PNT:

Rev: 0
Fecha Emisin
2014/11/10

PROCEDIMIENTO NORMALIZADO DE
TRABAJO
LCCM-FARMA MUNDI

Mtodo analtico para la cuantificacin de

Acetaminofn 60 mg, Aspirina 400 mg y Cafena
30 mg, tabletas Divina.

Pgina 1 de 8

PNT: Mtodo analtico para cuantificacin de Acetaminofn 60

mg, Aspirina 400 mg y Cafena 30 mg, tabletas Divina.

COPIA CONTROLADA [ ]
NO CONTROLADA

N.

[ ]

DESTINATARIO: __________________________________ FECHA ENTREGA:____/____/____

Elaborado: Tcnico Analista

Revisado:
Fisicoqumica

Jefe

Fecha: ____/____/____

Fecha: ____/____/____

INDICE

rea

Aprobado: Gerente de Control

de Calidad

Fecha: ____/____/____

PROCEDIMIENTO NORMALIZADO DE
TRABAJO
LCCM-FARMA MUNDI

Mtodo analtico para la cuantificacin de

Acetaminofn 60 mg, Aspirina 400 mg y Cafena
30 mg, tabletas Divina.

PNT:
Rev: 0
Fecha Emisin
2014/11/10
Pgina 2 de 8

Descripcin

Pgina

Alcance

Precauciones y advertencia de seguridad

Condiciones ambientales

Principio

5
6
7
8
8.1

Aparatos y equipos
Reactivos y Materiales
Control de Calidad
Procedimiento
Preparacin de valoracin para Acetaminofn 0.060g, Aspirina 0.40g y
Cafena 0.030g
Preparacin de Solucin estndar
Sistema Cromatogrfico
Medicin Analtica
Clculos
Reporte de resultados
Criterios de Aceptacin
Referencias
Registros
Anexos
Anexo 1. Cromatgrama del diluente

3
4
5
5
5

Anexo 2. Cromatgrama de la solucin estndar

Anexo 2. Cromatgrama de la solucin estndar

8.2
8.3
8.4
8.5
9
10
11
12
13
14.
1
14.
2
14.
3

6
6
6
7
7
7
7
8
8
8

PROCEDIMIENTO NORMALIZADO DE
TRABAJO
LCCM-FARMA MUNDI

Mtodo analtico para la cuantificacin de

Acetaminofn 60 mg, Aspirina 400 mg y Cafena
30 mg, tabletas Divina.

PNT:
Rev: 0
Fecha Emisin
2014/11/10
Pgina 3 de 8

1. ALCANCE
El mtodo propuesto se utilizara para la determinacin cuantitativa (valoracin) Acetaminofn 60 mg,
Aspirina 400 mg y Cafena 30 mg, tabletas Divina por HPLC.
2. PRECAUCIONES Y ADVERTENCIA DE SEGURIDAD.
Leer las precauciones para el uso de los materiales. Tome las precauciones necesarias durante el desarrollo
del estudio. La seguridad del personal incluye el uso adecuado de los equipos de proteccin, vestimenta, as
mismo deben manipular y almacenar adecuadamente los reactivos empleados. Los desechos generados
durante los anlisis deben de colocarse en el lugar correspondiente para evitar accidentes laborales.
3. CONDICIONES AMBIENTALES.
Trabajar a temperatura menores de 27 C, preferiblemente de entre 20-22C. La humedad relativa no menor
de 40%.
4. PRINCIPIO
La cromatografa es una tcnica que se emplea para separar entre si los componentes de una sustancia. En la
cromatografa se separan los componentes de las mezclas a medida que son transportadas por un fase fluida
mvil a travs de una fase estacionaria solida o lquida, la separacin de las molculas se logra porque la
movilidad de cada soluto depende de un equilibrio en la distribucin entre la fase mvil y la estacionaria,
gracias a este principio, el uso de esta tcnica es de gran conveniencia para la cuantificacin analtica de
Acetaminofn 60 mg, Aspirina 400 mg y Cafena 30 mg, en tabletas Divina.
5. APARATOS Y EQUIPOS
5.1. Cromatgrafo Lquido Autosampler Agilent Technologies, modelo 1200, detector arreglo de diodos,
bomba cuaternaria.
5.2. Columna Zorbax Eclipse XDB C18 150 mm x 4.6 mm, 5 m.
5.3. Balanza analtica Max: 210 g, d = 0.01 mg.
5.4. Bomba de Vaco.
5.5. Aparato de Ultrasonido.

