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Polymyxin B 28
Antibiticos - sntesis de protenas, sntesis de cidos nuclicos y metabolismo 29
Principios y Definiciones 29
Revisin de la Sntesis de Protenas y el Sitio de Accin de Antimicrobianos que Inhiben la Sntesis de
Protenas. 30
Inhibidores de la Sntesis de Protenas (la mayora bacteriostticos) 31
Inhibidores de la Funcin y Sntesis de los Acidos Nuclicos 32
Antimicrobianos Antimetabolitos 33
Resistencia contra las drogas Antimicrobianas. 34
Cultivo e identificacion de agentes infecciosos 35
Identificacin bacteriana en el diagnstico del laboratorio contra taxonoma 35
Trminos taxonmicos (clasificacin) 36
Pasos para el aislamiento e identificacin diagnstica de bacterias 36
La tincin de Gram 37
Caracterizacin taxonmica de bacterias 39
Anlisis qumico 39
Anlisis molecular 40
Diagnstico rpido en ausencia de cultivo previo. 40
Intercambio de informacin gentica 40
Palabras clave 40
Introduccin 41
Mecanismos de transferencia gentica en bacterias 42
Transformacin 42
Transduccin. 43
Conjugacin 45
Elementos genticos transponibles 48
Plsmidos 49
Mecanismos de regulacin gentica 51
Regulacin de la expresin gentica 51
Genes Inducibles - El Modelo del Operon 51
Genes Reprimibles - El Modelo del Opern. 54
Atenuacin 56
Regulacin de la actividad enzimtica. 58
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Introduccin
El mundo de los microorganismos
La microbiologa es el estudio de los microorganismos, que son pequeos organismos que viven
a nuestro alrededor y dentro de nuestro cuerpo. Un organismo es un ser viviente que ingiere y
descompone los alimentos para obtener energa y nutrientes, los alimentos no digeridos los
excreta como residuos, y es capaz de reproducirse. Usted es un organismo y tambin lo son los
perros, gatos, insectos y otras criaturas que se ven todos los das.
Un microorganismo es simplemente un organismo muy, muy pequeo que no puede ver a simple
vista, pero que se sienten sus efectos cada vez que sus ojos se llenan de flujos acuosos y escurre
moco como un grifo abierto en la nariz. Usted lo llama un resfriado. En realidad, usted est bajo
el asedio de un ejrcito de microorganismos que atacan las membranas dentro de su cuerpo. Los
ojos llorosos y una nariz que moquea son las maneras en las que usted lucha por lavar a los
microorganismos fuera de su cuerpo.
Los microorganismos son un componente clave de la guerra biolgica, junto con las sustancias
qumicas que alteran la homeostasis. El ataque con ntrax que siguieron a los ataques terroristas
del 9/11 ilustra claramente cmo un sobre con polvo de ntrax puede ser letal para las personas
en un edificio de oficinas. El ntrax es una enfermedad causada por el microorganismo Bacillus
anthracis, una bacteria que forma endosporas y se infiltra en el cuerpo por ingestin, contacto
con la piel e inhalacin. Una endospora es una bacteria en un estado inactivo que se forma
dentro de una clula. Afortunadamente, los incidentes de ataques biolgicos con
microorganismos han sido infrecuentes. Sin embargo, hay miles de microorganismos a nuestro
alrededor que pueden ser tan mortales y debilitantes, como los microorganismos utilizados en la
guerra a lo largo de la historia.
Las bacterias son las clulas de vida independiente ms pequeas y ms verstiles que se
conocen. Este mdulo examina las caractersticas estructurales, metablicas y genticas que
contribuyen a la ubicuidad y diversidad de este gran grupo de organismos. La temtica se centra
sobre todo en las caractersticas de las bacterias que les permiten causar enfermedad en
humanos.
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Procariontes y eucariontes.
Las bacterias verdaderas (las cuales incluyen todas las bacterias que infectan al hombre) son
miembros de un reino (Eubacteria, bacterias verdaderas). Por otra parte, otro grupo de
microorganismos a menudo encontrado en ambientes extremos, forma un segundo reino (las
archaebacteria, Archaea). Morfolgicamente, los organismos de los dos reinos parecen similares,
sobre todo por la ausencia de un ncleo y por tanto estn clasificados como procariontes. Sin
embargo, presentan entre ellos grandes diferencias bioqumicas. La mayora de los Archaea vive
en los ambientes tales como fuentes sulfurosas de agua caliente donde experimentan
temperaturas tan altas como de 80C y pH de 2, a estos se les llama termoacidfilos. Otros viven
en medios ambientes que contienen metano (metangenos) o resisten altas concentraciones de
sal (halfilos extremos).
Archaea
Con base en sus secuencias de ADN, parece que el reino Archaea y los eucariontes divirgieron
del Eubacteria, antes de haber divergido entre ellos (Figura 1.) y de alguna manera, las Archaea
son bioqumicamente ms parecidas a los eucariontes, que lo que puedan parecerse a las
Eubacteria. Por ejemplo, la RNA polimerasa de las Archaea es un complejo, en trminos del
nmero de subunidades, como lo son las polimerasas nucleares eucariontes y existe
considerable homologa con algunas subunidades de los eucariontes. La estructura del promotor
del gen de las Archaea es tambin mas parecida a las de los eucariontes, que a las de las
Eubacteria. Aunque como las Eubacteria, las Archaea presentan operones y transcriben mRNA
policistrnico. Tambin existe similitud entre los factores de la sntesis de protenas de las
Archaea y los eucariontes, sugiriendo que los mecanismos de sntesis de protenas de los
eucariontes en general y el Archaea puedan ser similares. Los rRNAs 16s de las Eubacteria y de
las Archaea son bastante diferentes a nivel de su secuencia de nucletidos.
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Archaea
Eucariontes
No
Nucleosomas/histo
nas
Operones/RNAs
policistrnicos
No
S: limitado por
membrana
S
Intrones
Protena de unin
a la caja de TATA
No
No
No
S
S
S
Ncleo
Organelos
No
No
S: mitocondria,
lisosomas, retculo
endoplsmico etc.
Cromosomas
Uno
Circular
Uno
Circular
Ms de uno
RNA Polimerasa
Una
(simple)
Ms de una
(complejo)
Aminocido
iniciador de
protenas
Sensibilidad de la
sntesis de
protenas ante la
toxina diftrica
Peptidoglucanos
Sntesis de
protenas
N-formil
metionin
a
Insensi
ble
Ms de
una
(complejo)
Metionina
Sensible
Sensible
Metionina
S
No
No
Los factores de iniciacin protenas
ribosomales factores de alargamiento
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El universo bacteriano
Entre los agentes infecciosos, las bacterias son los organismos ms pequeos, capaces de vivir
de manera independiente. Existen Individuos de diferentes especies de bacterias que colonizan o
infectan a los seres humanos que se encuentra en el rango de 0,1 a 10 m (1 m = 10-6 m). La
mayora de las bacterias esfricas tienen un dimetro de 0,5 a 2 m, y las clulas en forma de
bastn son generalmente de 0,2 a 2 m de ancho y de 1 a 10 m de largo. Como se muestra en
la Figura 4., las bacterias se superponen en al menos una dimensin con grandes virus y algunas
clulas eucariotas, pero son los nicos poseedores de la 1 - tamao m.
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El pequeo tamao y la naturaleza casi incolora de las bacterias requieren el uso de colorantes
para la visualizacin al microscopio de luz o el uso de la microscopa electrnica. Las formas
morfolgicas ms importantes son: esferas, bastones, varillas dobladas o curvas y espirales
(Figura 5.). Las bacterias esfricas u ovaladas se llaman cocos (singular: coco) y normalmente se
organizan en grupos o cadenas. Los bastones son llamados bacilos (singular: bacilo) y puede ser
rectos o curvos. Los bacilos son pequeos y pleomrficos y a menudo semejan a los cocos, y son
llamados cocobacilos. Las bacterias en forma de espiral pueden ser rgidos o flexibles y
ondulantes.
Estructuras bacterianas
A pesar de que comparadas con los eucariontes, estas carecen de complejidad, se pueden definir
estructuras eubacteriales, aunque no todas las bacterias poseen cada uno de estos
componentes.
Plsmidos
Estas son molculas de DNA extracromosomal, presentes generalmente en mltiples copias, que
a menudo codifican para factores de patogenicidad y factores de resistencia a antibiticos.
Algunas formas tambin estn relacionadas con la replicacin bacteriana.
La envoltura celular
Las bacterias se pueden dividir en dos grupos sobre las bases de su tincin de Gram. Las
bacterias gram positivas se quedan teidas con cristal violeta despus de lavar y las gram
negativas no. Todas las bacterias tienen una membrana celular donde ocurre la fosforilacin
oxidativa (ya que no tienen mitocondrias). Al exterior de la membrana celular, est la pared
celular, la cual es rgida y protege a la clula de la lisis celular. En las bacterias gram positivas,
la capa de peptidoglicano de su pared celular es una capa mucho ms gruesa que en las
bacterias gram negativas. Las bacterias gram negativas tienen una membrana externa adicional.
