportes de
imobilizao a quitosana, um polissacardeo natural, biodegradvel, inerte e atxico, muito
abundante na natureza. Este trabalho descreveu diversas tcnicas desenvolvidas na
biodegradao e biorremediao de petrleo, empregando bactrias produtoras de
biossurfactantes, possibilitando, assim, uma anlise dos mtodos mais eficazes e promissores
na resoluo de um problema histrico que causa grandes prejuzos indstria petrolfera e ao
meio ambiente. Foi possvel constatar que a imobilizao de clulas de bactrias produtoras de
biossurfactantes em cpsulas (ou esferas) de quitosana, apesar de no ser ainda empregada no
Brasil, uma tcnica com grande potencial para aplicao em atividades de biorremediao
devido ao seu baixo custo associado ao reaproveitamento de subprodutos da carcinicultura, para
obteno de quitosana, e a tcnica simples de imobilizao celular.
Palavras-chave: Petrleo. Biorremediao. Biossurfactantes. Bactrias. Imobilizao.

LISTA DE FIGURAS

Figura 1: Hidrocarbonetos representativos na composio do petrleo ....................... 19

Figura 2: Classificao de petrleo baseada na densidade (Grau API) ........................ 20
Figura 3: Derivados de Petrleo e suas aplicaes ....................................................... 22
Figura 4: Etapas do processo de degradao aerbica de hidrocarbonetos de petrleo35
Figura 5: Estrutura dos biossurfactantes e formao de micelas .................................. 37
Figura 6: Degradao microbiana de compostos aromticos por reaes com diferentes
aceptores de eltrons. .................................................................................................... 40
Figura 7: Principais Mtodos de imobilizao celular ou enzimtica .......................... 44
Figura 8: Arranjo experimental para produo de grnulos monodispersos ................ 45
Figura 9: Estrutura qumica da quitina ......................................................................... 48
Figura 10: Estrutura qumica da quitosana ................................................................... 48
Figura 11: Desacetilao da quitina por tratamento alcalino para formao de quitosana
...................................................................................................................................... 51
Figura 12: Fluxograma do processo para aproveitamento de resduos de camaro ..... 52
Figura 13: Esferas de quitosana (A) e esferas de quitosana contendo clulas imobilizadas
na proporo 1:1 (quitosana : biomassa) ...................................................................... 57
Figura 14: Ensaio de emulsificao de mistura querosene-gua, promovida por esferas
de quitosana .................................................................................................................. 58

LISTA DE TABELAS E QUADROS

Tabela 1: Os 10 maiores acidentes petrolferos no mundo ........................................... 25

Tabela 2: Biossurfactantes produzidos por microrganismos ........................................ 38
Tabela 3: Aplicaes de quitina e quitosana................................................................. 49
Tabela 4: Composio do meio mineral inoculado com a cultura bacteriana .............. 55
Tabela 5: Micronutrientes adicionados ao meio esterilizado ....................................... 55

SUMRIO
1.

INTRODUO ................................................................................................. 12

1.1. JUSTIFICATIVA ................................................................................................ 15

1.2. OBJETIVOS........................................................................................................ 16
2.

REVISO BIBLIOGRFICA ......................................................................... 17

2.1. O PETRLEO ..................................................................................................... 17

2.1.1.

Ocorrncia e origem do petrleo ................................................................. 17

2.1.2.

Propriedades fsicas e qumicas do petrleo ............................................... 18

2.1.3.

Aplicaes do petrleo e subprodutos ......................................................... 21

2.1.4.

Etapas da explorao e refino do petrleo .................................................. 23

2.1.5.

Acidentes petrolferos no mundo ................................................................ 24

2.1.6.

Acidentes petrolferos no Brasil .................................................................. 26

2.1.7.

Legislao no Brasil .................................................................................... 28

2.1.8.

Comportamento do leo no mar .................................................................. 29

2.1.9.

Impacto nos organismos marinhos e costeiros ............................................ 31

2.2. BIORREMEDIAO ......................................................................................... 32

2.2.1.

Classificao................................................................................................ 33

2.2.2.

Tcnicas empregadas................................................................................... 33

2.2.3.

Mecanismo da degradao de hidrocarbonetos de petrleo ........................ 34

2.2.4.

Microrganismos utilizados na biorremediao ........................................... 38

2.2.5.

Biorremediao com clulas imobilizadas .................................................. 41

2.3. IMOBILIZAO DE CLULAS E ENZIMAS ................................................ 43

2.3.1.

Suportes para imobilizao ......................................................................... 46

2.3.1.1. Quitina e Quitosana: caractersticas e aplicaes ............................... 47

2.3.1.2. Mtodos de obteno de quitina e quitosana ........................................ 50
2.3.1.3. Mtodos de preparo de suporte de quitosana ....................................... 52
2.3.2.

Preparo da cultura de microrganismos para imobilizao .......................... 54

2.3.3.

Mtodos de imobilizao de clulas e enzimas em quitosana .................... 56

2.3.4.

Atividade emulsificante............................................................................... 57

3.

METODOLOGIA ............................................................................................. 59

4.

CONSIDERAES FINAIS ........................................................................... 60

REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS ...................................................................... 62

12

1. INTRODUO

O petrleo, uma mistura de hidrocarbonetos e compostos sulfurados, nitrogenados,

oxigenados, resinas e asfaltenos, um recurso mineral no-renovvel que constitui, atualmente,
a principal fonte de energia mundial. O setor petroqumico engloba, atravs de sua cadeia
produtiva, tanto a indstria de produtos qumicos derivados do petrleo quanto a indstria de
transformao de plsticos, o que o torna o maior segmento dentro do setor qumico
(MACHADO, 2012).
Em 2014, o consumo mundial de petrleo aumentou em 0,9 milhes de barris por dia
(ou 0,9%), a menor taxa de crescimento desde 1998. J a produo global aumentou em
2,1 milhes de barris por dia (ou 2,3%) (BRITISH PETROLEUM, 2015). O crescimento da
demanda internacional, mesmo que modesto, vem acompanhado de maior preocupao acerca
da dependncia mundial do uso de combustveis fsseis, como carvo, petrleo e gs. Cerca de
66% do consumo mundial de energia se originam dessas fontes, sendo que aproximadamente
40% corresponde ao consumo de petrleo.
Estima-se que cada barril de petrleo extrado produza cerca de 436kg de CO2 na
combusto de derivados de petrleo para a gerao de energia, o que torna a indstria do
petrleo uma das maiores emissoras de gs carbnico na atmosfera (MACHADO, 2012). No
entanto, o impacto ambiental causado pelo uso de combustveis fsseis no se limita apenas s
emisses de gases poluentes responsveis pelo efeito estufa, mas se estende por toda a cadeia
produtiva do petrleo.
A explorao, prospeco e produo em terra levam ao aumento da degradao do
solo, enquanto que, em mar, h o risco permanente da ocorrncia de vazamentos de leo, os
quais podem afetar toda a fauna e flora marinha. Os efluentes gerados em sua extrao e o
despejo irregular contribuem tambm para a poluio do ar, do solo e da gua.
A contaminao por hidrocarbonetos de petrleo pode ocorrer por acidentes no
transporte de combustveis por navios e caminhes, vazamentos de tanques de armazenamento
subterrneos, corroso de dutos de transporte, liberao inadequada dos resduos oleosos
gerados pelas indstrias que utilizam seus derivados na produo de plstico, solventes,
produtos farmacuticos e cosmticos, dentre outras.

12
Um litro de leo capaz de esgotar o oxignio de um milho de litros de gua e, em
poucos dias, formar uma fina camada sobre a superfcie de 1000m de solo, bloqueando a
passagem de luz e inibindo o crescimento de microrganismos e plantas (YEUNG et al. 2011
apud SOUZA, 2013, p. 10). Os prejuzos ambientais e financeiros inerentes contaminao do
mar ou solo com petrleo e derivados alavancam pesquisas acerca de mtodos eficientes para
remoo ou reduo destes compostos no meio ambiente.
A remediao de stios contaminados pode ser realizada por mtodos fsico-qumicos
ou biolgicos. Mtodos fsico convencionais consistem na utilizao de equipamentos caros e
pouco eficientes, como barreiras de conteno, barcaas recolhedoras, cordas oleoflicas,
caminhes vcuo, absorventes granulados, entre outros, que realizam a remoo mecnica dos
hidrocarbonetos do ambiente (MANDRI; LIN, 2007 apud MONTAGNOLLI, 2011 p. 22-23).
A combusto in situ, uma tcnica de recuperao trmica de leo, consiste na ignio de uma
pequena poro do leo do reservatrio, a qual sustentada pela injeo contnua de ar e gera
resduos densos extremamente viscosos e de difcil recuperao no mar e na costa.
Alguns produtos qumicos como os dispersantes, constitudos por surfactantes e
solventes, podem ser pulverizados nas manchas de petrleo com o objetivo de acelerar o
processo de disperso natural para remover o leo flutuante e minimizar o impacto em zonas
costeiras sensveis e aves. No entanto, possuem eficincia limitada quando aplicados sobre
leos com ponto de fluidez prximo ou superior temperatura ambiente e podem at gerar
subprodutos txicos. (CRAIG et al., 2012). Mecanismos naturais e biolgicos de limpeza e
remoo do leo so priorizados em muitos casos, j que no causam danos adicionais
comunidade martima e costeira. A utilizao de microrganismos capazes de obter energia de
fontes de carbono, a partir da decomposio biolgica dos hidrocarbonetos presentes no
petrleo em dixido de carbono, gua, sais minerais e gases, se apresenta como um mtodo
ambientalmente amigvel para a remediao (SOUZA, 2013).
Entretanto, a baixa solubilidade e a hidrofobicidade elevada de muitos hidrocarbonetos
os tornam altamente indisponveis aos microrganismos, dificultando o deslocamento de
substratos insolveis pela membrana celular. Microrganismos aerbicos so capazes de resolver
esse problema a partir da produo de biossurfactantes, compostos formados por molculas
anfipticas que agem pela reduo da tenso entre o meio e a bactria, assim como entre a
parede celular bacteriana e as molculas de hidrocarbonetos. A interao do biossurfactante
com a superfcie celular promove modificaes na membrana, aumentando sua hidrofobicidade
e facilitando a aderncia do hidrocarboneto, o que reduz o ndice de lipopolissacardeos da

12
parede celular sem danificar a membrana. Outros mecanismos de ao desses compostos
consistem no aumento da rea de contato dos microrganismos com os hidrocarbonetos, na
melhora da mobilidade e acesso ao substrato, resultando no aumento da biodegradao desses
compostos (SILVA et al., 2014).
Dentre as vantagens que biossurfactantes oferecem, comparando-se com surfactantes
qumicos, pode-se mencionar a biodegradabilidade, compatibilidade ambiental e baixa
toxidade, o que torna esses compostos eficazes na biorremediao de vazamentos de petrleo.
Apesar de ser aplicado em diferentes processos industriais, como nas indstrias farmacutica,
de cosmticos e de alimentos, o maior mercado na indstria de petrleo, na qual tais
componentes podem ser utilizados na limpeza e biorremediao de mares e solos contaminados
com petrleo, na remoo de resduos de leo em tanques de armazenamento e na recuperao
do produto.
Este trabalho visou o estudo de diversas tcnicas desenvolvidas na biodegradao e
biorremediao de petrleo, empregando bactrias produtoras de biossurfactantes,
possibilitando, assim, uma anlise dos mtodos mais eficazes e promissores na resoluo de um
problema histrico que causa grandes prejuzos indstria petrolfera e ao meio ambiente.

12
1.1. JUSTIFICATIVA

O crescimento populacional e, consequentemente, o aumento da demanda por petrleo

e seus derivados, so fatores que mantm a indstria petrolfera em constante alta. A intensa
explorao de petrleo, associada a um aumento da conscincia ambiental, levou a indstria
energtica, juntamente com muitos pesquisadores, a voltar sua ateno para biossurfactantes:
compostos naturais, biodegradveis, no txicos e biocompatveis, sintetizados por
microrganismos aerbicos, altamente eficazes na remediao de stios contaminados por
hidrocarbonetos.
A biodegradao de petrleo, no ambiente marinho, ocorre naturalmente por diversas
populaes bacterianas, que determinam o destino final dos hidrocarbonetos. No entanto, a
velocidade pela qual esse processo ocorre muito lenta, incapaz de remediar, a curto prazo, o
impacto causado na fauna e flora marinha e costeira, uma vez que a biodegradao por ao de
microrganismos pode levar at um ano para ocorrer (POFFO, 2000). Visando acelerar esse
processo, de modo a superar os fatores limitantes e remover eficazmente os hidrocarbonetos
contaminantes de uma determinada rea, pesquisadores vm desenvolvendo muitas tcnicas,
dentre as quais podemos mencionar a semeao de culturas bacterianas, a alterao do meio
pela adio de inculo e nutrientes necessrios para a multiplicao celular, a imobilizao de
clulas em cpsulas de quitina, hidrogel ou outros materiais polimricos, ou at a adio de
biossurfactante ao meio, de modo a aumentar o acesso dos microrganismos ao substrato e
potencializar a sua degradao.
Os custos envolvidos na remediao de contaminao por leo e seus derivados,
devido a acidentes e vazamentos, aliados preocupao acerca do impacto ambiental causado
por componentes txicos e agressivos como hidrocarbonetos aromticos, impulsionam diversas
pesquisas na rea. Dessa forma, a aplicabilidade de biossurfactantes, compostos promissores na
biodegradao de petrleo, amplamente estudada.

12
1.2. OBJETIVOS

Gerais: Contribuir para o entendimento da aplicabilidade das tcnicas de

biodegradao e biorremediao de petrleo a partir do uso de bactrias produtoras de
biossurfactantes.

Especficos:

Descrever os efeitos do petrleo no ambiente marinho;

Descrever tcnicas de biorremediao;

Descrever os processos metablicos de degradao de microrganismos;

Descrever as tcnicas empregadas na biorremediao de reas contaminadas por

hidrocarbonetos provenientes de petrleo e sua aplicabilidade.

