Manuel de Prelevement

V3
Avril
2013
MANUEL DE PRELEVEMENT
Laboratoire de Biologie Mdicale
du Ple Infectiologie
Pr D. Raoult
Assistance Publique Hpitaux de Marseille
Hpital de la Timone
264, rue Saint Pierre
13385 Marseille Cedex 5
www.ap-hm.fr www.mediterranee-infection.com
Bactriologie - Virologie
Rickettsies
Parasitologie
Secrtariat
Tlphone
Fax
04 91 38 55 14/19 04 91 38 55 18
04 91 32 43 75
04 91 38 77 72
04 91 38 60 90
04 91 38 49 58
Rception
Tlphone
04 91 38 71 02
04 91 32 43 75
04 91 38 60 92
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SOMMAIRE
1/ La demande dexamen
1.1/ La prescription
1.2/ Ltiquetage de lchantillon biologique
2
2
3
2/ Le prlvement
2.1/ Les modalits de prlvement
2.2/ Le personnel ralisant lacte de prlvement
2.3/ Typologie des prlvements
2.4/ Les kits de prlvements
2.5/ Les examens urgents
2.6/ Modalit de prescription dexamens complmentaires
4
4
4
5
6
7
8
3/ La transmission des chantillons au laboratoire

3.1/ Les modalits de conservation et de transport des chantillons
3.2/ Echantillons ne pouvant pas tre accepts pour analyse
microbiologique/non conformits rception
8
8
10
4/ La transmission de comptes rendus de rsultats

4.1/ Dlai de rendu et transmission de rsultats
4.2/ Modification des comptes rendus de rsultats
4.3/ Permanence des soins
10
10
11
11
5/ Annexes
V.1 FICHE TECHNIQUE Prlvement sanguin par voie veineuse priphrique
V.2 FICHE TECHNIQUE Prlvement des hmocultures
V.3 FICHE TECHNIQUE Prlvement cutan
V.4 FICHE TECHNIQUE Bonnes pratiques ECBU
V.5 FICHE TECHNIQUE Prlvement ano-gnital
V.6 FICHE TECHNIQUE Prlvement ORL
V.7 FICHE TECHNIQUE Prlvement de scrtions broncho-pulmonaires
V.8 FICHE TECHNIQUE Prlvement superficiels
V.9 FICHE TECHNIQUE Prlvement profonds
V.10 FICHE TECHNIQUE Prlvements prinataux
12
13
14
16
18
20
23
24
25
26
Gestion documentaire
27
PF1 Manuel de prlvement Version 3 du 22 Avril 2013
LBM du Ple Infectiologie APHM
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1/ La demande dexamen
1.1/ La prescription
La demande dexamen bactriologique, virologique ou parasitologique doit tre formule

explicitement selon la nomenclature des actes de biologie mdicale sur une feuille de
prescription ( bon de demande ) du laboratoire.
Des feuilles types de prescription sont disponibles pour les services de lAPHM sur lintranet APHM
(catalogue ditique) et pour les laboratoires extrieurs sur le site www.mediterraneeinfection.com. Il existe des feuilles types pour les prescriptions de bactriologie, de virologie, de
parasitologie et pour le Centre National de Rfrence Rickettsies.
De plus, le prescripteur doit obtenir le consentement clair du patient quand cela est ncessaire
(ex : srologie HIV).
Doivent tre prciss sur la prescription:
Le but de lexamen : diagnostic tiologique d'une infection, suivi sous traitement,
contrle aprs traitement, ou recherche de micro-organismes particuliers.
Le contexte clinique : la nature des manifestations pathologiques, le site des lsions
infectieuses, et leur date d'apparition, l'existence d'affections associes, une
immunodpression En cas de srologie toxoplasmose chez la femme enceinte : le
statut srologique rcent et la date des dernires rgles.
L'ventualit d'un sjour en pays d'endmie et le risque d'infection ou de colonisation
par un agent potentiellement pidmique ou rsistant aux agents thrapeutiques :
tuberculose, mningococcmie, brucellose, shigellose, hpatite virale
Les traitements qui peuvent interfrer avec le choix des techniques de prlvement
(traitement anticoagulant) ou d'analyse (traitement antibiotique, antifongique, ou
antiviral).
la mthode de prlvement si elle ne correspond pas la technique usuelle et tout
incident survenu lors du prlvement prjudiciable la validit des rsultats (exemple :
hmodilution majeure pour une srologie).
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Lidentit complte du patient doit tre renseigne :
-Nom de naissance, prnom, nom marital pour les femmes maries,

-Date de naissance
-Sexe,
-Numro dentre dhospitalisation uniquement pour les patients hospitaliss lAP-HM
Doivent tre mentionns galement :
- lidentit du service demandeur (service de soins APHM ou laboratoire extrieur),

- lidentit du mdecin prescripteur et du prleveur,
- la date et lheure du prlvement
- la nature des prlvements chantillons envoys : sang, LCR, urines .
- la nature des examens demands
- le degr durgence : afin dassurer un rsultat compatible avec lutilisation clinique ; contacter
eventuellement directement le biologiste.
1.2/ Ltiquetage de lchantillon biologique
Le prleveur doit tiqueter les rcipients contenant lchantillon biologique au moment
Le prleveur doit tre identifi par son nom ou ses initiales.
Ltiquette doit comporter le nom, le prnom et la date de naissance du patient, ainsi que
la date, l'heure, la nature et le site du prlvement.
Attention : les donnes didentification du patient portes sur les chantillons doivent tre
strictement identiques celles de la demande dexamen sans quoi lanalyse risque dtre annule
ou retarde.
du prlvement, de faon viter toute erreur sur lidentit de la personne.
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2/ Le prlvement
2.1/ Les modalits de prlvement
Les prcautions "standards" pour tous les prlvements doivent tre appliques, afin de raliser un
prlvement dans des conditions dhygine et de scurit pour le patient et mais aussi pour le
personnel.
Tout produit pathologique doit tre considr comme potentiellement infectieux.
Le prleveur habilit doit respecter les rgles de soins et dhygine, (port de gants, blouses,
et dans certains cas de masques ou lunettes de protection)
Avant et aprs tout prlvement, le prleveur doit raliser une ANTISEPSIE DES MAINS sur
des mains propres et sches en l'absence de souillures macroscopiques avec une solution
hydro-alcoolique schage rapide.
Un prlvement vise tiologique doit tre effectu ds le dbut du processus infectieux.
les prlvements sont raliss avec du matriel strile usage unique. Le rcipient destin
recevoir le prlvement doit tre adapt la nature du prlvement et des analyses, en
particulier en matire de scurit et dtanchit, afin dviter tout risque de
contamination et de pollution. La nature et la quantit des substances adjuvantes quil
Des volumes insuffisants peuvent donc donner lieu des rsultats faussement ngatifs.
La fermeture des rcipients doit tre hermtique, pour ne pas contaminer l'extrieur des
flacons ou des tubes.
Il ne faut pas transporter une seringue avec son aiguille; celle-ci doit tre retire avec un
dispositif de scurit.
Le rcipient est transport dans un sac en plastique tanche et ferm hermtiquement,