La membrana externa es la barrera ms importante de permeabilidad en las bacterias gram
negativas. El espacio entre las membranas interna y externa se conoce como espacio
periplsmico. En el espacio periplsmico las bacterias Gram negativas almacenan enzimas
degradativas. Las bacterias Gram positivas carecen de espacio periplsmico; en su lugar
secretan exo-enzimas y realizan digestin extracelular. Esta digestin es necesaria ya que
molculas mas bien grandes no pueden pasar fcilmente a travs de la membrana externa (si
est presente) o la membrana celular.
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Figura 8. Bacterias con forma de bacilo formadoras de cpsula. La cpsula est compuesta de
polisacridos y poliprotenas. Las cpsulas tienen un papel en la adherencia, virulencia,
proteccin, aseguramiento de nutrientes y reconocimiento clula-clula. Las cpsulas
varan en grosor y pueden fcilmente representar 2 veces el volumen del organismo. En
una tincin de cpsula, el fondo se tie de azul grisceo y las clulas se tien en rojo. La
cpsula no esta teida y aparece como una halo alrededor de la clula.
Endosporas (esporas)
Estas son formas latentes de clulas bacterianas producidas por ciertas bacterias en condiciones
de ayuno (Figura 9., Figura 10., Figura 11., Figura 12.); las formas de crecimiento activo de la
clula se llaman clulas vegetativas. La espora es resistente a condiciones adversas (incluyendo
temperaturas altas y solventes orgnicos). El citoplasma de la espora es deshidratado y contiene
dipicolinato de calcio (cido dipicolnico) (Figura 13.) el cual est relacionado con la resistencia
de la espora al calor extremo. Las esporas se encuentran comnmente en los gneros Bacillus y
Clostridium.
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Figura 9. Espora de Bacillus cereus (verde) y las clulas que no forman esporas (rosa)
Figura 10.
larvae esporulacin el cultivo se muestra de forma similar a las de otros
formadores de esporas. La clula vegetativa en forma de bastn tiene una gruesa de capa
de peptidoglicano
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Figura 11.
Una espora inmadura se muestra rodeada por su clula madre (esporangio).
Una copia del DNA bacteriano esta contenida dentro de la espora en desarrollo. La
cubierta externa de la espora aparece ms delgada y menos electrodensa que en la clula
madura.
Figura 12.
La cubierta gruesa de la espora indica que la diferenciacin de la endospora
ya es completa, aunque la endospora permanece an dentro del esporangio. Finalmente,
la endospora se libera del esporangio. La cubierta interna consiste en un mximo de siete
capas distintas llamadas lamellae
Figura 13.
Acido Dipicolnico
Procarintes
Eubacteria (Bacteria)
Archaebacteria (Archaea )
Eucariontes
Plsmidos
Cromosomas
Ribosomas
Peptidoglicano (murena, mucopptido)
Tincin de gram
Gram negativos
Gram positivos
Envoltura celular
Membrana celular
Pared celular
Membrana externa
Espacio periplsmico
Fosforilacin oxidativa
Esferoplasto/protoplasto
Flagelos
Quimiotxis
Filamento axial
Protena de unin al periplasma
Permeasas
Grnulos de almacenamiento
Pili (fimbrias)
Cpsula (capa viscosa y glucoclix)
Endosporas
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Envoltura celular
La envoltura celular puede definirse como: la membrana celular y la pared celular, mas la
membrana externa si sta se encuentra presente. La pared celular consiste de la capa de
peptidoglicano y otras estructuras que sta lleva unidas. La mayora de las envolturas celulares
caen en dos categoras principales (Figura 14.): Gram positivas y Gram negativas. Esto se basa
en las caractersticas de la tincin de Gram en donde se reflejan grandes diferencias entre los
dos grupos. Otros tipos de pared celular se encuentran en pocas especies bacterianas (ni en los
Gram positivos ni en los Gram negativos).
Figura 14.
Paredes celulares de bacterias Gram positivas y negativas. M: peptidoglicano
o capa de murena; OM: membrana externa; PM: membrana plasmtica; P: espacio
periplsmico; W, pared de peptidoglicano en Gram-positivas.
El peptidoglicano (PG) es una macromolcula nica, con enlaces altamente entrecruzados, forma
una bolsa que rodea a la membrana celular bacteriana y que concede rigidez a la envoltura. En
tamao molecular es inmensa (su peso molecular es del orden de millones; comparado con las
protenas que son del orden de miles en peso molecular).
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Figura 15.
Figura 16.
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Membrana celular
Figura 17.
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Figura 18.
Estructura de peptidoglicano. Un diagrama esquemtico de un modelo de
peptidoglicano. Se muestran las cadenas de polisacridos, las cadenas laterales de
tetrapptido y puentes de pptidos.
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Lipopolisacrido
El ensamblaje del lpido A se lleva a cabo en la membrana celular y los azcares centrales se le
van uniendo secuencialmente. Las subunidades del antgeno-O son sintetizadas
independientemente (sobre un lpido acarredor, como en la sntesis del peptidoglicano). El
antgeno-O completamente sintetizado se une entonces a la regin central y el lpido A,
generndose el lipopolisacrido) en la membrana celular, antes de su paso/insercin a la
membrana externa (Figura 19.).
Figura 19.
Estructura de lipopolisacrido. A. lado O de la cadena - formada por azcares
enlazados. Nucleo de polisacridos - azcares enlazados a N -acetilglucosamina (NAG) y
Keto-desoxicolato (KDO). Lpido A - anclado en la membrana externa. B. modelo molecular.
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Endosporas
Estas clulas bacterianas, Gram positivas modificadas, tienen una envoltura celular inusual que
consta de una membrana celular y una membrana externa. La capa de peptidoglicano es menos
entrecruzada que en la mayora de las clulas bacterianas y contiene una forma deshidratada de
cido murmico. El peptidoglicano de la espora se mencionado como la corteza y se encuentra
entre las dos membranas. Es una cubierta consistente en queratina altamente entrecruzada que
se encuentra rodeando el exterior de la clula. Debido a esta cubierta la espora bacteriana es
altamente resistente a los agentes qumicos.
En la replicacin bacteriana, normalmente las clulas se dividen, se forma un septo separando a
la clula madre en dos hijas de tamao ms o menos equivalente. Cuando ocurre la
esporulacin, la divisin celular no es equitativa y la clula ms grande, llamada clula madre
envuelve a la clula hija. La membrana celular de la clula hija constituye la membrana interna
de la espora y la membrana celular de la clula madre forma la membrana externa (Figura 20.).
Figura 20.
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Requerimientos de Oxgeno
Los aerobios obligados deben ser capaces de crecer en presencia de oxgeno y no llevan a cabo
fermentacin.
Los anaerobios obligados no llevan a cabo fosforilacin oxidativa. Mas an, ellos mueren en
presencia de oxgeno ya que carecen de ciertas enzimas como la catalasa [la cual rompe el
enlace del perxido de hidrgeno, H2O2, a agua y oxgeno], la peroxidasa [por la cual NADH+
H2O2 se convierten a NAD y O2] y la superxido dismutasa [por la cual el superxido, O2; es
convertido a H2O2]. Estas enzimas de-toxifican los radicales libres producidos a partir del
perxido de hidrgeno y del oxgeno producidos durante el metabolismo aerobio (en presencia
de oxgeno). Los anaerbios aerotolerantes son bacterias que respiran anaerbicamentre, pero
pueden sobrevivir en presencia de oxgeno. Los anaerobios facultativos pueden llevar cabo tanto
la fermentacin como la respiracin aerbica. En presencia de oxgeno, la respiracin anaerbica
de estos organismos generalmente se apaga y entonces respiran aerbicamente. Las bacterias
Requerimientos Nutricionales
Estos incluyen fuentes de carbono orgnico, nitrgeno, fsforo, azufre e iones metlicos
incluyendo el hierro. Las bacterias secretan molculas pequeas que unen el hierro (siderforos,
por ejemplo; enterobactina, micobactina). Los siderforos (con el hierro unido) son entonces
internalizados va receptores de mebrana por la clula bacteriana. El husped humano tambin
tiene protenas transportadoras de hierro (por ejemplo: la transferrina). Por lo tanto las bacterias
que compiten con el husped por el hierro de forma ineficiente no son patgenos exitosos.
Temperatura
Las bacterias pueden crecer en una variedad temperaturas, desde aquellas cercanas al punto de
congelacin hasta el punto de ebullicin del agua. Las bacterias que crecen mejor a la mitad de
este rango se conocen como mesfilos, las cuales incluyen todos los patgenos y oportunistas de
humano. Las que viven a temperaturas ptimas altas se conocen como termfilas y las que lo
hacen a bajas temperaturas son los psicrfilicos.
pH
Algunas bacterias crecen mejor a pH neutro, sin embargo ciertas bacterias pueden sobrevivir y
crecer de forma constante en condiciones cidas o alcalinas.
a) turbidez: (la opacidad del liquido del cultivo bacteriano- es una estimacin del total de
bacterias [vivas y muertas]. Esta se cuantifica usualmente con un espectrofotmetro). Figura 21..