PROCEDIMIENTO NORMALIZADO DE
TRABAJO
LCCM-FARMA MUNDI

Mtodo analtico para la cuantificacin de

Acetaminofn 60 mg, Aspirina 400 mg y Cafena
30 mg, tabletas Divina.

PNT:
Rev: 0
Fecha Emisin
2014/11/10
Pgina 4 de 8

5.6. Matraz volumtrico clase A 25 mL, 50 mL, 100 mL, 1000 mL.
5.7. Pipetas Volumtricas 1, 2 , 3, 4, 5, 6, 7 y 10 ml
5.8. Embudo de decantacin 100 ml
5.9. Earlenmeyer 125 ml, 250 ml, 500 ml
5.10. Beakers 50 mL, 100 mL, 200 mL
5.11.

Probetas 100 mL

5.12. Esptula analtica.

5.13. Jeringa de vidrio para muestra.
5.14. Equipo de Filtracin de solventes.
6. REACTIVOS Y MATERIALES:
6.1. Estndar de Acetaminofn.
6.2. Estndar de Aspirina.
6.3. Estndar de Cafena.
6.4. Agua Grado HPLC.
6.5. Metanol Grado HPLC.
6.6. cido Actico Glacial.
6.7. Fase Mvil: En un Matraz Volumtrico de 1000 mL, agregar 690 mL de agua Grado HPLC,
seguidamente adicionar cido actico glacial, una cantidad equivalente a 30 mL, obteniendo as una
relacin de 72 partes entre agua y cido actico glacial, posteriormente Agregar metanol Grado HPLC
equivalente a 280 mL.
6.8. Filtrar y desgasificar usando filtros de membranas de Nylon, Tamao de poro 0.45 m.

PROCEDIMIENTO NORMALIZADO DE
TRABAJO
LCCM-FARMA MUNDI

Mtodo analtico para la cuantificacin de

Acetaminofn 60 mg, Aspirina 400 mg y Cafena
30 mg, tabletas Divina.

PNT:
Rev: 0
Fecha Emisin
2014/11/10
Pgina 5 de 8

6.9. Mezcla de Disolventes: En un Baln de 1000 mL, agregar 950 mL de Metanol Grado HPLC.
Posteriormente, aadir 50 mL de cido actico Glacial.
6.10. Filtrar y desgasificar usando filtros de membranas de Nylon, Tamao de poro 0.45 m.
7. CONTROL DE CALIDAD.
7.1. Cromatograar la Preparacin estndar y registrar el cromatograma segn se indica en el Procedimiento:
el factor de asimetra para el pico de cada analito no es mayor de 1,2; la resolucin, R, entre cualquiera
de los picos del analito no es menor de 1,4; y la desviacin estndar relativa para inyecciones repetidas
no es ms de 2,0%.
8. PROCEDIMIENTO.
8.1. Preparacin de valoracin para Acetaminofn 0.060g, Aspirina 0.40g y Cafena 0.030g :
8.1.1. Pesar con exactitud 20 tabletas que contienen 0.40 g de Aspirina, 0.060 g de Acetaminofn y
0.030 g de Cafena, pulverizar en un mortero hasta obtener un polvo fino.
8.1.2. Pesar con exactitud una porcin del polvo que equivalga a aproximadamente a 1.6667 g de
Aspirina, 0.250 g de Acetaminofn y 0.1250 g de Cafena.
8.1.3. Llevar a un matraz volumtrico de 100 mL las cantidades de polvo anteriormente pesadas,
disolver con 20 ml de Mezcla de Disolvente.
8.1.4. Someter a ultrasonido por un periodo de tiempo de 10 minutos. Agitar mecnicamente durante
10 minutos y Diluir a volumen con Mezcla de Disolvente.
8.1.5. Transferir 2 ml de la solucin anterior a un matraz volumtrico de 50 ml, y diluir a volumen
con Mezcla de Disolvente.
8.1.6. Filtrar las muestras con la ayuda de un Filtro de Jeringa, 0.45 m.
8.1.7. La solucin final poseer una concentracin terica de 100 g/ml de ER de Acetaminofn,
666 g/ml de ER de Aspirina, y 50 g/mL de ER de Cafena.

PROCEDIMIENTO NORMALIZADO DE
TRABAJO
LCCM-FARMA MUNDI

Mtodo analtico para la cuantificacin de

Acetaminofn 60 mg, Aspirina 400 mg y Cafena
30 mg, tabletas Divina.