12
2. REVISO BIBLIOGRFICA

2.1. O PETRLEO

O petrleo uma mistura complexa de compostos orgnicos de ocorrncia natural em

rochas arenticas ou calcrias de bacias sedimentares existentes em vrias partes do mundo,
cuja composio varia de campo para campo e at entre poos do mesmo campo (MACHADO,
2012). Sua aparncia pode variar de lquido completamente fluido de cor amarelo-palha at
material pastoso ou semisslido de cor preta, no entanto esse produto constitudo
essencialmente por hidrocarbonetos, alm de pequenas quantidades de compostos derivados de
enxofre, nitrognio e oxignio, considerados impurezas (CORREA, 1989).
A denominao hidrocarboneto se aplica a uma grande variedade de compostos
constitudos de carbono e hidrognio, diferentes entre si de acordo com as ligaes qumicas
realizadas pelos tomos de carbono. Eles possuem uma poro hidroflica, composta de
aminocidos ou polissacardeos, e uma poro hidrofbica, geralmente composta de cidos
graxos saturados ou insaturados (MONTAGNOLLI, 2011). Os hidrocarbonetos encontrados no
petrleo pertencem s sries dos alcanos lineares, alcanos cclicos e aromticos. Quando
possuem em suas configuraes a combinao de uma ou mais dessas sries, podem ser
denominados hidrocarbonetos mistos (TONINI; DE REZENDE; GRATIVOL, 2010).

2.1.1. Ocorrncia e origem do petrleo

O petrleo encontrado em formaes rochosas que datam de dez a quatrocentos

milhes de anos, entretanto, o mecanismo de transformao de organismos marinhos em
petrleo ainda no foi completamente explicado. Campos e Leontsinis (1990) apresentam trs
teorias a respeito da origem do petrleo: as teorias orgnica, inorgnica e da radioatividade.
De acordo com a teoria orgnica, microrganismos microscpicos constituintes do
plncton marinho podem ser depostos no fundo de mares profundos e fechados, onde h
inexistncia de correntes fortes e baixa oxigenao. A partir da sedimentao de argilas
provenientes da eroso das costas, as camadas de material orgnico e sedimentos se sobrepem
e sofrem a ao de bactrias anaerbicas, responsveis pela transformao dos carboidratos e
protenas em substncias gasosas e solveis em gua, e num resduo denominado sapropel

12
(NAGAYASSU, 2006). Este resduo consiste em uma espcie de lama putrefata, resultado da
converso de organismos marinhos, como animais e plantas, em matria orgnica.
Ao longo de um milho de anos cerca de 10% desta lama se transforma em betume,
denominao dada aos produtos orgnicos secundrios solveis em solventes orgnicos
comuns. Os restantes 90% se transformam em um composto do tipo polimrico de alto peso
molecular, intimamente associado s rochas que o contm, denominado querognio. Este
corresponde fraco da matria orgnica sedimentar derivada de reas continentais e dos
ambientes marinhos, insolvel nos solventes orgnicos comuns e presente nas rochas,
sedimentos modernos e solos (FERNANDES, 2004). Sob condies especificas de presso e
temperatura, aliadas catlise realizada pelo material constituinte das rochas, o querognio
transformado, ao longo de milhes de anos, em petrleo (CORREA, 1989).
A teoria inorgnica atribui a formao do petrleo s reaes entre a gua, gs
carbnico, carbonatos e carbonetos metlicos, sob condies de temperatura e presso elevadas.
Ela desconsidera a origem baseada em organismos vivos e no explica a existncia no petrleo
de porfirinas, compostos organometlicos de estrutura complexa, os quais so sintetizados por
seres vivos vegetais ou animais (KUTCHEROV et al., 2010).
Pela teoria da radioatividade, a radiao, proveniente de elementos radioativos
existentes na crosta terrestre, teria agido sobre o metano, proveniente da atmosfera primitiva do
planeta, gerando hidrocarbonetos de cadeias mais longas presentes no petrleo. No entanto, a
radiao intensa teria destrudo os compostos oticamente ativos que so encontrados no
petrleo, e resultaria em altos teores de hidrognio e hlio nos gases de petrleo, o que no
ocorre de fato (PASCHOA, 1997). Assim como a teoria inorgnica, a teoria da radioatividade
tambm no explica a existncia de porfirinas, um dos motivos pelos quais a teoria orgnica
melhor aceita na comunidade cientfica (PASCHOA, 1997).

2.1.2. Propriedades fsicas e qumicas do petrleo

Os hidrocarbonetos parafnicos, pertencentes srie dos alcanos, representam uma

grande proporo dos hidrocarbonetos presentes no petrleo e no gs natural. Eles so
caracterizados pela formao de cadeias lineares (mais abundantes) ou ramificadas, compostas
apenas de ligaes simples. Os alcanos so muito estveis e quimicamente inertes e, quando

12
queimados, liberam grande quantidade de calor, o que os caracteriza como excelentes
combustveis (CORREA, 1989).
A srie dos cicloalcanos, representada por hidrocarbonetos naftnicos, composta por
cadeias fechadas em forma de anis contendo trs ou mais tomos de carbono, sendo que as
sries com cinco ou seis tomos so mais comumente encontradas nos petrleos (MACIEL,
2003). As ligaes saturadas das cadeias conferem estabilidade aos compostos, cujas
propriedades se assemelham s dos alcanos lineares. Esses componentes so removidos mais
rapidamente pela degradao microbiolgica no ambiente marinho (POFFO, 2000).
Por fim, os hidrocarbonetos compostos por anis benznicos, dotados de seis tomos
de carbono ligados entre si por valncias simples e duplas alternadas, representam a srie dos
aromticos. Eles so compostos relativamente solveis em gua e altamente txicos para
plncton marinho (CETESB, 2008).
Na Figura 1 so apresentados alguns hidrocarbonetos que compem o petrleo:
tetradecano (um n-alcano), pristano (um alcano ramificado), metilciclopentano, ciclohexano e
hopano esto presentes na frao saturada do leo cru, enquanto que os outros compostos fazem
parte da frao aromtica.
Figura 1: Hidrocarbonetos representativos na composio do petrleo

Fonte: Montagnolli (2011, p. 29)

12
Algumas propriedades fsicas e qumicas dependem do nmero e forma pela qual
outros elementos como nitrognio, oxignio, enxofre, vandio, sdio, nquel e ferro, se ligam
aos hidrocarbonetos. Sua viscosidade, por exemplo, depende do teor de fraes leves
(componentes aromticos) e outros elementos, alm da temperatura ambiente. medida que a
temperatura aumenta, a viscosidade do fluido diminui, e vice-versa (CRAIG et al., 2012).
A maioria dos leos mais leve do que a gua, normalmente apresentando densidade
relativa menor que 1,0 devido baixa porcentagem de compostos parafnicos em sua
composio (MACHADO, 2012). A classificao do petrleo baseada na densidade foi
instituda pelas normas do American Petroleum Institute, e ganhou a denominao de grau API,
pela qual, quanto maior for a densidade do petrleo, menor ser o grau API e mais pesado ser
o leo. Logo, quando a densidade menor do que 0,85g/L, eles podem ser classificados como
leos leves (NEIVA, 1986) (Figura 2). Quando a densidade relativa baixa, um decrscimo da
tenso superficial (fora de atrao entre as molculas na superfcie de um lquido) ocasiona
elevao da temperatura e resulta em alta taxa de espalhamento na superfcie da gua ou do
solo (POFFO, 2000).

Figura 2: Classificao de petrleo baseada na densidade (Grau API)

Fonte: Machado (2012, p.11)

12
O petrleo apresenta uma solubilidade em gua extremamente baixa, geralmente
menor do que 5 ppm (CAMPOS; LEONTSINIS, 1990). Logo, apenas uma pequena parte dos
hidrocarbonetos solveis e dos vrios sais minerais presentes no leo so dissolvidos no meio
aqutico, o que influencia no nvel de toxicidade que esses compostos apresentam para
organismos aquticos, uma vez que cerca de 10 a 40% dos componentes do petrleo so
recalcitrantes, ou seja, persistentes no ambiente (CARVALHO, 2006).
Quando emulsionado, ou seja, misturado com gua, o leo pode permanecer na
superfcie do mar por horas ou at sete dias aps o vazamento, de acordo com a viscosidade, a
fluidez, o volume vazado e as condies climticas e oceanogrficas (ITOPF, 1986).

2.1.3. Aplicaes do petrleo e subprodutos

O aumento na demanda mundial por leo cru crescente, e est relacionado ao

aumento populacional e industrializao contnua nos pases em desenvolvimento. Apesar do
aumento da conscincia ambiental e preocupao com a explorao de recursos naturais
esgotveis, a demanda anual sofre um aumento de aproximadamente 1,6% (Annual Petroleum
Consuption, 2013). De acordo com os dados do Petroleum Industry Research Associates
(PIRA Energy Group), estima-se que em 2025 ultrapasse 115 milhes de barris por dia.
As aplicaes do petrleo bruto so limitadas, entretanto, a partir do refinamento e
etapas de destilao fracionada, extrao, catlise e purificao possvel convert-lo em uma
vasta diversidade de produtos e derivados, aplicveis desde o setor de energia ao de produtos
qumicos e de materiais (KIMURA, 2005), como pode ser observado na Figura 3.

12
Figura 3: Derivados de Petrleo e suas aplicaes

Fonte: Montagnolli (2011, p. 35)

Os derivados de petrleo podem ser classificados em energticos e no energticos. A

primeira categoria engloba os combustveis, como GLP, gasolina A, gasolina de aviao,
querosene iluminante, QAV, leo diesel e leo combustvel, enquanto que a segunda categoria
engloba graxas, lubrificantes, parafinas, asfaltos, solventes, coque, nafta, extratos aromticos,
gasleo de vcuo, leos leves de reciclo, RAT, diluentes, n-parafinas, minerais betuminosos e
outros subprodutos (MACHADO, 2012). O sistema energtico internacional fortemente
dependente de combustveis fsseis (carvo, petrleo e gs), sendo que o petrleo constitui a
principal fonte de energia mundial sem produtos substitutos prximos em toda a gama de usos
e aplicaes, podendo atingir 27,5% da matriz energtica at 2035 (BRITISH PETROLEUM,
2015).

12
2.1.4. Etapas da explorao e refino do petrleo

As atividades de extrao, refinamento, estocagem e transporte representam um grande

risco ambiental devido ocorrncia de vazamentos rotineiros, derramamentos acidentais ou
intencionais (ITOPF, 2014).
A atividade de perfurao realizada a partir de sondas de perfurao, constitudas de
tubulaes de ao, broca e sondas, que permitem delimitar reas com maior probabilidade de
existncia de um campo de petrleo. Em alto mar, podem ser empregadas plataformas fixas ou
flutuantes, alm de navios-sonda. Dentre os riscos envolvidos no trabalho de perfurao, podese citar erupes de gs e leo, as quais podem danificar os equipamentos de perfurao e
oferecem risco de exploso (KIMURA, 2005).
Aps diversos estudos geolgicos e geofsicos, ocorre a perfurao de poos de
prospeco e, caso o campo se revele economicamente vivel, inicia-se a fase de produo, que
pode ser executada por sistemas flutuantes de produo (FPS Floating Production Systems),
navios de grande porte com capacidade para produzir, processar e/ou armazenar at 200 mil
barris petrleo por dia (MACHADO, 2012).
O escoamento de petrleo, nacional ou importado, de campos produtores para
abastecimento das refinarias, possibilitado a partir de dutos e terminais, pelos quais ocorre o
abastecimento da rede domstica de distribuio de derivados produzidos (PETROBRAS,
1984).
O transporte pode ser realizado por sistemas constitudos de tubulaes e estaes de
bombeamento, navios petroleiros, rodovias ou at ferrovias. Os dutos utilizados no transporte
de petrleo e derivados podem ser classificados em terrestres ou submarinos, de acordo com o
local onde se encontram, e oleodutos ou gasodutos, de acordo com o produto transportado
(Terminais e Oleodutos, [s.d.]). Eles atravessam mares, mangues, reservas ecolgicas e
regies habitadas, elevando, assim, os riscos socioambientais associados ao transporte de
petrleo. Metade da produo mundial transportada pelo mar, e estima-se que mais de 2
milhes de toneladas so perdidas anualmente por acidentes na manipulao com petrleo
(READMAN ET AL 1992).
Nas etapas de refino, o petrleo separado em diferentes tipos de hidrocarbonetos por
meio de aquecimento progressivo do leo e remoo de impurezas. Esse processo pode ser
dividido em quatro grandes grupos: processos de separao, converso, tratamento e auxiliares.

12
Os produtos finais das estaes e refinarias so comercializados com as distribuidoras
(CARDOSO, 2005).

2.1.5. Acidentes petrolferos no mundo

As causas e circunstncias de acidentes de vazamento de petrleo so variadas e

podem ter um efeito significativo no volume final de leo derramado. Pequenos e mdios
vazamentos correspondem a 95% de todos os incidentes registrados, dentre os quais, 40% e
29% corresponde, respectivamente, a ocorrncias durante operaes de carga e descarga que
normalmente acontecem em portos e terminais de leo. Nesta categoria, 46% dos incidentes
ocorrem por falhas mecnicas ou furos no casco (ITOPF, 2014).
De acordo com os relatrios da base de dados The International Tanker Owners
Pollution Federation Limited (ITOPF), vazamentos maiores, superiores a 700 toneladas de
petrleo, so responsveis por 5% de todos os incidentes registrados, e sua ocorrncia diminuiu
drasticamente nos ltimos 45 anos. Aproximadamente 50% dos grandes vazamentos,
registrados entre 1970 e 2014, ocorreram enquanto os navios estavam navegando em mar
aberto; colises e aterramentos correspondem por 59% das causas desses acidentes. As mesmas
causas so responsveis por uma porcentagem ainda maior de incidentes, nos casos em que se
navegava por guas interiores ou mares costeiros (ITOPF, 2014).
Nos ltimos 70 anos, mais de 80 episdios de mdia e alta gravidade lanaram nos
mares e oceanos cerca de 7,4 bilhes de litros de petrleo, volume correspondente ao volume
de quase 3000 piscinas olmpicas. Os dez maiores desastres, verificados at 2010, respondem
por 68% desse total (BARBOSA, 2010) (Tabela 1).