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Figura 21.
Curva de crecimiento
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Respiracin Aerbica
La respiracin aerbica incluye la glicolisis y el ciclo del cido tricarboxlico (Ciclo de Krebs). El
piruvato se degrada por completo hasta bixido de carbono (C1) y en el proceso el NAD se
convierte a NADH. Por lo tanto, en la fermentacin aerbica, el NADH se genera por dos rutas
(glicolisis y ciclo de Krebs). La fosforilacin oxidativa convierte el exceso de NADH a NAD y
durante este proceso se genera ms ATP (energa almacenada). Las ubiquinonas y los citocromos
son componentes de la cadena de transporte de electrones, involucrada en este ltimo proceso y
la conversin de oxgeno hasta formar molculas de agua viene a ser el paso final.
Ciclo de Krebs (C4-C6 Compuestos intermediarios).
NAD ---> NADH
Pyruvate (C3) ----------------------------------->3 CO2 (C1)
Fosforilacin Oxidativa
NADH --> NAD
O2 ----------------------------------------------> H2O
ADP --> ATP
El Ciclo de Krebs (Figura 22. y Figura 23.) contiene intermediarios de 4 y 6 carbonos. El piruvato
(C3) es la molcula que alimenta el ciclo de Krebs de tal manera que el nmero de
intermediarios C4/C6 permanece igual o se incrementa.
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a) La prdida de CO2 (C1) del piruvato para formar la acetil CoA, se ve seguida de su adicin a
un componente C4 del ciclo (oxalacetato) y se produce un componente C6 (cido ctrico). Por lo
tanto el nmero de molculas C6 producidas iguala el nmero de molculas C4 presentes
inicialmente.
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Figura 22.
Figura 23.
b) Mediante la adicin del CO2 al piruvato se produce un compuesto de C4. En esta situacin, se
generan molculas adicinales de C4 (componentes del ciclo). .
Por lo tanto si alguno de los componentes del ciclo, son removidos para usarse en otras rutas
biosintticas, estos pueden ser repuestos por la va de esta reaccin.
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Figura 24.
Productos finales de las vas de fermentacin. Debido a que un determinado
tipo de organismo utiliza una va de fermentacin caractersticas, los productos finales
tambin se puede utilizar como un marcador de identificacin.
Esterilizacin/desinfeccin/ Antispsis
Antibitico
Toxicidad selectiva Bactericida
Bacteriosttico
Esterilization
El trmino esterilizacin se refiere a la muerte (o eliminacin) de TODAS las bacterias de manera
no selectiva. Por ejemplo, esterilizar en autoclave involucra el calentamiento de lquidos (por
ejemplo medios de cultivo) o slidos a 121oC bajo presin de vapor. Los materiales en este caso
obviamente deben ser resistentes al calor.
El xido de etileno se usa con frecuencia en los hospitales para esterilizar equipo que no puede
ser calentado. Los filtros de membrana poseen poros que atrapan a las bacterias, no obstante
permiten que algunos frmacos y sustancias qumicas pequeas los atraviesen, as que es
posible utilizar filtros pre-esterilizados para la esterilizacin de soluciones delicadas. La luz
ultravioleta se usa para disminuir los niveles bacterianos en las superficies como en las salas de
operaciones, sin embargo, no es completamente efectiva. La radiacin ionizante es ms eficiente
y puede ser utilizada para esterilizar instrumental y alimentos.
Los desinfectantes (por ejemplo los basados en fenol) pueden ser tiles para eliminar bacterias
en algunos instrumentos, pero no pueden ser utilizadas para consumo de ingesta o sobre la piel.
Los antispticos (por ejemplo el yodo o el alcohol al 70%) se usan va tpica (por ejemplo en la
superficie de la piel) para reducir la carga bacteriana.
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Antibioticos
En contraste, los antibiticos son agentes que son selectivamente txicos para las bacterias
(ya sea porque las matan [bactericida] o porque inhiben su crecimiento [bacteriosttico] sin
daar al paciente. De esta forma pueden ser ingeridos. Estos compuestos por definicin, deben
actuar sobre estructuras que se encuentran en las bacterias, pero no en el husped. Los
antibiticos trabajan mas eficientemente en colaboracin con el sistema inmune activo, para
matar las bacterias infecciosas eliminndolas del husped. Despus del aislamiento de colonias
puras (ver la Conferencia 2 de Bacteriologa, Bacteriology lecture 2), la susceptibilidad de los
aislamientos bacterianos se puede ensayar en una amplia variedad de antibiticos. La
concentracin inhibitoria mnima (MIC) se refiere a la concentracin ms baja de antibitico que
detiene visiblemente el crecimiento bacteriano. La forma ms simple, la zona de inhibicin del
crecimiento bacteriano alrededor de un disco impregnada con el antibitico (mtodo de KirbyBauer) es otra medida de la actividad del antibitico.
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(4) Los antibiticos beta-lactmicos que incluyen a las penicilinas (por ejemplo ampicilina) las
cefalosporinas y las monobactamicos. Se unen e inhiben a las enzimas (protenas de unin a
penicilina) involucradas en la transpeptidacin (unin cruzada) de peptidoglicanos. Estos
antibiticos tienen en comn el anillo lactmico de cuatro miembros. Unido al anillo lactmico,
las penicilinas tienen un anillo adicional de cinco miembros y las cefalosporinas un anillo de seis
miembros. Los monobactamicos consisten solamente del anillo lactmico y muestran actividad
antibitica.
Penicilina
La penicilina la sintetiza el hongo Penicillium chrysogenum. Durante la fermentacin el hongo
forma el cido-6-aminopenicilnico el cual consta de la fusin de un anillo tiazlico y un anillo
beta lactmico (Figura 25.). Sin embargo, este anillo es lbil a pH cido y est sujeto a la
degradacin por enzimas bacterianas. Sus derivados ms estables se elaboran bioqumicamente
de manera que adicionalmente incrementen su estabilidad, se absorban mejor por el tracto
gastrointestinal y tengan un ms amplio espectro de efectos bactericidas.
Figura 25.
Estructura de la penicilina
Varias cadenas laterales procedentes de sntesis qumica, se han unido a las estructuras de
anillos lactmicos de forma sinttica, produciendo un nmero de antibiticos con diferentes
propiedades en el husped. Muchas penicilinas (Figura 25.) muestran poca actividad contra las
bacterias Gram negativas, debido a que no penetran la membrana externa. Las cefalosporinas y
otras penicilinas mas recientes son activas contra las bacterias gram negativas ya que pueden
penetrar la membrana externa. Otras penicilinas qumicamente modificadas presentan una
menor tasa de eliminacin por parte del paciente, disminuyendo as la frecuencia de
administracin de estos frmacos.
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Las penicilinas pueden ser destrudas por las beta-lactamasas (o penicilinasas) que producen las
cepas bacterianas resistentes (Figura 26.). El cido clavulnico tambin posee un componente
beta lactmico, mediante el cual se une fuertemente a las beta-lactamasas, impidiendo su
disociacin como sustrato e inhibiendo por lo tanto la actividad de las beta-lactamasas. Este
compuesto se utiliza en combinacin con otras penicilinas, permitiendo su uso contra bacterias
que de otra manera presentaran resistencia. Otra forma de resistencia involucra un cambio en la
estructura de las protenas de unin a penicilina (PBPs, penicillin binding proteins), de tal manera
que el antibitico no se una eficientemente con ellas (Figura 27.). En el caso de las bacterias
gram negativas, las penicilinas atraviesan la membrana externa por medio de porinas. Los
mecanismos de resistencia se pueden desarrollar a travs de mutacin, dando lugar a la
aparicin de porinas modificadas.
Figura 27.
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Figura 26.
Polymyxin B
La polimixina B (Figura 28.) se une a la porcin Lpido A del lipopolisacrido y tambin se une a
fosfolpidos. Sin embargo, se une preferencialmente al Lpido A. Esto desestabiliza la membrana
externa de las bacterias gram negativas. Debido a que la membrana celular no se encuentra
expuesta en las bacterias gram positivas, la polimixina tiene poca efectividad contra ellas. Esta
droga es txica a las clulas humanas, debido a que tambin puede lisar a las membranas
eucariticas, esto explica que su uso clnico sea limitado.
Figura 28.
Estructura de polimixina
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Figura 29.
Para que un antibitico sea efectivo debe ser posible alcanzar la MIC o la MBC en el sitio de la
infeccin. La absorcin farmacolgica y la distribucin del antibitico van a influenciar la dsis, la
ruta y la frecuencia de administracin del antibitico a fin de alcanzar la dosis efectiva en el sitio
de la infeccin.
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La prueba se lleva a cabo bajo condiciones estandarizadas y se han establecido zonas estndar
de inhibicin para cada antibitico. Si la zona de inhibicin es igual o mayor que la zona
estndar, el microorganismo es considerado como sensible al antibitico. Si la zona de inhibicin
es menor que la zona estndar, el microorganismo se considera como resistente. La Figura 29.
tambin ilustra como se forma la zona de difusin del disco y la Figura 30. ilustra algunas de las
zonas estndar de inhibicin para varios antibiticos.
