FACULTAD DE CIENCIAS BIOLOGICAS

ESCUELA DE MICROBIOLOGIA Y
PARASITOLOGIA
CURSO:
Helmintologa Parasitaria
TEMA:
TCNICAS
HELMINTOS

SEROLGICAS

PARA

ALUMNAS:

MORILLOS SILVA, Teresa Lucila

AZCO RAMIREZ, Ana Lucia
RAMIREZ ALAYO, Belen
SALINAS ARANDA, Maria de Jesus

DOCENTE:
Dr. JARA CAMPOS, CESAR AUGUSTO

TRUJILLO PER
2015

TCNICAS SEROLGICAS PARA HELMINTOS

La serologa es el estudio
de anticuerpos en sangre

que

permite

comprobar

la

presencia

Las serologas de helmintos ms comunes o ms tiles son las de

hidatidosis, cisticercosis, fascioliasis, esquistosomiasis, toxocariasis,
anisakiasis, filariasis y estrongiloidiasis.
La cantidad de parsitos protozoarios y helmintos que afectan la vida del
humano y la de los animales es considerable. El estudio de sus antgenos es
complejo, ya que existen formas antignicas variadas, dependiendo de las
diferentes etapas de su ciclo de vida.
Las tcnicas para el estudio de antgenos parasitarios evolucionaron a
medida que aparecieron nuevos mtodos para aislar, purificar y determinar
su estructura qumica (por ejemplo, la secuencia de aminocidos de
antgenos proteicos).
Con la mejora de las tcnicas inmunolgicas se ha logrado la
automatizacin y la robotizacin, pero sobre todo el incremento de la
sensibilidad diagnostica, lo cual hace posible un estudio ms detallado y
amplio de los antgenos parasitarios.
El fundamento de las tcnicas para el estudio de los antgenos parasitarios,
desde sus orgenes hasta el momento actual, se basa en dos estrategias:
a) identificacin o cuantificacin de anticuerpos contra componentes de los
parsitos, y
b) identificacin directa o indirecta de los parsitos o alguno de sus
componentes.

A. Clasificacin de los antgenos parasitarios

Los antgenos de los parsitos se pueden clasificar segn la fuente de donde
se obtienen para su estudio o aplicacin clnica y su naturaleza qumica. Los
parsitos tienen ciclos de vida complejos con capacidad de reproducirse
dentro del hospedero (protozoarios), o aquellos que maduran pero no se
reproducen dentro del hospedero (helmintos). Esta diversidad de etapas o
estadios que el parsito debe completar en su ciclo vital implica un cambio
estructural, bioqumico y celular que se refleja en la diversidad de antgenos
que se pueden presentar de acuerdo con las diferentes etapas de desarrollo,
las cuales pueden ser concurrentes en un mismo hospedero, por lo cual un
parsito puede expresar diferentes antgenos de diferentes estadios en un
mismo hospedero.
En consecuencia, la inmunidad despertada por estos antgenos por lo
general es especfica de estadio. Debido a todo lo anterior, es importante,
tanto para fines diagnsticos como de investigacin de la respuesta contra
los parsitos, identificar su fuente u origen. Una clasificacin prctica de los
antgenos parasitarios de acuerdo con su origen es la siguiente:

a. Antgenos solubles extrados del parasito (somticos)

b. Antgenos solubles excretados o secretados
c. Antgeno sinttico
d. Antgenos recombinantes
Los antgenos somticos o estructurales son extrados del parasito; no
son secretados por los parsitos, sino que forman parte estructural de ellos
y se necesitan procedimientos de extraccin qumica para obtenerlos. Estos
antgenos, a excepcin de aquellos presentes en la cutcula o membranas
de superfino cie, pueden estar ocultos al hospedero y ser reconocidos solo
por el sistema inmune despus de la muerte del parasito.
Los antgenos solubles excretados o secretados al medio de cultivo son
derivados de procesos metablicos del parasito, y fueron la fuente de
antgenos de protozoarios, nematodos, cestodos, artrpodos y otros. Sin
embargo, la concentracin de estos antgenos en el medio de cultivo de
protozoarios o donde se mantienen helmintos regularmente es muy baja,
por lo que se requiere cultivar o mantener grandes cantidades de ellos para
obtener volmenes tiles de material antignico.
Los antgenos sintticos se obtienen por sntesis qumica en un
laboratorio cuando ya se conoce la secuencia de aminocidos del pptido o
protena antignica contra la cual se dirige la mayora de los anticuerpos
producidos por el husped. La fuente de antgenos sintticos es
prcticamente inagotable, es reproducible y de costo relativamente bajo; sin
embargo, su produccin est condicionada al conocimiento preciso de la
secuencia de aminocidos de los antgenos.
Los antgenos recombinantes son en general de naturaleza peptdica o
proteica y se originan con tcnicas de DNA recombinante; para ello, el gen
que codifica para un antgeno de un parasito se expresa en bacterias como
E. coli o levaduras metilo trficas como Pichia pastoris. A partir de cultivos
masivos en fermentadores se obtienen las bacterias recombinantes que
producen o secretan el antgeno parasitario cuyo gen fue introducido
artificialmente, y luego se realiza la purificacin, que puede incluir columnas
de afinidad con anticuerpos.
Tambin es posible clasificar a los antgenos, segn su composicin qumica,
en protenas, glucoprotenas, glucolipidos y polisacridos y cidos nucleicos.
B. Fundamento de las tcnicas inmunolgicas para estudiar
antgenos parasitarios
1. REACCION DE PRECIPITINAS
2. DOBLE DIFUSION
3. INMUNOELECTROFORESIS
4. ELECTROSINRESIS:
En el soporte empleado (gel) se disponen en forma encontrada la mezcla
antignica y el suero en estudio, en el cual se espera encontrar los

