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BAM: Salmonella

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AVISO PRVIO:
Se voc est procurando BAM Captulo 5: Salmonella (Dezembro de 2007 Edition)
que so incorporadas por referncia em 21 CFR Partes 16 e 118: Federal Register
final Regra (9 de julho de 2009, 74 FR 33030): Preveno de Salmonella Enteritidis
em Shell Eggs Durante Produo, Armazenamento e Transportes, use estas verses
do BAM Salmonella captulo (PDF, 189 Kb) e Apndice 1: Mtodos rpidos para
deteco de Patgenos Transmitidas por Alimentos (PDF, 195 Kb). Estes 2
documentos tambm esto disponveis como um arquivo combinado (PDF, 382 Kb).
A mais recente edio do BAM Captulo 5: Salmonella est disponvel abaixo deste
aviso.

Verso de Maio de 2014

Analtico Bacteriolgico manual


Captulo 5 Salmonella

Autores: Wallace H. Andrews, Andrew Jacobson e Thomas Hammack


Histrico de Reviso:

Dezembro 2015 - A seo para o Processo Statens Serum Institute foi adicionado
a Seo E: Identificao deSalmonella.

Maio 2014 - O mtodo de identificao Vitek genrico presuntivo de Salmonella foi


atualizado.

Fev 2014 - Seo de deteco e isolamento de Salmonella a partir de ovos de


casca foi substitudo, e dados de validao e referncias additonal foram adicionados
em um apndice.

Agosto de 2012, Novembro de 2011 - Feito disponvel em verses de formato PDF


do captulo 5: Salmonella e no apndice 1 (arquivado) de 2009, que foram incorporadas
por referncia em 21 CFR Partes 16 e 118: Federal Register final regra (9 de julho de
2009, 74 FR 33030): Preveno de Salmonella Enteritidis em ovos durante Shell de
Produo, Armazenamento e Transporte.

Novembro de 2011 - Adio a Seo C: Preparao de alimentos para o


isolamento de Salmonella: Vegetais de folhas verdes e ervas.

Fevereiro de 2011 - ligao removido para Apndice 1: Mtodos rpidos para


deteco de Patgenos Transmitidas por Alimentos (agora arquivado).

Dezembro de 2007 - Mtodo de celulose Mamey adicionado, e Seco D revisado.

Junho de 2006 - Ovos mtodo revisto para ovos com casca e os ovos inteiros
lquidos.

Abril 2003 - R mtodo pernas, casena lctico, coalho casena, caseinato de sdio
e mtodos Coelho carcaa revistos, orelhas de topo e outro co mastigar brinquedos
acrescentou. A.25 seo removida, agitador mecnico.

25 de outubro de 2001 - Prorrogao da aplicabilidade do mtodo de suco de


laranja na seco C.19 para suco de ma e cidra de ma.

1999-dezembro de 2000-MAR, e 2000-agosto reviso final sobre 2000-NOV-14


(ver a Introduo para um resumo das alteraes).

Para obter uma cpia de uma verso anterior no est publicado, por favor entre em
contato Thomas Hammack

Contedo do Captulo

Introduo

Equipamentos e Materiais

Mdia e Reagentes

Preparao de alimentos para o isolamento de Salmonella

Isolamento de Salmonella

Identificao de Salmonella

Referncias

Introduo

Vrias mudanas esto sendo introduzidas nesta edio de BAM (8 th Edition). A primeira
mudana envolve a ampliao do uso de Rappaport-Vassiliadis (RV) mdio para alimentos
com ambos os altos e baixos nveis de microflora competitivos. Na edio anterior, mdio
RV foi recomendado apenas para a anlise do camaro.Com base na concluso de AOAC
precollaborative (5, 6) e colaborativa (7, 8) estudos, forma RV est agora a ser
recomendada para a anlise de alta e baixa microbiana alimentos carga
microbiana. Forma RV substitui selenito cistina (SC) caldo para a anlise de todos os
alimentos, com excepo de goma de guar. Alm disso, o meio de RV substitui lauril caldo
de triptose para uso com levedura seca activa. Tetrationato (TT) caldo continua a ser
utilizado como o segundo caldo de enriquecimento selectivo. No entanto, o caldo TT deve
ser incubada a 43 C durante a anlise de alimentos com alto teor de carga microbiana e
a 35 C durante a anlise de alimentos de baixa carga microbiana, incluindo goma de
guar.
A segunda mudana envolve a opo de refrigerao preenrichments incubadas e
enriquecimentos seletivos de alimentos de baixa umidade por at 72 h. Com esta opo,
as anlises das amostras pode ser iniciada to tarde na quarta-feira ou quinta-feira sem
trabalho nos finais de semana estar envolvido.
A terceira mudana envolve a reduo do perodo de incubao do gar de ferro e lisina
(LIA) inclinaes. Na primeira edio (BAM-7), triplo gar de ferro e acar (ETI) e rampas
de LIA foram incubadas a 35 C durante 24 2 horas e 48 2 h, respectivamente. Dados
no publicados tm demonstrado que a leitura das 48 h inclinaes LIA sem valor de
diagnstico. De 193 inclinaes LIA examinados, todas deram resultados definitivos dentro
de 24 2 h de incubao. No ocorreram alteraes significativas alterou o resultado final
do ensaio quando os slants foram incubadas durante 24 h adicionais. Assim, ambos os
planos inclinados TSI e LIA esto agora incubadas durante 24 2 h.
A quarta mudana envolve o procedimento de desinfeco de superfcies de casca dos
ovos. Na edio anterior (BAM-7), cascas de ovos desinfectados foram superfcie por
imerso em soluo de cloreto mercrico a 0,1% durante 1 h, seguida por imerso em
etanol a 70% durante 30 min. Cloreto de mercrio classificado como resduo perigoso, e
caro para dispor de acordo com as diretrizes da Agncia de Proteo Ambiental.Nesta
edio (MAB-8) cascas de ovos so agora por imerso durante pelo menos 10 seg num 3
desinfectadas superficialmente: soluo 1 consiste em 3 partes de 70% de lcool (etlico
ou isoproplico) para 1 parte de iodo / iodeto de potssio .
A quinta mudana envolve a preparao de amostras de ovos. O contedo dos ovos (gema
e albmen) so completamente misturados antes da anlise. Depois de misturar os
contedos do ovo, 25 g (ml) so adicionados a 225 ml de caldo de tripticase (trptica) de
soja suplementado com sulfato ferroso.
Um mtodo para a anlise de goma de guar foi includo. Quando a goma de guar
preenriched a uma proporo de 1: 9 de amostra / caldo, um altamente viscosos, mistura
resulta nonpipettable. A adio da enzima celulase ao meio preenrichment, no entanto,
resulta em uma mistura prontamente pipettable.

Um mtodo para suco de laranja (pasteurizado e no pasteurizado) foi includa devido a


surtos relacionados com o suco de laranja recentes.
As instrues para escolher colnias dos gares seletivos chapeamento ter sido mais
explcito para refletir a inteno do mtodo. Na ausncia de colnias tpicos ou suspeitos
sobre os gares chapeamento seletivos, recomenda-se que as colnias atpicas ser
escolhido para TSI e LIA inclinaes. Essa recomendao baseada no fato de que at
4% de todas as Salmonella culturas isoladas por analistas do FDA de certos alimentos,
especialmente frutos do mar, durante os ltimos anos tm sido atpico.
Finalmente, uma vez que a publicao de Bam-7, uma comparao de 6 vias foi conduzida
da eficcia relativa dos trs gares chapeamento selectivos recomendadas na
BAM (bismuto sulfito, Hektoen entrico, e gares desoxicolato xilose lisina) e trs
relativamente novos gares ( EF-18, xilose lisina Tergitol 4, e gares Rambach). Os nossos
resultados (9) indicada nenhuma vantagem em substituio de qualquer dos gares Bamrecomendadas com um ou mais dos gares mais recentes. Assim, a combinao dos
gares chapeamento selectivos recomendadas na BAM-7 permanece inalterada.
Voltar para Contedo do Captulo

A.

Equipamentos e Materiais
1.
Blender e frascos esterilizados liquidificador (veja BAM Captulo 1)
2.

Estril, 16 oz (500 ml) de boca larga, frascos com tampa de rosca, estreis
de 500 ml frascos de Erlenmeyer, estreis 250 ml copos, vidro ou papel funis
estreis de tamanho apropriado, e, opcionalmente, recipientes de capacidade
apropriada para acomodar amostras composited

3.

Estril, vidro dobrado ou hastes plsticas propagador

4.

Equilbrio, com pesos; 2000 g de capacidade, sensibilidade de 0,1 g

5.

Equilbrio, com pesos; 120 g de capacidade, a sensibilidade de 5 mg

6.

Incubadora, 35 2 C

7.

Incubadora refrigerada ou laboratrio geladeira, 4 2 C

8.

Banho-maria, 49 1 C

9.

Banho de gua, circulao, controlado por termstato, 43 0,2 C

10.

Banho de gua, circulao, controlado por termstato, 42 0,2 C

11.
12.
13.

Colheres esterilizadas ou outros instrumentos adequados para a


transferncia de amostras de alimentos
Placas de cultura estreis, 15 100 mm, vidro ou plstico
Pipetas esterilizadas, 1 ml, com graduaes de 0,01 ml; 5 e 10 ml, com
graduaes de 0,1 ml

14.

Inoculando agulha e inoculando loop (ID de cerca de 3 mm ou 10 5l),


nichrome, platina-irdio, fios chromel, ou plstico estril

15.

Ensaio ou de cultura estril tubos, 16 x 150 mm e 20 x 150 mm; tubos


sorolgicos, 10 75 mm ou 13 x 100 mm

16.

Ensaio ou cultura suportes de tubos

17.

Misturador Vortex

18.

Tesouras estreis, grandes tesouras, bisturi e pinas,

19.

Lmpada (para a observao de reaes sorolgicas)

20.

Fisher ou bico de Bunsen

21.
22.

B.

papel de teste pH (faixa de pH 6-8) com graduaes mximas de 0,4


unidades de pH por mudana de cor
medidor de pH

23.

Os sacos de plstico, 28 37 cm, estril, com fita possa ser fechada


novamente. (Artigos 23-24 so necessrios para a anlise de pernas de r e
carcaas de coelho.)