E. Terapia de Combinacin La terapia de combinacin con dos o ms antibiticos se usa en
casos especiales: (1) para prevenir el surgimiento de cepas resistentes, (2) para tratar casos de
emergencia durante el periodo cuando el diagnstico del agente etiolgico an se encuentra en
proceso y (3) para sacar ventaja del sinergismo de los antibiticos.
El sinergismo de los Antibiticos ocurre cuando el efecto de una combinacin es mayor que
la suma de los efectos de los antibiticos usados individualmente. El antagonismo de los
antibiticos ocurre cuando un antibitico, usualmente el de menor efecto, interfiere con el efecto
de otro antibitico.
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Figura 30.
Figura 31.
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c. Resistencia Es comn
d. Efectos Adversos - Destruccin de la flora normal intestinal que resulta en incremento
de infectiones secundarias; produce manchado y deapareamiento de la estructura del hueso y
de los dientes.
3. Espectinomicina (bacteriosttico)
a. Modo de accin La espectinomicina interfiere de manera reversibe con la interaccin
del m-RNA con el ribosome 30S. La espectinomicina es similar estructuralmente a los
aminoglicosidos pero causa lectura errnea del mRNA.
b. Espectro de actividad- Se usa en el tratamiento de Neisseria gonorrhoeae resistante a la
penicilina.
c. Resistencia - Rara en Neisseria gonorrhoeae
B. Antimicrobianos que se unen a la Subunidad Ribosomal 50S
1. Chloramfenicol, lincomicina, clindamicina (bacteriostticos)
a. Modo de accin - Estos antimicrobianos se unen al ribosoma 50S e inhiben la actividad
de la peptidil transferase.
b. Espectro de actividad.
(1) Cloramfenicol - Amplio rango
(2) Lincomicina y clindamicina Rango restringido
c. Resistencia - Comn
d. Efectos Adversos El Cloramfenicol es txico (suprime a la mdula sea) pero se usa en
el tratamiento de la meningitis bacteriana.
2. Macrlidos (bacteriostticos) - Eritromicina
a. Modo de accin Los macrlidos inhiben la translocacin.
b. Espectro de actividad - Bacterias Gram-positivas, Mycoplasma, Legionella
c. Resistencia - Comn
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Antimicrobianos Antimetabolitos
A. Inhibidores de la Sntesis del cido Flico - La selectividadn de estos antimicrobianos es
una consequencia del hecho de que las bacterias no pueden usar el cido flico pre-formado y
deben sintetizar su propio cido flico. En contraste, las clulas de mamferos usan cido flico
obtenido de la dieta.
Revisin del metabolismo cido del flico La Figura 32. resume la ruta del metabolismo del
cido flico e indica los sitios en los cuales actan los antimetabolitos.
1. Sulfonamidas, sulfonas (bacteriostticos)
a. Modo de accin Estos antimicrobianos son anlogos del cido para-aminobenzico e
inhiben competitivamente la formacin de cido dihidroptrico.
b. Espectro de actividad- Actividad de amplio rango contra bacterias gram-positivas y
gram-negativas; se usa principalmente en infecciones del tracto urinario y en infecciones por
Nocardia.
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c. Resistencia Es comn.
d. Terapia de combinacin Las sulfonamidas se usan en combinacin con trimetoprim;
esta combinacin bloquea dos distintos pasos en el metabolismo del cido flico y previene la
emergencia de cepas resistentes.
2. Trimetoprim, metotrexato, pirimetamine (bacteriostaticos)
a. Modo de accin - Estos antimicrobianos se unen a la dihidrofolato reductasa e inhiben la
formacin de cido tetrahidroflico.
b. Espectro de actividad Amplio rango de actividad contra bacterias gram-positivas y
gram-negativas; se usan principalmente en infeciones del tracto urinario y en infecciones por
Nocardia.
c. Resistencia Es Comn
Figura 32.
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1. Resistencia clnica a los agentes antimicrobianos ocurre cuando la MIC de la droga para una
cepa particular excede a aquella que es capaz de alcanzarse in vivo en forma segura. La
resistencia a un antimicrobiano puede originarse (1) por mutacin en el gene que determina la
sensibilidad/resistencia al agente o (2) por adquisicin de un DNA extracromosomal (plsmido)
conteniendo genes de resistencia. La resistencia que aparece despus de la introduccin de un
agente antimicrobiano en el medio ambiente, resulta normalmente de un proceso de seleccin,
por ejemplo: el agente selecciona, es decir, solo permite que el desarrollo a los sobrevivientes de
aquellas cepas que poseen el gen de resistencia. La resistencia se puede desarrollar en un solo
paso o puede resultar de la acumulacin de mutaciones mltiples.
2. La resistencia cruzada implica que un solo mecanismo confiere resistencia a mltiples agentes
antimicrobianos mientras que la resistencia mltiple implica que estn involucrados mltiples
mecanismos. La resistencia cruzada se observa comnmente en aquellos agentes
antimicrobianos relacionados muy cercanamente, mientras que la resistencia mltiple se
observa con agentes antimicrobianos cuyos mecanismos de accin no estn relacionados.
B. Mecanismos de Resistencia
1. Permeabilidad alterada ante el agente antimicrobiano- Una permeabilidad alterada puede ser
atribudo a la incapacidad del agente antimicrobiano para penetrar en la clula bacteriana o
alternativamente para exportar activamente el agente desde el interior de la clula.
2. Inactivacin del agente antimicrobiano- La resistencia a menudo es el resultado de la
produccin de una enzima que es capaz de inactivar el agente antimicrobiano.
3. Alteracin del sitio blanco La resistencia se puede producir debido a la alteracin del sitio
blanco que reconoce el agente antimicrobiano.
4. Reemplazamiento de una ruta sensible La resistencia puede resultar de la adquisicin de una
enzima nueva que reemplace la sensible.
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Paso 1. Las muestras de fluidos corporales (por ejemplo, la sangre, la orina, el lquido
cerebroespinal) se estran sobre placas de cultivo y las colonias aisladas de las bacterias (las
cuales se observan a simple vista) aparecen despus de uno a varios das de incubacin (Figura
33.). Cada colonia consiste de millones de clulas bacterianas. La observacin de las colonias se
caracteriza por su tamao, la textura, el color y (si ha crecido en agar sangre) las reacciones de
hemlisis. La morfologa colonial es altamente importante como un primer paso en la
identificacin bacteriana. En caso de que el organismo requiera oxgeno para el crecimiento, esta
otra caracterstica es relevante en la diferenciacin.
Figura 33.
Cultivos en placas de bicarbonato y agar sangre de Bacillus anthracis.
Colonias lisas en bicarbonato (izquierdo) y colonias rugosas en el agar sangre (derecho)
Paso 2. Las colonias se tien por la tcnica de Gram y las clulas bacterianas teidas
individualmente se observan bajo el microscopio.
Paso 3. Las bacterias se tipifican usando colonias aisladas para sembrar pruebas bioqumicas.
Esto a menudo requiere horas adicionales de tiempo de crecimiento.
La tincin de Gram
Un toque del asa sobre la colonia bacteriana se debe disolver sobre una gota de agua y extender
como una capa fina sobre un portaobjetos. Se deja secar la preparacin, se fija al calor suave y
se trata como sigue (Figura 34., Figura 35., Figura 36., Figura 37.) :
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Figura 34.
Figura 35.
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Figura 36.
Streptococcus mutans. Tincin de gram. El cultivo en placa de agar sangre
produce una morfologia cocoide sin formar cadenas. Este microorganismo puede causar
endocarditis bacteriana subaguda y caries dental.
Figura 37.
Streptococcus mutans. Tincin de Gram. Cultivo en caldo de tioglicolato. Su
morfologa es parecida al Bacillus y forma cadenas cuando se cultiva en caldo, puede
causar endocaditits sub aguda bacteriana y caries dental.
A continuacin la apariencia de las bacterias se observa bajo el microscopio. Las preguntas que
se deben hacer incluyen:
Aparte de la tincin de Gram, hay otras tinciones disponibles que son menos empleadas (por
ejemplo tinciones para esporas y cpsulas).
De la placa de aislamiento primario se toma otra colonia similar y luego se examinan las
propiedades bioqumicas; por ejemplo, fermentara la bacteria un azcar, por ejemplo la lactosa?
Algunas veces, las bacterias se identifican (por ejemplo: por aglutinacin) con anticuerpos
disponibles comercialmente que reconocen antgenos definidos en la superficie de la bacteria. Ya
estn disponibles y son actualmente usadas otro tipo de pruebas de diagnstico molecular.