anticuerpos especficos. Se aplica corriente

elctrica para acelerar el

proceso. En la zona de interaccin se forma una banda de precipitacin. Es

utilizada en el diagnstico de cisticercosis, fasciolosis e hidatosis.
La desventaja de este mtodo radica en su baja sensibilidad y requiere para
hacerse positiva entre 10 y 20 ug de anticuerpos por ml. Esta tcnica,
adems, ha sido utilizada para la caracterizacin de fracciones antignicas
parasitarias.
5. REACCIN DE FLOCULACIN CON LATEX
Fue utilizada durante mucho tiempo como prueba de tamiz por su buena
sensibilidad,

rapidez

facilidad

de

ejecucin,

especialmente

en

el

diagnstico de enfermedad de Chagas, toxoplasmosis e hidatidosis. Pero sus

problemas de especificad derivados de la mala estandarizacin en el
tamao y la concentracin de las molculas de ltex (soporte del antgeno),
han hecho que se discontine su empleo.
6. REACCIN DE FLOCULACIN CON BENTONITA
Utiliza como soporte partculas de bentonita sensibilizadas con el antgeno,
el cual al ponerlo en contacto con el suero del paciente reacciona
evidencindose la reaccin como floculacin.
Su mayor utilidad prctica se ha obtenido en el diagnstico de triquinosis.
Debido a su buena especificidad y tarda sensibilidad (tres semanas

pos

infeccin) ha motivado su remplazo por mtodos de mayor precocidad en el

diagnstico de la infeccin aguda por Trichinella spiralis
7. REACCIN DE FIJACIN DE COMPLEMENTO
Esta antigua reaccin ha sido ampliamente utilizada en el diagnstico de las
parasitosis. Consta de dos sistemas, uno de deteccin de los anticuerpos
presentes en el suero del paciente (antgeno-complemento de cuy) y otro
indicador de la reaccin antgeno-anticuerpo (hemolisina-glbulos rojos de
cordero). La reaccin detecta fundamentalmente anticuerpos especficos
fijadores del complemento, los cuales se unirn al antgeno y al
complemento presente en el primer sistema; de esta forma, la reaccin
indicadora no presentar hemolisis. La ausencia de anticuerpos en el suero

del paciente, dejar en libertad el complemento que ser fijado por la

reaccin indicadora apareciendo hemolisis.
Debido a la gran cantidad de reactantes utilizados, se requiere de una gran
estandarizacin del mtodo como tambin una serie de condiciones en el
suero en estudio, ya que la anticomplementariedad de algunas muestras
(sueros envejecidos, infectados, hemolizados o lipmicos), hace que las
inmunoglobulinas

desnaturalizadas

agregadas

del

suero,

fijen

inespecficamente el complemento, alterndose la discriminacin entre una

reaccin positiva o negativa. Todo ello ha hecho que esta reaccin no sea
utilizada en el diagnstico de rutina parasitolgica.
8. REACCIN DE INMUNOFLUORESCENCIA
Debido a que anticuerpos marcados con sustancias fluorescentes como el
isotiocianato de fluoresceina, la aureamina-rodamina u otras no pierden sus
capacidades inmunolgicas, pueden ser utilizadas para la deteccin del
complejo antgeno-anticuerpo. La visualizacin de la reaccin se efecta a
travs de un microscopio de luz ultravioleta, el cual mediante una longitud
de onda especfica para cada fluorocromo lo excita y emite una luz
fluorescente visible pticamente.
El mtodo puede ser directo o indirecto, de acuerdo al nmero de
anticuerpos marcados empleados. El ms frecuentemente utilizado es el
mtodo indirecto, pues permite detectar anticuerpos de diversas clases
(IgG, IgM, IgA, IgE) adheridos a antgenos de superficie.
9. MTODOS INMUNOENZIMTICOS:
La marcacin de protenas (antgeno o anticuerpo) con enzimas, tiene la
ventaja de aumentar la sensibilidad de los mtodos que emplean este tipo
de conjugados, pues la reaccin enzima-sustrato amplifica la visualizacin
de la reaccin inmunolgica a travs del producto final cromognico. De
acuerdo al tipo de producto obtenido, los mtodos se pueden clasificar en
reaccin de ELISA cuando el producto es soluble y visible a simple vista o
mediante lectura espectrofotomtrica, o inmunoenzimtico cuando el
producto es precipitante y se visualiza en el sitio de reaccin.