24.

Copos de plstico, 4 litros, autoclavveis, para a realizao de saco de


plstico durante a agitao e incubao.

25.

Esponjas, non-bactericida (Nasco cat # B01299WA), ou equivalente.

26.

Cotonetes, no-bactericida, com ponta de algodo.

Mdia e Reagentes
Para a preparao de meios e reagentes, consulte Mtodos 967.25-967.28
em Official Methods of Analysis(1).
1.

Caldo de lactose (M74)

2.

Leite em p desnatado (reconstitudo) (M111)

3.

Cistina selenito (SC) caldo (M134)

4.

Tetrationato (TT) caldo (M145)

5.

Rappaport-Vassiliadis (RV) mdio (M132). NOTA: medium RV deve ser feita


a partir de seus ingredientes individuais. Formulaes comerciais no so
aceitveis.

6.

Xilose lisina desoxicolato (XLD) agar (M179)

7.

Hektoen entrica (HE) agar (M61)

8.

Bismuth sulfite (BS) agar (M19)

9.

Triplo agar acar ferro (TSI) (M149)

10.

Triptona (triptofano) caldo (M164)

11.

Trypticase (trptica) de caldo de soja (M154)

12.

Trypticase soy-triptose caldo (M160)

13.

Caldo MR-VP (M104)

14.

Agar citrato Simmons (M138)

15.

Caldo de Ureia (M171)

16.

Caldo de Ureia (rpida) (M172)

17.

Caldo de malonato de dietilo (M92)

18.

Lisina agar de ferro (LIA) (Edwards e Fife) (M89)

19.

Caldo de lisina descarboxilase (M87)

20.

Meio de teste de motilidade (semi-slida) (M103)

21.

Cianeto de potssio (KCN) caldo (M126)

22.

Caldo de fenol vermelho do hidrato de carbono (M121)

23.

Caldo carboidrato Purple (M130)

24.

Agar MacConkey (M91)

25.

Caldo nutriente (M114)

26.

Infuso de crebro e corao (BHI) (M24)

27.

Soluo de papana, 5% (M56a)

28.

Soluo de celulase, 1% (M187)

29.

Base de agar sangue Triptose (M166)

30.

Caldo preenrichment Universal (M188)

31.

Caldo preenrichment Universal (sem citrato de amnio frrico) (M188a)

32.

gua peptonada tamponada (M192)

33.

Caldo de Dey-Engley (M193)

34.

Sulfito de potssio em p, anidro

35.

Soluo de cloro, de 200 ppm, contendo 0,1% de dodecilsulfato de


sdio (R12a)

36.

Etanol, 70% (R23)

37.

Reagente de Kovacs (R38)

38.

Voges-Proskauer (VP) reagentes de teste (R89)

39.

Cristais de fosfato de creatina

40.

Soluo de hidrxido de potssio, 40% (R65)

41.

Soluo de hidrxido de sdio 1 N (R73)

42.

1 de cido clordrico N (R36)

43.

Soluo corante verde brilhante, 1% (R8)

44.

Bromocresol soluo corante roxo, 0,2% (R9)

45.

Indicador de vermelho de metilo (R44)

46.

gua destilada estril

47.

Tergitol Anionic 7 (R78)

48.

Triton X-100 (R86)

49.

Soluo salina fisiolgica, 0,85% (estril) (R63)

50.

Formolizados soluo salina fisiolgica (R27)

51.

Salmonella somtica polivalente (S) anti-soro

52.

Salmonella polivalente flagelar (H) anti-soro

53.

Salmonella grupo somtica (S) anti-soros: A, B,


C 1, C 2, C 3, D 1, D 2, E 1, E 2, E 3, E 4, F, G, H, I, VI, e outros grupos, conforme o caso

54.

Salmonella Spicer-Edwards flagelar (H) anti-soros


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C.

Preparao de alimentos para o isolamento de Salmonella

AVISO PRVIO:
Se voc est procurando BAM Captulo 5: Salmonella (Dezembro de 2007
Edition) que so incorporadas por referncia em 21 CFR Partes 16 e 118:Federal
Register final Regra (9 de julho de 2009, 74 FR 33030): Preveno de Salmonella
Enteritidis em Shell Eggs Durante Produo, Armazenamento e Transportes,
use estas verses do BAM Salmonella captulo (PDF, 189 Kb) eApndice 1:
Mtodos rpidos para deteco de Patgenos Transmitidas por Alimentos (PDF,
195 Kb). Estes 2 documentos tambm esto disponveis como um arquivo
combinado (PDF, 382 Kb). A mais recente edio do BAM Captulo
5: Salmonella continua abaixo deste aviso.

Os seguintes mtodos so baseados na anlise de uma unidade de anlise 25 g a


uma proporo de 1: 9 de amostra / caldo. Dependendo da extenso da composio,
adicionar caldo suficiente para manter esta proporo de 1: 9 a menos que indicado
de outra forma. Para amostras no analisada de forma exata de peso, por exemplo,
pernas de r, referem-se ao mtodo especfico para obter instrues.
1.

Gema de ovo seca, ovos brancos secos, ovos inteiros secos, leite
lquido (leite desnatado, leite gordo 2%, inteiras, e leitelho) e preparadas
misturas em p (bolo, biscoito, filhs, biscoito e po), frmula infantil, e
alimentao via oral ou tubo contendo ovo. De preferncia, no descongelar
as amostras congeladas antes da anlise. Se a amostra congelada deve ser
temperado para obter poro analtica, descongelar poro adequada, to

rapidamente quanto possvel para minimizar o aumento no nmero de


organismos concorrentes ou para reduzir o potencial de
lesoSalmonella organismos. Descongelar abaixo de 45 C durante 15 min,
com agitao contnua no banho de gua controlado termostaticamente ou
descongelamento a 18 h a 2-5 C. Assepticamente pesar 25 g de amostra em
estril, de boca larga, frasco com tampa de rosca (500 ml) ou outro recipiente
adequado. Para amostras nonpowdered, adicionar 225 ml estreis de caldo
de lactose. Se o produto em p, adicionar cerca de 15 ml de caldo de lactose
estril e mexa com haste de vidro estril, colher, ou esptula para alisar
suspenso. Adicionar 3 pores adicionais de caldo de lactose, 10, 10, e 190 ml,
para um total de 225 ml. Mexa bem at que amostra suspenso sem
grumos.Tampo frasco de forma segura e deixar em repouso 60 5 min
temperatura ambiente. Misture bem por roda e determinar pH com papel de
teste. Ajustar o pH, se necessrio, para 6,8 0,2 com NaOH 1 N estril ou 1 N
de HCl. Cap jar de forma segura e misture bem antes de determinar pH
final. Solte a tampa jar cerca de 1/4 de volta e incubar 24 2 h a 35
C. Continuar como em D, 1-11, abaixo.
2.

Ovos
a.

Cascas de ovos [10,11]. Ovos com lascado, rachado, ou conchas


quebradas no esto includos na amostra. Remova qualquer material
aderente da superfcie da casca do ovo. Desinfectar a superfcie do ovo
com uma soluo constituda por 3 partes de lcool a 70% (ou acetato de
isopropilo) para 1 parte de soluo de iodeto de iodo / potssio. Preparar
soluo a 70% de lcool, quer por diluio de 700 ml de 100% de lcool
com gua destilada estril para um volume final de 1.000 ml ou diluindo
700 ml de lcool a 95% com gua destilada estril para um volume final de
950 ml. Prepare soluo de iodeto de iodo / potssio dissolvendo 100 g de
iodeto de potssio em 200-300 ml de gua destilada estril. Adicionar 50 g
de iodo e aquece-se suavemente com mistura constante at que o iodo
esteja dissolvido. Dilui-se a soluo de iodeto de iodo / de potssio a 1.000
ml com gua destilada estril. Armazenar a Soluo de iodeto de iodo /
potssio num frasco com rolha de vidro mbar no escuro, se no for
utilizado imediatamente. Preparar a soluo de desinfeco atravs da
adio de soluo / iodeto de potssio de 250 ml de soluo de iodo a 750
ml de lcool a 70% e misturar bem. Mergulhe ovos em soluo desinfetante
por 10 segundos (certifique-se de no menos de 10 segundos). Remover
os ovos a partir da soluo e deixar secar ao ar. Cada amostra ser
composta por 20 (vinte) ovos, para um total de 50 (cinquenta) amostras por
capoeira. Os ovos so rachados assepticamente para um copo estril 4L
ou outro recipiente adequado por mos enluvadas, com uma mudana de
luvas entre as amostras. Misture amostras cuidadosamente com uma
ferramenta estril por mos enluvadas at gemas so completamente
misturada com a clara, com uma mudana de luvas entre as
amostras. Preenrich a amostra 20 de ovo por adio de 2 L de caldo de
tripticase de soja esterilizada (TSB; temperatura ambiente) e misturar bem

com uma ferramenta esterilizada. Cubra com segurana e incubar 24 2 h


a 35 C.Continuar como em D, 1-11, abaixo.
Veja Salmonella Apndice para validao de dados
b.

Ovos inteiros lquidos (homogeneizado). Combinar quinze (15)


pores de 25 ml de teste numa compsito continha 375 ml num balo de
Erlenmeyer de 6 litros. Os compostos so mantidas temperatura
ambiente (20-24 C) durante 96 2 h. Aps 96 2 horas, adicionar 3,375
ml estril TSB suplementado com sulfato ferroso, tal como descrito acima,
e misturar bem por agitao. Deixar repousar a 60 5 min temperatura
ambiente. Misture bem por roda e determinar pH com papel de
teste. Ajustar o pH, se necessrio, para 6,8 0,2. Incubar 24 2 h a 35
C. Continuar como em D, 1-11, abaixo.

c.

Ovos cozidos (frango, pato, e outros). Se as cascas de ovos


ainda esto intactos, desinfectar os reservatrios como descrito acima e
assepticamente separar as cascas dos ovos. Pulverizar os ovos (gema de
ovo e slidos de ovo de slidos brancos) assepticamente e pesa 25 g em
500 ml de uma soluo estril Erlenmeyer ou outro recipiente
adequado. Adicione 225 ml TSB (sem sulfato ferroso) e misture bem por
agitao. Continue como descrito acima.

3.

4.

Leite em p desnatado
a.