comportant un compartiment pour les papiers et la prescription.
Le matriel utilis pour le prlvement doit tre limin dans la filire des dchets infectieux
(matriel piquants tranchants dans collecteurs conformes)
2.2/ Le personnel ralisant lacte de prlvement
Infirmier(e)s diplms dtat

Technicien(ne)s de laboratoire titulaires du certificat de prlvement
Mdecins et Pharmaciens biologistes
Internes
peut contenir doivent tre connues et prcises.
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Remarque : le laboratoire peut intervenir dans les services de soins leur demande, pour former le
personnel soignant la pratique de prlvements, particuliers ou nouveaux. Ceci peut aussi se
produire lors de visites ou consultations de nos biologistes sniors dans certaines units (pdiatrie,
cardiologie, infectiologie)
Le prescripteur se reportera aux catalogues des analyses du laboratoire (catalogue bactriologie,
virologie, CNR rickettsies, parasitologie-mycologie) pour identifier la nature de lexamen, le
contenant appropri la prescription et la quantit minimale pour permettre lanalyse.
Ces catalogues sont galement disponibles sur lintranet APHM et sur le site www.mediterraneeinfection.com. Ils sont mis jour si ncessaire tous les ans ; au cours de cette mise jour est
galement ralise une revue des volumes des chantillons ncessaires la bonne ralisation de
lanalyse.
Voir fiches techniques par type de prlvement en annexes
2.3/ Typologie des prlvements

Prlvements de BACTERIOLOGIE
Matriel de prlvement
URINES
Tube borat , ventuellement pot strile
BIOPSIES, LIQUIDES
Pot ou tube strile
PRELEVEMENT CUTANE, VAGINAL, URETHRAL
Ecouvillon Transwab, ventuellement

couvillon sec
SELLES
Pot coproculture
SANG
Flacon Hmoculture Anarobie et Arobie
Prlvements de VIROLOGIE
Prlvement
PRELEVEMENT CUTANE, MUQUEUX, NASAL,

PHARYNGE, RECTAL, GENITAL PAR
ECOUVILLONNAGE
Tube Virocultcontenant un milieu de

transport pour la recherche de virus
SEROLOGIES
Tube sec glos
DEMANDE DE RECHERCHES EN BIOLOGIE

MOLECULAIRE SUR SANG
Tube EDTA
SELLES, LBA, URINES, BIOPSIES, LIQUIDES
Pot strile
Prlvement
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Prlvements de PARASITOLOGIE
Prlvement
SEROLOGIES
Tube sec glos
SELLES, LBA, URINES, BIOPSIES, LIQUIDES DIVERS
Pot strile
SANG POUR RECHERCHE DE PROTOZOAIRES PAR

MICROSCOPIE ET/OU BIOLOGIE MOLECULAIRE
Tube EDTA
PRELEVEMENTS DIVERS PAR ECOUVILLONNAGE
Ecouvillon sec sans milieu ajout
2.4/ Les kits de prlvements

En collaboration avec les mdecins des services de soins, les biologistes ont cr des kits de
prlvement pour le diagnostic de pathologies lourdes. Ces kits permettent de standardiser et de
contrler les prlvements, et de rduire le dlai de prise en charge thrapeutique surtout dans les
cas o ltiologie est difficile identifier.
Ces kits doivent tre prescrits ds ladmission du patient. Les fiches de renseignements et le
consentement joint dans les kits, doivent tre imprativement complts et signs.
Ces kits sont disponibles sur demande au laboratoire.
Les principaux kits sont:

Nom du kit
Infection de lendocarde (valve cardiaque)

Kit endocardite
Kit pricardite
Inflammation du pricarde
Kit infection osseuse
Arthrite Ostte
Kit mningo-encphalite
Inflammation mninge et crbrale
Kit uvite
Inflammation oculaire
Kit corne
Inflammation corne
Kit pneumonie
Pneumopathie pulmonaire
Kit agents infectieux hautement

pathognes
Pneumopathie pulmonaire aigu (BIOTOX)
Kit Tuberculose
Infection Mycobacterium tuberculosis

Indication
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Kit Whipple Fivre Q
Infection Trophyrema Whippleii et Coxiella

burnetii
Kit mort inattendue du nouveau n
Mort inattendue du nourrisson
2.5/ Les examens urgents
Les examens traits par le Point Of Care (POC)
Les examens urgents sont traits par les laboratoires Point Of Care de lhpital Nord et de lhpital
de la Timone 24h/ 24 et 7j/ 7. Seuls les examens figurant sur les bons de demande POC (ou bons
kit POC) sont considrs comme urgents. Le rsultat est transmis par linterne au service ou
mdecin demandeur, soit directement sur le logiciel informatique soit par tlphone pour les
rsultats positifs
Les autres examens urgents.
Le laboratoire traite aussi en urgence les examens suivants :

-Liquide Cphalo-Rachidien (LCR)
-Hmocultures
-Les examens dits prcieux : liquides ou biopsies pricardites, valves, biopsies
pulmonaires, ganglions , biopsies ou abcs crbraux, LBA, biopsies osseuses ou
liquides articulaires
-Analyses pour les Greffes dorganes
-Analyses pour les accidents dexposition au sang (HIV, Hpatites)