12
Tabela 1: Os 10 maiores acidentes petrolferos no mundo
Local
Poo da BP (Guerra do
Golfo, Kuwait, Golfo
Prsico)

Volume
1 milho e 360 mil
toneladas
(753
piscinas olmpicas)

Ixtoc I (Campeche, Golfo

do Mxico)

454 mil toneladas

(251
piscinas
olmpicas)

Poo Fergana
(Uzbequisto)

Valley

258 mil toneladas

(158
piscinas
olmpicas)

Atlantic Empress (Tobago,

Caribe)

287 mil toneladas

(159
piscinas
olmpicas)

Nowruz
Prsico)

ABT Summer (Angola)

260 mil toneladas

(144
piscinas
olmpicas)

Castillo de Bellver (frica

do Sul)

252 mil toneladas

(139
piscinas
olmpicas)

Amoco Cadiz (Frana)

223 mil toneladas

(123
piscinas
olmpicas)

M T Haven (Itlia)

144 mil toneladas (79

piscinas olmpicas)

10

Odyssey (Canad)

132 mil toneladas (73

piscinas olmpicas)

(Ir,

Golfo

260 mil toneladas

(144
piscinas
olmpicas)

Contexto
O pior vazamento de petrleo da histria foi
provavelmente deliberado, causado pela abertura
das vlvulas dos poos e oleodutos por foras
iraquianas aps se retirarem do Kuwait, em
janeiro de 1991. Causou enormes danos vida
selvagem no Golfo Prsico.
A plataforma mexicana Ixtoc 1 se rompeu na
Baa de Campeche, em junho de 1979. A enorme
mar negra afetou, por mais de um ano, as costas
de uma rea de mais de 1600km.
Um dos maiores acidentes terrestres j
registrados, em maro de 1992. A exploso de
um poo no Vale da Fergana afetou uma das
reas mais densamente povoadas e agrcolas da
sia Central.
Durante uma tempestade tropical, em julho de
1979, dois superpetroleiros gigantescos
colidiram entre si prximos ilha caribenha de
Tobago. O acidente matou 26 membros da
tripulao e despejou milhes de litros de
petrleo bruto no mar.
Durante a Primeira Guerra do Golfo, em
fevereiro de 1983, um tanque colidiu com a
plataforma de Nowruz, causando o vazamento
dirio de 1500 barris de petrleo.
O superpetroleiro Libria ABT Summer
explodiu na costa angolana em 28 de maio de
1991 e matou cinco membros da tripulao.
Milhes de litros de petrleo vazaram no Oceano
Atlntico, afetando a vida marinha.
Depois de um incndio a bordo, seguido de
exploso, o navio espanhol rachou-se ao meio,
liberando cerca de 200 milhes de litros do leo
na costa de Cape Town, na frica do Sul (agosto
de 1983). Por sorte, o vento forte evitou que a
mancha alcanasse o litoral, minimizando os
efeitos ambientais do desastre.
Em maro de 1978, o supertanque Amoco Cadiz
rompeu-se ao meio perto da costa noroeste da
Frana. O vazamento matou milhares de
moluscos e ourios do mar.
O navio gmeo do Amoco Cadiz, um
superpetroleiro, explodiu e naufragou prximo
costa de Gnova, em abril de 1991, matando seus
tripulantes. A poluio na costa mediterrnea da
Itlia e da Frana se estendeu pelos 12 anos
seguintes.
O poo petrolfero, localizado na provncia
canadense de Newfounland, explodiu durante
uma operao de perfurao da plataforma
americana Odyssey. Uma pessoa morreu e outras
66 foram resgatadas sem ferimentos.

Fonte: Elaborada pelo autor com base nos dados de BARBOSA (2010)

12
Muitos outros acidentes envolvendo vazamentos de petrleo em menor porte foram
registrados (EXAME, 2010). Um dos mais marcantes ocorreu em abril de 2010, aps a exploso
da plataforma Deepwater Horizon no poo Macondo, no Golfo do Mxico (EXAME, 2010).
Onze mil funcionrios perderam a vida e aproximadamente 4 milhes e 900 mil barris (780
milhes de litros) de petrleo vazaram ao longo de 87 dias, afetando inmeras praias e
ecossistemas sensveis ao longo de 1200km da costa norte-americana (VIEGAS, 2010).
De acordo com dados do ITOPF, estima-se que entre 1970 e 2014 cerca de
5,74 milhes de toneladas de leo foram perdidas como resultado de incidentes petrolferos.
Entretanto, houve uma reduo significativa no nmero de incidentes entre a dcada de 1970 e
2010, de uma mdia de 24,5 incidentes por ano para 1,8 incidentes por ano, respectivamente.
O volume de leo derramado tambm sofreu uma reduo drstica, de 287 mil toneladas no
acidente de 1980 da Atlantic Empress, para 11 mil toneladas no acidente de 2008 da Hebo Spirit
(ITOPF, 2014).
A melhoria nas operaes que envolvem a explorao, transporte e armazenamento de
petrleo refletem claramente no nmero de acidentes, os quais vem ocorrendo em menor
nmero e gravidade nos ltimos anos. No entanto, o risco de acidentes ainda permeia as
operaes petrolferas, e a contaminao de ecossistemas marinhos e costeiros inevitvel
(CRAIG et al., 2012). A implementao de leis que exijam planos de ao para controle de
acidentes e o desenvolvimento de tecnologias capazes de melhorar os instrumentos de resposta
a vazamentos de leo so de extrema importncia para reduzir o impacto ambiental e social
desses acidentes (PEREIRA; FREITAS, 2012).

2.1.6. Acidentes petrolferos no Brasil

No Brasil, o primeiro registro de um acidente envolvendo petrleo se refere ao navio

Sinclair Petrolore, em dezembro de 1960, com vazamento estimado de 66,53 m de petrleo
no mar aps exploso que o afundou, prximo da Ilha de Trindade, Esprito Santo. Outras trs
ocorrncias de grande magnitude foram registradas na dcada de 1970, no Canal de So
Sebastio (litoral paulista), envolvendo os petroleiros Takimyia Maru, em 1974, e Brazilian
Marina, em 1978, e na Baa de Guanabara (litoral carioca), com o petroleiro Tarik Ibn Zyiad,
em 1975. Os acidentes foram atribudos a coliso dos navios petroleiros com rocha submersa,

12
e estima-se que, em cada um destes episdios, vazaram 6000 toneladas de petrleo (POFFO,
2000).
Um dos casos que causou maior repercusso, devido ao impacto ambiental causado,
foi o rompimento do oleoduto na Baia de Guanabara em janeiro de 2000, entre a Refinaria
Duque de Caxias e o Terminal da Ilha dgua. O vazamento de 1,300 milhes de litros de leo
resultou em uma mancha que se espalhou por 40 quilmetros quadrados, levando
contaminao de praias, costes, manguezais, unidades de conservao e patrimnio histrico,
alm de afetar a fauna local, representada por aves aquticas e crustceos, e a economia, baseada
em atividades de pesca, extrativismo e turismo. A Petrobras pagou uma multa de R$ 35 milhes
ao Ibama e investiu R$ 15 milhes na revitalizao da baa (ANDRADE, 2014).
Em julho de 2000, a ruptura da junta de expanso de uma tubulao que ligava a
Refinaria Presidente Getlio Vargas Refinaria Araucria, da Petrobras, resultou no vazamento
de 4 milhes de litros de leo cru, o qual se espalhou pelos rios Barigui e Iguau e atingiu a
cidade de Balsa, no Paran (NAGAYASSU, 2006).
Em maro de 2001, na Bacia de Campos em Maca, Rio de Janeiro, duas exploses
em um tanque de leo e gs da plataforma P-36 na poca, a maior em termos de produo de
petrleo em alto mar resultaram no alagamento das instalaes. A plataforma atingiu uma
inclinao de 16 graus e, apesar das tentativas de salvamento, naufragou levando cerca de 1,2
milho de litros de leo diesel e 350 mil litros de petrleo para o oceano, alm de ocasionar a
morte de onze brigadistas. De acordo com a Comisso de Investigao da ANP da Diretoria de
Postos e Costas (DPC), a no conformidade quanto a procedimentos operacionais, de
manuteno e de projeto, foi responsvel pelo vazamento, que se espalhou rapidamente por
uma distncia de, aproximadamente, 150 quilmetros da costa (DPC/ANP, 2001).
Dados do Ibama mostram que, de 2010 a junho de 2014, ocorreram 285 acidentes
ambientais em plataformas, embarcaes e refinarias da Petrobras. O volume de ocorrncias
registradas subiu de 41, em 2010, para 74 no ano seguinte. Apesar de sofrer uma queda para 60
acidentes, em 2012, as ocorrncias voltaram a crescer em 2013, chegando a 72 acidentes
(BRESCIANI; SASSINE, 2014).
Dentre esses acidentes, pode-se destacar o caso ocorrido em novembro de 2011, na
Bacia de Campos em Maca (Rio de Janeiro), onde um poo de petrleo da empresa americana
Chevron foi responsvel pelo vazamento de 588 mil litros de leo no mar. As causas relatadas
pela ANP indicaram sete fissuras no poo e apontaram 25 falhas da Chevron, inclusive

12
descumprimento das regulamentaes. O vazamento durou 10 dias e ocorreu a 120 quilmetros
da costa do Rio de Janeiro, em guas ultra profundas, sem qualquer ferimento aos operrios da
sonda e resultou em uma mancha de leo com 18 quilmetros de extenso (CABRAL;
TEIXEIRA, 2012).

2.1.7.

Legislao no Brasil

No Brasil so legalmente previstos trs tipos de planos (apresentados a seguir) para o

combate poluio causada por lanamento de leos derivados de petrleo em guas
brasileiras, que podem ser acionados de forma complementar e cujo suporte legal est contido
na Lei n 9,966/2000, que dispe sobre a preveno, o controle e a fiscalizao da poluio
causada por lanamento de leo em guas sob a jurisdio nacional (AMORIM, 2012).

Plano de Emergncia Individual (PEI), obrigatrio para cada instalao, exigido

e aprovado no mbito Licenciamento Ambiental.

Plano de rea (PA), consolidao de diversos Planos de Emergncia Individuais

de empreendimentos localizados em determinada rea geogrfica, aprovado por
rgo de Licenciamento Ambiental.

Plano Nacional de Contingncia (PNC), adotado em acidentes de maiores

propores, onde a ao individualizada dos agentes no se mostra suficiente
para a soluo do problema.

Atravs do Plano Nacional de Contingncia so previstas aes envolvendo 17

ministrios, cujos objetivos envolvem a reduo do tempo de resposta em caso de impactos
ambientais relevantes (DPC/ANP, 2001). O PNC composto por uma autoridade nacional,
responsvel por coordenar todas as suas atividades e representada pelo Ministrio do Meio
Ambiente; um comit executivo, responsvel pela proposio das diretrizes para
implementao do Plano e composta pelo MMA (Ministrio do Meio Ambiente), MME
(Ministrio de Minas e Energia), Ibama (Instituto Brasileiro de Meio Ambiente), ANP (Agncia
Nacional de Petrleo), MIN (Ministrio da Integrao Nacional) e MT (Ministrio dos
Transportes); um Grupo de Acompanhamento e Avaliao (GAA), responsvel pelo
acompanhamento de qualquer acidente, independente do porte, composto pela Marinha, pelo
Ibama e pela ANP; um Coordenador Operacional, designado pelo GAA para coordenar o

12
acompanhamento do acidente e, se necessrio, propor o acionamento do PNC; e, por fim, um
Comit de Suporte, que dar apoio aos demais quando demandado, composto por representantes
de diversos rgos e instituies federais (POFFO, 2000).
A principal figura executiva o coordenador operacional, responsvel pelo comando
das aes imediatas ao acidente. No caso de incidentes de poluio por leo em guas abertas
ou interiores, compreendidas entre a costa e a linha de base reta (a partir da qual se mede o mar
territorial), a Marinha assume o papel de coordenador operacional. Em incidentes ocorridos em
guas interiores, excetuando-se as guas compreendidas entre a costa e a linha de base reta, o
Ibama assume a coordenao. E, enfim, nos casos de incidentes ocasionados a partir de
estruturas submarinas de perfurao e produo de petrleo, a ANP responsvel pela
coordenao (AMORIM, 2012)
Desde a publicao da lei 9.966, em abril de 2000, apenas o acidente ocorrido no
Paran, em julho daquele mesmo ano, a partir do qual 4 milhes de litros de leo vazaram e
atingiram os rios Barigui e Iguau, apresentou caractersticas que justificariam o acionamento
do PNC. Os outros acidentes ocorridos no pas, desde ento, no apresentaram significncia
para o acionamento do PNC, inclusive os recentes acidentes ocorridos no Campo de Frade
(operado pela Chevron) e na rea do prospecto Carioca Nordeste (operado pela Petrobras), nas
bacias de Campos e Santos, respectivamente. O impacto causado no acidente do Campo de
Frade, em novembro de 2011, reativou a discusso do Plano, de forma a reavaliar seu texto e
incorporar procedimentos at ento no previstos (CALIXTO, 2011).

2.1.8.