Anlisis qumico
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Anlisis molecular
La comparacin de las secuencias del DNA cromosomal bacteriano completo sera lo ideal, pero
esto no es factible hacerlo en todos los casos. Millones de nucletidos tendran que ser
secuenciados por cada cepa. En aos anteriores, se ha llevado a cabo la secuenciacin de
genomas enteros de un solo representante, de unas pocas especies bacterianas (por ejemplo
una cepa). En cada caso, esto involucrara cantidades masivas de trabajo, realizadas por grandes
grupos de investigacin dedicados a la tarea de secuenciacin. Alternativamente, la semejanza
genmica histricamente se ha determinado por el contenido de guanina (G) ms citosina (C),
expresado comnmente como un porcentaje (% de GC). Esto ha sido reemplazado por dos
alternativas mas confiables la hibridacin y la secuenciacin de genes en particular,
(comnmente se usa el gen que codifica para el rRNA 16S).
La homologa de DNA-DNA (o qu tanto pueden unirse [hibridizar] dos cadenas de DNA de
diferentes bacterias) se emplea para comparar las relaciones genticas de las cepas/especies
bacterianas. Si el DNA de dos cepas bacterianas muestra un alto grado de homologa (es decir
las cadenas se unen muy bien) se considera que estas cepas son miembros de la misma especie.
El DNA de especies bacterianas diferentes (a menos que tenga relacin taxonmica muy
cercana) no muestra homologa.
En los ltimos aos, la secuenciacin de las molculas del RNA ribosomal 16S (rRNA 16S) se han
convertido en el "estndar de oro" de la taxonoma bacteriana. La molcula tiene
aproximadamente mil seiscientos nucletidos de longitud. La secuencia del rRNA 16S provee una
medida de la semejanza genmica, sobre la base de que permite hacer comparaciones de
parentesco entre especies de todo el reino bacteriano. Las especies bacterianas cercanamente
relacionadas a menudo tienen secuencias de rRNA idnticas. Por lo tanto, esta tcnica
proporciona informacin complementaria a la hibridacin DNA-DNA. La determinacin de la
secuencia de los genes de rRNA 16S y otras regiones genticas se usan en la identificacin en el
laboratorio de microbiologa clnica.
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Palabras clave
Merocigoto
Transformacin
Competencia
Recombinacin Homloga
Transduccin
Transduccin generalizada
Transduccin especializada
Conversin lisognica
Conjugacin
Pilus F/pili sexual
Replicn
F+
FHfr
F'
Elemento gentico transponible
Secuencias de insercin
Transposn
Recombinacin sitio-especfico
Variacin de fase
Plsmidos, Plsmido conjugativo
Plsmido No conjugativo
Factor R
RTF
Determinante R
Introduccin
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Adems, dado que las bacterias son organismos haploides, an las mutaciones que normalmente
podran ser recesivas sern expresadas. Por ello, en poblaciones bacterianas las mutaciones
pueden representar un problema en el tratamiento de las infecciones causadas por bacterias. No
solo son problema las mutaciones, las bacterias tienen mecanismos por los cuales sus genes
pueden transferirse de una clula a otra. Por tanto, una mutacin que surge en una clula
siempre puede ser transmitida a las otras.
La transferencia gentica en bacterias es unidireccional y va de una clula donadora a una
receptora y la donadora usualmente cede solamente una pequea parte de su DNA a la
receptora. Por tanto, no se forman cigotos completos; en su lugar se forman cigotos parciales
(merocigotos).
Los genes bacterianos usualmente se transfieren a miembros de la misma especie aunque
ocasionalmente puede ocurrir transferencia hacia otras especies. La Figura 38. ilustra las
transferencias genticas que se ha demostrado que ocurren entre especies bacterianas
diferentes.
Figura 38.
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Transformacin
La transformacin es la transferencia gentica que resulta de la incorporacin de DNA desnudo
por una clula receptora desde una clula donadora. Ciertas bacterias (ej. Bacillus, Haemophilus,
Neisseria, Pneumococcus) son capaces de tomar DNA del medio ambiente y ese DNA que es
introducido puede llegar a ser incorporado al cromosoma de la clula bacteriana receptora.
1. Factores que afectan la transformacin.
a. Tamao del DNA Funciona mejor el DNA de doble cadena de al menos 5 X 105 daltones. Por
tanto, la transformacin es sensible a las nucleasas del medio ambiente.
b. Competencia de la clula receptora Algunas bacterias son capaces de incorporar DNA en
forma natural. Sin embargo, estas bacterias solo toman al DNA en una etapa particular de su
ciclo celular, cuando producen una protena especfica llamada factor de competencia. Cuando la
bacteria se encuentra en este estadio se dice que es competente. Otras bacterias no son
capaces de incorporar el DNA naturalmente, sin embargo en estas bacterias la competencia
puede ser inducida in vitro mediante tratamiento con sustancias qumicas (ej. CaCl2).
2. Pasos de la transformacin.
a. Incorporacin del DNA La incorporacin del DNA por las bacterias Gram+ y Gram- es
diferente. En las bacterias Gram+ el DNA se introduce en forma de molculas de cadena sencilla
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Figura 39.
Los fagos que median la transduccin generalizada, normalmente cortan el DNA de la clula
husped en pequeas piezas y empacan ambos DNAs al interior de la partcula fgica mediante
un mecanismo llamado head full o llenado de las cabezas del fago. Ocasionalmente una de las
piezas del DNA de la bacteria husped resulta empacada al azar dentro de una cubierta de fago.
Por lo tanto cualquier gene de la bacteria donadora puede ser potencialmente transferido, pero
solamente se transferir tanto DNA como pueda caber en una sola cpside. Cuando la clula
receptora se infecta con un fago que contiene DNA de una donadora, el DNA de la donadora
puede entrar a la receptora. Ya dentro de la clula receptora puede ocurrir el evento de la
recombinacin generalizada, en el cual se substituye el DNA de la clula donadora por el de la
receptora (Figura 40.).
Figura 40.
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Figura 41.
Durante la escisin (separacin) del profago, un error llega a ocurrir ocasionalmente en el cual
un poco del DNA del husped escinde (se separa del cromosoma) junto con el DNA del fago. Solo
puede ser transferido el DNA del husped que est flanqueando cada lado del sitio donde el
profago se ha insertado, (ej. transduccin especializada). Despus de la replicacin y la
liberacin del fago y a travs de la infeccin de la clula receptora, puede ocurrir una
lisogenizacin de la receptora dando como resultado la transferencia estable de los genes de la
donadora. La receptora ahora tendr dos copias de los genes que le fueron transferidos. Tambin
es posible que se lleve a cabo una recombinacin legtima entre los genes de la donadora y de la
receptora.
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En los cruces del tipo Hfr X F- el F- raramente se convierte en Hfr y la clula Hfr permanece como
tal. En ste caso existe una alta frecuencia de transferencia de los genes cromosomales del
donador, de ah que el nombre de la cepa sea hfr, del ingls high frequency of recombination.
c. Autnomo con genes cromosomales (F') - En este estadio el factor F es autnomo, pero ahora
contiene algunos genes cromosomales. Los factores F' se producen por escisin del factor F de
una Hfr, como se ilustra en la Figura 42.b. Ocasionalmente, cuando el factor F se escinde del
cromosoma Hfr, los genes del donador localizados en cada lado del factor F pueden escindir
junto con el factor F generando una F'. Los factores F' se denominan dependiendo de los genes
cromosomales que contienen.
a)
Figura 42.
b)
Estados fisiolgicos del factor F.r
En los cruces del tipo F' X F- el F- se convierte a F' mientras que F' permance como tal. Por otra
parte esta bacteria presenta una alta frecuencia de transferencia de aquellos genes
cromosomales se encuentran en el F' y presenta una baja frecuencia de transferencia de otros
genes cromosomales del donador.
3. Mecanismo de la conjugacin.
a. Cruces F+ X F- (Figura 43.)
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Figura 43.
i) Formacin del par - La punta del pilus sexual se pone en contacto con la receptora y
formandose un puente de conjugacin entre las dos clulas. Es a travs de este puente que el
DNA pasar del donador al receptor. De tal forma que el DNA queda protegido de las nucleasas
ambientales. Los pares de acoplamiento o mating pairs pueden ser separados por fuerzas tan
simples como la agitacin y as la conjugacin se puede interrumpir. Consecuentemente, los
pares de apareamiento permanecen asociados solamente por un tiempo corto.
ii) Transferencia del DNA El DNA del plsmido se corta en un sitio especfico llamado origen de
la transferencia y se replica mediante un mecanismo de crculo rodante. Una sola cadena de DNA
pasa a travs del puente de conjugacin y entra a la receptora donde la segunda cadena se
replica.
iii) Este proceso explica los cruces caractersticos F+ X F-. La receptora se convierte en F+, la
donadora permanece como F+ y presenta una baja frecuencia de transferencia de los genes
cromosomales del donador. Como se describe en la Figura 44., realmente no hay transferencia
de los genes cromosomales del donador. Sin embargo en la prctica, existe un bajo nivel de
transferencia de los genes cromosomales del donador en tales cruces.
b. Cruces Hfr X F- (Figura 44.)
Figura 44.
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Figura 45.
iv) Este mecanismo explica las caractersticas de los cruces F' X F-. El F- se convierte en F', el F'
permanece como tal y la se presenta una alta frecuencia de transferencia de los genes del
donador que van en el F' pero una baja frecuencia de transferencia de otros genes cromosomales
del donador.