-Hpatites fulminantes
-Recherche dune immunit ancienne en cas de contage pour rougeole et varicelle
-Les examens sous scells dans le cadre dune expertise judiciaire
Toute autre demande en urgence devra tre justifie par le prescripteur auprs du biologiste
senior.
Bioterrorisme et activit dans le cadre dune crise en maladie infectieuse
Toute suspicion dagent infectieux hautement pathogne (grippe aviaire, peste, anthrax)
Remarque : Dans ce cas, le prlvement devra tre obligatoirement conditionn en triple emballage
et le bon dexamen plac lextrieur de lemballage.
-Antigne anti HbS pour les femmes enceintes
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2.6/ Modalit de prescription dexamens complmentaires
Le prescripteur peut demander par tlphone, au biologiste du laboratoire, dajouter un

examen une demande initiale.
Le laboratoire pourra laccepter, uniquement si le prlvement le permet (quantit, date

du prlvement). Sinon un autre prlvement sera demand.
Le laboratoire peut galement rajouter des analyses la prescription initiale sil juge ces
analyses ncessaires pour raliser un meilleur diagnostic ; dans ce cas il devra en informer le
prescripteur.
En virologie, dans les cas o une premire analyse a montr un rsultat positif ou douteux
pour les marqueurs suivants (antigne HbS du virus de lhpatite B, anticorps du virus de
lhpatite C, des virus HIV1/HIV2, et des virus HTLV1/HTLV2), le biologiste pourra rclamer
un autre prlvement sanguin.
3/ La transmission des chantillons au

laboratoire
3.1/ Les modalits de conservation et de transport des chantillons
sils sont apports rapidement au laboratoire (dlai infrieur 4h).
Pour les selles, la conservation + 4C est recommande (sauf pour la recherche de
formes vgtatives de protozoaires intestinaux en Parasitologie : temprature
ambiante).
Pour des analyses de virologie, les chantillons ncessitent d'tre rfrigrs (+4C) :
Recherche CMV, antignmie et culture.
Les petits chantillons et les biopsies doivent tre achemins au laboratoire le plus
rapidement possible (dlai infrieur 4h), afin de prserver la survie des microorganismes les plus fragiles et d'viter qu'ils soient inhibs par des bactries plus
rsistantes l'environnement extrieur. Les bactries qui ne supportent pas de dlai
peuvent tre prserves dans des milieux de transport.
La plupart des chantillons primaires peuvent tre transports temprature ambiante (22C)
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Les laboratoires extrieurs lAPHM nous envoyant des chantillons sont responsables des
conditions et des dlais de transport des chantillons. Il est conseill dutiliser les emballages
suivants selon la catgorie de lchantillon envoy:
Lemballage primaire (rcipient) contenant le matriel biologique doit tre tanche:

(Tubes vacutainers, flacons striles)
Pour tous les envois de prlvements, bien mentionner sur le container le nom,
ladresse et le tlphone du responsable de lexpdition joindre en cas durgence.
Un contrle rception de lidentification des chantillons et des demandes dexamens

est effectu leur arrive au laboratoire.
Le laboratoire assure la rception de tous les prlvements 24h/ 24. Seul le secteur
bactriologie est ouvert 24h/24 7j/7.
Le secteur virologie, ouvert du lundi au samedi matin, traite uniquement la nuit et le weekend les examens urgents (voir II.5).
Le secteur de parasitologie est ouvert du lundi au vendredi et ne traite pas dexamen en

urgence
Emballage Secondaire
Echantillons Cliniques
Catgorie B
UN3373
Echantillons susceptibles
dappartenir la catgorie
des agents infectieux
hautement pathognes
(classe 6.2)
Catgorie A
sachet plastique avec double

compartiment (fourni dans le
container): un compartiment pour
le prlvement et un
compartiment pour la demande
dexamen (bien sparer papier et
prlvement)
sachet plastique avec double

compartiment (fourni dans le
container): un compartiment pour
le prlvement et un
compartiment pour la demande
dexamen (bien sparer papier et
prlvement)
Emballage tertiaire
Sachets placs dans un
container carton tanche avec
absorbant et rsistant aux
chocs
(container UN 3373 cat B)
Sachets placs dans la bote

plastique avec mousse de
protection puis dans le
container carton tanche
rsistant aux chocs
(container UN 2814 cat A)
UN2814
Catgorie
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3.2/ Echantillons ne pouvant pas tre accepts pour analyse

microbiologique/non conformits rception
Toute non conformit constate la reception du prlvement est enregistre dans le systme
informatique du laboratoire et impose une information du service ou laboratoire prescripteur
uniquement pour les prlvements non techniqus
Diffrents cas de figures peuvent survenir :
anomalies imposant un nouveau prlvement :

ex : chantillon sans identit, avec identit illisible ou incomplte, discordance entre
identit chantillon et feuille de prescription, tube vide, chantillons inappropris aux
analyses prescrites, chantillons reus dans des rcipients endommags et non
tanches
anomalies impliquant une reformulation de la demande
Dans ce cas, une rgularisation doit tre effectue rapidement, seuls les prlvements urgents
pourront tre traits avant rgularisation.
ex : absence nature examens raliser, chantillon non accompagn de la demande
dexamen, absence du nom du service/ laboratoire prescripteur
anomalies imposant une annulation de la demande

ex : examen non ralis par le laboratoire
prescripteur.
4/ La transmission de comptes-rendus de
rsultats
4.1/ Dlai de rendu et transmission de rsultats
Les rsultats dexamen direct sont disponibles sur linformatique de lAPHM dans un
maximum de 4h suivant la rception du prlvement au laboratoire.
Les rsultats dfinitifs sont disponibles en fonction du temps danalyse ncessaire la

recherche et lidentification des germes.
Aucun prlvement nest jet sans laccord pralable dun biologiste et aprs en avoir averti le
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Les rsultats des examens urgents sont communiqus par tlphone au service ou
laboratoire prescripteur.
Les autres rsultats sont communiqus pour les services de lAPHM par le systme informatique
du laboratoire et pour les laboratoires extrieurs par voie postale. Si le client extrieur la exig
explicitement, il peut arriver que le rsultat soit dabord envoy par fax sur un numro stipul
clairement sur la prescription, puis doubl par envoi postal. Dans tous les cas, aucun rsultat
dexamen HIV ou Hpatites est communiqu par tlphone. Il est uniquement transmis en format
papier au prescripteur.
4.2/ Modification de comptes rendus de rsultats

