Revista de Toxicologa

ISSN: 0212-7113
revista@aetox.es
Asociacin Espaola de Toxicologa
Espaa

Contreras Montero, M. T.; Hernndez Jerez, A.; Pla Martnez, A.; Segura Noguera, J.; Valverde
Villarreal, J. L.; Gonzlez Merino, M.; Gonzlez Martnez, S.; Ventura Alemany, R.; Torre Fornell, R.
de la
El lquido pericrdico como muestra relevante en toxicologa forense
Revista de Toxicologa, vol. 20, nm. 2, cuatrimestral, 2003, pp. 86-87
Asociacin Espaola de Toxicologa
Pamplona, Espaa

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XV Congreso Espaol de Toxicologa

entre el tomo de fsforo y el denominado grupo saliente, produciendo dos compuestos generalmente menos txicos que el
organofosforado inicial. Se ha descrito la presencia de PTEs en
una gran variedad de tejidos biolgicos de mamferos, peces,
aves, moluscos y bacterias. La actividad PTE capaz de hidrolizar paraoxon (denominada paraoxonasa) de suero humano es
una protena dependiente de Ca2+ que se sintetiza en el hgado
y circula en sangre unida a lipoprotenas de alta densidad. La
PTE encontrada en la bacteria Pseudomonas diminuta posee en
su centro activo 2 tomos de Zn2+ y es una firme candidata a ser
utilizada en procesos de biorremedacin de espacios contaminados por organofosforados y como antdoto frente a intoxicaciones por organofosforados.
Las carboxilesterasas (CbEs) (E. C. 3.1.1) son esterasas inhibidas por insecticidas organofosforados y carbamatos a travs del
bloqueo del residuo de serina de su centro activo. Los efectos
txicos de los organofosforados y carbamatos derivan de la fosforilacin o carbamilacin de CbEs del sistema nervioso (acetilcolinesterasa, esterasa diana de neuropata y otras CbEs). Sin
embargo, en mamferos (especialmente en suero) existe un grupo de CbEs de funcin fisiolgica desconocida cuya inhibicin
no causa efectos txicos aparentes. Estas esterasas son capaces
de retirar del medio una molcula de organofosforado por cada
molcula de enzima, impidiendo as que el txico alcance las
dianas en sistema nervioso. Por tanto las CbEs, si bien con una
eficacia menor que las PTEs, tambin pueden considerarse
implicadas en los procesos de destoxicacin de organofosforados. Este sistema de destoxicacin es el empleado por determinadas cepas de insectos resistentes a organofosforados que
sobreexpresan determinadas CbEs que eliminan organofosforados del medio a travs de la fosforilacin de sus centros activos.
Las albminas sricas tambin expresan actividades PTEs. Las
albminas sricas hidrolizan organofosforados de una manera
no dependiente de metales con una mucho menor eficacia que
las PTEs dependientes de Ca2+ y asociadas a lipoprotenas. El
mecanismo de hidrlisis parece basado en una fosforilacin
reversible de un residuo de tirosina. Al igual que en el caso de
las CbEs que otorgan resistencia a organofosforados en insectos,
la eficacia de la albmina como enzima destoxicadora de organofosforados no estara basada en la eficacia cataltica de la
hidrlisis, sino en el alto nmero de molculas de enzima presentes en el suero. La actividad PTE de albmina srica podra
explicar el hecho de que no se detecte incremento de sensibilidad a paraoxon en ratones modificados genticamente que no
expresan paraoxonasa dependiente de Ca2+.
Diversas monografas tcnicas describen la hidrlisis de carbamatos y piretroides como un mecanismo de destoxicacin eficaz. Dado que la estructura qumica de estos insecticidas es la de
steres carbmicos y carboxlicos, cabe pensar que sern las
CbEs las enzimas implicadas en la hidrlisis de estos compuestos. Sin embargo, slo existen estudios bioqumicos detallados
sobre las CbEs hidrolizantes de carbamatos en bacterias, no
habindose realizado dichos estudios en vertebrados.
Recientemente se ha demostrado que la albmina de suero de
conejo es capaz de hidrolizar el carbamato carbaryl mediante un
mecanismo similar al que utiliza para la hidrlisis de organofosforados. Sin embargo, se desconoce si existen otras protenas en
suero u otros tejidos con capacidad de hidrolizar carbamatos.
Como conclusin se deberan remarcar que: 1)Es necesario
esclarecer el papel que juegan las actividades PTEs asociadas a
albmina en la hidrlisis de organofosforados a concentraciones
bajas, toxicolgicamente relevantes y 2)Es necesario un estudio
sistemtico de clasificacin y caracterizacin de las esterasas de
vertebrados implicadas en la destoxicacin de carbamatos y
piretroides.
Agradecimientos: M.A. Sogorb es investigador contratado con
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ayudas del Ministerio de Ciencia y Tecnologa y de la Generalitat Valenciana.