Comportamento do leo no mar

A partir da liberao do petrleo no ambiente marinho interaes com a gua do mar

levam a uma srie de mudanas fsicas e qumicas. O espalhamento das manchas de leo,
formadas nas primeiras horas de contato com o mar, depende do volume e viscosidade do
produto envolvido, alm de outros fatores, como a disperso mecnica, ocasionada pela
passagem de embarcaes sobre as manchas. A disperso de leos leves, por exemplo, ocorre
nas primeiras 24-48 horas aps o vazamento, enquanto que nos leos pesados esse processo
mais lento e pode se estender at 168 horas (ITOPF, 1986).
Alguns tipos de leo formam emulses imediatamente aps o contato com a gua do
mar, o que pode aumentar o volume do poluente de trs a quatro vezes e atingir um teor de 70

12
a 80% de gua em 24 horas. As emulses resultam em alterao do aspecto e cor originais dos
produtos petrolferos, retardando os processos que dissipam o leo e tornando-o mais
persistente (IIDA et al., 2007).
As manchas de leo podem se fragmentar em fraes menores pelo processo de
disperso, o qual varia de acordo com a viscosidade do produto envolvido e a tenso interfacial
leo-gua, estando sujeito ventos, ondas e correntes martimas. Dessa forma, leos mais
fluidos, expostos s condies de mar agitado, podem se dispersar naturalmente em um a dois
dias, enquanto que produtos mais viscosos, que formam emulses relativamente estveis na
superfcie da gua, tendem a se dispersar menos e podem permanecer no mar por quatro a sete
dias (MORAIS, 2012).
O leo, exposto luz solar e em contato com o oxignio, est sujeito ao processo de
oxidao, que ocorre mais facilmente em manchas pouco espessas. A reao dos
hidrocarbonetos com o oxignio pode resultar em produtos solveis ou, pelo contrrio, outros
mais persistentes (CRUZ, 2012).
De acordo com a porcentagem de componentes volteis presentes no produto e outras
propriedades, como o espalhamento na superfcie do mar, aliados temperatura do ar e da gua,
umidade relativa do ar, velocidade dos ventos e correntes marinhas, a evaporao pode ocorrer
em menor ou maior extenso. Produtos leves, como gasolina e querosene, podem evaporar
rapidamente em poucas horas e, no entanto, apresentam alta toxicidade e oferecem riscos de
incndios e exploses. Pelo contrrio, produtos mais pesados devido ao alto teor de graxas
apresentam baixas taxas de evaporao e oferecem menores riscos segurana operacional
(SZEWZYK, 2006).
A solubilidade do leo na gua depende tanto da composio qumica quanto de
fatores como espalhamento, velocidade de disperso das manchas, turbulncia do mar e
temperatura ambiente. Os hidrocarbonetos aromticos se dissolvem mais facilmente em gua,
no entanto, so volteis e evaporam rapidamente. J os componentes pesados do leo so,
geralmente, insolveis em gua, resultando em baixa dissoluo (CRAIG et al., 2012).
A adeso de partculas de sedimento ou da matria orgnica ao leo e produtos muito
densos, que sofrem grande influncia climatolgica e outros processos de interao, pode levar
formao de pelotas ou placas de piches pesadas que afundam na coluna de gua e depositam-

12
se no fundo do mar. Aps turbulncia do mar, ocasionada por chuvas e ventos fortes, essas
placas podem ressurgir em costas distantes da origem do vazamento (CETESB, 2008).
As fraes menores formadas na disperso do leo podem ser mais facilmente
degradadas por microrganismos marinhos presentes na gua do mar. J no caso de sedimentos
aquticos, a degradao mais lenta devido ausncia de luz e oxignio, principalmente no
interior de esturios, baas e enseadas abrigadas. Esse processo, denominado biodegradao,
pode ser afetado pela temperatura e disponibilidade de oxignio e nutrientes (compostos de
nitrognio e fsforo), e depende do nmero de microrganismos existentes no meio e sua
capacidade de utilizar os hidrocarbonetos presentes no petrleo como fonte de carbono e
energia para suas reaes metablicas (CALIXTO, 2011).
Dentre os processos mencionados para descrio do comportamento do petrleo no
mar, os mais importantes aps a sua liberao so: espalhamento, evaporao, disperso,
emulsificao e dissoluo, que podem ocorrer em um a sete dias aps o contato com a gua.
Os processos de foto-oxidao e sedimentao podem ocorrer em at um ms aps o contato
do produto com a gua, enquanto que a biodegradao pode levar uma semana a um ano para
ocorrer. Eles so processos que, a longo prazo, determinam o destino final do leo (POFFO,
2000).

2.1.9.

Impacto nos organismos marinhos e costeiros

As manchas de leo podem afetar diretamente os ecossistemas marinhos e costeiros,

por ao fsica, como recobrimento e asfixia, ou por ao qumica, pela toxidade dos
componentes qumicos fauna e flora. Seu efeito tambm pode ser indireto, pela interferncia
em processos como fotossntese, respirao e ciclagem de minerais (TOSCAN et al., 2012).
O recobrimento de animais e vegetais por leos pesados e viscosos pode impedir as
trocas necessrias com o ambiente, como respirao, excreo, alimentao e fotossntese,
assim como prejudicar a temperatura do organismo e sua locomoo (LOPES, 1998).
A toxidade de componentes do petrleo, como benzeno, tolueno e xileno (aromticos),
responsvel pela mortalidade aguda, especialmente nos primeiros dias aps o derrame. As

12
larvas e recrutas, por exemplo, so 100 vezes mais sensveis ao leo do que adultos
(FLOODGATE, 1984).
Dentre seus efeitos, pode-se mencionar a reduo da quantidade de ovos com sucesso
de fertilizao, ocasionando efeitos a mdio prazo na reposio de indivduos das populaes e
desencadeando uma perturbao nos recursos alimentares de grupos trficos superiores. A
reduo na variedade de espcies e alterao na composio das espcies resistentes e
oportunistas, com aumento nas densidades populacionais, so, portanto, efeitos esperados nas
comunidades costeiras. Muitos desses compostos, como o benzopireno e benzantreno,
apresentam tambm comprovado efeito carcinognico, o que os torna capazes de causar
tumores em diversos organismos (CALIXTO, 2011). Alm disso, a absoro de compostos
txicos pelas mucosas e membranas biolgicas, ou at a ingesto de gua do mar contaminada,
pode levar bioacumulao em altas concentraes nos organismos (CRUZ, 2012).
Muitos efeitos indiretos e sub-letais, como dificuldade na localizao de presas,
problemas na percepo qumica e motora, inibio da desova, aborto, deformao de rgos
reprodutores, perda de membros, alteraes respiratrias, alteraes na taxa de fotossntese,
desenvolvimento de carcinomas, dentre outros, podem ocorrer a mdio ou longo prazo, em
diferentes intensidades, ocasionando a reduo das populaes das espcies atingidas
(SZEWZYK, 2006).

2.2. BIORREMEDIAO

O termo biorremediao refere-se ao uso de microrganismos para detoxificar reas

contaminadas por compostos biodegradveis (CRAIG et al., 2012). Seu objetivo principal
minimizar o impacto das substncias persistente no ambiente, a partir da criao de condies
favorveis ao crescimento e atividade biolgica. Na dcada de 80, as tecnologias de
biorremediao foram introduzidas como uma alternativa ambientalmente compatvel e de
baixa toxicidade para a degradao de substncias orgnicas e inorgnicas (MONTAGNOLLI,
2011).
A completa mineralizao de poluentes, sem produzir resduos ou subprodutos
recalcitrantes, aliada grande variedade de microrganismos capazes de decompor
hidrocarbonetos so fatores que tornam a biorremediao uma alternativa ambientalmente

12
amigvel e bastante promissora na limpeza e remoo de leo. Diferentemente dos mtodos
fsico-qumicos comumente empregados, no causa danos adicionais comunidade martima e
costeira (SOUZA, 2013).

2.2.1.

Classificao

Os mtodos de biorremediao podem ser classificados em mtodos in situ e mtodos

ex situ. O primeiro caso ocorre pela decomposio do poluente no local contaminado, sob
condies naturais, enquanto que, no segundo, o material poluente removido para ser tratado
em outro local, o qual pode apresentar desvantagens, como aumento do tempo e custo do
processo, exposio ao contaminante e danos ao ambiente (ANGELIM et al., 2013).
Os mtodos in situ podem ocorrer pela utilizao de microrganismos livres,
imobilizados ou apenas dos produtos desses microrganismos. De acordo com a tcnica
empregada, pode-se dividir em biorremediao passiva, bioestimulao, bioventilao,
aplicao de clulas ou enzimas imobilizadas ou aplicao direta de biossurfactantes e
bioamplificao, cuja eficincia pode variar em funo de trs fatores principais: composio
microbiana, caractersticas do contaminante e condies fsicas e qumicas da rea contaminada
(EMTIAZI et al., 2005).

2.2.2.

Tcnicas empregadas

A escolha do mtodo de limpeza a ser empregado deve levar em conta as

caractersticas e sensibilidades do ecossistema impactado, alm do tipo e volume de leo
derramado e fatores tcnicos, tais como acesso e tipo de equipamento passvel de ser utilizado
(OKOH; TREJO-HERNANDEZ, 2006).
Na biorremediao passiva a degradao promovida naturalmente pelos
microrganismos indgenas do meio, um mtodo de baixo custo e simples, que ocorre a uma
baixa taxa reacional, podendo levar at um ano para se completar (VIDALI, 2011).
No caso da bioestimulao ocorre a adio de nutrientes como nitrognio, enxofre e
fsforo ao stio contaminado, nutrientes essenciais para a multiplicao celular e crescimento

12
dos microrganismos indgenas que, no entanto, esto presentes em menos de 3% da composio
de hidrocarbonetos de petrleo (CAMEOTRA; SINGH, 2008).
A bioventilao caracterizada pela adio de gases como oxignio e metano ao meio
atravs de plantas, que servem como substrato para os microrganismos, aumentando a eficincia
de degradao aerbica na subsuperfcie (TONINI; DE REZENDE; GRATIVOL, 2010).
Os microrganismos produzem enzimas especficas que podem atuar nas reaes de
degradao de contaminantes, contribuindo para a detoxificao de reas poludas. Logo, a
aplicao dessas enzimas imobilizadas ao meio contaminado permite que microrganismos
incapazes de sintetiz-las possam efetuar essas reaes metablicas, aumentando assim a
eficincia no processo de converso dos hidrocarbonetos (HOMMEL, 1990).
Outra forma de aumentar a taxa de degradao de compostos do petrleo pela
aplicao direta de biossurfactantes ao meio, de forma a modificar caractersticas dos
hidrocarbonetos como baixa solubilidade e elevada hidrofobicidade, aumentando a
disponibilidade de substratos insolveis e facilitando seu deslocamento pela membrana celular
dos microrganismos (SILVA et al., 2014).
O mtodo de bioamplificao uma das tecnologias mais bem sucedidas, que ocorre
pela inoculao de stios contaminados com culturas de microrganismos hidrocarbonoclsticos
especficos, os quais so semeados pela rea contaminada em grande quantidade, a fim de
acelerar a eficincia do processo de biodegradao (CRAIG et al., 2012). Entretanto, a biomassa
microbiana produzida em biorreatores sob condies timas, completamente diferentes dos
fatores biticos e abiticos do local contaminado. Para que esse mtodo seja eficaz, necessrio
utilizar microrganismos que sejam funcionalmente ativos sob condies adversas e possam se
adaptar a ambientes inspitos (SZEWZYK, 2006).
Dentre as abordagens utilizadas no mtodo de bioamplificao pode-se citar o uso de
microrganismos engenheirados, bioamplificao de genes e microrganismos indgenas, alm
da imobilizao de clulas em suportes polimricos (ANGELIM et al., 2013).

2.2.3.

Mecanismo da degradao de hidrocarbonetos de petrleo

A degradao de hidrocarbonetos pode ocorrer por trs vias metablicas: respirao

aerbia, respirao anaerbia e via fermentativa (DAZ, 2004).

12
Grande parte dos poluentes orgnicos degradada mais rapidamente e completa sob
condies aerbicas, quando o oxignio o aceptor final de eltrons. A Figura 4 apresenta as
etapas do processo degradativo.

Figura 4: Etapas do processo de degradao aerbica de

hidrocarbonetos de petrleo

Fonte: Das; Chandran (2011)

Primeiramente, ocorre um ataque intracelular dos poluentes orgnicos que depende de

reaes enzimticas de ativao e incorporao de oxignio, catalisadas por oxigenases e
peroxidases. Quando h a incorporao de uma molcula de oxignio, a enzima monoxigenase
ataca os substituintes metil do hidrocarboneto, permitindo a degradao de tolueno e xilenos.
Caso haja a incorporao de duas molculas de oxignio, a reao de ataque a anis aromticos
realizada pela dioxigenase, o que permite a degradao do benzeno (MONTAGNOLLI,
2011).

12
Em seguida, reaes de degradao perifricas convertem o material orgnico, passo
a passo, em intermedirios de vias metablicas centrais, como o ciclo do cido tricarboxlico.
A biossntese de biomassa celular ocorre a partir de metablitos precursores, como acetil-coA,
sucinato e piruvato, a partir de acares sintetizados por glucognese (FIELD et al., 1995).
A funo de aceptor final de eltrons pode ser desempenhada por outros substratos
inorgnicos, como ocorre na respirao anaerbia. Neste caso, o CO2 reduzido a metano,
sulfato reduzido a sulfeto e nitrato a nitrognio molecular ou on amnio. Quando substratos
fosforilados tem a funo de aceptores finais de eltrons, a degradao ocorre por via
fermentativa e resulta em compostos como CO2, acetato, etanol, propionato e butirato
(ENGLERT; KENZIE; DRAGUN, 1993).
A adeso de clulas microbianas ao substrato e a produo de biossurfactantes so
alguns dos mecanismos envolvidos no processo de degradao. Apesar de no se conhecer o
mecanismo associado adeso das clulas a gotculas de leo, a produo de biossurfactantes
amplamente estudada (HOMMEL, 1990).
Biossurfactantes pertencem ao grupo de substncias tensoativas produzidas por
microrganismos, capazes de reduzir a tenso superficial de misturas aquosas de
hidrocarbonetos, aumentando o acesso de microrganismos ao substrato e facilitando a
ocorrncia de reaes de degradao (OLIVEIRA, 2010).
A formao de estruturas globulares a partir de agregados de molculas anfipticas
(que apresentam simultaneamente caractersticas polares e apolares), denominadas micelas,
permite que os hidrocarbonetos se solubilizem em gua. Elas atuam no remanejamento
molecular, atravs do acmulo na superfcie de compostos insolveis, modificando as ligaes
de hidrognio, assim como outras interaes hidroflicas e hidrofbicas, o que leva a um
aumento

da

biodisponibilidade

de

substrato

e,

consequentemente,

aumento

da

biodegradabilidade (EMTIAZI et al., 2005). A Figura 5 apresenta a estrutura dos

biossurfactantes e o mecanismo de ao de micelas.

12
Figura 5: Estrutura dos biossurfactantes e formao de micelas

Fonte: Montagnolli (2011, p. 63)

Os biossurfactantes podem ser divididos em lipopolissacardeos, lipopeptdeos,

glicolipdeos, fosfolipdeos, cidos graxos e lipdeos neutros. Os glicolipdeos, hidrxi-cidos
graxos ligados a molcula de acar por ligao glicosdica, se dividem ainda em trealose,
soforolipdeos e ramnolipdeos (SOUZA, 2013). A Tabela 2 apresenta alguns tipos de
biossurfactantes produzidos por microrganismos.

