IDENTIFICACIO

N DE LA
LISTERIA

INTEGRANTES

Aroni Lozada Katherine

Morales Roca Yesenia
Nuez Casio Carlos
Reyes Manrique Cintya
Tineo Cruz Brenda

DOCENTE: Ing. Sonia Herrera

CURSO: Microbiologia

LABORATORIO

OBJETIVOS
Identificar la presencia de Listeria.
Conocer las caractersticas de la Listeria
Conocer los medios de cultivo que podemos utilizar.

IDENTIFICACION DE LA LISTERIA

DE MICROBIOLOGA |1

LABORATORIO

DE MICROBIOLOGA |2

MARCO TEORICO
Es una bacteria que se desarrolla intracelularmente
y es causante de la Listeriosis. Es uno de los
patgenos causante de infecciones alimentarias
ms violentos, con una tasa de mortalidad entre un
20 a 30%, ms alta que casi todas las restantes
toxicoinfecciones
alimentarias.L.
monocytogenes es
un bacilo Gram
positivo,
pequeo (0,4 a 0,5 micrones de ancho x 0,5 a 1,2
de
largo)
no
ramificado
y anaerobio
facultativo capaz de proliferar en un amplio rango
de temperaturas (1 C a 45 C) y una elevada
concentracin de sal. Es catalasa positivo y no
presenta
cpsula
ni
espora.
Tiene flagelos pertricos, gracias a los cuales
presenta movilidad a 30 C o menos, pero es
inmvil a 37 C, temperatura a la cual sus flagelos
se inactivan.
Concepto
Listeria monocytogenes recibe su nombre del cirujano ingls Joseph Lister(Listeria) y de
su capacidad de que extractos de su membrana son capaces de estimular la produccin
generar monocitos (monocytogenes) en el conejo, aunque no en la enfermedad del ser
humano.
Caracteristicas:
El gnero se encuentra definido por poseer un contenido de DNA G+C,
aproximadamente de un 38% adems en sumembrana celular tiene una pared
celular de mureina, pptidoglucano que contiene cido meso-diaminopimlico que se
encuentra
fijo
a
la membrana
celular por
el cido
teicoico y
el cido
lipoteicoico presentes en la membrana celular. Puede ser aislada de diversos ambientes
como suelo, agua fresca, aguas residuales y vegetacin y puede llegar a infectar
numerosos animales domsticos contaminando la vegetacin y el suelo donde habitan. Es
tambin un contaminante frecuente de los productos alimentarios, ya que es capaz de
generar biopeliculas en alimentos que se encuentren en refrigeracin, porque tiene la
capacidad de crecer hasta a 4 C.
La infeccin por L. monocytogenes, en el contexto del embarazo, suele diagnosticarse de
forma tarda, producindose un cuadro muy grave, llamado granulomatosis
infantisepticum, llegando a provocar abortos. Tambin se ha relacionado
conMeningoencefalitis y meningitis especialmente
en
neonatos,
ancianos
e
IDENTIFICACION DE LA LISTERIA

