UNIVERSIDAD NACIONAL AUTNOMA DE MXICO,

REPORTE NO. 5, EQUIPO 1, OCTUBRE DE 2015, P. 1-5

Introduccin.

ESTRUCTURA,
PROPIEDADESY
FUNCINDECIDOS
NUCLECOS.
TRANSFERENCIADE
MATERIAL
GENTICOII:

cromosmicos
arrastrados
por
Aunque
las
plsmidos desde
bacterias
se
las
bacterias
reproducen por un
donadoras a las
proceso
asexual
receptoras
(fisin
binaria),
(conjugacin).
poseen
Transformacin
mecanismos para
En
la
lograr
la
transformacin la
variabilidad
bacteria receptora
gentica
que
molculas
TRANSFORMACIN acepta
necesitan
para
desnudas de ADN
adaptarse a un
que penetran por
entorno cambiante. Campos Silva R., Cortes Hernndez L. N., su pared desde el
En general existen
medio externo. De
Laboratorio de bioqumica experimental,
dos formas de
forma
natural
Facultad de qumica UNAM.
cambiar
la
podra
ocurrir
dotacin gentica
cuando
En esta parte II llamada transformacin
de una bacteria, Resumen.
las
bacterias
bacteriana, se procedi a Identificar al DNA como
las mutaciones y la portador de la informacin gentica mediante los
receptoras
transferencia
de mecanismos por los que una bacteria puede adquirir
comparten
su
un
plsmido.
Mediante
el
uso
del
vector
fragmentos
de
ecosistema
con
pET-TEM-1-ompA-lactamasa, se
ADN
de
unas recombinante
una
poblacin
de
llev a cabo mecanismo por el cual se realiza la
bacterias a otras transformacin bacteriana como un fenmeno de
bacterias
transferencia horizontal de material gentico y
con posterior
donadoras
que
recombinacin de aprender a identificar clulas transformantes mediante muere y cuyos
su fenotipo, conociendo la definicin de organismo
los
fragmentos transgnico y las aplicaciones de la transformacin
cromosomas
se
adquiridos en el bacteriana, sus beneficios y riesgos.
fragmentan.
El
cromosoma o en
ADN desnudo es
los plsmidos de las bacterias destruido rpidamente por DNAsas
receptora.
que son enzimas muy frecuentes en
Conocemos
dos
formas
de muchos medios, por lo que la
recombinacin:
la
recombinacin probabilidad
de
que
ocurran
homloga y la transposicin. En la transformaciones
naturales
es
recombinacin homloga el fragmento pequea.
de ADN aceptado es muy similar a Adems la pared de la clula
una parte del genoma del a bacteria y, receptora debe estar relativamente
tras situarse al lado, se intercambian permeable
para
dejar
pasar
con l por un mecanismo de rotura, fragmentos de ADN. Suelen ser
entrecruzamiento y reunin de sus competentes, es decir, capaces de
cadenas de ADN. La transferencia sufrir transformacin las especies de
previa a este tipo de recombinacin Streptococuus,
Staphylococcus,
puede ocurrir mediante tres vas: la Haemophilus, Neisseria y Bacillus. Sin
penetracin
de
ADN
desnudo embargo en el laboratorio puede
directamente a travs de la pared de forzarse la competencia mediante
la clula receptora (transformacin), cambios en la concentracin de calcio
mediante un bacterifago que infecta del medio. Esta tcnica se emplea
diferentes poblaciones bacterianas para introducir en la bacteria
(transduccin), o por transferencia de molculas
mixtas
de
ADN
plsmidos y en su caso de genes
1

recombinante de las que interesa

obtener copias (clonacin).
Metodologa.
Transformacin de clulas
competentes
con el vector PET-TEM/-1 por el
mtodo de choque trmico. (Manual
de
prcticas
de
Bioqumica
experimental (MPBE), tema 3, Parte I.
[MPBE (0141), Sobeida S.N. pg. 2832]).
Resultados.

CUESTIONARIO

No se observ crecimiento de
colonias en la placa de Agar LB
canamicina.

1 1.Qu es un organismo transgnico?

2
Debido a que el DNA contiene un
cdigo gentico esencialmente igual
Anlisis de resultados y
para todos los organismos, en
conclusiones.
principio
se
pueden
transferir
No hubo transformacin de clulas secuencias de genes de organismos
relacionados
y
producir
competentes con el vector PET-TEM- no
1 por el mtodo de choque trmico organismos con caractersticas tiles
debido a que no se obtuvo y particulares que de otra manera
imposible
obtener
los
crecimiento en la placa de Agar LB sera
canamicina, por lo que tampoco se organismos transgnicos.
pudo realizar el clculo de la La transgnia es una de las
eficiencia de la transformacin y esto biotecnologas cuyo fin es la creacin
produccin
de
Organismos
se atribuye a que las clulas y
competentes ya estaban previamente Genticamente Modificados OGM o
desnaturalizado o al momento de GMOs por sus siglas en ingls
permeabilizar la membrana en el Genetically Modified Organisms ms
choque trmico a 42C, se agit el conocidos como trangnicos. Los
genes se encuentran agrupados en
medio.
paquetes muy comprimidos de cido
desoxirribonucleico (ADN) llamados
cromosomas. Cuando se introduce un
nuevo gen se pretende alterar la
clula para que produzca o deje de
producir un tipo especfico de enzima
o protena, para que as la clula
realice nuevas funciones.

3 2.Qu es un vector de clonacin?