TOXICOLOGA FORENSE
EL LQUIDO PERICRDICO COMO MUESTRA RELEVANTE EN TOXICOLOGA FORENSE. MT Contreras Montero1, A Hernndez Jerez2, A Pla Martnez2, J Segura Noguera3,
JL Valverde Villarreal1, M Gonzlez Merino3, S Gonzlez Martnez3, R Ventura Alemany3, R de la Torre Fornell3
1 Instituto Nacional de Toxicologa Departamento de Barcelona
2 Departamento Medicina Legal y Toxicologa, Facultad de
Medicina de Granada
3 IMIM Instituto Municipal de Investigacin Mdica de Barcelona
El lquido pericrdico podra constituir una alternativa valida a
la sangre como fluido biolgico donde practicar anlisis de drogas de abuso y de otros frmacos en el mbito de la toxicologa
forense. Debido a su parecido fsico qumico al plasma presenta
ciertas ventajas analticas (en cuanto a matriz biolgica) con respecto a la sangre total, sobre todo en aspectos relacionados con
la calidad de la muestra en medicina forense, por lo que debera
considerarse una muestra ms idnea.
La seleccin de muestras adecuada para el anlisis y su correcta
conservacin son requisitos indispensables en la investigacin
toxicolgica. La sangre es el espcimen fundamental para identificar, cuantificar e interpretar concentraciones de txicos. Histricamente, la mayora de los estudios publicados han sido con
datos significativos determinados en sangre. La muestra de sangre postmortem est a menudo hemolizada y putrefacta y no es
posible la separacin del plasma, pero en algunos casos es la
nica muestra disponible.
El lquido pericrdico, se encuentra preservado en el saco pericrdico (compartimento estanco), casi libre de contaminacin de
los microorganismos, que protege el corazn evitando dilataciones y desplazamientos excesivos del mismo. Como muestra
forense tiene ventajas tanto para los mdicos forenses, al no ser
complicada su obtencin, como para los laboratorios toxicolgicos forenses, ya que es mucho ms fcil trabajar con ella que
con una muestra de sangre, incluso si esta se encuentra en buenas condiciones, al estar libre de los elementos celulares del tejido hemtico y por tanto est libre de los problemas de hemlisis
y coagulacin. De hecho, el lquido pericrdico recibido durante el transcurso del estudio, casi dos centenares de muestras de
dicho fluido, se recibi en todos las casos en muy buenas condiciones, mientras que en algunos casos las muestras de sangres
recibidas estaban hemolizadas y coaguladas.
El lquido pericrdico por su composicin es equivalente a un
ultrafiltrado del plasma. Se puede comprobar que las concentraciones son muy similares en ambos fluidos, excepto en el pH,
pues el lquido pericrdico est menos tamponado que la sangre,
por lo que es ms cido que sta.
Se ha realizado un trabajo novedoso de investigacin toxicolgica de drogas de abuso en Lquido Pericrdico. Los analitos
objeto de este estudio son la morfina, codena, cocana, benzoilecgonina y cocaetileno.
Se recogieron varias decenas de casos y se han podido incluir
54. Se recogieron adems ms de 100 muestras control de lquido pericrdico de individuos que fallecieron como consecuencia
de politraumatismos, accidentes de trfico, etc. en los que la
causa de la muerte no estuviera relacionada con drogas de abuso.
Las metodologas analticas desarrolladas para el lquido pericrdico no difieren sustancialmente de las utilizadas rutinariamente y aplicadas a otros lquidos biolgicos. Esto es de gran
importancia para un laboratorio de toxicologa forense, ya que

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demuestra que no es necesario desarrollar mtodos especficos.