Instantnea. De forma assptica, pesar 25 g de amostra num copo


estril (250 ml) ou outro recipiente adequado. Usando vidro ou papel estril
funil (feito com fita para suportar autoclave), despeje 25 g unidade analtica
suave e lentamente sobre a superfcie de 225 ml brilhante verde gua
contida em 500 ml estril Erlenmeyer ou outro recipiente adequado. Em
alternativa, 25 g de unidades analticas podem ser compostas e derramou
sobre a superfcie proporcionalmente maiores volumes de gua verde
brilhante. Prepare brilhante verde gua por adio de 2 mlbrilhante soluo
corante verde 1% por cada 1000 ml de gua destilada estril. Vamos
recipiente repouso durante 60 5 min. Incubar recipiente fechado, sem
misturar ou de ajuste de pH, durante 24 2 h a 35 C. Continuar como
em D, 1-11, abaixo.

b.

No imediato. Examinar como descrito para o leite em p magro


instantneo, excepto que as unidades de anlise 25 g no podem ser
compostas.

Leite integral seco. Examinar como descrito para o leite em p magro


instantneo, excepto que as unidades de anlise 25 g no podem ser
compostas.

5.

Casena
a.

Casena lctico. Assepticamente pesar 25 g de amostra num copo


estril (250 ml) ou outro recipiente adequado. Usando vidro ou papel estril
funil (feita com fita para suportar a autoclavagem), verter 25 g analtica

unidade suave e lentamente sobre a superfcie de 225 ml de caldo


Preenrichment universal contido em 500 ml esterilizado Erlenmeyer ou
outro recipiente adequado. Unidades de anlise (25 g) pode ser
composta. Vamos recipiente ficar imperturbvel 60 5 min. Incubar
recipiente fechado, sem misturar ou de ajuste de pH, durante 24 2 h a 35
C. Continuar como em D, 1-11, abaixo.
b.

Casena de coalho. Assepticamente pesar 25 g de amostra num


copo estril (250 ml) ou outro recipiente adequado. Usando vidro ou papel
estril funil (feita com fita para suportar a autoclavagem), verter 25 g
analtica unidade suave e lentamente sobre a superfcie de 225 ml de caldo
de lactose contida em 500 ml esterilizado Erlenmeyer ou outro recipiente
adequado.Unidades de anlise (25 g) pode ser composta. Vamos
recipiente ficar imperturbvel 60 5 min.Incubar recipiente fechado, sem
misturar ou de ajuste de pH, durante 24 2 h a 35 C. Continuar como
em D, 1-11, abaixo.

c.

O caseinato de sdio. Assepticamente pesar 25 g de amostra em


estril, de boca larga, frasco com tampa de rosca (500 ml) ou outro
recipiente adequado. Adicione 225 ml de caldo de lactose estril e misture
bem. Unidades de anlise pode ser composta. Deixe repousar 60 minutos
temperatura ambiente com o frasco tampado firmemente. Misture bem por
roda e determinar pH com papel de teste. Ajustar o pH, se necessrio, para
6,8 0,2. Solte frasco cerca de 1/4 de volta e incubar 24 2 h a 35
C. Continuar como em D, 1-11, abaixo.

6.

Farinha de soja. Examine como descrito para coalho casena, exceto 25 g


unidades de anlise (25 g) no pode ser composta.

7.

Produtos (macarro, rolos de ovo, macarro, espaguete), queijo,


massa, saladas preparadas (presunto, ovo, frango, atum, Turquia), frescos,
congelados ou frutas secas e legumes, carnes porca, crustceos (camaro
contendo ovo, caranguejo, crustceo, langostinos, lagosta) epeixe. De
preferncia, no descongelar as amostras congeladas antes da anlise. Se a
amostra congelada deve ser temperado para obter poro analtica, degelo
abaixo de 45 C durante <15 min com agitao contnua no banho de gua
controlado termostaticamente ou descongelamento a 18 h a 2-5 C.
Assepticamente pesar 25 g de amostra no recipiente de mistura estril. Adicione
225 ml estril caldo de lactose e misturar 2 min. Transferncia assepticamente
homogeneizada a mistura estril, de boca larga, frasco com tampa de rosca (500
ml) ou outro recipiente apropriado e deixe descansar por 60 5 minutos em
temperatura ambiente com o frasco tampado firmemente. Misture bem por roda
e determinar pH com papel de teste. Ajustar o pH, se necessrio, para 6,8
0,2. Misture bem e soltar tampa jar cerca de 1/4 de volta. Incubar 24 2 h a 35
C. Continuar como em D, 1-11, abaixo.

8.

Levedura seca (ativo e levedura inativa). Assepticamente pesar 25 g de


amostra em estril, de boca larga, frasco com tampa de rosca (500 ml) ou outro
recipiente adequado. Adicione 225 ml estril caldo de tripticase de soja. Misture

bem para formar suspenso homognea. Deixe repousar 60 5 min


temperatura ambiente com o frasco tampado firmemente. Misture bem por roda
e determinar pH com papel de teste. Ajustar o pH, se necessrio, a 6,8 0,2,
misturar bem antes de determinar o pH final.Solte a tampa jar 1/4 de volta e
incubar 24 2 h a 35 C. Continuar como em D, 1-11, abaixo.
9.

Geada e superando misturas. Assepticamente pesar 25 g de amostra em


estril, de boca larga, frasco com tampa de rosca (500 ml) ou outro recipiente
adequado. Adicione 225 ml de caldo nutrientee misture bem. Tampo frasco de
forma segura e deixar em repouso 60 5 min temperatura ambiente. Misture
bem por roda e determinar pH com papel de teste. Ajustar o pH, se necessrio,
para 6,8 0,2. Solte a tampa jar cerca de 1/4 de volta e incubar 24 2 h a 35
C. Continuar como em D, 1-11, abaixo.

10.

11.

Temperos
a.

Pimenta preta, pimenta branca, sementes de aipo ou flocos, p


de pimento, o cominho, pprica, flocos da salsa, alecrim, semente de
gergelim, tomilho, e flocos de vegetais.Assepticamente pesar 25 g de
amostra em estril, de boca larga, frasco com tampa de rosca (500 ml) ou
outro recipiente adequado. Adicione 225 ml estril caldo de tripticase de
soja (TSB) e misture bem. Tampo frasco de forma segura e deixar em
repouso 60 5 min temperatura ambiente. Misture bem por roda e
determinar pH com papel de teste. Ajustar o pH, se necessrio, para 6,8
0,2. Solte a tampa jar sobre l / 4 de volta e incubar 24 2 h a 35
C. Continuar como em D, 1-11, abaixo.

b.

Flocos de cebola, cebola em p, flocos de alho. Assepticamente


pesar 25 g de amostra em estril, de boca larga, frasco com tampa de
rosca (500 ml) ou outro recipiente adequado. Amostra Preenrich
em TSB com adio de K 2 SO 3 (5 g K 2 SO 3 por 1000 ml TSB, resultando
em final de 0,5% K 2 SO 3 concentrao). Adicionar K 2 SO 3 a caldo de
volume antes da autoclavagem 225 ml em frascos de Erlenmeyer de 500 ml
a 121 C durante 15 min. Aps autoclavagem, assepticamente determinar
e, se necessrio, ajustar o volume final a 225 ml. Adicione 225 ml estril
TSB com adio de K 2 SO 3 a amostra e misture bem. Continuar como em
C-10-A.

c.

Pimenta da Jamaica, canela, cravo e organo. Neste momento


no existem mtodos conhecidos para neutralizar a toxicidade destes 4
especiarias. Dilu-los alm de seus nveis txicos para examinlos. Examine pimenta, canela, e organo em 1: 100 sample / rcio de caldo
de carne, e cravo em 1: 1000 proporo amostra / caldo. Examine
condimentos folhosos na amostra / caldo proporo maior do que 1:10 por
causa de dificuldades fsicas encontradas pelos absoro do caldo por
produto desidratado. Examine estas especiarias como descrito em C-10A,
rcios de exemplo acima, mantendo recomendado / caldo.

Doces e revestimento de doces (incluindo o chocolate). Assepticamente


pesar 25 g de amostra no recipiente de mistura estril. Adicione 225 ml

estril, leite em p desnatado reconstitudo e misturar 2 min. Transferncia


assepticamente homogeneizada a mistura estril, de boca larga, frasco com
tampa de rosca (500 ml) ou outro recipiente apropriado e deixe descansar por 60
5 minutos em temperatura ambiente com o frasco tampado
firmemente. Misture bem por roda e determinar pH com papel de teste. Ajustar o
pH, se necessrio, para 6,8 0,2. Adicionar 0,45 ml de 1% brilhante soluo
aquosa corante verde e misture bem. Solte tampas de frascos de 1/4 de volta e
incubar 24 2 h a 35 C. Continuar como em D, 1-11, abaixo.
12.

Coconut. Assepticamente pesar 25 g de amostra em estril, de boca larga,


frasco com tampa de rosca (500 ml) ou outro recipiente adequado. Adicione 225
ml estril caldo de lactose, agite bem, e deixe descansar por 60 5 minutos em
temperatura ambiente com o frasco tampado firmemente. Misture bem por roda
e determinar pH com papel de teste. Ajustar o pH, se necessrio, para 6,8
0,2.Adicione at 2,25 ml no vapor (15 min) Tergitol Anionic 7 e misture
bem. Como alternativa, use vapor (15 min) Triton X-100. Limite o uso desses
surfactantes a quantidade mnima necessria para iniciar a formao de
espuma. Para Triton X-100 Esta quantidade pode ser to pequena como 2 ou 3
gotas.Solte a tampa jar sobre l / 4 de volta e incubar 24 2 h a 35 C. Continuar
como em D, 1-11, abaixo.

13.

Corantes alimentares e de substncias corantes de alimentos. Para os


corantes com um pH 6.0 ou acima (10% de suspenso aquosa), o mtodo
descrito para utilizao ovos inteiros secos (Cl, acima).Para laked corantes ou
corantes com pH abaixo de 6,0, assepticamente pesar 25 g de amostra em
estril, de boca larga, frasco com tampa de rosca (500 ml) ou outro recipiente
adequado. Adicione 225 ml de caldo tetrationato sem corante verde
brilhante. Misturar bem e deixar em repouso 60 5 min temperatura ambiente
com o frasco firmemente tapado. Utilizando um medidor de pH, ajustar o pH a
6,8 0,2. Adicionar 2,25 ml brilhante soluo corante verde de 0,1% e misture
bem por agitao. Solte a tampa jar cerca de 1/4 de volta e incubar 24 2 h a 35
C. Continuar como em D, 3-11, abaixo.