Si le compte rendu de rsultat doit tre modifi, la nouvelle version est consultable sur le Logiciel
Laboratoire. Une version papier est rdite et envoye au prescripteur. Toute modification fait
lobjet dun appel du prescripteur par le biologiste.
4.3/ Permanence des soins

Les mdecins biologistes du laboratoire sont prsents et joignables sur le site de lHpital Timone
et de la Facult de Mdecine Unit des Rickettsies du lundi au vendredi de 8h 18h.
librer les rsultats en absence de biologiste snior sur site.

En dehors des heures de permanence, un biologiste dastreinte est joignable de 18h 8h et le
samedi-dimanche (planning de gardes et astreintes sur lintranet APHM et affich dans les
secteurs du laboratoire).
5/ Annexes : fiches techniques

prlvements
Sur le site du POC Nord, un interne est prsent 24h sur 24 et est habilit par le chef de service
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V.1 FICHE TECHNIQUE Prlvement sanguin par voie veineuse
VIROLOGIE/PARASITOLOGIE
Voir plus de dtails sur le site intranet du CLIN (http://pole-infectieux/ CLIN/ puis protocoles de soins)
pour le protocole de prlvement dans le service de soins
Indiqu pour les srologies bactriennes virales et parasitaires, les hmocultures et les
analyses de biologie molculaire
Prescription mdicale crite , date et signe
Si ncessaire, Consentement du patient sign dans son dossier mdical.
Bon de demande dexamen complt
Faire une dsinfection hyginique des mains par

friction
Prparer le matriel, tiqueter les tubes

Vrifier lidentit du patient,
Installer le patient
Poser le garrot
Effectuer une double dsinfection cutane du site de ponction
en partant du point de ponction vers lextrieur
avec des compresses striles imbibes dantiseptique alcoolique
Ponctionner la veine
Relcher le garrot ds larrive du sang dans le 1er tube
Prlever tous les tubes
Les tubes avec additif doivent tre homogniss par
retournements successifs lents (au moins 3)
Respecter le dlai et les conditions de transport
Mettre des gants non striles
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V.2 FICHE TECHNIQUE Prlvements des hmocultures
BACTERIOLOGIE/VIROLOGIE
Prescription mdicale crite et date et signe
Bon de demande dexamen complt

Noter en plus la temprature du patient au moment du prlvement
Faire 2 ou 3 fois le prlvement de 1 flacon arobie et 1 flacon anarobie
intervalle minimal de h par 24h.
1 seul prlvement sur un flacon spcial pour les hmocultures fongiques
Faire une dsinfection hyginique des mains par friction
Prparer le matriel de faon antiseptique ,

Dsinfecter les septums des flacons avec des compresses striles imbibes
dantiseptique dermique alcoolique

Mettre des gants striles non poudrs
Ponctionner la veine
Prlever le flacon arobie puis le flacon anarobie.
Respecter la limite de remplissage.
Prlever 20ml de sang dans chaque flacon pour un adulte
Entre 2ml et 10ml pour un enfant (en fonction de lge)
Pour la mycologie : 10ml de sang dans le flacon Hmoculture fongique
Etiqueter et numroter les flacons et renseigner le bon
Envoyer les hmocultures au laboratoire le plus rapidement possible

A temprature ambiante
Faire la prparation cutane du patient :

dtersion, rinage, schage, antisepsie avec des antiseptiques iod ou base de
chlorhexidine
Poser le garrot
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V.3 FICHE TECHNIQUE Prlvement cutan
MYCOLOGIE/PARASITOLOGIE
Avant le prlvement
-
Faire un interrogatoire dtaill : notion de voyage rcent en zone tropicale, mtier exerc,
animaux de compagnie, loisirs (piscine, cheval).
sassurer que le malade nest pas sous traitement antifongique local ou gnral. Si cest le cas,
arrter le traitement et attendre au moins une semaine avant deffectuer le prlvement.
La suspicion dune mycose dimportation doit tre signale au biologiste car des prcautions
particulires de manipulation des chantillons et des cultures doivent tre imprativement
respectes.
lsions squameuses :
-
Lsions de la
peau glabre
Racler les squames la priphrie des lsions laide dune curette de

Brocq, dun grattoir de Vidal ou, dfaut, dun vaccinostyle strile. Puis
frotter avec une compresse strile
Recueillir les chantillons dans une bote de Petri .
Raliser un prlvement la cellophane adhsive (scotch-test ) pour le
diagnostic rapide du pityriasis versicolor. Cette technique nest ralisable ni
sur les rgions pileuses ni sur les lsions inflammatoires ou suintantes. Dans
ces cas, des squames sont prleves laide dune curette mousse.
Plaies cutanes : couvillonner les lsions, ou pour les nodules, ponctionner

avec une aiguille strile, ou encore, faire une biopsie aprs avoir dsinfect la
surface avec un antiseptique.
lsions non inflammatoires : nettoyer lalcool 70 pour viter le
dveloppement de la flore bactrienne contaminante en culture.
Lsions des plis
Lsions
unguales
lsion sche et squameuse : gratter la curette les squames en bordure de