 Reaccin de ELISA clsica. Como soporte del antgeno o de los

anticuerpos se utiliza microplacas, tubos, esferas, discos de poliestireno
o

de

polivinilo,

las

cuales

son

bloqueados

con

protenas

no

reaccionantes para evitar reacciones inespecficas. Posteriormente, se

agrega la muestra en estudio, facilitando la produccin de la reaccin
antgeno-anticuerpo. A continuacin de una serie de lavados, se utiliza
un segundo anticuerpo marcado con la enzima, el cual se unir a la
reaccin previamente formada. La visualizacin de la reaccin se
observara a simple vista o mediante lectura espectrofotomtrica del
producto coloreado formado por la accin de la enzima sobre el sustrato
especfico. Desde su descripcin, este mtodo ha sido utilizado
ampliamente

en

el

diagnstico

de

parsitos

debido

su

alta

sensibilidad. En la actualidad, debido a la utilizacin de antgenos

insuficientemente purificados se han descrito reacciones cruzadas.

Reaccin de ELISA reversa o invertida.

El mtodo trata de capturar inmunoglobulinas especficas presentes en
baja concentracin en el suero en estudio. Para ello se inmoviliza la
antiinmunoglobulina

al

soporte

slido,

haciendo

posteriormente

reaccionar la muestra problema, capturndose de esta forma la

inmunoglobulina presente. Se revela la reaccin con un conjugado
compuesto

por

el

antgeno

especfico

unido

una

enzima.

Posteriormente, al agregar el sustrato se producir su degradacin y la

formacin de un producto coloreado proporcional a la Ig especfica
presente en la muestra con problema.
Reaccin ELISA doble sndwich.
Se puede aplicar para la deteccin de anticuerpos y de antgenos. Para
los primeros, se sensibilizan las placas con una inmunoglobulina
especifica

anti-Ig, marcadora de infeccin aguda que detectar los

anticuerpos especficos presentes en la muestra en estudio. Con

posterioridad se agregara el antgeno especfico u la reaccin se
detectara al utilizar un anticuerpo anti-antgeno especfico marcado con
la enzima. Producida la reaccin antgeno-anticuerpo, se detectar por
el producto coloreado producido al emplear el sustrato enzimtico
especifico.
Para la determinacin de antgenos se sensibilizarn las placas con
anticuerpos mono o polivalentes anti-antgenos especficos, los cuales
sern atrapados desde la muestra problema. Posteriormente, al agregar
el anticuerpo especfico marcado con la enzima especfica, se producir
la reaccin antgeno-anticuerpo, la cual ser detectada por el producto
coloreado obtenido al agregar el sustrato enzimtico especifico.
A pesar de que el empleo de anticuerpos monoclonales es estas
tcnicas aumenta la especificidad del diagnstico, no son utilizadas
rutinariamente, ya que la tecnologa de preparacin de los diversos
reactantes, es muy sofisticada.

 Dot inmunoensayo (Dot ELISA).

Una serie de membranas (nitrocelulosa, inmuln, etc.) tienen la
capacidad de fijar en forma no covalente a molculas proteicas,
lipopolisacaridos, cidos nucleicos, etc., constituyentes de los antgenos
parasitarios. De esta forma, al incubar estos soportes sensibilizados con
el suero en estudio, se unirn los anticuerpos al antgeno, los cuales
posteriormente son revelados por un mtodo inmunoenzimtico cuyo
producto final es inmunoprecipitante.
Este mtodo tiene la ventaja de utilizar pequeas cantidades de
inmunorreactivos,

de

fcil

almacenamiento

no

necesita

espectrofotmetro. Sin embargo, debido a que las mezclas antignicas

que emplea son muy complejas y poco purificadas, sus resultados son
inespecficos. Ha sido una tcnica altamente empleada en unin a otros
mtodos, en el diagnstico de la hidatidosis, fasciolosis, cisticercosis y
otras parasitosis.

Inmunoblot o inmunnoelectrotransferencia
De gran utilidad para el estudio de mezclas inmugnicas complejas.
Primeramente las separa mediante una electroforesis en geles de

policrilamida en los constituyentes polipeptidicos que la conforman

segn

su

peso

molecular.

Posteriormente,

los

polipeptidos

son

transferidos, mediante una electroforesis horizontal, a un soporte

sensibilizado con la muestra problema. La reaccin antgeno-anticuerpo
se visualizara mediante una reaccin enzimtica cuyo producto es
precipitante. Este mtodo, de excelente especificidad, se utiliza
rutinariamente como prueba confirmatoria.