12
Tabela 2: Biossurfactantes produzidos por microrganismos

Fonte: Montagnolli (2011, p. 67)

A demanda mundial de surfactantes aumenta a uma taxa de 35% ao ano (KIM et al.,
2000). Atualmente, a grande maioria dos surfactantes quimicamente sintetizados so derivados
do petrleo, o que, diante do aumento na conscincia ambiental, torna crescente o interesse por
surfactantes biodegradveis e produzidos por microrganismos. No entanto, o maior obstculo
na produo e aplicao de biossurfactantes o alto custo de produo, que faz com que essas
substncias no sejam capazes de competir economicamente com os surfactantes qumicos do
mercado (NITSCHKE; PASTORE, 2002).

2.2.4. Microrganismos utilizados na biorremediao

A escolha do microrganismo um dos principais fatores que afeta a eficincia de todos

os mtodos. No entanto, o crescimento celular e a degradao de contaminantes esto sujeitos

12
a fatores biticos e abiticos que limitam a viabilidade celular, tais como: variaes de
temperatura (ou temperaturas extremas), pH, disponibilidade de oxignio dissolvido, salinidade
(condio osmtica), necessidades nutricionais, toxicidade e concentrao do poluente,
competio (intra e interespcie), predao (por protozorios) ou parasitismo entre espcies
nativas e introduzidas, presena de substncias que inibam o crescimento celular, dentre outras
(GOLDSTEIN; MALLORY; ALEXANDER, 1985).
Comparando-se com culturas puras, as culturas mistas apresentam eficincia superior
e maior versatilidade metablica, devido capacidade de degradar uma variedade maior de
hidrocarbonetos e compostos presentes no petrleo, alm de satisfazer as relaes de
cooperao ou sintrofismo de alguns microrganismos (ANGELIM et al., 2013)
Alguns gneros microbianos frequentemente encontrados em ambientes contaminados
por petrleo, que apresentam um bom desempenho na decomposio de substratos complexos,
so

Acinetobacter,

Actinobacter,

Alcaligenes,

Arthrobacter,

Bacillus,

Berjerickia,

Flavobacterium, Methylosinus, Mycobacterium, Mycococcus, Nitrosomonas, Nocardia,

Penicillium,

Phanerochaete,

Pseudomonas,

Rhizoctonia,

Rhodococcus,

Serratia,

Sphingomonas, Trametes e Xanthobacter (OKOH; TREJO-HERNANDEZ, 2006). April, Foght

e Currah (1999) analisaram 64 espcies de fungos filamentosos pela sua capacidade de degradar
petrleo bruto, dentre as quais diversas cepas de fungos e actinomicetos foram
comprovadamente eficazes.
Algumas caractersticas desejveis para que as reaes de degradao de
contaminantes sejam eficazes so: a presena de microrganismos em densidades apropriadas
para degradar os compostos alvos, acessibilidade do substrato (poluentes) de forma que possa
ser utilizado como fonte de carbono e energia, presena de um indutor para causar a sntese de
enzimas especficas para atuar sobre substratos especficos, a presena de sistema de eltrons
aceptores e doadores, condies ambientais favorveis catlise enzimtica das reaes (pH e
umidade) e desfavorveis ao crescimento de espcies competitivas s desejadas,
disponibilidade de nutrientes necessrios para o crescimento microbiano e produo enzimtica
(nitrognio e fsforo so essenciais), faixas de temperatura adequadas para atividade
enzimtica, ausncia de substncias txicas (VIDALI, 2011).
As bactrias desempenham um papel crucial na constituio da biosfera e em ciclos
biogeoqumicos, no s pela abundncia desses microrganismos e alta taxa de crescimento, mas
tambm pela capacidade de transferir seus genes para clulas que no so descendentes
(transferncia lateral), o que permite que elas evoluam rapidamente como vm fazendo h 3

12
bilhes de anos e se adaptem facilmente a mudanas ambientais extremas (DAZ, 2004). A
vasta diversidade gentica contribuiu para uma tima versatilidade metablica, o que permitiu
que as bactrias desenvolvessem diversas estratgias para a obteno de energia a partir de,
praticamente, todo tipo de composto (LOVLEY, 2003).
Apesar da grande variedade de microrganismos capazes de degradar contaminantes
aerobiamente, muitos ambientes contaminados no possuem oxignio suficiente para que essas
reaes ocorram, tais como aquferos, rios, mares, solos submersos, dentre outros. Nesses
ambientes, a biodegradao conduzida por microrganismos anaerbios restritos ou
facultativos, a partir de aceptores de eltrons alternativos, como nitrato (organismos
desnitrificantes), sulfatos (redutores de sulfato), Fe3+ (redutores ferro-inicos), CO2
(metanognicos), ou outros (clorato, Mn, Cr, U, etc.). A utilizao de aceptores de eltrons
diferentes do oxignio depende da disponibilidade dos aceptores de eltrons alternativos e da
competitividade entre microrganismos com diferentes capacidades respiratrias por doadores
de eltrons (TONINI; DE REZENDE; GRATIVOL, 2010). A Figura 6 apresenta as diferentes
formas de aproveitamento de compostos aromticos para o metabolismo de diferentes
microrganismos:
Figura 6: Degradao microbiana de compostos aromticos por reaes com diferentes
aceptores de eltrons.

Fonte: Daz (2004)

12

O sulfato, por exemplo, um grande aceptor de eltrons para degradao anaerbia de

contaminantes em ambientes marinhos, devido alta concentrao de sulfato em gua do mar.
J a reduo de ferro (III) um mecanismo de oxidao de matria orgnica mais frequente na
subsuperfcie desses ambientes (WIDDEL; RABUS, 2001). A degradao de anis aromticos
utilizando nitrato de ferro (III) como aceptor final de eltrons quase to eficiente,
energeticamente, quanto as reaes que utilizam o oxignio. No entanto, a reduo de sulfato e
metano costuma ser muito menos energtica, o que torna o rendimento celular relativamente
baixo (FIELD et al., 1995b).
As espcies capazes de realizar fermentao esto sujeitas a uma relao sintrpica,
cuja biodegradao se torna energeticamente favorvel apenas quando essas espcies esto
associadas a bactrias metanognicas ou redutoras de sulfato, que utilizam os metablitos
produzidos ao longo da quebra de compostos aromticos realizada por microrganismos
fermentadores (DAZ, 2004).
Bactrias fotossintticas obtm energia a partir de reaes envolvendo a radiao solar.
A degradao anaerbia de compostos aromticos forma metablitos intermedirios como
acetil-coA, o qual usado em reaes metablicas de biossntese (LOVLEY, 2003).
Alguns compostos aromticos podem servir de aceptores de eltrons, ao invs de
doadores em reaes de biorremediao (PEREIRA; FREITAS, 2012). Assim, um importante
tipo de reao a declorao redutiva, na qual bactrias removem cloretos de contaminantes,
como solventes clorados e PCBs1, pela utilizao desses compostos como aceptores de eltrons
por dehalogenao (FETZNER, 1998).

2.2.5. Biorremediao com clulas imobilizadas

Os primeiros relatos do uso de clulas aprisionadas em diversos tipos de suportes para

utilizao em aplicaes ambientais so relativamente recentes, iniciados por Chevalier e Noue

Bifenilpoliclorado corresponde a uma classe de compostos organoclorados, formados por anis

aromticos com tomos de cloro, ligados por ligao simples carbono carbono.

12
(1985), que utilizaram microalgas imobilizadas em carragenana2 para o tratamento de guas
residuais.
Desde ento foi estudado o encapsulamento ou aprisionamento de diversas espcies
microbianas com diferentes aplicaes, tais como linhagens de fungo encapsulados para
biocontrole e biodegradao, microalgas encapsuladas para o sequestro de metais e remoo de
nutrientes de resduos em ambientes aquosos, ou at bactrias aprisionadas para a captura e
degradao de compostos txicos. Dentre as principais vantagens de se utilizar microrganismos
ou enzimas imobilizados na biorremediao (CARVALHO, 2006), cita-se:
a. Segurana na introduo de um fator novo ao meio ambiente, limitando sua reao
somente ao stio-alvo a ser atingido, e impedindo sua proliferao descontrolada no
meio.
b. Reduo de custo, pois no ocorrem perdas ocasionadas pela diluio em ambientes
aquticos abertos e as clulas ou enzimas permanecem restritas interface
leo/gua;
c. Reduo da possibilidade de contaminao do inculo durante estocagem,
transporte e aplicao;
d. Possibilidade de produzir clulas em grandes quantidades e estocar por longos
perodos, devido ao estado liofilizado;
e. Grnulos (ou beads) produzidos com materiais polimricos naturais so
biodegradveis, ambientalmente amigveis e no so txicos;
f. O suporte de imobilizao fornece proteo aos fatores ambientais biticos e
abiticos, aumentando a taxa de sobrevivncia das clulas ou enzimas imobilizadas;
g. Aumento da atividade metablica ou enzimtica das clulas ou enzimas
encapsuladas;
h. Liberao lenta de clulas com reduzido movimento pelo solo, a partir do transporte
induzido pelo fluxo de gua;
i. Aumento da estabilidade celular.

No entanto, existem ainda algumas desvantagens que devem ser previamente

analisadas para que a escolha do mtodo seja eficaz e os efeitos do petrleo nos ambientes
2
Polissacardeo sulfatado extrado de algas, utilizado principalmente na indstria alimentcia, de
cosmticos e txtil.

12
marinho e costeiro no se alastrem mais ainda. As cpsulas podem restringir a solubilidade de
gases e solutos, diminuindo o coeficiente de transferncia volumtrico de oxignio dissolvido
(kLa), o que pode afetar as vias metablicas principais responsveis pela degradao de
hidrocarbonetos. A reduo nas velocidades de consumo de oxignio pode causar alteraes
metablicas cujo efeito, quando negativo, limita a atividade celular no meio aquoso. Outro fator
a necessidade de aplicaes repetidas dos grnulos com clulas imobilizadas, uma vez que
no ocorre a formao de colnias estveis fora deles (CARVALHO, 2006).
Em estudos conduzidos por Wilson e Bradley (1996), Pseudomonas sp. foram
utilizadas livres em suspenso e imobilizadas para degradar petrleo em soluo aquosa. Os
resultados indicaram que a imobilizao provocou um aumento da rea de contato entre clulas
e os hidrocarbonetos, alm de aumentar a produo de ramnolipdeos, que causaram uma maior
disperso de n-alcanos insolveis na fase aquosa pela reduo da tenso superficial. A maior
interao entre clulas com pequenas gotculas de hidrocarboneto solubilizadas permitiu uma
assimilao mais rpida, aumentando a taxa de degradao.

2.3. IMOBILIZAO DE CLULAS E ENZIMAS

O processo de imobilizao celular ou enzimtica consiste em sua conteno em

suportes neutros capazes de preservar suas propriedades funcionais, obtendo-se, assim, uma
maior eficincia e produtividade em reaes e melhorias em processos biotecnolgicos. A
aplicao de tcnicas de imobilizao proporciona reutilizao das enzimas e clulas, facilita a
separao de produtos, aumenta a estabilidade em solventes orgnicos e se mostra vantajosa
para clulas submetidas a condies adversas (ANGELIM et al., 2013).
Os principais mtodos de imobilizao de clulas ou enzimas so: adsoro, ligao
covalente, encapsulao, aprisionamento e ligao cruzada (WOODWARD, 1988), como pode
ser observado na Figura 7.

12
Figura 7: Principais Mtodos de imobilizao celular
ou enzimtica

Fonte: Carvalho (2006)

Dentre os mtodos fsicos para imobilizao, se destacam adsoro em uma matriz

insolvel em gua, aprisionamento em gel e encapsulao (ou microencapsulao) com
membrana slida ou lquida. Os mtodos qumicos incluem adsoro a matriz insolvel em
gua, ligao covalente e ligao cruzada (utilizando um reagente multifuncional de baixo peso
molecular ou substncias neutras como protenas) (KRAJEWSKA, 2004).
Todos os mtodos oferecem vantagens e desvantagens, e nenhum adequado para
todas as clulas e enzimas, devido s diferentes caractersticas bioqumicas e composies,
propriedades dos substratos e aplicaes dos suportes (MATEO et al., 2007).
A adsoro um mtodo simples, de baixo custo e efetivo, que ocorre geralmente pela
circulao de inculo por biorreator at que a biomassa cresa no material de suporte e esteja
retida no reator. A principal desvantagem desta tcnica que qualquer mudana nas condies
do biorreator, como fora inica, pH e taxa de agitao, pode afetar drasticamente o grau de
adsoro, revertendo, assim, a imobilizao. Alm disso, polmeros de troca inica geralmente

12
possuem uma baixa capacidade de adeso, entre 10 a 50 mg/g para clulas microbianas
(WOODWARD, 1988).
O mtodo de aprisionamento baseia-se na imobilizao de clulas microbianas nos
interstcios de polmeros em gel de ocorrncia natural, como alginato, carragenana, quitina e
quitosana, o que torna este mtodo simples e seguro. Ele pode ser realizado pela solubilizao
do polmero em um cido orgnico diludo, como cido actico ou cido frmico, para formao
de uma soluo em gel que pode ser adicionada biomassa microbiana antes da etapa de
coagulao em lcali ou solues ionotrpicas. Esse procedimento permite a produo de
biomateriais em diferentes configuraes geomtricas, tais como grnulos, filmes ou
membranas (ANGELIM et al., 2013).
Outra tcnica para imobilizao por aprisionamento consiste em adicionar o gel, gota
a gota, a um agente endurecedor, resultando na formao de grnulos de 2 a 5 mm de dimetro.
Scott (1987) descreve um aparato (Figura 8) composto por um reservatrio pressurizado e
agitado que, atravs de um tubo flexvel, transfere a soluo de gel (incluindo microrganismos
e outros aditivos) a um pequeno bocal (como uma agulha de seringa), que vibra a uma
determinada frequncia para produzir um fluxo de gotculas de gel monodispersas.