la lsion ; frotter avec compresse strile (pour recherche de
dermatophytes)
- lsion macre et suintante: frotter les srosits successivement laide de
2 ou 3 couvillons.
- lsion vsiculeuse : percer les vsicules puis prlever la srosit
lcouvillon ;
Couper toute la partie de longle atteint avec des ciseaux, jusqu la limite des
tissus sains. Il est aussi possible de prlever des poussires dongles en raclant la
tablette interne de longle, ou les lots blanchtres de la surface de longle, au
vaccinostyle ou la curette strile. Pour les dermatophytes , utiliser une meule
si possible
Prlever le pus de prionyxis ventuel (couvillon)
Lsions du cuir
chevelu et des
Examiner les cheveux sous une lampe de Wood.
Selon laspect des lsions :
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zones pileuses
Arracher avec une pince piler les cheveux fluorescents (cas des teignes
microsporique et favique).
Sinon, prlever les cheveux casss la loupe proximit du bulbe. Prlever les
squames et les crotes ventuelles en raclant la curette. En cas de lsions
inflammatoires suppures, prlever les suppurations avec un couvillon. La
technique dite du carr de moquette doit tre utilise.
Lsions nodulaires, papuleuses, verruqueuses
Le prlvement de ce type de lsion seffectue par couvillonnage ou ponction
avec une aiguille strile.
Une biopsie peut galement tre ralise aprs dsinfection de la surface par un
antiseptique.
Pour la recherche de leishmanies cutanes prlever sans faire saigner laiguille
et ou au tire nerf strile au niveau du bourrelet dextension de la lsion et placer
le prlvement dans un pot strile sans adjonction de liquide
Autres
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V.4 FICHE TECHNIQUE Bonnes pratiques ECBU

Les urines destines au laboratoire de bactriologie doivent tre

imprativement transfres dans le dispositif vacutainer
Aprs dsinfection hyginique des mains par friction et toilette soigneuse de

la rgion vulvaire chez la femme et du mat chez l'homme au savon liquide,
puis rinage, puis dsinfection avec du Dakin ou de la Btadine dermique :
Patient sond
demeure
* Eliminer le 1er jet (20 ml) d'urines pour ne recueillir dans un flacon strile
que les 20-30 ml suivants au minimum en prenant soin de ne pas toucher
lintrieur du rcipient. * Fermer hermtiquement le flacon, (si recherche
bactriologique transfrer dans le tube vacutainer), l'identifier trs
prcisment et le porter immdiatement au laboratoire accompagn de sa
prescription et de lheure de prlvement.
Aprs clampage dheure avant le prlvement, ponctionner avec une
seringue directement la chambre de prlvement pralablement dsinfecte
puis transvaser dans un flacon strile (si recherche bactriologique transfrer
dans le tube vacutainer) . Ds le retrait du tube, homogniser par 8-10
retournements.
Utiliser un collecteur strile spcifique. Ce dispositif usage unique adapt
l'anatomie se pose aprs dsinfection soigneuse et ne peut tre laiss en
place plus d'une heure. Pass ce dlai, si l'enfant n'a pas urin, le dispositif est
limin et remplac par un collecteur neuf.
Le nourrisson
Ds la miction termine le collecteur est enlev et les urines sont transvases

soigneusement dans un flacon strile (si recherche bactriologique transfrer
dans le tube vacutainer) puis achemines rapidement vers le laboratoire.
Lurine peut galement tre saisie la vole au moment du change.
Urtrostomie
(sans sonde)
Aprs nettoyage soigneux de la stomie on met en place un collecteur strile et

l'on procde comme pour le nourrisson.
Cas gnral
habituel
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Cet examen de seconde intention excut sur prescription spcifique
ultrieure au vu des premiers rsultats doit tre effectu sur la totalit de la
premire miction du matin aprs restriction hydrique, trois jours de suite.
Urines du premier
jet
Intressant en cas de suspicion d'infection urtrale ou prostatique, utilisable

aussi pour la recherche de Mycoplasma ou de Chlamydia trachomatis par
biologie molculaire.
Recherche de
mycobactries
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V.5 FICHE TECHNIQUE Prlvement ano-gnital

BACTERIOLOGIE :
Dans tous les cas, les prlvements doivent permettre lexamen direct et lensemencement
Prlever 1 couvillon Type Transwab
VIROLOGIE :
En cas de recherche virologique, prlever 1 couvillon Virocult
BACTERIOLOGIE :
Dans tous les cas, les prlvements doivent permettre lexamen direct et
lensemencement
VIROLOGIE :
En cas de recherche virologique, prvoir 1 couvillon Virocult
Ulcration anognitale
Pustules
Recueil du premier
jet des urines
un prlvement endo urtral lcouvillon

le recueil de la srosit se fera au niveau de la base ou des bords de lulcre
avec un vaccinostyle, une se, une curette ou un couvillon,
le recueil du contenu la seringue ou lcouvillon.
intressant dans les urtrites, pour les recherches de Chlamydia par
technique de biologie molculaire.
Prlvements du tractus gnital chez la femme
Les prlvements gnitaux se font sous spculum avec un clairage adapt, sauf pour la recherche de
streptocoques du groupe B o le simple couvillonnage vulvaire donne les meilleurs rsultats.
Vulvo-vaginites
Bartholinites
Ecouvillonnage des scrtions de lorifice vaginal et de la vote vaginale

postrieure.
Aspiration la seringue du canal ou prlvement lcouvillon
Urtrites
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Ecouvillonnage de lendocol, et on recherchera toujours le gonocoque et les
Chlamydia ce niveau.
Cervicite
Endomtrite
Prlvement dendocol et ventuellement laspiration transcervicale par

cathter qui sont du domaine du spcialiste.
Annexite
Le liquide dabcs se prlve la seringue et les cellules tubo-pritonales

par brossage au cours de lacte chirurgical.
Matriel intra-utrin
Lexamen bactriologique se fait sur le matriel et sur lventuel pus.

