UNIVERSIDAD DE CRDOBA

FACULTAD DE CIENCIAS BSICAS

PROGRAMA DE BIOLOGA
LABORATORIO DE BIOLOGA MOLECULAR
LABORATORIO N 2
EXTRACCIN DE ADN GENMICO TOTAL DE PLANTAS
Protocolo descrito por PROMEGA
OBJETIVO
Aislar ADN Genmico vegetal.
FUNDAMENTO
El ADN, ARN y protenas son base y material de estudio en cualquier laboratorio
de Biotecnologa en el cual se manejen herramientas de tipo Molecular. Cuando
las clulas se encuentran en estado de metafase durante la divisin celular, el
ADN condensado en forma de cromosomas puede ser visualizado en forma
directa con la ayuda de equipos de microscopia de luz no muy complicados o en
algunos casos lo podemos hacer sin ayuda de estos equipos cuando trabajamos
en un proceso de aislamiento o extraccin de ADN el cual involucra una buena
cantidad del material fuente de la extraccin. (Barrante y Cruz, 2002) El ADN
genmico es fcil de aislar y caracterizar pero ser de escasa utilidad a menos de
que sea de elevado peso molecular como para ser posteriormente manipulado
mediante tratamientos enzimticos as mismo dependiendo de la fuente del
material vegetal a extraer se deben realizar estandarizaciones en los protocolos
para garantizar calidad en la extraccin (Rivera, et al 2009).
MATERIALES Y REACTIVOS
1. Reactivos del kit PROMEGA
Nuclei Lysis Solution
RNasa
Protein Precipitation Solution
DNA Rehydration Solution
2. Reactivos y equipos no suplidos por el kit:
Mortero y mango de mortero
Bao de Maria
Vortex
Etanol (70%)
Isopropanol
Nitrgeno liquido
Tubos de microcentrifuga (1,5 ml)
Microcentrifuga con rotor para tubos de 2 ml

Hielo
Pipeta 0.2-2 L
Pipeta 1-10 L
Pipeta 20-200 L
Pipeta 100-1000 L
Guantes
Gafas de proteccin
Esptula
Papel aluminio
Marcador de punta fina
Servilletas

PROCEDIMIENTO
LISIS DE CELULAS VEGETALES
1. Macerar 40 mg de tejido foliar en nitrgeno lquido.
2. Agregar 600l de Nuclei Lysis Solution. Incubar a 65 C durante 15
minutos.
3. Aadir 3l de la solucin de RNasa. Incubar a 37 C durante 15 minutos.
Incubar la muestra a temperatura ambiente durante 5 minutos. Proceda a
la precipitacin de la protena y la rehidratacin de ADN, el paso 1
(abajo).
PRECIPITACIN DE LA PROTENA Y LA REHIDRATACIN DE ADN
4. Adicionar 200 l Protein Precipitation Solution. vortex por 20 segundos.
5. Centrifugar a 13000 16000 g* por 3 minutos.
6. Transferir el sobrenadante a un tubo nuevo que contenga 600 I de
isopropanol a temperatura ambiente,
7. Mezclar por inversin y centrifugue a 13000 16000 g* por 1 minutos.
8. Descartar el sobrenadante, adiciones 600 I de etanol al 70% a temperatura
ambiente, mezcle.
9. Centrifugar a 13000- 16000 g* por 1 minutos.
10. Aspirar el etanol y deje secar el pellet (10-15 minutos). Utilice una servilleta.
11. Agregar al ADN 100 I de DNA Rehydration Solution
12. Rehidratar a 65 C por una hora y lleve a 4C toda la noche, para su
posterior uso.
g* Velocidad mxima de la centrifuga

REFERENCIAS.
BERRANTE, I. Y CRUZ, C. 2002, Gua de prctica. Biologa Molecular.
Laboratorio de Bioqumica y Biologa Molecular. Universidad Nacional Federico
Villareal. Lima Peru.
http://www.molecularstation.com/es/protocol-links/DNA-Protocols/DNA
Extraction-Blood/, Mejorado por docentes y estudiantes de los programas de Biologia y
Qumica de la universidad de Cordoba.

PROMEGA, 1999 -2010. Wizard Genomic DNA Purification Kit. Instructions for
use of products A1120, A1123, A1125 AND A1620.
RIVERA. H. J., SUREZ. I. PALACIOS. J. D. 2007. Estandarizacin de la tcnica
AFLP para la caracterizacin de accesiones Colombianas de caa flecha
(Gynerium sagittatum (Aubl.)); Revista Temas Agrarios 14 (1): 17-23 Enero Junio
2009.