14.

Gelatina. Assepticamente pesar 25 g de amostra em estril, de boca larga,


frasco com tampa de rosca (500 ml) ou outro recipiente adequado. Adicionar
225 ml estril caldo de lactose e 5 ml de soluo aquosa 5% de soluo de
papana e misturar bem. Tampo frasco de forma segura e incubar a 35 C
durante 60 5 min. Misture bem por roda e determinar pH com papel de
teste. Ajustar o pH, se necessrio, para 6,8 0,2. Solte a tampa jar cerca de 1/4
de volta e incubar 24 2 h a 35 C.Continuar como em D, 1-11, abaixo.

15.

Carnes, substitutos da carne, carne subprodutos, substncias de


origem animal, produtos glandulares, e refeies (peixe,
carne, osso). Assepticamente pesar 25 g de amostra no recipiente de mistura
estril. Adicione 225 ml estril caldo de lactose e misturar 2 min. Transferncia
assepticamente homogeneizada a mistura estril de boca larga, tampa de rosca
frasco (500 ml) ou outro recipiente apropriado e deixe descansar por 60 5
minutos em temperatura ambiente com o frasco tampado firmemente. Se a

mistura em p ou modo ou triturado, de mistura pode ser omitido. Para


amostras que no necessitam de mistura, adicione o caldo de lactose e misture
bem;deixar repousar durante 60 5 min temperatura ambiente com o frasco
firmemente tapado.
Misture bem por roda e determinar pH com papel de teste. Ajustar o pH, se
necessrio, para 6,8 0,2.Adicione at 2,25 ml no vapor (15 min) Tergitol
Anionic 7 e misture bem. Como alternativa, use vapor (15 min) Triton X100. Limite o uso desses surfactantes a quantidade mnima necessria para
iniciar a formao de espuma. Quantidade real depender da composio dos
materiais de teste. Surfactantes no ser necessrio na anlise de produtos
glandulares em p. Soltar tampas de frasco de 1/4 de volta e incubar as
misturas de amostra de 24 2 h a 35 C. Continuar como em D, 1-11, abaixo.
16.

Pernas de r. (Este mtodo usado para todas as pernas de r


domsticos e importadas.) Colocar 15 pares de pernas sapo num saco de
plstico estril e cobrir com caldo de lactose estreis, a uma proporo de 1: 9
de amostra-para-caldo (g / ml) ( ver A, 23-24, acima). Se as pernas individuais
esto estimados em mdia de 25 g ou mais, examinar apenas uma perna de
cada um dos 15 pares. Coloque o saco num grande copo de plstico ou outro
recipiente adequado. Misturar bem e deixar em repouso 60 5 min
temperatura ambiente. Misture bem por roda e determinar pH com papel de
teste. Ajustar o pH, se necessrio, para 6,8 0,2. Saco de plstico contendo
lugar as pernas de r e caldo de lactose em copo de plstico ou outro recipiente
adequado. Incubar 24 2 h a 35 C. Prosseguir a anlise como em D, 111, abaixo.

17.

Carcaas de coelho. (Este mtodo usado para todas as carcaas de


coelho nacionais e importados.) Carcaa Lugar coelho em saco de plstico
estril. Coloque o saco no copo ou outro recipiente adequado. Adicionar caldo
de lactose estreis, a uma proporo de 1: 9 de amostra-a-caldo (g / ml) para
cobrir carcaa (ver A, 23-24, acima). Misture bem por agitao e deixar em
repouso 60 5 min temperatura ambiente. Misture bem por roda e determinar
pH com papel de teste. Ajustar o pH, se necessrio, para 6,8 0,2. Incubar 24
2 h a 35 C. Prosseguir a anlise como em D, 1-11,abaixo.

18.

A goma de guar. De forma assptica, pesar 25 g de amostra num copo


estril (250 ml) ou outro recipiente adequado. Preparar uma soluo de celulase
1,0% (adicionar 1 g de celulase para 99 ml de gua destilada estril). Distribuise garrafas de 150 ml. (Soluo de celulase pode ser armazenado a 2-5 C
durante at 2 semanas). Adicionar 225 ml estreis de caldo de lactose e 2,25 ml
de soluo estril de 1% a celulase estril, de boca larga, frasco com tampa de
rosca (500 ml) ou outro recipiente adequado. Enquanto se agitava
vigorosamente a celulase / caldo de lactose com um agitador magntico, verter
25 g unidade analtica rapidamente atravs de funil de vidro estril para o
celulase / caldo de lactose. Tampo frasco de forma segura e deixar em repouso
60 5 min temperatura ambiente. Incubar recipiente fechado, sem

ajustamento de pH, durante 24 2 h a 35 C. Continuar como em D, 111, abaixo.


19.

Suco de laranja (pasteurizado e no pasteurizado), sidra de ma


(pasteurizado e no pasteurizado), e suco de ma (pasteurizado). Adicionar
assepticamente 25 ml de amostra a 225 mlUniversal preenrichment caldo em
um, de boca larga, com tampa de rosca frasco estril (500 ml) ou outro
recipiente adequado. Agitar o contedo do frasco cuidadosamente. Tampo
frasco de forma segura e deixar em repouso 60 5 min temperatura
ambiente. No ajustar o pH. Incubar recipiente fechado durante 24 2 h a 35
C. Continuar como em D, 1-11, abaixo (tratar como um alimento de baixo carga
microbiana).

20.

Pig orelhas e outros tipos de co mastigar pedaos. Coloque um


pedao (ou 2-3 pedaos se tamanhos menores) de cada unidade da amostra em
saco de plstico estril. Coloque o saco em grande copo ou outro recipiente
adequado. Adicionar caldo de lactose estreis, a uma proporo de 1: 9 de
amostra-a-caldo (g / ml), para cobrir as peas (ver A, 23-24, acima). Misture bem
por agitao e deixar em repouso 60 5 min temperatura ambiente. Misture
bem por roda e determinar pH com papel de teste. Ajustar o pH, se necessrio,
para 6,8 0,2. Adicionar tanto vapor (15 min), o Tergitol Anionic 7 ou vapor (15
min) de Triton X-100 at uma concentrao de 1%. Por exemplo, se 225 ml de
caldo de lactose adicionada, o volume mximo de surfactante adicionado
2,25 ml. Limitar o uso destes surfactantes a quantidade mnima para iniciar a
formao de espuma. Incubar 24 2 h a 35 C. Continua exame como em D, 111, abaixo.

21.

Cantaloupes. De preferncia, no descongelar as amostras congeladas


antes da anlise. Se a amostra congelada deve ser temperado para obter
poro analtica, degelo abaixo de 45 C durante <15 min com agitao
contnua no banho de gua controlado termostaticamente ou descongelamento
a 18 h a 2-5 C.
Para frutos liquefeitos ou cortar, de forma assptica pesar 25 g de amostra no
recipiente de mistura estril. Adicione 225 ml estril caldo preenrichment
Universal (UP) e misturar 2 min. Transferncia assepticamente homogeneizada
a mistura estril, de boca larga, frasco com tampa de rosca (500 ml) ou outro
recipiente apropriado e deixe descansar por 60 5 minutos em temperatura
ambiente com o frasco tampado firmemente. No ajustar o pH. Misture bem e
soltar tampa jar cerca de 1/4 de volta.Incubar 24 2 h a 35 C. Continuar como
em D, 1-11, abaixo.
Para meles inteiros, no lavar, mesmo se houver sujeira visvel. Examine os
meles "tal como est".
Coloque o melo em um saco de plstico estril. Adicionar suficiente UP caldo
para permitir que o melo flutuar. O volume de UP caldo pode ser 1,5 vezes o
peso dos meles. Por exemplo, meles pesando 1,500 g, provavelmente, ser
necessrio um volume de aproximadamente 2250 ml UP caldo para
flutuar. Adicionar mais caldo, se necessrio. Coloque o saco plstico, com

meles e UP caldo, para um copo de 5 litros, ou outro recipiente adequado, para


apoio durante a incubao. Permitir que a aba de extremidade aberta do saco de
plstico para "dobre" de modo a formar um seguro, mas no impermevel ao ar,
o encerramento durante a incubao.
Deixar repousar durante 60 5 min temperatura ambiente. No ajustar o
pH. Incubar ligeiramente aberta saco, contendo o cantaloupe, de 24 2 h a 35
C. Continuar como em D, 1-11, abaixo.
22.

Mangas. De preferncia, no descongelar as amostras congeladas antes


da anlise. Se a amostra congelada deve ser temperado para obter poro
analtica, degelo abaixo de 45 C durante <15 min com agitao contnua no
banho de gua controlado termostaticamente ou descongelamento a 18 h a 2-5
C.
Para frutos liquefeitos ou cortar, de forma assptica pesar 25 g de amostra no
recipiente de mistura estril. Adicione 225 ml estril de gua peptonada
tamponada (BPW) e misturar 2 min. Transferncia assepticamente
homogeneizada a mistura estril, de boca larga, frasco com tampa de rosca (500
ml) ou outro recipiente apropriado e deixe descansar por 60 5 minutos em
temperatura ambiente com o frasco tampado firmemente. Misture bem por roda
e determinar pH com papel de teste. Ajustar o pH, se necessrio, para 6,8
0,2. Misture bem e soltar tampa jar cerca de 1/4 de volta. Incubar 24 2 h a 35
C. Continuar como em D, 1-11, abaixo.
Para mangas inteiras, no lavar, mesmo se houver sujeira visvel. Examine as
mangas "como est".
Coloque a manga num saco de plstico estril. Adicionar suficiente BPW para
permitir que a manga de flutuar. O volume de BPW pode ser 1,0 vezes o peso
das mangas. Por exemplo, as mangas pesando 500 g, provavelmente, ser
necessrio um volume de aproximadamente 500 ml BPW caldo para
flutuar. Adicionar mais caldo, se necessrio. Coloque o saco plstico, com
mangas e BPW caldo, para um copo de 5 litros, ou outro recipiente adequado,
para apoio durante a incubao.
Deixar repousar durante 60 5 min temperatura ambiente. Ajustar o pH para
6,8 0,2, se necessrio. Incubar saco ligeiramente aberta para 24 2 h a 35
C. Continuar como em D, 1-11, abaixo.