Figura 8: Arranjo experimental para produo de grnulos monodispersos

Fonte: Scott (1987)

12
A frequncia de vibrao ajustada de acordo com o dimetro (que varia em at 10%)
e as propriedades da soluo de gel, logo, para fluxo de 0,10 mL/s de 4% k-carragenana e
vibrao de 190 Hz obteve-se grnulos de 1,96 mm de dimetro, enquanto que, a um fluxo de
0,37 mL/s e vibrao de 250 Hz, o dimetro mdio foi de 2,33 mm (SCOTT, 1987).
Aos mtodos de aprisionamento e microencapsulao esto associados problemas de
difuso. Outras tcnicas, como ligao covalente e ligao cruzada, so efetivas e durveis, mas
podem ter custo elevado e afetar o desempenho das enzimas. Portanto, as condies ideais de
imobilizao para uma determinada clula e aplicao so determinadas empiricamente, de
modo a garantir a maior reteno possvel, alta atividades enzimticas e crescimento celular,
estabilidade operacional e durabilidade (WOODWARD, 1988).

2.3.1. Suportes para imobilizao

Diversos polmeros sintticos (poliacrilamida, polietilenoglicol e poliuretano) e

naturais (alginato, carragenana, gar, colgeno, quitina e quitosana) so empregados como
matrizes para imobilizao de clulas e enzimas, no entanto a busca por tecnologias limpas e
biocompatveis torna a utilizao de polmeros naturais tema de diversas pesquisas (PEREIRA,
2014). A escolha do suporte e dos procedimentos metodolgicos adequados imobilizao
depende de uma srie de fatores, como propriedades das clulas ou enzimas e dos substratos,
condies fsico-qumicas das reaes, produto de interesse, escala do processo, dentre outros
(VAN DE VELDE et al., 2002, apud CARVALHO, 2006 p. 16).
Os suportes podem ser orgnicos (naturais ou sintticos) e inorgnicos (minerais ou
sintticos), e so classificados ainda em porosos e no porosos. Suportes porosos podem ter
poros de tamanho controlado, ser de ampla distribuio ou de estrutura de gel. Nos suportes
no porosos a fixao ocorre na superfcie em contato imediato com o meio externo, onde os
efeitos de difuso so mnimos, possibilitando a reao de grande quantidade de substrato. Uma
desvantagem a baixa relao rea/volume, o que limita a fixao em suportes no porosos,
comparativamente com porosos (SCHOFFER, 2013).
Dentre as caractersticas desejveis para os suportes empregados na imobilizao de
clulas ou enzimas podemos citar insolubilidade em gua, alto peso molecular, no ser txico
para as clulas, apresentar alta reteno de microrganismos, ser qumica e bioquimicamente
inerte, possuir alta resistncia mecnica, possibilitar alta difusividade de reagentes e produtos

12
formados, ter uma grande rea superficial, ser biodegradvel e de baixo custo (KRAJEWSKA,
2004).
A quitosana um polmero natural muito promissor para imobilizao de clulas, o
que ocorre por ser um material biodegradvel, inerte, atxico, e amplamente disponvel na
natureza. No entanto, poucos estudos envolvendo aprisionamento de clulas em matriz de
quitosana foram registrados, provavelmente pela ao antimicrobiana do material e pela
capacidade de alguns microrganismos para produzir enzimas degradadoras de quitosana
(BORGOGNONI; POLAKIEWICZ; PITOMBO, 2006)

2.3.1.1.Quitina e Quitosana: caractersticas e aplicaes

A quitina (Figura 9) o biopolmero mais abundante na natureza, depois da celulose.

Esse homopolissacardeo linear composto por unidades de N-acetil-D-glucosamina (ou 2acetoamido-2-deoxi-D-glicose) em ligaes (1 4). O processo de N-desacetilao da
quitina, seja por tratamento alcalino com bases fortes ou por mtodos microbiolgicos na parede
celular de alguns fungos, origina a quitosana (Figura 10), um heteropolissacardeo constitudo
por resduos de N-acetil-D-glucosamina e D-glucosamina (ou 2-amino-2-deoxi-D-glicose),
unidos entre si por ligaes (1 4) (PETER, 1995).
Este polmero apresenta propriedades qumicas e biolgicas distintas: em suas cadeias
de poli-D-glucosamina, de alta massa molecular, existem grupos amino e hidrxido reativos,
suscetveis a modificaes qumicas. Esses grupos tornam a quitosana em um dos poucos
eletrlitos catinicos encontrados na natureza. A caracterstica bsica desse polmero o torna
solvel em meio aquoso cido (pH menor que 6,5) e, quando dissolvido, apresenta alta carga
positiva nos grupos NH3+, os quais aderem a superfcies carregadas negativamente e permite
que se agregue a compostos polianinicos (KRAJEWSKA, 2004).

12
Figura 9: Estrutura qumica da quitina

Fonte: Borgognoni, Polajiewicz, Pitombo (2006)

Figura 10: Estrutura qumica da quitosana

Fonte: Borgognoni, Polajiewicz, Pitombo (2006)

O grau de acetilao, proporo de unidades de N-acetil-D-glucosamina em relao ao

nmero total de unidades, inferior a 50% em polmeros de quitosana, permitindo a distino
entre quitina e quitosana (SCHOFFER, 2013).
A excelente propriedade de formao de gel da quitosana, aliada
biocompatibilidade, biodegradabilidade, atoxicidade, alta afinidade a protenas, propriedades
hemostticas, fungicida, antitumoral, e anticolesterol, garantem quitina e quitosana um grande
espectro de aplicaes para esses biopolmeros (KHONDEE et al., 2015), as quais so
apresentadas na Tabela 3.

12

Tabela 3: Aplicaes de quitina e quitosana

rea
Agricultura
Biomdica
Biotecnologia

Cosmtica
Farmacutica

Indstria de Alimentos

Indstria Fotogrfica
Indstria Txtil e de Papel
Tratamento de Efluentes

Aplicao
Fertilizantes
Liberao controlada de agroqumicos
Defensivos agrcolas
Biomembranas artificiais
Lentes de contato
Sutura cirrgica
Agente antimicrobiano
Biossensores
Cromatografia (purificao)
Imobilizao de enzimas e de clulas
Separao de protenas
Bactericida
Fungicida
Umectante
Agente cicatrizante
Aditivo de medicamentos
Controle de colesterol
Liberao controlada de drogas
Aditivos alimentares
Espessante
Embalagem
biodegradvel
para
alimentos
Preservante
Nutrio animal
Filmes
Tratamento de superfcie
Floculante e coagulante
Remoo de ons metlicos
Remoo de corantes

Fonte: Adaptado de Carvalho (2006)

Apesar de ambos os polmeros possurem diversas aplicaes, nas mais diversas reas,
a quitosana desperta um maior interesse devido alta solubilidade, o que amplia as
possibilidades de sua utilizao. Por ser biocompatvel, biodegradvel, pouco txica aos
mamferos e abundantes na natureza, a quitosana tem sido foco de muitos estudos (KUMAR,
2000).

12
2.3.1.2.Mtodos de obteno de quitina e quitosana

A quitina um dos mais abundantes recursos orgnicos renovveis do planeta,

encontrado naturalmente na carapaa de crustceos, no exoesqueleto de insetos e na parede
celular de alguns fungos. Esse material est disponvel em sua forma bruta nos resduos slidos
do processamento de frutos do mar em diversos pases. J a quitosana pode ser obtida pela
desacetilao da quitina, embora seja encontrada naturalmente na parede celular de alguns
fungos (PEREIRA, 2014).
No Brasil, um pas de vasto litoral, grande potencial hdrico e dotado de uma grande
biodiversidade de fauna marinha, estima-se que a produo anual de camaro por carcinicultura
chegue a 100 mil toneladas o que permite a grande produo de quitina no pas (ORMOND et
al., 2004).
O processamento do camaro consiste primeiramente na etapa de descasque, de forma
a eliminar a cabea e casca do animal, correspondentes a aproximadamente 40% do seu peso
total. Esse processo gera grandes quantidades de resduos slidos, compostos por cerca de 70 a
75% de gua (CARVALHO, 2006).
No processo de obteno da quitina a partir de casca de camaro desenvolvido por
Wang et al. (2001), utilizando-se 700mL de soluo de hidrxido de sdio a 6% para 10g de
casca de camaro, ocorre primeiramente a saponificao dos cidos graxos e a hidrlise das
protenas presentes na casca. Obteve-se 7,0g de quitina, a qual foi tratada com 700mL de
soluo a 10% de cido clordrico para que ocorresse a desmineralizao. Para a extrao
alcalina da quitosana, pela remoo do grupo acetil da quitina (Figura 11), 4g do material
resultante na desmineralizao reagiu com 800mL de soluo de hidrxido de sdio a 50%, sob
aquecimento a 120C e agitao por 3 horas. Obteve-se uma substncia facilmente solvel em
gua, cujos grupos catinicos podem interagir com materiais hidrofbicos e aninicos,
denominada quitosana, com grau de desacetilao de 50% (BORGOGNONI; POLAKIEWICZ;
PITOMBO, 2006).

12

Figura 11: Desacetilao da quitina por tratamento alcalino para formao

de quitosana

Fonte: http://sigmaaldrich.com

No entanto, ao longo do processamento do resduo de camaro para obteno de

quitosana, minerais e protenas dos tecidos so quimicamente extrados e drenados, de forma
que apenas 10% de material seco da matria prima recuperado como quitosana. Isso significa
que para cada quilo de quitosana produzido, aproximadamente 3 kg de protena desperdiado
(GILDBERG; STENBERG, 2001).
As protenas presentes na casca do camaro podem ser hidrolisadas e recuperadas por
tratamento com alcalase, um preparado de proteases, resultando em um hidrolisado composto
por peptdeos bioativos. Gildberg e Stenberg (2001) desenvolveram um processo empregando
alcalase para o aproveitamento de resduos de camaro na produo comercial de quitosana, no
qual obteve-se 26,5% de massa seca a partir dos resduos de camaro, dentre os quais 74%
correspondentes a matria orgnica (protenas e quitina) e 26% a minerais. Nesse processo, a
casca de camaro passou por tratamento alcalino, hidrlise, desmineralizao, desproteinao
e desacetilao, obtendo-se, por fim, quitosana com grau de desacetilao de 50%. A
quantidade de astaxantina3 recuperada no precipitado foi de 40%, dez vezes maior do que o teor
normalmente encontrado em uma refeio composta por camaro. O processo apresentado na
Figura 12.

A astaxantina um carotenoide que no se converte em vitamina A no corpo humano, com ao

antioxidante e frmula molecular C40H52O4.

12
Figura 12: Fluxograma do processo para aproveitamento de resduos
de camaro

Fonte: Gildberg e Stenberg (2001)

2.3.1.3.Mtodos de preparo de suporte de quitosana

Os principais mtodos de preparao de gel de quitosana podem ser divididos em

quatro grupos: mtodo de evaporao de solvente, mtodo de neutralizao, mtodo de ligaes
cruzadas e mtodo de gelatinizao ionotrpica (SCHOFFER, 2013).
O primeiro mtodo principalmente empregado na preparao de membranas e filmes,
aplicados posteriormente no preparo de superfcies enzimticas ativas, depositadas nas
extremidades de eletrodos (PETER, 1995). Uma soluo de quitosana em cido orgnico pode
ser aplicada extremidade de um eletrodo para secar a 65C e, enquanto isso, a membrana/filme
normalmente neutralizada com uma soluo diluda de NaOH, para evitar desintegrao em
pH menor que 6,5. Pode-se misturar, tambm, um agente de ligao cruzada soluo inicial
de quitosana, antes da secagem (KHONDEE et al., 2015). As enzimas podem ser imobilizadas
na superfcie do filme por adsoro e reticulao, ou ligao covalente, ou at adicionadas na
soluo inicial de quitosana (KRAJEWSKA, 2004).

12
J o mtodo de neutralizao explorado para a produo de precipitados de quitosana,
membranas, fibras e, mais especificamente, grnulos esfricos de diferentes tamanhos e
porosidades. O princpio deste mtodo consiste na adio gota a gota de uma soluo cida de
quitosana a uma soluo de NaOH, comumente preparada em misturas gua-etanol nas quais o
etanol, um no solvente para a quitosana, facilita a solidificao dos grnulos de quitosana. Em
seguida, os grnulos so normalmente submetidos ao mtodo de ligaes cruzadas (DIAS et
al., 2008).
Pelo mtodo de ligaes cruzadas, uma soluo cida de quitosana submetida
diretamente a ligaes cruzadas, atravs de uma mistura com agente de reticulao que
proporciona a gelificao. Os gis obtidos so quebrados em partculas, de acordo com o
tamanho desejado, e a imobilizao no exige ativao qumica, uma vez que os agentes
costumam atender duas funes: reticulao e ativao. O principal agente empregado o
glutaraldedo, devido facilidade de uso, confiabilidade e alta disponibilidade de grupos amino
(BARRETO et al., 2010).
Por fim, pelo mtodo de gelatinizao ionotrpica, a mistura de quitosana, um
polieletrlito catinico, com polieletrlitos aninicos como alginato, carragenana, xantana,
polifosfatos e sulfatos orgnicos ou enzimas, forma espontaneamente complexos insolveis em
gua. Esse mtodo empregado principalmente na produo de grnulos de gel, pela adio
gota a gota de soluo aninica de polieletrlito, a uma soluo cida de quitosana. A
imobilizao ocorre pelo preparo de uma soluo polieletrlito aninica contendo enzima,
anteriormente gelificao (KRAJEWSKA, 2004)
A principal estratgia para incrementar a capacidade de adsoro da quitosana o
preparo de beads (ou grnulos) para imobilizao, uma vez que os beads possuem uma rea
superficial at 100 vezes maior que a rea da quitosana em flocos e cinticas de adsoro mais
rpidas (CARVALHO, 2006).
O tipo de quitosana utilizada no processo e caractersticas distintas, tais como peso
molecular e grau de desacetilao, podem influenciar no tamanho e na morfologia dos beads
formados. No entanto, algumas metodologias podem ser empregadas para a obteno de beads
de quitosana com dimenses controladas por:
a. Coagulao a quitosana dissolvida em meio cido e gotejada em soluo
alcalina e o entrecruzamento executado aps a obteno e neutralizao dos
beads. Esta tcnica a mais simples.

12
b. Inverso de fases os beads so obtidos in situ pela dissoluo da quitosana em
meio cido, contendo o agente de entrecruzamento, e ocorre disperso da fase
aquosa em uma fase oleosa para obteno de materiais insolveis;
c. Spray-drying a quitosana purificada dissolvida em meio cido e recebe
adio de agente reticulante. A soluo resultante bombeada e, a partir da ao
do ar comprimido, que interrompe o fluxo no bico aspersor, os beads so
formados. Esta tcnica a mais rpida e precisa (HE; TEBO, 1998).