Prlvements gnitaux masculins
Epididymites et
prostatites
Orchites
Ecouvillonnage urtral ou prlvement de sperme, ou recueil du premier jet

urinaire dans un flacon strile.
Le prlvement de sperme peut tre ralis sans priode dabstinence, mais
aprs une miction suivie dune dsinfection soigne du gland laide dun
antiseptique et rinage.
Prlvement dabcs la seringue (par le chirurgien).
Raliser le prlvement aprs une abstinence de 3 jours, aprs une miction
et une dsinfection du gland.
Le prlvement est recueilli dans un pot strile, conserv 37c et envoy
rapidement au laboratoire.
Sperme
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V.6 FICHE TECHNIQUE Prlvement ORL
BACTERIOLOGIE/VIROLOGIE/PARASITOLOGIE
BACTERIOLOGIE :
Dans tous les cas, les prlvements doivent permettre lexamen direct et lensemencement
VIROLOGIE :
En cas de recherche virologique, prlever 1 couvillon Virocult
prlvement
auriculaire
Quelques points particuliers, fonction du contexte, sont signaler :

- en prsence d'une ulcration ou d'un exsudat, le prlvement doit s'effectuer
leur niveau,- lors d'une suspicion de diphtrie, le prlvement doit porter sur la
priphrie des fausses membranes,- pour la recherche de N. gonorrhoeae, si la mise
en culture ne peut tre immdiate, l'utilisation d'un milieu de transport de type
Stuart ou Amies est indispensable,- pour la recherche de Candida, le prlvement
s'effectue au niveau de la langue, du palais et de la face interne des joues.
- pour la recherche virologique, utiliser des couvillons Virocult
Pus de paracentse :
raliser le prlvement l'aide d'un cathlon mont sur seringue puis verser le pus
dans un pot strile ou laide de deux couvillons fins (alginate ou dacron) monts
sur tige mtallique.
Otites chroniques :
le prlvement est en gnral effectu l'aide de 2 couvillons fins (alginate ou
dacron monts sur tige mtallique
Otites externes :
On limine les dbris et crotes prsents dans le conduit auditif l'aide d'un
premier couvillon en coton humide, puis deux couvillonnages successifs sont
raliss.
Prlvement de
gorge
Il doit tre ralis avant toute antibiothrapie locale ou gnrale.

On procde l'couvillonnage des amygdales (ou de l'amygdale atteinte en cas
d'amygdalite unilatrale) ou, des piliers du voile du palais
On ralise deux couvillons,
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Ils concernent essentiellement les prlvements conjonctivaux :
Prlvements
oculaires
pour un examen propratoire, le prlvement doit alors tre ralis

immdiatement avant lintervention chirurgicale
conjonctivite, le prlvement sera effectu
- avant toute toilette faciale
- au niveau de langle interne de lil
- avec un couvillon
Blpharite; on prlvera alors les crotes palpbrales et un ou deux cils la
pince piler strile.
Orgelet qui sera ouvert avec un vaccinostyle strile pour prlever le pus ( la
pipette ou lcouvillon).
Dacryocystite qui demande un recueil du pus au niveau des points lacrymaux
palpbraux aprs pression sur les sacs lacrymaux;
Ulcre de corne, le prlvement est alors effectu avec un coton mont aprs
anesthsie locale.
pour la recherche virologique, utiliser des couvillons Virocult.
Pour la recherche damibes oculaires il est impratif de travailler sur grattage
cornen plac dans 1 pot strile (Pas dcouvillonnage).
Humeur aqueuse et vitre pour srologies parasitaires : doivent tre
accompagnes dun prlvement sanguin sur tube sec.
Le prlvement naso-pharyng (couvillon) permet le diagnostic des viroses

respiratoires comme la grippe.
Pour viter d'tre expose, la personne qui effectue le prlvement doit porter un
masque de type FFP2, des gants usage unique (vinyle ou latex).
pour recherche de
virus respiratoires
Le matriel ncessaire aux prlvements (couvillons et tube avec liquide de

transport type virocult) se trouve sous forme de kits prts lemploi contenant :
1 coton-tige scell dans un tui strile et 1 rcipient cylindrique contenant le milieu
de conservation du virus (liquide).
Prlvement :
-introduire lcouvillon souple dans le conduit nasal jusqu atteindre le nasopharynx (environ 7 cm de larcade chez ladulte), puis faire 2 rotations.
-Retirer lcouvillon.
-Casser lcouvillon plastique au bord du cylindre en vitant les projections de
liquide.
-Refermer le cylindre grce la vis plastique
Si la distance est suprieure 20 km du laboratoire de rfrence, utiliser une
glacire rfrigre pour le transport
Prlvements nasopharyngs
(couvillons)
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Laspiration naso-pharyng permet le diagnostic des viroses respiratoires comme la

grippe.
Pour viter d'tre expose, la personne qui effectue le prlvement doit porter un
masque de type FFP2, des gants usage unique (vinyle ou latex).
pour recherche de
virus respiratoires
Prlvement :
- Saisir la tubulure la plus longue (sans embout), dconditionner une seringue et la
connecter l'embout de la tubulure
- Mesurer la distance nez-oreille l'aide de la tubulure la plus courte, faire un
repre au feutre sur la tubulure et maintenir la tubulure entre le pouce et l'index.
Ceci dtermine la longueur approximative de la tubulure introduire dans le
nasopharynx.
- Vaporiser la tubulure la plus courte l'aide de la bombe de silicone.
- Bien nettoyer la narine avec un mouchoir puis introduire la tubulure silicone dans
l'une des deux narines et enfoncer de la longueur dtermine auparavant.
- Saisir la seringue et activer le piston de faon aspirer les scrtions
nasopharynges (si trs peu de scrtions sont rcupres, retirer la sonde, la
plonger dans un tube contenant du srum physiologique strile et aspirer 0,5 1 ml
maximum de liquide pour rincer la tubulure)
-Retirer la sonde.
Aspirations nasopharynges
Le matriel ncessaire : Aspirateur de mucosits pdiatrique (25 ml gnralement),

seringue 50 ml strile usage unique et une bombe silicone.
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V.7 FICHE TECHNIQUE Prlvement de scrtions broncho-pulmonaires

BACTERIOLOGIE/VIROLOGIE/PARASITOLOGIE
Expectorations
Il doit se faire le matin, au rveil, aprs rinage bucco-dentaire leau distille strile
et lors dun effort de toux aid, si besoin dune kinsithrapie. Lexamen
bactriologique doit tre effectu sans dlai.
Crachats recherche de
BK
Les crachats seront prlevs :