23.

Tomatoes. Para frutos liquefeitos ou cortar, de forma assptica pesar 25 g


de amostra no recipiente de mistura estril. Adicione 225 ml de gua peptonada
tamponada estril e misturar 2 min. Transferncia assepticamente
homogeneizada a mistura estril, de boca larga, frasco com tampa de rosca (500
ml) ou outro recipiente apropriado e deixe descansar por 60 5 minutos em
temperatura ambiente com o frasco tampado firmemente. Misture bem por roda
e determinar pH com papel de teste. Ajustar o pH, se necessrio, para 6,8
0,2. Misture bem e soltar tampa jar cerca de 1/4 de volta. Incubar 24 2 h a 35
C. Continuar como em D, 1-11, abaixo.

Para os tomates inteiros, no lavar, mesmo se houver sujeira visvel. Examine os


tomates "tal como est".
Coloque o tomate em um saco de plstico estril ou outro recipiente apropriado
(folha coberta proveta esterilizada pode ser utilizado). Adicionar
suficiente UP caldo para permitir que o tomate para flutuar. O volume
de UP caldo pode ser 1,0 vezes o peso do tomate. Por exemplo, os tomates
pesando 300 g, provavelmente, ser necessrio um volume de
aproximadamente 300 ml UP caldo para flutuar.Adicionar mais, se
necessrio. Coloque o saco de plstico (se usado), com tomate e UP caldo, num
copo de precipitao estril (tamanho taa dependente do tamanho do
tomate), ou outro recipiente apropriado, para o apoio durante a
incubao. Permitir que a aba de extremidade aberta do saco de plstico para
"dobre" de modo a formar um seguro, mas no impermevel ao ar, o
encerramento durante a incubao.
Deixar repousar durante 60 5 min temperatura ambiente. No ajustar o
pH. Incubar saco ligeiramente aberta para 24 2 h a 35 C. Continuar como
em D, 1-11, abaixo.
24.

Testes ambientais. Superfcies do ambiente de amostras com cotonetes ou


esponjas estreis.Coloque o cotonete / esponja em uma bolsa estril Giro-pak,
ou equivalente, que contm o suficienteDey-Engley (DE) caldo para cobrir o
cotonete / esponja.
Cotonetes Transporte / esponjas em um recipiente de isolamento de transporte
com gel congelado packs para manter as amostras de frio, mas no
congelados. Se as amostras no podem ser processados imediatamente,
refrigerar a 4 2 C. Comece a anlise da amostra no prazo de 48 2 h aps a
coleta.
Adicionar zaragatoa / esponja para 225 ml de caldo de lactose num, de boca
larga, com tampa de rosca frasco estril (500 ml) ou outro recipiente
adequado. Agitar o contedo do frasco cuidadosamente. Tampo frasco de
forma segura e deixar em repouso 60 5 min temperatura ambiente. Misture
bem por roda e determinar pH com papel de teste. Ajustar o pH, se necessrio,
para 6,8 0,2. Incubar 24 2 h a 35 C. Prosseguir a anlise como em D, 111, abaixo.

25.

Sementes de alfafa e feijo mungo. Assepticamente pesar sementes de


alfafa 25g ou feijo verde em um frasco de 500 ml Erlenmeyer
estreis. Adicionar assepticamente 225 ml caldo de lactose toma de ensaio e
agite o Erlenmeyer. Cobrir a boca do balo de Erlenmeyer com a folha de
alumnio estril e permite que o contedo em repouso temperatura ambiente
durante 60 5 min. Ajustar o pH da cultura a 6,8 0,2, se necessrio. Incubar
durante 24 2 horas a 35 2 C. Continuar como em D, 1-11, abaixo (tratar
como alimentos de alta carga microbiana).

26.

Mamey polpa. Se congelado, amostra deve ser temperado para obter parte
analtica. Descongelar abaixo de 45 C durante <15 min com agitao contnua

no banho de gua controlado termostaticamente ou descongelamento a 18 h a


2-5 C.
Para polpa mamey, suspeitos de estarem contaminados com S. Typhi,
assepticamente pesar 25 g de amostra em estril, de boca larga, frasco com
tampa de rosca (500 ml) ou outro recipiente adequado.Adicione 225 ml
estril caldo Universal Preenrichment sem citrato de amnio frrico, misturar por
agitao, e deixe descansar por 60 5 minutos em temperatura ambiente com o
frasco tampado firmemente. No ajustar o pH. Misture bem e soltar tampa jar
cerca de 1/4 de volta. Incubar 24 2 h a 35 C. Continuar como em D, 111, abaixo. Tratar como um alimento de baixo carga microbiana.
Para polpa mamey, que no sejam suspeitos de estarem contaminados
com S. Typhi, assepticamente pesar 25 g de amostra em estril, de boca larga,
frasco com tampa de rosca (500 ml) ou outro recipiente adequado. Adicione 225
ml de caldo estril Universal Preenrichment, misturar por agitao, e deixe
descansar por 60 5 minutos em temperatura ambiente com o frasco tampado
firmemente.No ajustar o pH. Misture bem e soltar tampa jar cerca de 1/4 de
volta. Incubar 24 2 h a 35 C.Continuar como em D, 1-11, abaixo.
27.

Vegetais de folhas verdes e ervas aromticas (espinafre beb,


Romaine alface, coentro, salsa cacheados, salsa italiana, culantro, repolho,
e manjerico). Assepticamente pesar 25 g para um frasco esterilizado
Erlenmeyer boca larga ou outro recipiente adequado. Adicione 225 ml de caldo
de lactose e misture manualmente por contedo vigorosamente agitando o
frasco de 25 vezes no sentido horrio e anti-horrio 25 vezes. Permitir que o
balo em repouso temperatura ambiente durante 60 5,0 minutos, medir o pH
e ajust-lo a 6,8 0,2 com NaOH 1 N ou HC1 IN, se necessrio. Incubar a 35
2.0 C durante 24 2,0 horas e deve prosseguir como em D, 1-11, abaixo.

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D.

Isolamento de Salmonella
1.

Apertar a tampa e agitar suavemente amostra incubada.


A goma de guar e gneros alimentcios suspeitos de estarem
contaminados com S. Typhi.Transferir 1 ml de uma mistura a 10 ml de selenito
cistina (SC) de caldo e outra 1 ml de uma mistura de 10 ml de caldo TT. Vrtice.
Todos os outros alimentos. Transferir 0,1 ml de uma mistura de 10 ml
de Rappaport-Vassiliadis (RV) mdio e outro 1 ml de uma mistura de 10 ml
de tetrationato (TT) caldo. Vrtice.

2.

Incubar meios de enriquecimento selectivo da seguinte forma:


Alimentos com uma alta carga microbiana. Incubar forma RV 24 2 h a 42
0,2 C (em circulao, controlado termostaticamente, banho de gua). Incubar
caldo TT 24 2 h a 43 0,2 C (em circulao, controlado termostaticamente,
banho de gua).

Alimentos com uma baixa carga microbiana (excepto goma de guar e


gneros alimentcios suspeitos de estarem contaminados
com S. Typhi). Incubar mdio RV 24 2 horas a 42 0,2 C (em circulao,
com termstato, banho de gua). Incubar caldo TT 24 2 h a 35 2,0 C.
A goma de guar e gneros alimentcios suspeitos de estarem
contaminados com S. Typhi.Incubar SC e TT caldos de 24 2 h a 35 C.
3.

Mix (vortex, se o tubo) e raia trs milmetros ansa (10 ul) incubadas caldo
de TT em sulfito de bismuto (BS) agar, xilose lisina desoxicolato
agar (XLD), e Hektoen entrica (HE) agar. Prepare placas BS no dia anterior
estrias e armazenar no escuro temperatura ambiente at estrias.

4.

Repita com trs milmetros ansa (10 mL) de meio de RV (para amostras de
alimentos de alta e baixa carga microbiana) e de SC caldo (para goma de guar).

5.

Consulte a 994,04 em Official Methods of Analysis (1) para a opo de


refrigerao preenrichments amostra incubada e enriquecimentos seletivos
amostra incubada (SC e caldos TT nica) de alimentos com baixo teor de
humidade. Esta opo permite que analisa amostra deve ser iniciado o mais
tarde na quinta-feira, enquanto ainda evitando o trabalho de fim de semana.

6.

Incubar as placas de 24 2 h a 35 C.

7.

Examinar as placas para presena de colnias que podem ser Salmonella.


TPICO Salmonella morfologia da colnia
Escolha 2 ou mais colnias de Salmonella de cada agar seletivo aps 24 2 h
de incubao. TpicosSalmonella colnias so as seguintes:
a.

Hektoen entrica (HE) agar. Azul-verde para colnias azuis com


ou sem centros pretos. Muitas culturas de Salmonella podem produzir
colnias com grandes, brilhantes centros pretos ou pode aparecer como
quase completamente colnias pretas.

b.

Desoxicolato de Lisina Xilose (XLD) de agar. Colnias cor de


rosa com ou sem centros pretos.Muitas culturas de Salmonella podem
produzir colnias com grandes, brilhantes centros pretos ou pode aparecer
como quase completamente colnias pretas.

c.

Bismuth sulfite (BS) agar. Brown, cinza ou preto colnias; s


vezes eles tm um brilho metlico.Meio circundante geralmente castanho
no incio, mas pode ficar preto no tempo com o aumento da incubao,
produzindo o chamado efeito de aurola.

Se as colnias tpicas esto presentes no agar BS aps 24 2 horas de


incubao, em seguida, escolher 2 ou mais colnias. Independentemente de
estarem ou no BS placas de gar so escolhidas em 24 2 h, reincubate BS
agar um adicional de 24 2 h. Aps 48 2 horas de incubao, escolher 2 ou
mais tpicas colnias, se presente, a partir da BS agar placas, somente se
colnias colhidos a partir da BS agar placas incubadas por 24 2 h dar reaes
atpicas em gar trplice acar ferro (TSI) e gar de ferro e lisina (LIA) que

resultam na cultura de ser descartado como no


sendo Salmonella. Verseces D.9 e D.10, abaixo, para obter mais detalhes na
interpretao de reaces TSI e LIA.
ATPICOS Salmonella COLNIA MORFOLOGIA
Na ausncia de tpicos ou suspeitos de Salmonella colnias, procurar
atpicos Salmonella colnias da seguinte forma:
d.