PNT:
Rev: 0
Fecha Emisin
2014/11/10
Pgina 6 de 8

8.2. Preparacin de Soluciones Estndar.

8.2.1. Solucin Madre del Estndar:
8.2.1.1. Pesar con exactitud 0.025 g del Estndar de Referencia de Acetaminofn, 0.1667 g del
Estndar de Referencia de Aspirina y 0.0125 g del Estndar de Referencia de Cafena.
8.2.1.2. Llevar cada Estndar de referencia a un baln de 100 ml y aforar con Mezcla de
8.2.2.
1.
2.
3.

Disolventes.
Preparacin Estndar:
Tomar 20 ml de la Solucin Madre del Estndar y transferir a un Baln de 50 ml.
Diluir con Mezcla de Disolventes, mezclar y Aforar.
Esta solucin contendr una concentracin aproximada de 100 g/mL de ER de

Acetaminofn, 666 g/mL de ER de Aspirina, y 50 g/mL de ER de Cafena.

8.3. Sistema Cromatogrfico
8.3.1. Columna Zorbax Eclipse XDB C18 150 mm x 4.6 mm, 5 m.
8.3.2. Temperatura de la columna

45 1C.

8.3.3. Longitud de onda analtica

275nm

8.3.4. Flujo

1.5 ml / min.

8.3.5. Volumen de inyeccin

10 L

8.4. Medicin analtica.

8.4.1. Acondicionar la columna con la fase mvil durante 30 minutos o hasta obtener una lnea base
estable Inyectar en el cromatgrafo volmenes iguales, aproximadamente de 10 l de la
Preparacin Estndar y de la Preparacin de la Valoracin.
8.4.2. Registrar los cromatogramas y medir las respuestas correspondientes a los Picos Principales.
Los tiempos de retencin relativos son aproximadamente 0,3 para acetaminofn; 0,5 para
cafena; 0,8 para aspirina, y 1,2 para cido saliclico.
8.5. CALCULOS
Calcular las cantidades, en mg, de acetaminofn (C8H9NO2), aspirina (C9H8O4), y cafena
(C8H10N4O2) en la porcin de Tabletas tomada, por la frmula:

PROCEDIMIENTO NORMALIZADO DE
TRABAJO
LCCM-FARMA MUNDI

Mtodo analtico para la cuantificacin de

Acetaminofn 60 mg, Aspirina 400 mg y Cafena
30 mg, tabletas Divina.

PNT:
Rev: 0
Fecha Emisin
2014/11/10
Pgina 7 de 8

Donde
En donde C es la concentracin, en mg por ml, del Estndar de Referencia USP correspondiente en la
Preparacin estndar; y RU y RS son los cocientes entre las respuestas de los picos del analito
correspondiente y del estndar interno obtenidos de la Preparacin de valoracin y de la Preparacin
estndar, respectivamente.

9. REPORTE DE RESULTADOS
Reportar los resultados como % de contenido de la siguiente manera: %C = XX, XX % RSD.
El RSD se dar con dos cifras significativas.
10. CRITERIOS DE ACEPTACION
Anlisis Cuantitativo: Las Tabletas de Acetaminofn, Aspirina y Cafena contienen no menos de 90,0
por ciento y no ms de 110,0 por ciento de las cantidades declaradas de acetaminofn (C8H9NO2),
aspirina (C9H8O4), y cafena (C8H10N4O2).
Identificacin: Los tiempos de retencin relativos de los picos principales en el cromatograma de la
Preparacin de valoracin se corresponden con los del cromatograma de la Preparacin estndar, segn
se obtienen en Valoracin.
11. REFERENCIAS
Farmacopea de los Estados Unidos de Amrica. 2007. Formulario Nacional. USP 30/NF 25. Edicin
Anual en Espaol. Estados Unidos. Convencin de Farmacopea Estados Unidos. Pp. 1397-1398.

12. REGISTROS
13. ANEXOS
14.1. Anexo 1: Cromatgrama del diluente.

PROCEDIMIENTO NORMALIZADO DE
TRABAJO
LCCM-FARMA MUNDI

Mtodo analtico para la cuantificacin de

Acetaminofn 60 mg, Aspirina 400 mg y Cafena
30 mg, tabletas Divina.

PNT:
Rev: 0
Fecha Emisin
2014/11/10
Pgina 8 de 8

14.2. Anexo 2: Cromatgrama de la solucin estndar al 100% de su valor nominal.

14.3. Anexo 3: Cromatgrama de la solucin muestra al 100% de su valor nominal.
..............................................................Fin del procedimiento......................................................................