- le matin,
- chez un sujet qui se sera pralablement rinc la bouche l'eau,
- la suite d'un effort de toux, qui ramne les scrtions bronchiques accumules
pendant la nuit.
Un volume de 5 ml reprsente une quantit convenable, le minimum exigible est de
2 ml
Le prlvement est rapidement achemin vers le laboratoire, sinon il sera conserv
+ 4C au rfrigrateur.
Lavage bronchoalvolaire
Tubage gastrique
recherche de BK
Instiller aprs blocage du bronchofibroscope dans une bronche segmentaire ou

sous-segmentaire des chantillons de 50 ml de srum physiologique ( 37C) 4
6 fois et on ramne entre 20 et 60 % de la quantit injecte.
Envoyer rapidement le pot daspiration du dispositif LBA rapidement au
laboratoire
Il consiste prlever directement dans l'estomac, les scrtions bronchiques qui ont
t dgluties inconsciemment pendant le sommeil.
Cette preuve sera ralise chez un sujet :
- maintenu jeun
- alit depuis la veille au soir
- le plus tt possible aprs le rveil
Utiliser une sonde usage unique, prsentant, son extrmit distale, des
perforations ncessaires au passage du liquide et, son extrmit proximale, un
embout auquel s'adapte la seringue ncessaire l'aspiration.
Sur ces sondes, des repres indiquent, par rapport aux arcades dentaires, les
distances correspondant au cardia et au pylore. Quand la sonde est dans l'estomac,
monter une seringue et aspirer le liquide gastrique. Mettre le prlvement dans un
pot strile.
Brossage bronchique
protg
Glisser la brosse tlescopique au travers du fibroscope et dirige sous contrle

de la vue dans une petite bronche de 4e ordre drainant le territoire pulmonaire
radiologiquement suspect.
Raliser le prlvement bactriologique. Replacer la brosse dans la gaine et
sortir le guide du fibroscope.
Sortir la brosse de la gaine et la couper avec des ciseaux striles pour quelle
tombe dans 1 ml de liquide (eau physiologique tamponne strile ou liquide de
Ringer) que lon agite doucement 2 minutes sur place au lit du malade.
Apporter le prlvement sans dlai au laboratoire.
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V.8 FICHE TECHNIQUE prlvements superficiels
Inflammation
cutane, rysiple,
hypodermite
Prlvements raliss au
cours d'opration sur
matriel implant ou sur
lsion osseuse
Fistule, aspiration
laiguille fine dune lsion
profonde
Morsures
Prlvements cutans
pour virologie
Nettoyer la plaie, liminer les exsudats, dbrider les tissus ncross si

ncessaire
Rincer l'eau physiologique strile
Faire une Biopsie de la lsion ou cureter le bord actif de la lsion
(voir biopsies)
Eventuellement aspirer l'aiguille fine le liquide inflammatoire
produit par la lsion (trs peu de matriel est suffisant). Si ncessaire,
aspirer ensuite 1 ml d'eau physiologique strile pour viter que le
prlvement ne se dessche dans la seringue
Ecouvillonnage peu fiable
Effectuer au minimum 3 prlvements (couvillonnages ou biopsies)

en des sites anatomiques diffrents (rgions osseuses diverses,
matriel implant, ciment) et bien les identifier sur la demande
d'examen.
Pr dcouper les prlvements de manire strile.
Dsinfecter la partie cutane ou la partie superficielle
Laisser scher.
Aspirer l'aiguille la partie la plus profonde de la lsion et aspirer
ensuite si ncessaire 1 ml d'eau physiologique strile pour viter que le
prlvement ne se dessche dans la seringue.
Raliser galement un prlvement biopsique de la paroi du trajet
fistuleux.
Aspirer le pus de la blessure dans une seringue; aspirer ensuite 1 ml
d'eau physiologique strile.
A dfaut : 2 couvillonnages profonds : 1 pour bactries anarobies
(couvillon dalginate de Ca) et 1 pour bactries arobies (couvillon
en coton).
Le matriel ncessaire aux prlvements (couvillon et tube avec
liquide de transport type virocult) se trouve sous forme de kits prts
lemploi contenant :
1 coton-tige scell dans un tui strile et 1 rcipient cylindrique
contenant le milieu de conservation du virus (liquide).
Plaie superficielle, brlure,

abcs ouvert, ulcration,
escarre, lsions cutanes
ncrotiques,
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V.9 FICHE TECHNIQUE Prlvements profonds
BACTERIOLOGIE/VIROLOGIE/PARASITOLOGIE/MYCOLOGIE
Placer la biopsie au fond d'un tube strile
Ajouter 3 ou 4 gouttes d'eau physiologique strile pour les petits chantillons
Biopsie
Si recherche de germes anarobies stricts, adresser une 2e biopsie dans un milieu de

transport anarobie
Les prlvements effectus au bloc opratoire doivent tre rapidement achemins au
laboratoire et accompagns de renseignements cliniques ainsi que la localisation
prcise de lendroit o ils ont t effectus.
Les prlvements de liquides pritonaux, de pus dabcs et de srosits sont recueillis
laide dune seringue qui sera rebouche hermtiquement et strilement ou
dposes dans un pot strile.
Les recherches de chlamydia et de Mycoplasma sont effectues partir des biopsies
des trompes ou dadhrences du pritoine, le produit de brossage tubaire, le liquide de
Douglas.
Les biopsies chirurgicales sont dposes dans un pot strile.
Ils sont indiqus pour les suppurations d'une sreuse, d'un organe creux, d'un tissu ou
d'une cavit abcde. ces prlvements peuvent tre complts par des hmocultures.
Ponction
Aprs dsinfection, Les prlvements de liquides, de pus dabcs et de srosits sont

recueillis laide dune seringue qui sera rebouche hermtiquement et strilement ou
le prlvement peut tre dposes dans un pot strile.
analyses bactriologiques, parasitologiques et mycologiques.

Dans le diagnostic dune mningite aigu lexamen cytochimique du LCR permet de
reconnatre ou de suspecter une tiologie bactrienne justifiant un traitement
antibiotique immdiat.
La ponction lombaire est ralise avec une asepsie rigoureuse.
recueillir 3 ml de LCR dans 3 tubes striles en verre numrots 1, 2, 3 servant
LCR
respectivement lexamen biochimique, microbiologique et cytologique.