HE e agares XLD. Atipicamente alguns Salmonella culturas


produzem colnias amarelas com ou sem centros pretos no HE e agares
XLD. Na ausncia de tpicas de Salmonella colnias em HE ou agares XLD
aps 24 2 h de incubao, em seguida, escolher 2 ou mais atpicas de
Salmonellacolnias.

e.

Agar BS. Atipicamente algumas estirpes produzem colnias verdes


com pouco ou nenhum escurecimento do meio circundante. Se as colnias
tpicas ou suspeitos no esto presentes no agar BS aps 24 2 h, ento
no escolher nenhum colnias, mas reincubate um adicional de 24 2
h. Se as colnias tpicas ou suspeitos no esto presentes aps 48 2 h
de incubao, em seguida, escolher 2 ou mais atpicos colnias.

CULTURAS controle sugeriram


Para alm das culturas de controlo positivas (tpico de Salmonella), 3
adicionais Salmonella culturas so recomendados para auxiliar na seleco de
atpica Salmonella morfologia das colnias em gar selectivo. Estas culturas so
uma lactose-positiva, H 2 S-positivo S. diarizonae (ATCC 12325) e uma lactosenegativa, H 2 S-negativo S. abortus equi (ATCC 9842); OU uma lactose-positiva,
H 2 S-negativoS. diarizonae (ATCC 29934). Estas culturas podem ser obtidas a
partir da American Type CultureCollection, 10801 University Boulevard,
Manassas, VA 20110-2209.
8.

Toque levemente no centro da colnia para ser retirado com uma agulha de
inoculao estril e inocular ETI inclinao por estrias inclinao e esfaquear
bumbum. Sem flamejante, inocular LIA inclinao por esfaquear bunda duas
vezes e, em seguida, listando inclinao. Desde reao lisina decarboxylation
estritamente anaerbias, as inclinaes LIA deve ter bunda profunda (4
cm). Loja pegou placas de agar selectivo a 5-8 C.

9.

Incubar ETI LIA e inclina a 35 C durante 24 2 h. Tubos com tampas


livremente para manter condies aerbicas enquanto incubando inclinaes
para evitar H excessiva 2 a produo de S.Salmonella em cultura produz
tipicamente alcalina (vermelho) inclinada e cido (amarelo) extremidade, com ou
sem produo de H 2 S (enegrecimento de agar) em ETI . Em
LIA, Salmonella normalmente produz reao alcalina (roxo) na extremidade do
tubo. Considerar apenas amarela distinta na extremidade do tubo de reao
cida (negativo). No eliminar as culturas que produzem descolorao no
bumbum de tubo exclusivamente nessa base. A maioria dos Salmonella culturas
produzir H 2 S em LIA. Alguns no-Salmonella culturas produzem uma reao
vermelho-tijolo em inclinaes LIA.

10.

Todas as culturas que do uma bunda alcalina em LIA, independentemente


da reao ETI, deve ser mantido como potencial Salmonella isolados e
submetidos exames bioqumicos e sorolgicos. As culturas que do um fundo
cido em LIA e uma inclinao alcalino e cido no bumbum ETI tambm deve
ser considerada potencial Salmonella isolados e deve ser submetido a testes
bioqumicos e serolgicos. As culturas que do um fundo cido em LIA e uma
inclinao cido e bumbum cido em ETI podem ser descartados como no
sendo Salmonella. Teste retida, culturas positivas presume-TSI conforme
indicado em D-11, abaixo, para determinar se eles so de Salmonella espcies,
incluindo S.arizonae. Se as culturas ETI deixar de dar reaes tpicas
de Salmonella (inclinao alcalina e bumbum cido) escolher colnias suspeitas
adicionais de placa meio seletivo no dando cultura presume-positivas e inocular
TSI e LIA Slants como descrito no D-8, acima.

11.

Aplicar testes bioqumicos e sorolgicos para:


a.

Trs culturas ETI presumveis recuperados a partir de conjunto de


placas riscadas de mdio RV (ou caldo de SC para a goma de guar), se
presente, e 3 presumveis culturas de agar TSI recuperados a partir de
placas riscadas de caldo de TT, se houver.

b.

Se 3 culturas ETI presuntivos positivos no so isolados a partir de


um conjunto de placas de gar, teste presuntivo outras culturas positivas
agar TSI, se isoladas, por Bioche mical e testes sorolgicos. Examine um
mnimo de 6 ETI culturas para cada unidade analtica 25 g ou 375 g cada
composto.
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E.

Identificao de Salmonella
1.

Culturas mistas. Streak culturas de agar TSI que parecem ser misturados
em agar MacConkey, HEAgar, ou agar XLD. Incubar as placas de 24 2 h a 35
C. Examinar as placas para presena de colnias que se suspeita a Salmonella.
a.

b.
c.

2.

gar de MacConkey. As colnias tpicas aparecer transparente e


incolor, s vezes com centro escuro. As colnias de Salmonella ir limpar
reas de blis precipitada causada por outros organismos, por vezes
presentes.
Hektoen entrica (HE) agar. Ver D-7-A, acima.
Xilose lisina desoxicolato (XLD) agar. Ver D-7b,
acima. Transferncia de pelo menos 2 colnias suspeitas
de Salmonella para TSI e LIA Slants como descrito no D-7, acima, e
continuar como naD-9, acima.
Culturas puras

a.

Teste da urease (convencional). Com agulha estril, inocular o


crescimento de cada cultura inclinada presume-positivo ETI em tubos
de caldo de ureia. Desde ocasionais, tubos no inoculadas de caldo de

ureia virar vermelho-prpura (teste positivo) em p, incluem tubo no


inoculado deste caldo como controle. Incubar 24 2 h a 35 C.
b.

3.

Opcional teste de urease (rpida). Transferir duas ansas cheias


de 3 mm de crescimento de cada cultura inclinada presume-positivo ETI
em tubos de caldo de ureia rpida. Incubar 2 h em 37 0,5 C banho de
gua. Descartar todas as culturas que do teste positivo. Guarde para um
estudo mais aprofundado de todas as culturas que do teste negativo (sem
mudana de cor do meio).
Flagelar polivalente sorolgico teste (H)

a.

Realizar o teste flagelar polivalente (H) neste ponto, ou mais tarde,


como descrito em E-5, abaixo.Inocular crescimento de cada ETI gar
inclinado urease-negativa em ou 1) caldo BHI e incuba-se 4-6 h a 35 C
at o crescimento visvel ocorre (a testar, no prprio dia); ou 2) tripticase de
caldo de soja-triptose e incubar 24 2 h a 35 C (para testar no dia
seguinte). Adicionar 2,5 ml de soluo salina fisiolgica formolizados para 5
ml de caldo de cultura quer.

b.

BD Procedimento DIFCO. Selecione 2 culturas de caldo


formolizados e teste com Salmonellaflagelar polivalente (H) anti-soros por
instrues do fabricante. Coloque 0,5 ml de apropriadamente
diludo Salmonella flagelar polivalente (H) anti-soro em 10 x 75 mm ou 13
100 mm de tubo teste serolgico. Adicionar 0,5 ml de antignio a ser
testado. Prepare controlo de soluo salina por mistura de 0,5 ml de
soluo salina fisiolgica formolizados com 0,5 ml formolizados
antignio.Incubar as misturas em 48-50 C banho de gua. Observe em
intervalos de 15 minutos e ler os resultados finais em 1 h.
Positivo - aglutinao na mistura de ensaio e sem aglutinao no controle.
Negativo - sem aglutinao na mistura de ensaio e sem aglutinao no
controle.
No especfica - aglutinao tanto na mistura de teste e controle. Teste as
culturas que do tais resultados com Spicer-Edwards anti-soros.

c.

Statens Serum Institute Procedure. Realizar o teste flagelar


polivalente (H) usando Statens Serum Institute Salmonella flagelar
polivalente (H) anti-soros. A Salmonella cultivada durante a noite em meio
de gar no selectivo. Swarm gar o meio mais adequado para o cultivo
de culturas para tipagem H, mas pode ser antignios H serotipagem de um
meio de gar no-selectivo, se os antignios H so bem
expressa. Adicionar uma pequena gota de anti-soro (aprox. 20 mL) sobre
uma lmina de vidro ou placa de petri de plstico (15 x 100
mm). Transferncia de cultura usando uma ansa de inoculao a partir de
vrias colnias com a gota de anti-soro e misture bem. A quantidade de
cultura deve ser suficiente para dar uma turvao leitosa distinta. Incline o
slide ou placa de petri por 5-10 segundos. Uma reaco positiva visto
como aglutinao, uma reaco negativa ao passo que visto como a

turvao leitosa homognea. A aglutinao tarde ou fraco deve ser


considerado negativo. Soluo salina fisiolgica (0,85%, pH 7,4) utilizado
como um controlo negativo e dever ser considerado negativo.
4.

Spicer-Edwards teste serolgico. Use este teste como uma alternativa ao


teste flagelar polivalente (H). Ele tambm pode ser usado com culturas dando
aglutinao no especfica em flagelar polivalente teste (H). Realizar SpicerEdwards flagelar (H) anti-soros de teste tal como descrito
em E, 3b, acima.Realizar testes bioqumicos adicionais (E, 5a-c, abaixo) em
culturas que do resultados positivos em testes flagelar. Se ambas as culturas
de caldo formolizados so negativos, execuo de testes serolgicos em 4
culturas adicionais caldo (E, 3a, acima). Se possvel, obter 2 culturas positivas
para testes bioqumicos adicionais E, 5a-c, a seguir). Se todas as ETI culturas
urease-negativas de amostra sorolgica dar flagelar (H) Os resultados negativos
dos testes, realizar testes bioqumicos E adicional, 5a-c, abaixo).

5.

Ensaios de culturas urease-negativas


a.