4) Importancia Entre las bacterias Gram negativas esta es la forma principal en que se
transfieren los genes. La transferencia puede ocurrir entre diferentes especies bacterianas. La
transferencia de resistencia mltiple a los antibiticos por conjugacin ha llegado a ser un
problema relevante en el tratamiento de ciertas enfermedades bacterianas. Debido a que la
clula receptora se convierte en donadora despus de la transferencia del plsmido, es fcil ver
por qu un gen de resistencia a los antibiticos que va en un plsmido puede rpidamente
convertir una poblacin sensible de bacterias en una resistente.
Las bacterias Gram positivas tambin tienen plsmidos que llevan genes de resistencia mltiple
a los antibiticos, en algunos casos estos plsmidos se transfieren por conjugacin mientras que
en otras ellos se transfieren por transduccin. El mecanismo de conjugacin en las bacterias
Gram + es diferente al de las Gram -. En las bacterias Gram + el donador produce un material
adhesivo el cual causa agregacin con el receptor y el DNA se transfiere.
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Figura 46.
Las secuencias de insercin son pequeos tramos de DNA que a sus extremos tienen secuencias
repetidas que estn involucradas en la transposicin. En medio de las secuencias terminales
repetidas hay genes involucrados en la transposicin y secuencias que pueden controlar la
expresin de los genes, pero no presentan otros genes que no sean esenciales.
c. Importancia
i) Mutacin La introduccin de una secuencia de insercin en medio de un gene bacteriano
resultar en la inactivacin de tal gene.
ii) Insercin de plsmidos en los cromosomas Los sitios en los cuales los plsmidos se insertan
en el cromosoma bacteriano se localizan ya sea en las propias secuencias de insercin o cerca
de ellas.
iii) Variacin de Fase Los antgenos flagelares son de los principales antgenos ante los cuales
se dirige la respuesta inmune, en nuestro intento de luchar contra la infeccin bacteriana. En
Salmonella existen genes que codifican para dos genes flagelares antigenicamente diferentes. La
expresin de estos genes est regulada por secuencias de insercin. En una orientacin, uno de
los genes est activo mientras que en la otra orientacin el otro gene flagelar estar activo.
Como resultado Salmonella puede cambiar sus flagelos en respuesta al ataque del sistema
inmune. La variacin de fase en los antgenos flagelares de Salmonella no es nica. Tambin se
ha visto que ocurre con otros antgenos de superficie. Adems el mecanismo de la variacin de
fase puede ser diferente en diversas especies de bacterias (ej. transformacin en Neisseria).
2. Transposones (Tn) Los transposones son elementos genticos transponibles que llevan
uno o ms de otros genes adems de aquellos que son esenciales para la transposicin.
a. Nomenclatura A los transposones se les da la designacin Tn seguida de un nmero.
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Figura 47.
Estructura de un Transposn.
Plsmidos
A. Definicin Los plsmidos son elementos genticos extra-cromosomales que pueden llevar a
cabo una replicacin autnoma. Un episoma es un plsmido que adems es capaz de integrarse
al cromosoma bacteriano.
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ii) Estructura Los plsmidos R son plsmidos conjugativos en los cuales los genes para la
replicacin y la transferencia se localizan en una parte del factor R y los genes de resistencia
estn localizados en otra parte del mismo, como se ilustra en la Figura 48..
Figura 48.
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Figura 49.
El opern de lactosa
a. Genes estructurales - El opern de lactosa contiene tres genes estructurales que codifican
para las enzimas involucradas en el metabolismo de la lactosa. El gen lac z codifica para
la -galactosidasa, una enzima que convierte la lactose en glucosa y galactosa, el gen lac
y que codifica para una permeasa, la cual est involucrada en la incorporacin de la
lactosa, y el gen lac a, que codifica para una galactosa transacetilasa. Estos genes se
transcriben desde un promotor comn en un mRNA polcistrnico, el cual es traducido para
dar lugar a las tres enzimas.
b. Gen Regulador- La expresin de los genes estructurales no solamente se ve influenciada por la
presencia o ausencia del inductor, tambin est controlada por un gen regulador especfico. El
gen regulador puede estar cerca o lejos de los genes que estn siendo regulados. El gen
regulador codifica para una protena especfica, un producto denominado REPRESOR.
c. Operador - El represor acta mediante la unin con una regin especfica del DNA llamada el
operador, la cual est adyacente a los genes estructurales que se estn regulando. Los genes
estructurales junto con la regin operadora y el promotor se conocen como un OPERN. Sin
embargo, la unin del represor con el operador se previene por el inductor y el inductor puede
tambin remover el represor que ya se haya unido al operador. No obstante, en presencia del
inductor el represor se inactiva y no se une al operador, dando como resultado la transcripcin
de los genes estructurales. En contraste, en ausencia del inductor, el represor si est activo y se
une al operador, lo cual da como resultado la inhibicin de la transcripcin de los genes
estructurales. Este tipo de control se conoce como CONTROL NEGATIVO, ya que la funcin del
producto del gen regulador (el represor) es apagar la transcripcin de los genes estructurales.
d. Inductor La transcripcin de los genes lac est influenciada por la presencia o ausencia de
un inductor (lactosa u otros -galactsidos) (Figura 50.).
Ej.
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Figura 50.
Figura 51.
Represin Catablica
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Figura 52.
Figura 53.
2. Opern del triptofano -El opern para triptofano se ilustra en la Figura 54..
a. Genes estructurales El opern para el triptofano contiene cinco genes estructurales que
codifican para las enzimas involucradas en la sntesis del triptofano. Estos genes se transcriben
desde un promotor comn dando lugar a un RNA mensajero (mRNA) policistrnico, el cual se
traduce dando lugar a las cinco enzimas del opern.
b. Gen Regulador- La expresin de los genes estructurales no solamente se ve influenciada por la
presencia o ausencia del co-represor, es tambin controlada por un gen regulador especfico. El
gen regulador puede estar cercano o lejano a los genes que estn siendo regulados. Los genes
reguladores codifican para un producto protico especfico llamado el REPRESOR (a veces
tambin se le conoce como el apo-represor). Cuando el represor se sintetiza es inactivo. Sin
embargo, se puede activar al formar un complejo con el co-represor (por ejemplo: el triptofano)
c. Operador El complejo represor/co-repressor acta unindose a la regin especfica del DNA
llamada operador el cual es una secuencia adyascente a los genes estructurales que se estn
regulando. Los genes estructurales junto con la regin del operador y el promotor se le conoce
como el OPERN. Por lo tanto, en presencia del co-represor, el represor se activa y se une al
operador, dando como resultado la represin de la transcripcin de los genes estructurales. En
contraste, en ausencia del co-represor, el represor es inactivo y por tanto no es capaz de unirse
al operador, lo cual da como resultado la transcripcin de los genes estructurales. A este tipo de
control se le conoce como CONTROL NEGATIVO, ya que la funcin del producto del gen regulador
(represor) es apagar la transcripcin de los genes estructurales.
Figura 54.
El opern de triptofano
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d. Co-represor La transcripcin de los genes del triptofano est influenciada por la presencia o
ausencia de un co-represor (triptofano) (Figura 55.).
Ej.
+ co-represor----> Expresin
- co-represor ----> No hay expresin
Figura 55.
Atenuacin
En muchos operones reprimibles la transcripcin que se inicia en el promotor puede terminarse
prematuramente en la region lder, que es la que precede al primer gen estructural. (ej: la
polimerasa termina la transcripcin antes de que se empiece a transcribir el primer gen del
opern. Este fenmeno se conoce como ATENUACION; la terminacin prematura de la
transcripcin. Aunque la atenuacin se observa en un nmero de operones, el mecanismo se
conoce y se entiende mejor en aquellos operones que son reprimibles y que estn involucrados
en la sntesis de los aminocidos. En estos casos la atenuacin se regula mediante la
disponibilidad del tRNA aminoacilado correspondiente al aminocido en cuestin.
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Figura 56.
Mecanismo de atenuacin
Aunque la transcripcin se inicia al nivel del promotor, realmente esta empieza antes del inicio
del marco de lectura del primer gen estructural y en esta regin previa se forma un transcrito
corto y se conoce como regin lder. Esta regin lder contiene una seal de inicio y otra de alto
(paro) para la sntesis de protenas. Ya que las bacterias no tienen membrana nuclear, la
transcripcin y la transduccin pueden ocurrir simultneamente. Por tanto se puede estar
formando un pptido corto, al mismo tiempo que la RNA polimerasa est transcribiendo la regin
lder. Este pptido de prueba contiene varios residuos de triptofano a la mitad del mismo. Por lo
tanto, si existe suficiente cantidad de triptofanil-t-RNA para traducir el pptido de prueba, el
pptido entero estar formado y el ribosoma alcanzar la seal de alto. Por otra parte, si no hay
suficiente triptofanil-t-RNA para traducir el pptido, el ribosoma se arrestar en los dos codones
para el triptofano antes de alcanzar la seal de alto.