En el presente trabajo se ha podido demostrar que la obtencin
de lquido pericrdico de forma sistemtica en el momento de la
autopsia es factible y que tanto la calidad de la muestra como el
volumen recogido es suficiente para practicar determinaciones
de drogas y frmacos.
En general es ms factible obtener una muestra de mayor calidad con el lquido pericrdico en cualquier estado del cadver
cuando se compara con la obtencin de sangre total que puede
estar sometida a procesos de putrefaccin, coagulacin y hemlisis.
Han sido validadas metodologas analticas para la determinacin de cocana y metabolitos as como de morfina y codena en
lquido pericrdico introduciendo pequeas modificaciones en
mtodos desarrollados para otros fluidos biolgicos Como consecuencia el desarrollo de mtodos analticos para la determinacin de drogas y frmacos en dicho fluido no comporta desarrollos especficos condicionados por la matriz que por otra parte
ha demostrado un comportamiento muy parecido al del plasma.
La determinacin de drogas y frmacos no est condicionada
por la disponibilidad de lquido pericrdico libre de los mismos
para la preparacin de materiales de control y calibracin ya que
se ha demostrado que es intercambiable con el plasma. Siendo
este ltimo fluido biolgico de ms fcil obtencin a travs de
los bancos de sangre hospitalarios.
La comparacin de concentraciones en sangre total y en lquido
pericrdico ha demostrado una excelente correlacin para la
determinacin de la benzoilecgonina, principal metabolito de la
cocana. La menor correlacin encontrada con la morfina est
sesgada por las distintas aproximaciones metodolgicas aplicadas a la preparacin de muestras Ello demuestra la utilidad del
lquido pericrdico como alternativa a la sangre total para la
prctica de anlisis toxicolgicos.
El perfil demogrfico de la muestra estudiada es similar al descrito por el Plan Nacional para la Droga para Barcelona en el
ao 1999. La gran mayora de los casos estudiados fueron positivos a morfina. Asimismo, se ha detectado un importante policonsumo de drogas, pues el 92.6% de la muestra presentaba dos
o ms sustancias en sangre, de las cuales una de ellas era la morfina, acompaada en orden decreciente por nordiazepam, cocana, alcohol y metadona.
La utilidad de los resultados de este estudio es la inclusin del
lquido pericrdico en los protocolos de recogida de muestras
por parte de los mdicos forenses, ya que hasta el momento la
utilizacin de este fluido biolgico como muestra forense no
estaba contemplada en ninguna norma o protocolo. Por este
motivo, se ha propuesto la inclusin en proximas revisiones de
la Orden Ministerial de 8 de noviembre de 1996, por la que se
aprueban las normas para la preparacin y remisin de muestras
objeto de anlisis por el Instituto Nacional de Toxicologa, del
lquido pericdico como muestra util para el estudio de analisis
de drogas.
ANTECEDENTES DE LA TOXICOLOGA FORENSE EN
ESPAA. A Vingut
Jefe del Servicio de Qumica del Instituto de Toxicologa de
Barcelona.
Desde principios del siglo XIX, la evolucin de la toxicologa
forense en Espaa ha ido de la mano de la propia medicina legal,
aunque siempre se ha diferenciado el trabajo especfico de los
toxiclogos forenses (que precisaban de profundos conocimientos en la ciencia qumica) de las cuestiones mdico-legales
(encomendadas a los conocedores de las artes mdicas, es decir
a los mdicos legistas).
La necesidad por parte de la Administracin de Justicia de resolver las cuestiones referentes a los envenenamientos es muy anti-