Caldo Lisina descarboxilase. Se o teste LIA foi satisfatrio, no


necessrio repetir. Use caldo de lisina descarboxilase por determinao
final de lisina descarboxilase se a cultura d reaco duvidosa LIA. Inocular
caldo com pequena quantidade de crescimento da ETI inclinao suspeito
para Salmonella. Recoloque a tampa firmemente e incubar 48 2 h a 35
C, mas examinar, a intervalos de 24 horas. Salmonella espcies causam
reaco alcalina indicado pela cor roxa em toda a mdia. Teste negativo
indicado pela cor amarela em toda a mdia. Se mdio parecer descolorido
(nem roxo nem amarelo) adicione algumas gotas de 0,2% bromocresol
tintura roxa e reaes tubo re-ler.

b.

Fenol caldo dulcitol vermelho ou base de caldo de roxo com


0,5% dulcitol. Inocular caldo com pequena quantidade de crescimento da
cultura ETI. Substituir tampa solta e incubar 48 2 h a 35 C, mas
examinar aps 24 h. A maioria dos Salmonella espcies dar teste positivo,
indicado pela formao de gs no interior do frasco de fermentao e pH
cido (amarelo) de meio.Produo de cido deve ser interpretada como
uma reaco positiva. Teste negativo indicado pela no formao de
gases no interior do frasco de fermentao e cor em toda mdio vermelho
(com vermelho de fenol como indicador) ou roxo (com bromocresol roxo
como indicador).

c.

Triptona (ou triptofano) caldo. Inocular caldo com pequeno


crescimento de ETI cultura agar.Incubar 24 2 h a 35 C e proceder como
segue:
1.

Cianeto de potssio (KCN) caldo. Transferncia de 3 mm


ansa de 24 h triptofano cultura de caldo de caldo de KCN. Borda calor
do tubo de modo que boa vedao formada quando o tubo rolha
de cortia revestida com cera. Incubar 48 2 h a 35 C, mas
examinar aps 24 h. Interpretar crescimento (indicado pela turvao)

como positivo. A maioria dos Salmonellaespcies no crescem neste


meio, como indicado pela falta de turbidez.

6.

2.

Caldo de malonato. Transferncia de 3 mm ansa de 24 h de


cultura de caldo de triptona caldo de malonato. Desde ocasionais
tubos no inoculadas de malonato caldo azul da volta (teste positivo)
em p, incluem tubo no inoculado deste caldo como controle. Incubar
48 2 h a 35 C, mas examinar aps 24 h. A maioria
dos Salmonella culturas de espcies do teste negativo (cor verde ou
inalterado) neste caldo.

3.

Indole teste. Transferncia de 5 ml de caldo de triptofano


24 h de cultura para tubo de ensaio vazio. Adicionar 0,2-0,3 ml de
reagente de Kovacs. A maioria dos Salmonella culturas do teste
negativo (ausncia de cor vermelho escuro na superfcie do
caldo). Tons intermedirios recordes de laranja e rosa como .

4.

Flagelar sorolgico (H) testes para Salmonella. Se


qualquer flagelar polivalente teste (H)(E-3 (H) teste tubo de ensaio,
acima) ou a flagelar Spicer-Edwards (E-4, acima) ainda no tiver sido
executada, quer ensaio pode ser realizado aqui.

5.

Descarte como no Salmonella qualquer cultura que mostra


qualquer teste positivo indole e flagelar sorolgico negativo de teste
(H), ou teste de KCN positiva e teste de lisina descarboxilase negativo.

Somtica (O) testes sorolgicos para Salmonella.


(Pr-teste todos os anti-soros para Salmonella com culturas conhecidas.)
a.

Somtica polivalente (S) de teste. Usando lpis de cera, marcar 2


sees cerca de 1 2 centmetros cada no interior de vidro ou placa de
Petri de plstico (15 x 100 mm). Podem ser usadas lminas seccionadas
comercialmente disponveis. Emulsionar 3 mm ansa de cultura a partir de
24-48 h ETI inclinao ou, de um modo preferido, base de agar de sangue
triptose (sem sangue) com 2 ml de 0,85% de soluo salina. Adicione 1
gota de suspenso de cultura para parte superior de cada seo marcadacrayon retangular. Adicionar 1 gota de soluo salina a parte inferior de
uma nica seco. Adicione 1 gota de Salmonella somtica polivalente (O)
anti-soro para nica outra seo. Com lao de transferncia estril limpo ou
agulha, misture suspenso cultura com soro fisiolgico para uma seo e
repita para outra seo que contm anti-soro.Incline misturas em vai-e-vem
de movimento durante 1 minuto e observe contra um fundo escuro de boa
iluminao. Considere qualquer grau de aglutinao uma reao
positiva. Classificar somtica polivalente (S) os resultados do teste como se
segue:
Positivo - aglutinao na mistura de ensaio; sem aglutinao em controlo
de soro fisiolgico.
Negativo - sem aglutinao na mistura de ensaio; sem aglutinao em
controlo de soro fisiolgico.

No especfica - aglutinao em teste e em misturas de controlo. Executar


mais testes bioqumicos e serolgicos, tal como descritos na identificao
de Enterobacteriaceae de Edwards e Ewing (2).
b.

7.

Testes somticas (O) do grupo. Teste como na E-6a, acima,


usando grupo somtico indivduo (O) anti-soros incluindo Vi, se disponvel,
no lugar de Salmonella somtica polivalente (O) anti-soro. Para um
tratamento especial das culturas que do reao positiva aglutinao Vi,
consulte a sec. 967.28B em Official Methods of Analysis (1). Culturas
recorde que do aglutinao positiva com somtica indivduo (O) anti-soro
como positivo para esse grupo. Culturas de registro que no reagem com
somtica (O) anti-soro indivduo como negativo para esse grupo.

Testes bioqumicos adicionais. Classificar como Salmonella aquelas


culturas que exibem tpicosSalmonella reaces para testes 1-11, apresentados
na Tabela 1. Se uma cultura a partir de 25 g ETI unidade analtica classificada
como Salmonella, o ensaio adicional de outras culturas TSI a partir da mesma
unidade de 25 g analtica desnecessria . As culturas que contm
demonstrveis Salmonellaantignios como mostrado por
positiva Salmonella flagelar teste (H), mas no tm as caractersticas
bioqumicas de Salmonella deve ser purificado (El, supra) e novamente testadas,
comeando com E-2, acima.
Realize os seguintes testes adicionais em culturas que no do tpicas de
Salmonella reaes para testes de 1-11 na Tabela 1 e que, consequentemente,
no classificamos como Salmonella.
a.

Fenol caldo de lactose vermelho ou caldo de lactose roxo.


1.

Inocular caldo com pequena quantidade de crescimento de


categorias 24-48 h ETI inclinao.Incubar 48 2 h a 35 C, mas
examinar aps 24 h.
Positivo - produo de cido (amarelo) e gs de produo em frasco
de fermentao interior.Considere a produo de cido apenas como
reao positiva. A maioria das culturas deSalmonella dar resultado
negativo, indicado pela no formao de gases no interior do frasco
de fermentao e vermelho (com vermelho de fenol como indicador)
ou roxo (com bromocresol roxo como indicador) ao longo de meio.

2.

b.

Descartar no como Salmonella, culturas que do provas


de lactose positivas, excepto culturas que do inclinaes cido em
ETI e as reaes positivas em LIA, ou culturas que do reaes
positivas caldo malonato. Realizar mais testes sobre estas culturas
para determinar se eles so S. arizonae.

Fenol caldo vermelho sacarose ou caldo de


sacarose roxo. Seguir o procedimento descrito noE, 7a-1, acima. Descartar
no como Salmonella, culturas que do provas de sacarose positivos,
exceto aqueles que do inclinaes cido em ETI e as reaes positivas
em LIA.

c.

d.

Caldo MR-VP. Inocular meio com pequena quantidade de


crescimento de cada inclinao ETI no classificados suspeita de
conter Salmonella. Incubar 48 2 h a 35 C.
1.

Voges-Proskauer realizar teste (VP) temperatura ambiente


como se segue: Transferir 1 ml de 48 h de cultura para testar tubo e
incubar restante do caldo MR-VP mais 48 h a 35 C.Adicionar 0,6 ml
-naftol e agite bem. Adicionar soluo de KOH 0,2 ml de 40% e
agitar. Para intensificar e velocidade de reao, adicionar alguns
cristais de creatina. Leia resultados aps 4 h; desenvolvimento de corde-rosa vermelho-rubi para todo meio positivo. A maioria das
culturas de Salmonella so VP-negativo, indicado pela ausncia de
desenvolvimento de cor-de-rosa-to-vermelho em todo o caldo.

2.

Realizar teste de vermelho de metilo como segue: a 5 ml de


caldo 96 h MR-VP, adicione 5-6 gotas de indicador vermelho de
metilo. Leia os resultados imediatamente. A maioria
dosSalmonella culturas dar teste positivo, indicado pela cor vermelha
difusa no meio. A cor amarela distinta teste negativo. Descarte,
como no Salmonella, culturas que do testes positivos KCN e VP e
teste negativo metil vermelho.

Simmons agar citrato. Inocular este agar, utilizando agulha


contendo o crescimento de categorias ETI agar inclinado. Inocular por
estrias inclinao e esfaquear bumbum. Incubar a 96 2 h a 35 C. Ler os
resultados como se segue:
Positivo - presena de crescimento, geralmente acompanhada de
mudana de cor de verde para azul. A maioria das culturas
de Salmonella so o citrato-positiva.
Negativo - nenhum crescimento ou muito pouco crescimento e nenhuma
mudana de cor.

8.

Classificao das culturas. Classificar, como Salmonella, culturas que tm


padres de reao daTabela l. Descarte, como no Salmonella, culturas que
do resultados listados em qualquer subdiviso da Tabela 2. Realizar testes
adicionais descritos na identificao de Enterobacteriaceae de Edwards e
Ewing (2) para classificar qualquer cultura que no seja claramente identificada
como Salmonella pelo esquema de classificao na Tabela l ou no eliminados
como no sendo Salmonella por reaes de teste na Tabela 2. Se nenhum dos 2
ETI culturas realizadas atravs de testes bioqumicos confirma o isolado
como Salmonella, realizar testes bioqumicos, comeando com E-5, no restante
da urease-negativas culturas TSI de mesmo 25 g unidade analtica.