La secuencia en el mRNA lder contiene cuatro regiones, las cuales tienen secuencias
complementarias entre s (Figura 57.). Por lo tanto, varias diferentes estructuras de tallo y lupa
se pueden formar. La regin 1 solamente puede formar pares de bases con la regin 2; la region
2 puede formar pares de base ya sea con la regin 1 o con la regin 3; la regin 3 puede formar
pares de bases con las regiones 2 o 4; y la regin 4 solamente puede formar pares de bases con
la regin 3. Por lo tanto tres posibles estructuras de tallo/lupa pueden formarse en el RNA.
Figura 57.
regin 1: regin 2
regin 2: regin 3
regin 3: regin 4
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Una de las posibles estructuras (la regin 3 que forma pares de bases con la regin 4) genera
una seal para la RNA polimerasa para que ella termine la transcripcin (ej. para atenuar la
transcripcin). Sin embargo la formacin de una estructura de tallo y lupa puede ser que anule la
formacin de otras. Si la regin 2 forma pares de bases con la regin 1 no estar disponible para
parearse con la regin 3. De manera similar, si la regin 3 forma pares de bases con la regin 2
no estar disponible para formar pares de bases con la regin 4.
La capacidad de los ribosomas para traducir el pptido de prueba, afectar la formacin de las
diferentes estructuras de tallo y lupa Figura 58.. Si el ribosoma alcanza la seal de alto de la
traduccin, sta estar cubriendo la regin 2 y por tanto la regin 2 no estar disponible para la
formacin de pares de bases con otras regiones. Esto permite la generacin de la seal para la
terminacin de la transcripcin, porque la regin 3 estar disponible para parearse con la regin
4. Por lo tanto, cuando existe suficiente triptofanil-t-RNA para traducir el pptido de prueba
ocurrir una atenuacin y los genes estructurales no se transcribirn. En contraste, cuando
existe una cantidad insuficiente de triptofanil-t-RNA para traducir el pptido de prueba, entonces
la atenuacin s ocurrir. Esto es porque el ribosoma se detendr en los dos codones para
triptofano de la regin 1, permitiendo as que la regin 2 forme pares de bases con la regin 3
previniendo as la formacin de la seal de atenuacin (ej. la regin 3 se pareara con la regin
4). Por lo tanto, los genes estructurales se transcribirn.
Figura 58.
Mecanismo de atenuacin
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Transmisin
Las especies especficas de bacterias (o cepas dentro de una especie) inician la infeccin
despus de ser transmitidas por diferentes routas a sitios especficos del cuerpo humano. Por
ejemplo, las bacterias se transmiten en gotitas aerotransportadas al tracto respiratorio, por
ingestin de alimentos o agua, o por contacto sexual
Adherencia
Las infecciones bacterianas son iniciadas generalmente por la adherencia del microbio a una
superficie epitelial especfica del cuerpo. Lo contrario ocurre cuando el organismo es eliminado
ya sea por peristalsis y defecacin (en el intestino), por accin de los cilios, tos y estornudos (en
las vas respiratorias) o por miccin (en el tracto urogenital). La adherencia no es simplemente
una unin inespecfica sino que existen interacciones especficas entre constituyentes externos
en la clula bacteriana (adhesinas) y en las clulas del organismo (receptores), es decir,
interacciones adhesina-receptor.
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Los estreptococos (S. pyogenes) tienen fimbrias en su superficie que contienen dos
componentes principales, la protena M y el cido lipoteicoico. La fibronectina presente en el
plasma se une a las clulas epiteliales y las porciones de cidos grasos del cido lipoteicoico
interactan a su vez con la fibronectina.
Las cepas de E. coli con diferentes caractersticas de superficie causan distintas enfermedades.
Entre los pili ms extensamente estudiados estn los de E. coli uropatognica. Ciertas adhesinas
presentes en los extremos de las fimbrias de E. coli facilitan la unin a las clulas epiteliales. Las
fimbrias tipo 1 se unen a receptores que contienen manosa. Mientras que las fimbrias P permiten
la unin a glicolpidos que contienen galactosa (e.g. cerebrosidos) y a glicoprotenas presentes
en las clulas epiteliales. Se denominan fimbrias "P" porque originalmente se demostr que se
unan a los antgenos de eritrocitos del grupo sanguneo P de humanos.
Penetracin y diseminacin
Algunos patgenos bacterianos se alojan en las superficies epiteliales como por ejemplo Vibrio
cholerae. Otras especies son capaces de penetrar estas barreras pero permanecer localmente.
Otros pasan a la corriente sangunea y de ah a otros sitios sistmicos. Esto generalmente ocurre
en el intestino, tracto urinario y tracto respiratorio y en menor medida a travs de la piel. Por
ejemplo, Shigella penetra a las clulas epiteliales del intestino al activar su funcin endoctica;
Shigella no se disemina por la va sangunea. En otros casos, las bacterias (ej. Salmonella typhi)
pasan a travs de las clulas epiteliales a la circulacin sangunea. As, la invasin se refiere a la
habilidad de un organismo para entrar a una clula, aunque en algunos casos esto puede
significar un paso posterior hacia el sistema vascular. Borrelia burgdorferi se transmite a la
circulacin sangunea a travs de la piel por medio de una picadura de insecto. Ciertas
endotoxinas degradativas secretadas por algunas bacterias (ej. hialuronidasa o colagenasa)
pueden aflojar la matriz del tejido conectivo aumentando la facilidad del paso de las bacterias a
travs de estos sitios.
Sobrevivencia en el hospedero
Muchos patgenos bacterianos son capaces de resistir a la accin citoltica del plasma y de otros
fluidos corporales que contienen anticuerpos y complemento (ir aqu) (va clsica) o
complemento solo (va alterna) o lisozima. La destruccin de los patgenos extracelulares ocurre
en mayor medida dentro de los fagocitos despus de la opsonizacin (por anticuerpos y/o
complemento) y la fagocitosis. Evadir la fagocitosis es por lo tanto un mecanismo principal de
supervivencia para los patgenos extracelulares. La presencia de cpsulas (en muchos
patgenos), la protena A (S. aureus) y la protena M (S. pyogenes) funcionan en este sentido.
La protena A es un constituyente asociado a la superficie de S. aureus pero tambin es un
producto que se secreta y se une a la porcin Fc de las inmunoglobulinas. Las bacterias, al
unrseles el anticuerpo, activan la va clsica del complemento lo cual resulta en la fijacin de
C3. La fagocitosis ocurre cuando las bacterias opsonizadas se unen a los receptores que
reconocen a las porciones Fc de las inmunoglobulinas y/o a regiones del componente C3. La
protena A es anti-complementaria (ya que cuando se une a la IgG, se activa la cascada del
complemento, bajando los niveles del complemento). Lo anterior significa que en presencia de la
protena A, habr menos fijacin del complemento y por lo tanto la interaccin de la bacteria con
los receptores para C3 no ocurrir. Por otro lado, la protena A libre se une a las porciones Fc de
la IgG por lo que la fagocitosis va receptores de Fc ser inhibida debido al impedimento estrico.
Los peptidoglicanos, as como los polisacridos, activan a la cascada alterna del complemento.
En S. pyogenes el pptidoglicano est suficientemente expuesto de tal manera que es capaz de
unir complemento por la va alterna. La protena M del estreptococo del grupo A es el
componente anti-fagoctico de las fimbrias. La protena M se une al fibringeno del plasma lo
cual bloquea la unin del complemento a las capas de peptidoglicano que cubre a las bacterias.
Por lo tanto, los estreptococos en un suero no inmune no son fagocitados.
Los patgenos intracelulares (tanto obligados como facultativos) deben evitar ser destruidos
dentro de los fagolisosomas. Esto ocurre cuando los parsitos evitan a estas vesculas o las lisan
para luego establecerse en el citoplasma. Alternativamente, los patgenos pueden sobrevivir en
los fagosomas (inhibiendo la fusin de los fagosomas con los lisosomas o bien se hacen
resistentes a las enzimas degradativas si ocurre la fusin con los lisosomas).
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Dao tisular
Las bacterias causan dao a los tejidos por varios mecanismos distintos que implican: 1)
exotoxinas 2) endotoxinas e inmunidad no-especfica, 3) inmunidad especfica humoral y celular.
Exotoxinas
Muchas bacterias producen protenas (exotoxinas) que por su accin enzimtica modifican o bien
destruyen determinadas estructuras celulares. Los efectos de las exotoxinas usualmente se
observan de manera aguda, ya que son suficientemente potentes para producir efectos serios
(ej. la muerte) como resultado. Ejemplos de estos son el botulismo, el ntrax, el clera y la
difteria. Si el husped sobrevive a la infeccin aguda, los anticuerpos neutralizantes (anti-toxina)
frecuentemente se producen de manera tal que neutralizan los efectos de la exotoxina. Las
diferentes clases de exotoxinas incluyen:
(1) Toxinas que actan sobre la matriz extracelular del tejido conectivo.
Ejemplos. La colagenasa de Clostridium perfringens y la hialuronidasa de Staphylococcus aureus.