gua. De hecho, aparece en el momento en que la ley contempla

como un delito con entidad propia el dar muerte a un semejante
mediante la utilizacin de un veneno. Esto se produce en Espaa hace ms de 2000 aos, en plena dominacin romana.
Durante muchos siglos, hasta que no se produjo la aparicin de
las ciencias experimentales y el desarrollo de los anlisis qumico-analticos, la impunidad de los envenenadores fue prcticamente total. No haba posibilidad de detectar la presencia del
txico responsable en el cuerpo de la vctima y nicamente con
pruebas circunstanciales (como su estado de salud previo al episodio mortal o el conocimiento de la obtencin o compra, por
parte del inculpado, de una sustancia potencialmente txica das
antes, as como la interpretacin de la sintomatologa del
supuesto envenenado, la observacin de la apariencia del cadver y los hallazgos macroscpicos en la autopsia) se resolvan
dichas cuestiones, errando en muchos casos y castigando cruelmente a inocentes as como dejando sin su justo castigo a gran
nmero de culpables.
En aquellos tiempos, el asesoramiento legal en un caso de envenenamiento corra a cargo de los mdicos y cirujanos, los cuales, sin embargo, poco o nada podan hacer para dilucidar si la
causa real de la muerte haba sido debida o no a la administracin dolosa de un txico.
De hecho, existe constancia documentada de la realizacin de
autopsias judiciales en casos de envenenamiento ya en el siglo
XII. En el reino de Aragn se hicieron frecuentes a partir de
mediados del siglo XIV y eran realizadas por los dessuspitadors,
mdicos y cirujanos que realizaban peritaciones medico-legales
(dessuspitacions) de toda ndole, y entre ellas el estudio mdicolegal de los envenenamientos.
Hasta el siglo XIX, las peritaciones toxicolgicas siguieron siendo realizadas por mdicos y cirujanos, en la mayora de los
casos sin ninguna experiencia en la materia, puesto que los saberes medico-legales estaban en general muy descuidados, sin verdaderos especialistas en esta importante rama del saber, lo cual
desprestigiaba enormemente a la profesin mdica a causa de la
actuacin de estos frente a los tribunales. Hasta ese momento,
tanto las obras destinadas a la formacin de los cirujanos como
los planes de estudio de los nacientes Colegios de Ciruga omitan entre sus enseanzas cualquier tipo de alusin a la medicina legal.
No es hasta 1783 que Domingo Vidal, profesor del Real Colegio
de Ciruga de Barcelona, publica su obra Cirujia forense Arte
de hacer los informes y declaraciones Chirurgico-legales, que
tiene como precedente en Espaa una anterior de Juan Fragoso
Tratado de las declaraciones que han de hacer los cirujanos
acerca de muchas enfermedades y muchas maneras de muertes
que suceden, incluida dentro de su obra Ciruga Universal,
del ao 1572. En la obra de Vidal, de 128 pginas, se vislumbra
un cambio de actitud respecto al inters e importancia de los
conocimientos medico legales.
En los inicios del siglo XIX, continan siendo nicamente
mdicos los encargados de hacer las peritaciones en casos de
sospecha de envenenamiento. Sin embargo, muy pronto el panorama da un giro radical al conocerse los trabajos realizados en
Francia por el menorqun Orfila. Los anlisis qumicos se hacen
imprescindibles y en muchas ocasiones es necesario descubrir la
presencia de la sustancia responsable del envenenamiento como
evidencia de que ste ha tenido lugar. Es en este momento cuando la medicina legal y la toxicologa forense empiezan a bifurcar sus caminos, pues se requiriere un profundo conocimiento en
las ciencias qumicas para abordar con garantas la enorme complejidad de los anlisis que se solicitan.
Fueron numerosos los problemas que surgieron en todos estos
aos, principalmente de orden econmico y competencial. Los
anlisis qumico-toxicolgicos, principalmente encomendados a

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