Nos estudos realizados por Carvalho (2006), as esferas foram preparadas a partir de
20g de quitosana dissolvidos em 500mL de cido actico 1%, a qual foi gotejada sobre uma
soluo de hidrxido de sdio 8% (p/v) a partir de um sistema eltrico com agulhas calibradas
para liberar gotas padronizadas de 0,1mm. As microesferas permaneceram na soluo de
hidrxido de sdio sob agitao mecnica, por 24 h. Por fim, elas foram lavadas com gua
destilada (para obter pH neutro) e secas a 30C.
Percebeu-se que, quando as solues de quitosana em meio cido e de hidrxido de
sdio apresentam densidades aproximadamente iguais, as gotas de soluo de quitosana no
encontram resistncia suficiente para se deformarem e coagulam rapidamente, mantendo a
forma esfrica. Outros fatores, como velocidade de agitao, volume de soluo coagulante e
altura entre o gotejador e o coagulante, contribuem para que as gotas de quitosana coagulem
isoladamente (CARVALHO, 2006).

2.3.2. Preparo da cultura de microrganismos para imobilizao

Carvalho (2006) isolou a cepa PFA001 (Staphylococcus saprophyticus) de uma

amostra de petrleo, a qual foi cultivada em placa com meio gar nutritivo a 37C por 24 h,
para produo de biomassa. As duas colnias formadas foram, ento, transferidas para um tubo
de ensaio contendo 9 mL de caldo nutritivo, o qual foi incubado a 37C por 4 horas. Aps ajuste
da densidade da cultura (de acordo com a absorbncia), ela foi utilizada para inocular um meio
mineral com a composio apresentada na Tabela 4. Aps esterilizao a 110C por 10 minutos,
em autoclave, e aps resfriamento, adicionou-se uma soluo de 1000 mL de gua destilada
com os micronutrientes (Tabela 5), na proporo 0,1% v/v (MACIEL, 2003).

12

Tabela 4: Composio do meio mineral inoculado com a cultura bacteriana

Nutrientes

Concentrao
(g/L)

K2PO4

13,99

KH2PO4

6,0

MgSO4.7H2O

0,2

(NH4)2SO4

4,0

Fonte: Carvalho (2006)

Tabela 5: Micronutrientes adicionados ao meio esterilizado

Micronutrientes

Concentrao (g/L)

EDTA

2,5

ZnSO4.7H2O

10,95

FeSO4.7H2O

5,0

MnSO4.H2O

1,54

CuSO4.5H2O

0,392

Co(NO3)2.6H2O

0,25

Na2B4O7.10H2O

0,177

Fonte: Carvalho (2006)

Algumas gotas de cido sulfrico concentrado foram adicionadas soluo de

microrganismos para evitar a precipitao e foi esterilizada por filtrao em membrana
0,45 m. A cultura de bactria inoculada foi inoculada na proporo de 1% v/v em Erlenmeyer
de 2 L contendo 0,500 L de meio mineral enriquecido com 0,4% de extrato de levedura
(esterilizada a 121C por 15 minutos, em autoclave) e 2% de glicerol previamente esterilizado
por filtrao (em membrana de 0,45 m). A cultura foi mantida sob agitao a 160 rmp, a 2830C por 48 horas, quando foi inativada por aquecimento a 100C por 10 minutos e centrifugada
a 1000 g por 15 minutos. O sobrenadante foi descartado e as clulas foram lavadas trs vezes
com gua destilada, sob centrifugao nas mesmas condies. Por fim, a biomassa foi
liofilizada (PEREIRA, 2014).

12
2.3.3. Mtodos de imobilizao de clulas e enzimas em quitosana

A imobilizao de clulas pelo mtodo de encapsulao ocorre pelo preparo de uma

emulso entre o composto a ser encapsulado e o agente de encapsulao, seguido da secagem
da emulso. Carboidratos so agentes de encapsulao muito empregados devido sua
capacidade de absorver compostos volteis do ambiente e ret-los durante o processamento
(BORGOGNONI; POLAKIEWICZ; PITOMBO, 2006).
Carvalho (2006), comparou a capacidade de emulsificao e coagulao de misturas
leo-gua de esferas, membranas, filmes e hidrogis de quitosana sem e com a bactria
Staphylococcus saprophyticus subs. saprophyticus imobilizada. A quitosana foi obtida a partir
da quitina de carapaas de camaro, com grau de desacetilao de 78% e massa molar mdia
de 117.000 Da. As esferas com bactria se destacaram pela uniformidade e resistncia a
agitao mecnica durante os testes de emulsificao de misturas leo-gua, atingindo um
porcentual de 60% de emulsificao.
De acordo com a metodologia de Carvalho (2006) para imobilizao de clulas em
esferas de quitosana, 4 g de quitosana (de massa molecular menor que 125 Da) foram
misturados com 4 g de biomassa bacteriana liofilizada, previamente preparada, e dissolvidos
em 100 mL de cido actico 1%. Essa soluo foi incubada a 25C por uma hora, sob agitao,
e depois foi gotejada controladamente em uma soluo de NaOH 8% para formao de esferas
uniformes de 1 a 2 mm de dimetro, pelo mtodo de coagulao. As esferas permaneceram em
repouso nessa soluo por 12-14h para ento serem lavadas com gua destilada at pH neutro.
As esferas produzidas com quitosana e Staphylococcus saprophyticus se distinguiram
das esferas compostas apenas por quitosana pela colorao amarela, devido ao pigmento
produzido pela bactria, como pode ser observado na Figura 13.

12
Figura 13: Esferas de quitosana (A) e esferas de quitosana contendo clulas
imobilizadas na proporo 1:1 (quitosana : biomassa)

Fonte: Carvalho (2006)

2.3.4. Atividade emulsificante

A eficincia de degradao de hidrocarbonetos por microrganismos depende, dentre

muitos fatores, da acessibilidade de um substrato altamente hidrofbico s clulas
(CAMEOTRA; SINGH, 2008). A partir da produo de biossurfactantes, compostos que
diminuem a tenso superficial leo-gua e aumentam a disponibilidade de substrato, os
microrganismos so capazes de metabolizar mais eficientemente os compostos do petrleo
(HOMMEL, 1990). No entanto, os diversos tipos de emulsificantes podem apresentar
composies qumicas e atividade emulsificante bem distintas podendo afetar a atividade
celular e velocidade de reaes degradativas (IIDA et al., 2007).
Nos ensaios de emulsificao apresentados por Iqbal, Khali e Malik (1995), 2 mL de
microesferas midas foram colocadas em tubos de ensaio com tampa rosqueada e, sobre elas,
foram adicionados 2 mL de um hidrocarboneto e 200 L do corante rosa de bengala, para
facilitar a visualizao da camada emulsificada. Aps agitao em vrtex por 2 minutos e
repouso por 24 horas, o porcentual de emulsificao foi calculado dividindo-se a altura da
camada emulsificada (mm) pela altura da camada total de lquido (mm), multiplicando-se por
100. As esferas de quitosana-bactria na proporo 1:1 apresentaram porcentuais de
emulsificao mais elevados do que as esferas preparadas na proporo 2:1 (m:m) de quitosana
: bactria, enquanto que as esferas sem clulas (controle) no apresentaram atividade
emulsificante. A Figura 14 apresenta o resultado do ensaio de emulsificao, de esferas de

12
quitosana sem agitao (A), esferas de quitosana com agitao (B), suspenso com clulas de
Staphylococcus saprophyticus livres (C), esferas de quitosana e bactria imobilizada na
proporo 2:1 (D) e esferas de quitosana e bactria imobilizada na proporo 1:1 (E) (MACIEL,
2003).

Figura 14: Ensaio de emulsificao de mistura querosene-gua,

promovida por esferas de quitosana

Fonte: Carvalho (2006)

A atividade emulsificante das esferas de quitosana com clulas de Staphylococcus

saprophyticus, na proporo 1:1, foi avaliada em 60% (ANGELIM et al., 2013).

12
3.

METODOLOGIA

Foi empregado o estudo exploratrio-descritivo atravs de pesquisa bibliogrfica, pela

utilizao de dados secundrios oriundos de publicaes e resultados de pesquisas especficas
sobre as tcnicas de biorremediao de petrleo utilizando bactrias produtoras de
biossurfactantes.

12
4.

CONSIDERAES FINAIS

O petrleo , sem dvida, a principal fonte de energia utilizada pela sociedade

moderna, o que torna necessria a estruturao, a preparao e o planejamento de todo o
processo de explorao, produo e transporte de seus produtos e subprodutos, de forma a
reduzir os casos de contaminao de ambientes terrestres e marinhos. A elaborao de planos
de resposta a incidentes crucial, exigindo extensos conhecimentos sobre o nvel e extenso da
contaminao, alm das propriedades fsico-qumicas do contaminante derramado e
caractersticas climticas, geolgicas e biolgicas da rea afetada. Uma avaliao meticulosa
das tcnicas de remediao disponveis e sua aplicabilidade algo importante para uma seleo
correta, j que a escolha de um mtodo inadequado pode afetar ainda mais o ambiente marinho
e costeiro.
Algumas propriedades como espalhamento, disperso, formao de emulses, alta
hidrofobicidade, sedimentao, recalcitrncia e alta toxicidade permitem que os
hidrocarbonetos presentes no petrleo afetem diretamente ecossistemas marinhos e costeiros.
A demanda por petrleo e seus derivados crescente, assim como as pesquisas em busca por
mtodos eficientes para biorremediao destes compostos no meio ambiente, visando reduzir
os prejuzos ambientais e financeiros associados a derrames e vazamentos.
A versatilidade e ampla diversidade de microrganismos tornam a biorremediao uma
estratgia simples, de baixo custo e ambientalmente amigvel para reduo da poluio
ambiental, alternativa a opes no biolgicas. Apesar de microrganismos representarem
aproximadamente metade da biomassa do planeta, apenas 5% da diversidade microbiana
conhecida (CURTIS; SLOAN; SCANNELL, 2002), impulsionando diversas pesquisas para
desenvolver mtodos de isolamento, cultivo e identificao de plantas, fungos e bactrias
degradadoras de poluentes, alm de estudos para entender o mecanismo pelo qual ocorre essa
degradao. Dentre eles, pode-se destacar a produo de biossurfactantes, que podem
apresentar alta atividade emulsificante, avaliada em 60% por Carvalho (2006), aumentando a
disponibilidade de substrato s clulas e a velocidade pela qual as reaes de degradao de
hidrocarbonetos ocorrem. No entanto, o alto custo associado produo de biossurfactantes em
biorreatores torna essas substncias incapazes de competir economicamente com os
surfactantes qumicos do mercado.
Neste contexto, a imobilizao de clulas de bactrias produtoras de biossurfactantes
em cpsulas (ou esferas) de quitosana, um material biodegradvel, resistente, que no causa

12
danos ao homem e ao meio ambiente, mostrou-se um mtodo extremamente eficaz na
degradao de hidrocarbonetos de petrleo devido a uma srie de vantagens, como o aumento
da atividade metablica, a liberao lenta de clulas, o aumento da estabilidade plasmidial e da
taxa de sobrevivncia das clulas, permitindo a introduo de clulas no meio ambiente
(bioamplificao) e servindo de fonte de carbono e nitrognio (bioestimulao), o que pode
beneficiar toda a comunidade bacteriana. A combinao das estratgias mencionadas permite
que as limitaes associadas a cada tcnica, individualmente, sejam superadas e a eficincia do
processo de biodegradao aumente. No entanto, a complexidade de fatores do meio ambiente
torna difcil prever o comportamento, atividade metablica, adaptao celular e competncia
dos microrganismos quando aplicados in situ. Apesar desta tcnica no ser empregada ainda no
Brasil, o baixo custo associado ao reaproveitamento de subprodutos da carcinicultura, para
obteno de quitosana, e a tcnicas simples de imobilizao celular, aliados ao alto grau de
inovao, so fatores que indicam o grande potencial para aplicao em atividades de
biorremediao.

12
REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS

AMORIM, M. N. DE. Definio e criao de novos modelos eficazes de preveno,

contingncia e atendimento aos acidentes, voltados, especificamente, para a explorao e
produo de petrleo, oriundo da camada do pr-sal, Braslia. Ministrio do Meio Ambiente
(MMA),
2012.
Disponvel
em:
<http://www2.camara.leg.br/atividadelegislativa/comissoes/comissoes-permanentes/cmads/audiencias-publicas/audienciaspublicas/08-05-2012-definicao-e-criacao-de-novos-modelos-eficazes-deprevencao/apresentacoes/marco-antonio-almeida>. Acesso em: 8 set. 2015
ANDRADE, C. Conhea os piores acidentes petrolferos registrados no Brasil nos ltimos
anos. Disponvel em: <http://horizontegeografico.com.br/exibirMateria/2169/conheca-ospiores-acidentes-petroliferos-registrados-no-brasil-nos-ultimos-anos>. Acesso em: 10 set.
2015.
ANGELIM, A. L. et al. An innovative bioremediation strategy using a bacterial consortium
entrapped in chitosan beads. Journal of Environmental Management, v. 127, p. 1017, 2013.
Annual Petroleum Consuption. . Washington DC: [s.n.]. Disponvel em:
<http://www.eia.gov/cfapps/ipdbproject/iedindex3.cfm?tid=5&pid=5&aid=2&cid=ww,&syid
=2010&eyid=2014&unit=TBPD>. Acesso em: 28 out. 2015.
BARBOSA, V. Os 10 maiores acidentes petrolferos da histria | EXAME.com. p. 3, maio
2010.
BARRETO, R. V. G. et al. New approach for petroleum hydrocarbon degradation using
bacterial spores entrapped in chitosan beads. Bioresource Technology, v. 101, n. 7, p. 2121
2125, 2010.
BORGOGNONI, C. F.; POLAKIEWICZ, B.; PITOMBO, R. N. D. M. Estabilidade de
emulses de d-limoneno em quitosana modificada. Cincia e Tecnologia de Alimentos, v. 26,
n. 3, p. 502508, 2006.
BRESCIANI, E.; SASSINE, V. Ibama lista 285 acidentes em refinarias e plataformas pelo pas.
O Globo, 2014.
BRITISH PETROLEUM. BP Statistical Review of World Energy. Londres, Reino Unido:
[s.n.].
CABRAL, C. A. O.; TEIXEIRA, L. D. S. P. Investigao Do Incidente De Vazamento De
Petrleo No Campo De Frade Relatrio Final. [s.l: s.n.]. Disponvel em:
<http://www.anp.gov.br/?pg=61825&m=&t1=&t2=&t3=&t4=&ar=&ps=&cachebust=139230
2719624>.
CALIXTO, E. Contribuies para Plano de Contingncia para derramamento de petrleo
e derivados no Brasil. [s.l.] Universidade Federal do Rio de Janeiro, 2011.