Lacheminement du LCR vers le laboratoire doit se faire sans dlai et labri du froid.
Pour la parasitologie-mycologie, en particulier pour la recherche de cryptocoques, un
tube supplmentaire est prvoir (accompagn dun prlvement de sang sur tube sec
dans le cas dun diagnostic de toxoplasmose).
Il faut obtenir une quantit de liquide suffisamment importante pour raliser les
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V.10 FICHE TECHNIQUE Prlvements prinataux
Prlvements chez le nouveau-n
Ils sont effectus et achemins temprature ambiante dans l'heure (si

possible) qui suit la naissance et examins dans les meilleurs dlais.
Ils doivent tre accompagns des renseignements cliniques ainsi que l'heure
de naissance et de prlvement.
Prlvements dont les

rsultats sont urgents
Aspiration gastrique :
Quelques ml de liquide gastrique sont aspirs l'aide d'une sonde gastrique

n 8 monte sur une seringue de 10 ml et munie d'un pige liquide.
Ecouvillonnages cutans et orificiels
L'couvillonnage de 1 3 sites (un pli, une narine et un conduit auditif par

exemple) est achemin temprature ambiante.
Eventuellement effectus dans les 24h qui suivent la naissance.

Prlvement de mconium
Normalement, le mconium est mis dans les 48 h. Une mission prcoce
peut tre un signe d'infection. Quelques ml sont prlevs l'aide d'une
spatule strile et achemins temprature ambiante.
Prlvement de placenta
Un chantillon du placenta (ou la totalit pour recherche de toxoplasmes)
complmentaires
dans une zone d'aspect macroscopique anormal. Lchantillon est dpos

dans un pot strile.
Si l'acheminement est diffr, il faut conserver l'chantillon + 4C.
Pour le diagnostic de toxoplasme congnital, le sang de la mre et un sang
du cordon seront prlevs sur tubes secs. En cas de sroconversion au
dernier trimestre de grossesse, prlever un tube de sang du cordon sur
EDTA.
Liquides amniotiques
Pour recherche de toxoplasmes, prlever au minimum 4 ml accompagns
obligatoirement du consentement de la patiente.
peut tre prlev par carottage l'aide d'un scalpel strile, de prfrence
Prlvements
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Historique
Modification
Date de diffusion
Version 0
Cration
3 fvrier 2009
Version 1
Condition de transport des chantillons pour les

chantillons hors APHM
10 Dcembre 2010
Version 2
Mise jour kits, type de matriel de prlvement
09 janvier 2013
Version 3
Paragraphe permanence soins, formation

personnel soignant
22 avril 2013

Manuel de Prelevement

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V3

3/ La transmission des chantillons au laboratoire

4/ La transmission de comptes rendus de rsultats

PF1 Manuel de prlvement Version 3 du 22 Avril 2013

LBM du Ple Infectiologie APHM

La demande dexamen bactriologique, virologique ou parasitologique doit tre formule

PF1 Manuel de prlvement Version 3 du 22 Avril 2013

LBM du Ple Infectiologie APHM

Lidentit complte du patient doit tre renseigne :

-Nom de naissance, prnom, nom marital pour les femmes maries,

Doivent tre mentionns galement :

- lidentit du service demandeur (service de soins APHM ou laboratoire extrieur),

1.2/ Ltiquetage de lchantillon biologique

Le prleveur doit tiqueter les rcipients contenant lchantillon biologique au moment

Le prleveur doit tre identifi par son nom ou ses initiales.

PF1 Manuel de prlvement Version 3 du 22 Avril 2013

LBM du Ple Infectiologie APHM

du prlvement, de faon viter toute erreur sur lidentit de la personne.

Un prlvement vise tiologique doit tre effectu ds le dbut du processus infectieux.

Le rcipient est transport dans un sac en plastique tanche et ferm hermtiquement,

2.2/ Le personnel ralisant lacte de prlvement

Infirmier(e)s diplms dtat

LBM du Ple Infectiologie APHM

peut contenir doivent tre connues et prcises.

2.3/ Typologie des prlvements

Tube borat , ventuellement pot strile

Pot ou tube strile

PRELEVEMENT CUTANE, VAGINAL, URETHRAL

Ecouvillon Transwab, ventuellement

Flacon Hmoculture Anarobie et Arobie

PRELEVEMENT CUTANE, MUQUEUX, NASAL,

Tube Virocultcontenant un milieu de

Tube sec glos

DEMANDE DE RECHERCHES EN BIOLOGIE

SELLES, LBA, URINES, BIOPSIES, LIQUIDES

PF1 Manuel de prlvement Version 3 du 22 Avril 2013

LBM du Ple Infectiologie APHM

Tube sec glos

SELLES, LBA, URINES, BIOPSIES, LIQUIDES DIVERS

SANG POUR RECHERCHE DE PROTOZOAIRES PAR

PRELEVEMENTS DIVERS PAR ECOUVILLONNAGE

Ecouvillon sec sans milieu ajout

2.4/ Les kits de prlvements

Les principaux kits sont:

Infection de lendocarde (valve cardiaque)

Kit infection osseuse

Inflammation mninge et crbrale

Kit agents infectieux hautement

Pneumopathie pulmonaire aigu (BIOTOX)

Infection Mycobacterium tuberculosis

LBM du Ple Infectiologie APHM

Infection Trophyrema Whippleii et Coxiella

Kit mort inattendue du nouveau n

Mort inattendue du nourrisson

2.5/ Les examens urgents

Les examens traits par le Point Of Care (POC)

Les autres examens urgents.

Le laboratoire traite aussi en urgence les examens suivants :

-Analyses pour les accidents dexposition au sang (HIV, Hpatites)

Bioterrorisme et activit dans le cadre dune crise en maladie infectieuse

PF1 Manuel de prlvement Version 3 du 22 Avril 2013

LBM du Ple Infectiologie APHM

-Antigne anti HbS pour les femmes enceintes

2.6/ Modalit de prescription dexamens complmentaires