Tabela 1. reaes bioqumicas e sorolgicas de Salmonella

Resultado

Teste ou
substrato

Positivo

Negativo

Salmonella
espcies
de reaco

1.

Glicose (TSI)

bunda amarelo

bumbum vermelho

2.

Lisina
descarboxilase
(LIA)

bunda roxo

bunda amarelo

3.

H S (TSI e LIA)

escurecimento

nenhum enegrecimento

4.

Urease

cor vermelhoprpura

nenhuma mudana de cor

5.

Lisina caldo
descarboxilase

cor roxa

cor amarela

6.

Fenol caldo
dulcitol vermelho

cor e / ou gs
amarelo

nenhum gs; nenhuma


mudana de cor

7.

Caldo de KCN

crescimento

nenhum crescimento

8.

Caldo Malonato

cor azul

nenhuma mudana de cor

(B)

(C)

(a)

Tabela 1. reaes bioqumicas e sorolgicas de Salmonella

Resultado

Teste ou
substrato

Positivo

Negativo

Salmonella
espcies
de reaco

1.

Glicose (TSI)

bunda amarelo

bumbum vermelho

9.

Teste de indol

cor vermelha na
superfcie

cor amarela na superfcie

10.

Teste flagelar
polivalente

aglutinao

sem aglutinao

11.

Teste somtica
polivalente

aglutinao

sem aglutinao

12.

Fenol caldo de
lactose vermelho

cor e / ou gs
amarelo

nenhum gs; nenhuma


mudana de cor

13.

Fenol caldo de
sacarose vermelho

cor e / ou gs
amarelo

nenhum gs; nenhuma


mudana de cor

14.

Teste de VogesProskauer

-pink-a cor
vermelha

nenhuma mudana de cor

15.

Teste de vermelho
de metilo

cor vermelha difusa

difuso cor amarela

(C)

(a)

Tabela 1. reaes bioqumicas e sorolgicas de Salmonella

1.

16.

Resultado

Teste ou
substrato

Positivo

Negativo

Salmonella
espcies
de reaco

Glicose (TSI)

bunda amarelo

bumbum vermelho

Citrato Simmons

crescimento; cor
azul

nenhum
crescimento; nenhuma
mudana de cor

(a)

+: 90% ou mais positiva em 1 ou 2 dias; -: 90% ou mais negativa em 1 ou 2 dias;


v: varivel. maioria de S. arizonae culturas so negativos. Maioria dos S. arizonae culturas
so positivas.
um

Tabela 2. Critrios para descartando no-Salmonella culturas

Teste ou substrato

Resultados

1.

Urease

positivo (cor vermelho-prpura)

2.

Teste de indol e
flagelar
Polivalente teste
(H);
ou
teste de indol e
teste flagelar
Spicer-Edwards

(cor vermelha na superfcie) positivo


negativo (sem aglutinao) (cor vermelha na superfcie)
positivo negativo (sem aglutinao)

Tabela 1. reaes bioqumicas e sorolgicas de Salmonella

1.

Resultado

Teste ou
substrato

Positivo

Negativo

Salmonella
espcies
de reaco

Glicose (TSI)

bunda amarelo

bumbum vermelho

3.

Descarboxilase
lisina e
caldo de KCN

negativo (cor amarela)


positivo (crescimento)

4.

Fenol caldo de
lactose vermelho

positivo (cor e / ou gs amarelo)

5.

Fenol caldo de
sacarose vermelho

positivo (cor amarelo e / ou de gs),

6.

Caldo de KCN,
teste de VogesProskauer, e
teste de vermelho
de metilo

(crescimento) positivo
positivo (rosa-a-cor vermelha)
negativo (difuso cor amarela)

(a), (b)

(b)

malonato de caldo de teste culturas positivas ainda mais para determinar se eles
so S. arizonae. No descarte culturas de caldo positivos se correspondentes culturas LIA dar
tpicas de Salmonella reaes; testar ainda mais para determinar se eles so de
Salmonella espcies.
um

9.

Identificao genrica presuntivo de Salmonella. Como alternativa ao


sistema de tubos bioqumica convencional, use qualquer um dos 5 sistemas
bioqumicos comerciais (20E API, Enterotube II,Enterobacteriaceae II, MICROID, ou Vitek 2 GN) para a identificao genrica presuntivo de origem

(a)

alimentar Salmonella. Escolha um sistema comercial baseado em uma


demonstrao em laboratrio prprio do analista de correlao adequada entre
o sistema comercial e sistema de tubos bioqumica delineados nesta seo
identificao. Kits comerciais bioqumicos no deve ser utilizado como um
substituto para os testes serolgicos (l). Montar suprimentos e reagentes
necessrios para preparar o kit. Inocular cada unidade de acordo com o Mtodo
978,24 (API 20E, Enterotube II, eEnterobacteriaceae II), seg. 989,12 (MICROID), e Mtodo 2.011,17 (Vitek 2 GN) em Official Methods of Analysis (1),
incubao para o tempo e temperatura especificada. Adicione reagentes,
observar e registrar os resultados. Para a identificao presuntiva, classificar as
culturas, de acordo com a ref. 1, acima, como Salmonella ou no de Salmonella.
Para a confirmao de culturas presumivelmente identificados como Salmonella,
realizar a Salmonellasomtica serolgica (O) teste (E-6, acima) e
a Salmonella flagelar serolgica teste (H) (E-3, acima) ou a flagelar SpicerEdwards (H) teste (E-4, acima), e classificar as culturas de acordo com as
seguintes diretrizes:

10.

a.

Reportar como Salmonella essas culturas classificadas como


presuntivo de Salmonella com kits comerciais bioqumicos quando a cultura
demonstra positivo Salmonella somtica de teste (O) e
positivo Salmonella (H) de teste.

b.

Descarte culturas presuntivamente classificadas como


no Salmonella com kits comerciais bioqumicos quando as culturas esto
em conformidade com critrios AOAC (1) para a classificao de culturas
como no Salmonella.

c.

Para culturas que no se conformam com a ou b, classificar de


acordo com testes adicionais especificados no E, 2-7, os testes acima, ou
adicionais, conforme especificado pela Ewing (2), ou enviar para fazer
referncia digitando laboratrio para sorotipagem definitivo e identificao.

O tratamento das culturas que do teste negativo flagelar (H). Se as


reaces bioqumicas de certo flagelar (H) cultura -negative sugerem fortemente
que Salmonella, a aglutinao flagelar negativa pode ser o resultado de
organismos sem motilidade ou insuficiente desenvolvimento de antignio
flagelar. Faa o seguinte: Inocular meio de teste de motilidade em placa de Petri,
utilizando pequena quantidade de crescimento da ETI inclinao. Inocular por
esfaquear meio de uma vez cerca de 10 mm de borda da placa de profundidade
de 2-3 mm. No esfaquear a parte inferior da placa ou inocular qualquer outra
parte. Incubar 24 horas a 35 C. Se os organismos tenham migrado 40 mm ou
mais, reteste como se segue: Transferncia de 3 mm ansa cheia de crescimento
que migrou mais distante de tripticase de caldo de soja-triptose. Repetir quer
flagelar polivalente (H) (E-3, acima) ou Spicer-Edwards (E-4 testes serolgicos,
supra). Se as culturas no so mveis, aps as primeiras 24 h, incubar 24 horas
adicionais a 35 C; se ainda no mveis, incubar at 5 dias a 25 C. Classificar
cultura como nonmotile se os testes acima ainda so negativos. Se flagelar (H)

cultura -negative suspeito de ser uma espcie de Salmonella na base das


suas reaces bioqumicas, laboratrios FDA deve apresentar a cultura de
Denver Laboratrio FDA
Ateno Amostra Custodian
Denver Federal Center, prdio de 20
6th Avenue & Kipling Ruas
Denver, CO 80225-0087 (Acima endereo partir de 1 de outubro de
2004)

para posterior identificao e / ou sorotipagem. Exceto FDA laboratrios devem


fazer acordos com um laboratrio de referncia para a sorotipagem
de Salmonella culturas.
11.

Apresentao de culturas para sorotipagem. Enviar um isolado de cada


grupo somtico recuperado de cada unidade analtica, salvo indicao em
contrrio. Enviar culturas em BHI rampas de gar em tubos com tampa de rosca
(13 100 mm ou 16 125 mm) com tampas garantidos firmemente.Rotular
cada tubo com nmero da amostra, subamostra (unidade de anlise) nmero e
cdigo, se for o caso. Enviar uma cpia do Relatrio de Coleta, FD-464, ou
Relatrio de Amostra de Importao, FD-784 para cada amostra. Lugar culturas
em recipientes de cultura com selo oficial FDA. Coloque registos que
acompanham (E-11, acima) dentro de caixa de transporte, mas no dentro de
recipientes de cultura selado oficialmente. Enviar memorando ou carta de
apresentao para cada nmero de amostra para agilizar a comunicao dos
resultados. Preparar culturas para a expedio de acordo com os requisitos para
a transferncia de agentes etiolgicos (3). Rotular continer de transporte
secundrio de acordo com a ref. 4. Enviar recipiente por mais servio de correio
rpido disponvel.Manter as culturas duplicadas daqueles submetidos
sorotipagem apenas nas amostras sob considerao para ao legal.
Laboratrios de microbiologia de campo deve seguir a seguinte orientao no
envio de Salmonella para serotipagem:
Isolados de NRL, WEAC, SRL e ARL ser serotipados em ARL:
Laboratrio Regional de Arkansas
3900 NCTR construo de estradas 26 de
Jefferson, AR 72079
Ateno: Gwendolyn Anderson
Tel # 870-543-4621
Fax 870-543-4041 #
Isolados de SAN, PRL-NW, PRL-SW e DEN ser serotipados em DEN:
Denver Distrito Laboratrio
6th Avenue & Kipling Rua
DFC Edifcio 20
Denver, CO 80.225-0087

Ateno: Shauna Madson


Tel # 303-236-9631
Fax 303-236-9675 #
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Referncias
1.
AOAC INTERNATIONAL. 2000. Official Methods of Analysis, 17a ed., Methods
967,25-967,28, 978,24, 989,12, 991,13, 994,04 e 995.20. AOAC INTERNATIONAL,
Gaithersburg, MD.
2.

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ed. Elsevier, Nova Iorque.

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