12
CAMEOTRA, S. S.; SINGH, P. Bioremediation of oil sludge using crude biosurfactants.
International Biodeterioration and Biodegradation, v. 62, n. 3, p. 274280, 2008.
CAMPOS, A. C.; LEONTSINIS, E. Petrleo e derivados: obteno, especificaes,
requisitos de desempenho. Rio de Janeiro: JR Editora Tcnica Ltda, 1990.
CARDOSO, L. C. Petrleo do poo ao posto. [s.l.] Qualitymark Editora Ltda, 2005.
CARVALHO, T. V. Biomateriais base de quitosana de camaro e bactrias para remoo de
metais traos e petrleo. 2006.
CETESB.
Efeitos
do
leo
nos
organismos.
Disponvel
<http://emergenciasquimicas.cetesb.sp.gov.br/tipos-de-acidentes/vazamentos-deoleo/impactos-ambientais/efeitos-do-oleo-nos-organismos/>. Acesso em: 14 set. 2015.

em:

CHEVALIER, P.; NOUE, J. L. Wastewater nutrient removal with microalgae immobilized in

carrageenan. Enzymes Microbiology Technology, v. 7, p. 621624, 1985.
CORREA, I. M. G. Petrleo e Derivados - Noes Bsicas. 2 ed ed.Rio de Janeiro: Instituto
Brasileiro de Petrleo (IBP), 1989.
CRAIG, A. P. DE L. et al. Tcnicas de limpeza de vazamentos de petroleo em alto mar.
Cadernos de Graduao - Cincias Exatas e Tecnolgicas, v. 1, p. 7586, out. 2012.
CRUZ, J. F. DA. Avaliao da eficincia de surfactantes no processo de biodegradao de
petrleo bruto em simulaes de derrames no mar. [s.l.] Universidade Federal da Bahia,
2012.
CURTIS, T. P.; SLOAN, W. T.; SCANNELL, J. W. Estimating prokaryotic diversity and its
limits. Proc Natl Acad Sci U S A, v. 99, n. 16, p. 1049410499, 2002.
DAS, N.; CHANDRAN, P. Microbial degradation of petroleum hydrocarbon contaminants: an
overview. Biotechnology research international, v. 2011, p. 941810, 2011.
DIAS, F. S. et al. Um Sistema Simples Para Preparao De Microesferas De Quitosana.
Qimica Nova, v. 31, n. 1, p. 160163, 2008.
DAZ, E. Bacterial degradation of aromatic pollutants: a paradigm of metabolic versatility.
International Microbiology, v. 7, n. 3, p. 173180, 2004.
DPC/ANP. Acidente Com a Plataforma P-36 Relatrio De InvestigaoMARINHA DO
BRASIL - Comisso de Investigao. [s.l: s.n.].
EMTIAZI, G. et al. Utilization of petroleum hydrocarbons by Pseudomonas sp . and
transformed Escherichia coli. Journal of Biotechnology, v. 4, n. February, p. 172176, 2005.
ENGLERT, C. J.; KENZIE, E. J.; DRAGUN, J. Bioremediation of petroleum products in soil:
Principles and Practices for Petroleum Contamined Soils. In: CALABRESE, E. J.; KOSTECKI,
P. T. (Eds.). . Boca Raton: Lewis Publishers, 1993. p. 111130.

12
FERNANDES, P. Evoluo da matria orgnica: da original aos carves e petrleo5o
Encontro de Professores de Geocincias do Algarve. Vila Real de Santo Antonio: [s.n.].
FETZNER, S. Bacterial dehalogenation. Applied Microbiology and Biotechnology, v. 50, n.
6, p. 633657, 1998.
FIELD, J. A. et al. Enhanced biodegradation of aromatic pollutants in cocultures of anaerobic
and aerobic bacterial consortia. Antonie van Leeuwenhoek, v. 67, n. 1, p. 4777, 1995a.
FIELD, J. A. et al. Enhanced biodegradation of aromatic pollutants in cocultures of anaerobic
and aerobic bacterial consortia. Antonie van Leeuwenhoek, v. 67, n. 1, p. 4777, 1995b.
FLOODGATE, G. The fate of petroleum in marine ecossystems. R. M. Atla ed.New York:
Macmillan Publishing Co., 1984.
GILDBERG, A.; STENBERG, E. A new process for advanced utilisation of shrimp waste.
Process Biochemistry, v. 36, p. 809812, 2001.
GOLDSTEIN, R. M.; MALLORY, L. M.; ALEXANDER, M. Reasons for possible failure of
inoculation to enhance biodegradation. Applied and environmental microbiology, v. 50, n. 4,
p. 977983, 1985.
HE, L. M.; TEBO, B. M. Surface Charge Properties of and Cu(II) Adsorption by Spores of the
Marine Bacillus sp. Strain SG-1. Applied and environmental microbiology, v. 64, n. 3, p.
11239, 1998.
HOMMEL, R. K. Formation and physiological role of biosurfactants produced by hydrocarbonutilizing microorganisms - Biosurfactants in hydrocarbon utilization. Biodegradation, v. 1, n.
2-3, p. 107119, 1990.
IIDA, P. H. et al. Estudo do efeito da gua em emulses de petrleo4o Congresso Brasileiro
de P&D em Petrleo e Gs. Anais...Campinas, SP: 2007
IQBAL, S.; KHALI, Z. M.; MALIK, K. A. Enhanced biodegradation and emulsification of
crude oil and hyperproduction of biosurfactant by gamma ray - induced mutant of Pseudomanas
aerugiona. Applied Microbiology and Biotechnology, n. 21, p. 176179, 1995.
ITOPF. Response marine oil spill. Londres, Reino Unido: Whitherby & ITOPF, 1986.
ITOPF. Oil tanker spill statistics 2014. The International Tanker Owners Pollution
Federation Limited, n. January, p. 12p, 2014.
KHONDEE, N. et al. Lipopeptide biosurfactant production by chitosan-immobilized Bacillus
sp. GY19 and their recovery by foam fractionation. Biochemical Engineering Journal, v. 93,
p. 4754, 2015.
KIM, S. H. et al. Purification and characterization of biosurfactants from Nocardia sp. L-417.
Biotechnology and Applied Biochemistry, v. 31, p. 249253, 2000.

12
KIMURA, R. M. Indstria Brasileira De Petrleo: Uma Anlise Da Cadeia De Valor
Agregado. [s.l.] Universidade Federal do Rio de Janeiro, 2005.
KRAJEWSKA, B. Application of chitin- and chitosan-based materials for enzyme
immobilizations: A review. Enzyme and Microbial Technology, v. 35, n. 2-3, p. 126139,
2004.
KUMAR, M. N. V. R. A review of chitin and chitosan applications. Reactive and Functional
Polymers, v. 46, n. 1, p. 127, 2000.
KUTCHEROV, V. et al. Synthesis of hydrocarbons under upper mantle conditions: Evidence
for the theory of abiotic deep petroleum origin. Journal of Physics: Conference Series, v. 215,
p. 012103, 2010.
LOPES, C. F. Derrames de petrleo e os ecossistemas costeiros: A experincia da CETESB.
IV Simpsio de Ecossistemas Brasileiros, v. 3, n. 104, p. 342351, 1998.
LOVLEY, D. R. Cleaning up with genomics: applying molecular biology to bioremediation.
Nature Reviews Microbiology, v. 1, n. 1, p. 3544, 2003.
MACHADO, E. L. Economia de Baixo Carbono: Avaliao de Impactos de Restries e
Perspectivas Tecnolgicas. So Paulo: [s.n.].
MACIEL, I. M. C. T. Avaliao do potencial de bactrias para degradar derivados do
petrleo e produzir biossurfactantes. [s.l.] Universidade Federal do Cear, 2003.
MATEO, C. et al. Improvement of enzyme activity, stability and selectivity via immobilization
techniques. Enzyme and Microbial Technology, v. 40, n. 6, p. 14511463, 2007.
MONTAGNOLLI, R. N. Biodegradao de Derivados do Petrleo com a Aplicao de
Biossurfactante produzido por Bacillus subtilis. [s.l.] Universidade Estadual Paulista
(UNESP), 2011.
MORAIS, N. L. Estudo da Contaminao e Remediao de Petrleo em guas Marinhas.
[s.l.] Universidade Federal de Uberlndia, 2012.
NAGAYASSU, V. Y. (ESCOLA P. DA U. DE S. P. Anlise crtica do ensaio NACE TM0172 para verificao da agressividade de derivados de petrleo. [s.l.] Universidade de So
Paulo, 2006.
NEIVA, J. Conhea o petrleo. 5. ed. Rio de Janeiro: Editora ao Livro Tcnico, 1986.
NITSCHKE, M.; PASTORE, G. M. Biossurfactantes: Propriedades e aplicaes. Quimica
Nova, v. 25, n. 5, p. 772776, 2002.
OKOH, A. I.; TREJO-HERNANDEZ, M. R. Remediation of petroleum hydrocarbon polluted
systems: Exploiting the bioremediation strategies. Journal of Biotechnology, v. 5, n. 25, p.
25202525, 2006.

12
OLIVEIRA, J. G. DE. PRODUO DE BIOSSURFACTANTE POR Bacillus pumilus E
AVALIAO DA BIORREMEDIAO DE SOLO E GUA CONTAMINADOS COM
LEO. [s.l.] UNIVERSIDADE ESTADUAL PAULISTA JLIO, 2010.
ORMOND, J. G. P. et al. A carcinicultura brasileira. BNDES Setorial, p. 91118, mar. 2004.
PASCHOA, A. S. Naturally occurring radioactive materials (NORM) and petroleum origin.
Applied Radiation and Isotopes, v. 48, n. 10-12, p. 13911396, out. 1997.
PEREIRA, A.; FREITAS, D. DE. Uso de micro-organismos para a biorremediao de
ambientes impactados. Revista Eletrnica em Gesto, Educao e Tecnologia Ambiental,
v. 6, n. 6, p. 9951006, 2012.
PEREIRA, R. M. Tcnicas de imobilizao e estabilizao de lipases obtidas a partir de
diferentes fontes microbianas. [s.l.] Universidade Federal de Alfenas, 2014.
PETER, M. Applications and environmental aspects of chitin and chitosan. J Macromol Sci
Pure Applied Chemistry, v. 32, p. 629640, 1995.
PETROBRAS. O petrleo e a Petrobras. [s.l: s.n.].
POFFO, . R. F. Vazamentos de leo no litoral Norte do Estado de So Paulo: Anlise
Histrica (1974-1999). [s.l.] Universidade de So Paulo, 2000.
SCHOFFER, J. N. Imobilizao de Ciclodextrina Glicosil Transferase para Produo de
Ciclodextrinas: Catlise em Batelada e Catlise contnua em Reator de Leito Fixo. [s.l.]
Universidade Federal do Rio Grande do Sul, 2013.
SCOTT, C. D. Techniques for Producing Monodispersed Biocatalyst Beads for Use in
Columnar Bioreactors. Annals of the New York Academy of Sciences, v. 501, n. Enzyme
Enginering 8, p. 487493, jun. 1987.
SILVA, R. D. C. F. S. et al. Applications of biosurfactants in the petroleum industry and the
remediation of oil spills. International Journal of Molecular Sciences, v. 15, n. 7, p. 12523
12542, 2014.
SOUZA, E. C. Produo e ao de biossurfactante produzido por bactrias em meios
salinos contaminados por hidrocarbonetos aromticos. [s.l: s.n.].
SZEWZYK, S. B. O. Processos envolvidos em um derramamento de leo no marII
Seminrio e Workshop em Engenharia Ocenica. Anais...Rio Grande (RS): 2006
Terminais e Oleodutos. . [s.l: s.n.]. Disponvel em: <http://www.petrobras.com.br/pt/nossasatividades/principais-operacoes/terminais-e-oleodutos/>. Acesso em: 8 set. 2015.
TONINI, R. M. C. W.; DE REZENDE, C. E.; GRATIVOL, A. D. Degradao e biorremediao
de compostos do petrleo por bactrias: Reviso. Oecologia Australis, v. 14, n. 4, p. 1025
1035, 2010.

12
TOSCAN, K. H. et al. Laudo Tcnico Ambiental N 01/2012/Mb-Ibama-FepamPorto
Alegre (RS)IBAMA-FEPAM, , 2012.
VIDALI, M. Bioremediation - An overview. Journal of Industrial Pollution Control, v. 27,
n. 2, p. 161168, 2011.
VIEGAS, T. O balano do vazamento de petrleo no Golfo do Mxico. Disponvel em:
<https://infopetro.wordpress.com/2010/08/23/a-bp-e-as-alternativas-do-desastre-aesperanca/>. Acesso em: 8 set. 2015.
WANG, J. et al. Optimization of the methods for extraction of chitin in crab shell and
preparation of chitosan. J. Harbin Inst. Technology, v. 8, n. 2, p. 199202, 2001.
WIDDEL, F.; RABUS, R. Anaerobic biodegradation of saturated and aromatic hydrocarbons.
Current Opinion in Biotechnology, v. 12, n. 3, p. 259276, 2001.
WILSON, N. G.; BRADLEY, G. The effect of immobilization on rhamnolipid production by
Pseudomonas fluorescens. Journal of Applied Bacteriology, v. 81, n. 5, p. 525530, 1996.
WOODWARD, J. Methods of immobilization of microbial cells. Journal of Microbiological
Methods, v. 8, n. 1-2, p. 91102, 1988.
YEUNG, C. W. et al. Analysis of bacterial diversity and metals in produced water, seawater
and sediments from an offshore oil and gas production platform. Marine Pollution Bulletin,
v. 62, p. 20952105, 2011.