(2) Toxinas que tienen un componente de unin "B" y un componente cataltico "A"
(Toxinas tipo A-B)
Estas incluyen:
a) Aquellas con actividad ADP-ribosiladora ej. la toxina del clera, la toxina termo-lbil de E. coli,
las toxinas de Pseudomonas aeruginosa y difteria.
b) Aquellas con actividad ltica sobre el rRNA 28S ej. las toxinas shiga y shiga-like (o vero).
c) Aquellas con un sitio de accin parcialmente caracterizado ej. la toxina botulnica, la toxina del
ttanos u la toxina letal del ntrax.
(3) Toxinas con dao a las membranas. ej. la toxina delta de Staphylococcus aureus.
Toxinas que actan extracelularmente. Estas incluyen proteasas, colagenasas y hialuronidasas.
Por ejemplo, Clostridium perfringens produce una colagenasa muy potente, mientras que
Staphylococcus aureus produce una hialuronidasa. El dao a la matriz del tejido conectivo (por la
hialuronidasa y la colagenasa) puede "aflojar" las fibras tisulares permitiendo al microorganismo
diseminarse mas facilmente a travs de los tejidos. Tambin se encuentra includa en este grupo
la exfoliatina de Staphylococcus aureus la cual causa una separacin de las lminas entre la
epidermis y es el agente causal del sndrome de la piel escaldada del recin nacido.
Toxinas A - B. Tales toxinas consisten de dos componentes. Uno de los cuales se une a las
superficies y el otro pasa al interior de la membrana hacia el citoplasma donde realmente acta.
Las toxinas clsicas que han demostrado que actan de esta manera son las del clera y la
difteria.
(i) Exotoxinas ADP-ribosiladoras.
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La toxina diftrica (producida por Corynebacterium diphtheriae) est codificada por el gen tox
de un fago. La toxina se sintetiza como una cadena polipeptdica y rpidamente es procesada
para dar dos cadenas que se mantienen juntas por un enlace disulfuro. B se une a las clulas y A
lleva la actividad enzimtica. A se endocita y desde el endosoma pasa al citosol. La toxina
diftrica, lleva a cabo la ADP-ribosilacin del factor de elongacin (EF2) en los ribosomas,
inhibiendo por lo tanto la sntesis de protenas. La exotoxina A de Pseudomonas tiene un
mecanismo de accin similar al de la toxina diftrica.
La toxina colrica tiene varias subunidades las cuales forman un anillo pentamerico de B con la
subunidad A monomrica insertada en el centro. B se une a los ganglisidos sobre la superficie
celular y parece proveer de un canal a travs del cual penetra A. A1 se forma por una
modificacin proteoltica y despus de la internalizacin lleva a cabo la ADP-ribosilacin de un
complejo regulador en la membrana celular (usando NADH como substrato), causando as la
activacin de la enzima adenilato ciclasa. La activacin de la adenilato ciclasa da lugar a un
incremento en la produccin del AMP cclico, lo que lleva a un decremento en la incorporacin
de cloruro de sodio desde el lumen intestinal y activa la secrecin de iones y agua dando lugar a
la diarrea. La toxina termolbil de E. coli tiene un modo de accin similar.
(ii) Toxinas que actan sobre el rRNA 28S
Las toxinas de Shiga (codificadas en el cromosoma) estn involucradas en la patognesis de la
shigelosis, mientras que las toxinas shiga-like (o semejantes a la de Shiga) son codificadas por
fagos. Estas se producen principalmente por E. coli enterohemorrgica. Estas toxinas comparten
un mecanismo de accin comn. Un fragmento de la subunidad A pasa por el ribosoma donde
tiene actvidad de N-glycosidasa sobre un solo residuo de adenosina; ej. el enlace entre la base y
la ribosa se anula. La diarrea es el resultado, no de una forma activa de secrecin de iones/agua,
sino de una deficiente absorcin de agua debida a la muerte de las clulas epiteliales, los
enterocitos, por la inhibicin de su sntesis de protenas.
(iii) Sitio de accin parcialmente caracterizado
Las neurotoxinas botulnicas, la tetanospasmina y la toxina letal de B. anthracis parecen ser del
tipo de las exotoxinas A-B. La toxina botulnica acta causando inhibicin de la liberacin de la
acetilcolina a nivel de la unin neuromuscular. La toxina del tetanos se absorbe a nivel de las
uniones neuromusculares y se transporta a travs de los axones hacia las sinapsis. Entonces
acta inactivando las neuronas inhibidoras. Las exotoxinas del ttanos y el botulismo, parecen
tener componentes B, pero el mecanismo de accin de sus subunidades A no se conoce. El
componente B de la toxina letal de B. anthracis es el antgeno protector; es interesante que este
componente tambin sirve como subunidad B para la toxina de edema.
Toxinas que daan la membrana: Estas toxinas digieren enzimticamente componentes como los
fosfolpidos (o protenas) de las membranas, es decir, se comportan como detergentes. En cada
caso producen hoyos en la membrana celular y los contenidos citoplsmicos se pueden
derramar. La ("toxina") fosfolipasa de C. perfringens es un ejemplo de una toxina por dao a la
membrana. Esta destruye a los vasos sanguneos deteniendo as el influjo o llegada de las
clulas inflamatorias, lo cual tambin ayuda a crear un ambiente anaerbico mismo que es
importante para el crecimiento de este microorganismo anaerobio estricto. La toxina delta de S.
aureus es una protena extremadamente hidrofbica que se inserta en las membranas celulares
y se cree que tenga una accin similar a la de un detergente.
Endotoxinas
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infeccin. Esto es importante en las infecciones crnicas tales como la tuberculosis, la lepra, la
enfermedad de Lyme y la sfilis.
Inmunopatologa
El tejido infectado a veces acta solamente como un inocente observador y le aparece una
inmunopatologa. Esto puede ocurrir en las infecciones tanto agudas como crnicas. La sobreestimulacin de la produccin de citocinas y la activacin del complemento por las endotoxinas
puede causar dao tisular en ausencia de respuesta inmune. Los antgenos generados que
liberan continuamente los microbios viables y persistentes, subsecuentemente van a
incrementar los anticuerpos de la respuesta humoral y la inmunidad mediada por clulas
resultar en una inmunopatologa crnica. Ciertos antgenos que no se degradan eficientemente
(ej. el polisacrido pneumococal y la pared celular del grupo A estreptococal) pueden mantener
la inmunopatologa que causan, an en ausencia de agentes vivos persistentes. Otros antgenos
bacterianos dan reaccin cruzada con antgenos procedentes de los tejidos del husped,
causando as el desarrollo de autoinmunidad (ej. la protena M de S. pyogenes presenta reaccin
cruzada con la miosina de mamferos). Por tanto la inmunopatologa puede persistir an
despus de que la infeccin y los antgenos microbianos se hayan eliminado.
El sistema inmune en la resistencia a la infeccin - ejemplos
1. Parsitos extracelulares. Los anticuerpos causan lisis del microorganismo y/o su opsonizacin
para favorecer la ingestin por los fagocitos y en tal punto son rpidamente eliminados.
2. Parsitos intracelulares. Principalmente son eliminados por la inmunidad mediada por clulas.
3. Las exotoxinas pueden ser neutralizadas por antitoxinas. Estas se pueden inducir usando
vacunas basadas en toxoides (los toxoides son antignicos pero no txicos). Esto ocurre, por
ejemplo, en la vacunacin contra la difteria.
4. Ciertos microorganismos producen proteasas contra IgA (incluyendo H. influenzae, S.
pneumoniae, N. gonorrhoeae and N. meningitidis), estas le ayudan a sobrevivir sobre las
superficies externas.
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Espiroquetas
Treponema
Borrelia
Leptospira
b) Otros
Vibrio
Hemophilus
Pasteurella
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c) Legionellaceae
Legionella
Tatlockia
Enfermedad
Toxina
Antrax
Toxin de edema
Mayor informacin
Complejo antgeno
protector/Factor Edema
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Toxina Letal
Clostridium botulinum
Botulismo
Toxina Botulnica
Clostridium difficile
Enterotoxina
Clostridium perfringens
Gangrena Gaseosa
Envenenamiento alimentario
Enterotoxina
Clostridium tetani
Ttanos
Tetanospasmina
Corynebacterium
diphtheriae
Difteria
Toxina diftrica
Escherichia coli
Diarrea (ETEC)
Toxina termolbil
Toxinas termoestables
Colitis Hemorrgica
Vero-toxina
Pseudomonas
aeruginosa
Enfermedades propias de
husped comprometido
Exotoxina A
Staphylococcus aureus
Infecciones oportunistas
Toxinas alfa-gamma,
leucocidina
Choque Txico
Envenenamiento alimentario
Enterotoxina
Fosfolipasa, (lecitinasa)
Inhibe a EF2
Fiebre escarlatina
Choque Txico
Toxina
Eritrognica/pirognica
Shigella dysenteriae
Disentera bacilar
Toxina de Shiga
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Vibrio cholerae
Clera
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Anexos
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Dichotomous Keys
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Referencia Bibliogrfica