4
Es un sistema que permite introducir
en una clula hospedera el fragmento
de DNA que se pretende clonar
(obtener mltiples copias); en sta
clula hospedera el vector se replica y
se expresa. La molcula que resulta
de la unin de un DNA vector con el
DNA de inters (inserto) se denomina
molcula vector recombinante.
Los vectores de clonacin son
secuencias de ADN que sirven para
transferir nuevas secuencias de ADN
a clulas husped.
3.Cules son los requisitos que debe
de cumplir un vector de clonacin
para ser utilizado para transformar un
organismo?
Tener su propio origen de replicacin
y, por tanto, la capacidad de
replicacin autnoma e independiente
del genoma del hospedero.
Tener un sitio de clonacin mltiple
(SCM) que permite la apertura del
DNA con enzimas de restriccin
(enzimas que cortan secuencias
internas de DNA de manera
especfica) y hace posible la clonacin
de insertos de DNA en la forma y
orientacin deseada.
Poseer
marcadores
genticos
seleccionables que permitan aislar a
las clulas hospederas que contengan
al vector, generalmente resistencia a
un antibitico. La mayora de los
plsmidos naturales no cumplen todas
estas condiciones, por lo que una
tarea de la ingeniera gentica ha
consistido en la construccin de
plsmidos artificiales, combinando en
una misma molcula diversos rasgos

tiles procedentes de los plsmidos

naturales.
En general: Vector de clonacinmolcula de DNA transportadora
Replicacin independiente (ori*)
Sitios de corte nicos
Marcador de seleccin
Recuperacin sencilla
4.Da dos ejemplos de vectores que
son usados para la clonacin de
fragmentos de DNA de alto peso
molecular
Plsmido y E. coli.
5.Qu tipo de vector de clonacin es
el pET24?
Plsmido pTE24 que es un marcador
de
seleccin
resistente
a
la
kanamicina, es decir que tiene a la
protena -lactamasa que inactiva al
antibitico.
6.Cul
es
el
mtodo
de
transformacin que se utilizar en la
prctica?
Por mtodo de choque trmico
7.Describe al menos otros dos
mtodos para transformar clulas ya
sea de animales hongos o plantas.
Existen varias tcnicas para la
introduccin del transgene en la clula
u
organismo,
como
son
la
microinyeccin, la infeccin de una
clula husped con virus que
contenga al vector, o mediante el uso
de bacterias (principalmente para la
transformacin de plantas).
Nanotubos
de
carbono
funcionalizados con aminas: Un grupo
3

de investigadores de la Facultad de
Qumica
(FQ)
de
la
UNAM,
encabezados por Tzvetanka Dimitrova
Dinkova, desarrolla un mtodo para
transformar clulas de maz y tabaco
mediante el uso de nanotubos de
carbono funcionalizados con aminas
8 8.Para realizar la transformacin de
clulas, adems del vector de
clonacin se necesitan las clulas
receptoras, qu tipo de clulas
receptoras son las E. coli DH5 y las
clulas E.coli BL21?
9
E. coli DH5:
Es una cepa de clonacin con
mltiples mutaciones que permiten
transformaciones de alta eficiencia.
Las mutaciones que la cepa DH5-alfa
tiene son: dlacZ Delta M15 Delta
(lacZYA-argF) U169 recA1 endA1
hsdR17 (RK-mK +) supE44 thi-1
gyrA96 relA1. Estas mutaciones
corresponden
a
las
distintas
caractersticas que hacen que la cepa
DH5-alfa
sobresalir
en
los
procedimientos de clonacin de
laboratorio.
LacZ Delta M15 mutacin: Permite la
deteccin azul-blanco de clulas
recombinantes. EndA1 mutacin:
Permite la degradacin endonucleasa
inferior que garantiza altas tasas de
transferencia de plsmidos.
RecA1
mutacin:
reduce
la
recombinacin homloga para una
insercin ms estable.
E.coli BL21:
Qumicamente competentes, clulas
adecuadas para la transformacin y
expresin de la protena.
Eficiencia de transformacin: 1-5 x
107 ufc / g de ADN pUC19

T7 Expresin Strain
Deficiente en proteasas Lon y OmpT
Resistente al fago T1 (fhuA2)
B Strain
Libre de productos de origen animal
9.Cul es el marcador de seleccin
de las cepas transformantes y dnde
se encuentra codificado?
El marcador de seleccin es la
resistencia a la kanamicina y se
encuentra codificado en el vector.
10.Despus de obtener un organismo
transgnico, cules son los cuidados
que se deben tener para su
manipulacin o almacenamiento?
Los cuidados referentes a cualquier
organismo transgnico se deben
realizar de manera higinica y
adecuada, teniendo en todo momento
una
manipulacin
adecuada
e
higinica, teniendo en cuenta que
durante la manipulacin y proceso de
almacenamiento, esto no conlleve a
una alteracin fsica o qumica, para
ello se tienen que de saber tales
propiedades.
Pginas consultadas.

A. Jimnez Snchez, R.
Guerrero (1982); Gentica
Molecular Bacteriana; Editorial
Revert, S.A; Espaa; Pp. 99114.
Y. Stainer Roger, [et al.];
(1992);
Microbiologa;
2
Edicin; Editorial Revert, S.A.;
Espaa; Pp. 286-288.
Loeza Lara Pedro D., [et al.];
(2004)Mecanismos
de
Replicacin de los plsmidos
bacterianos; REB23 (2): 71-78;
consultado el da 18 de
4

Octubre de 2015 desde:

http://www.facmed.unam.mx/pu
blicaciones/ampb/numeros/200
4/06/71-78_PEDRO_D.pdf

http://mural.uv.es/monavi/disco/
primero/bioquimica/Tema4.pdf
http://www.datoanuncios.org/?
a=21191

http://www.uniprot.org/uniprot/P
00340