LABORATORIO

DE MICROBIOLOGA |3

inmunodeprimidos, as como bacteriemia en mujeres gestantes, inmunodeprimidos y

neonatos (granulomatosis infanto-sptica).
Patogenia
L. monocytogenes es un patgeno facultativo intracelular que puede crecer en
los macrfagos, las clulas epiteliales y losfibroblastos en cultivo. Tras la ingesta de
alimentos contaminados, L. monocytogenes puede sobrevivir a la exposicin aenzimas
proteolticas, cido gstrico y sales biliares. Principalmente contiene una protena
denominada internalina la cual interacta con el receptor de las clulas del hospedero
para la adhesin celular, esta se denomina E-cadherina la cual induce la fagocitosis,
siendo estas especficas para cada tejido. La presencia de internalinas facilita la entrada
del microorganismo a las clulas. El organismo reacciona creando una especie
de fagosoma con el fin de encapsular la bacteria pero esta produce listeriolisina O y
fosfolipasas C que le permiten destruir el fagosoma hidrolizando los lpidos de su
membrana. Esta listeriolisina est codificada por el gen hly. Al estar dentro del citosol L.
monocytogenes utiliza una protena de superficie denominada ActA la cual genera la
polimerizacin intracelular de la actina.2
Estos filamentos se reorganizan en una larga cola que se extiende desde un solo extremo
de la bacteria. Mediante los movimientos de la cola el microorganismo migra por el
citoplasma hacia la membrana de la clula husped. En la periferia se forman
protrusiones (filpodos) que pueden penetrar en las clulas adyacentes y que permiten el
ingreso de la bacteria. Esto explica la necesidad de una inmunidad mediada por clulas.
Puesto que los microorganismos nunca son extracelulares, los anticuerpos humorales del
husped no seran efectivos

Identificacin patolgica
L. monocytogenes se desarrolla muy bien en agar sangregenerando colonias grisceas y
presentando beta hemolisis. Es un bacilo catalasa positivo, mvil y se evidencia en
medios de cultivo semislido donde a los 25 C el microorganismo forma una especie de
sombrilla. Se desarrolla de manera adecuada en bilis, por lo que se utilizan medios
inclinados con agar bilis esculina. Esta prueba consiste en determinar la capacidad que
tiene L. monocytogenes de hidrolizar la esculina a esculetina y la glucosa en presencia de
sales biliares. La esculetina generada reacciona con los iones de hierro que contiene el
cloruro frrico en el medio y genera una coloracin negra, siendo esta positiva.
IDENTIFICACION DE LA LISTERIA

LABORATORIO

DE MICROBIOLOGA |4

L. monocytogenes presenta un metabolismo

fermentativo al generar cido a partir de la glucosa
y por producir acetona, lo que conlleva a
una reaccin de Voges-Proskauer positiva y no
fermenta la xilosa. La fermentacin de estos
azcares se evidencian por la tcnica de vogesproskauer, la cual consiste en identificar si L.
monocytogenes genera cidos y diacetilo ya que el
medio contiene azcares fermentables. Para ver la
reaccin se utilizan los reveladores alfa-naftol
y KOH. Si la suspensin se torna color rosa la
prueba es positiva.2
La prueba de CAMP es utilizada para la identificacin de L. monocytogenes Consiste en
sembrar en agar sangre una estra en forma horizontal de L. monocytogenes y una
perpendicular a esta de S.aureus sin unirse entre s. El resultado esperado ser que L.
monocytogenes genere el factor CAMP el cual produce un sinergismo con la beta lisina
producida por Staphylococcus aureus sobre los eritrocitos generando una lisis de estos.

Tratamiento

Al ser la listeriosis una enfermedad relativamente rara en humanos, no hay estudios

prospectivos y controlados que establezcan el mejor tratamiento antibitico. Dado que la
mayora de los antibiticos son bacteriostticos para Lysteria monocytogenes,
actualmente se considera que las mejores opciones son las combinaciones
de gentamicina conpenicilinas de espectro ampliado como la ampicilina.1 5 Se han
descrito fallos teraputicos con estos antibiticos, pero nunca se ha demostrado in vitro
resistencia al compuesto -lactmico utilizado. En el manejo de estas infecciones son de
gran importancia el empleo de dosis altas y la duracin adecuada del tratamiento, que
deben individualizarse. En las enfermedades graves como la cerebritis o
la granulomatosis infantisptica, el inicio precoz del tratamiento es fundamental para el
control
de
la infeccin.
Estudios in
vitro han
demostrado sinergia de ampicilina y penicilina con aminoglucsidos. Esta asociacin
debe utilizarse en casos de granulomatosis infantisptica o de sepsis neonatal. En
aquellos
pacientes
conmeningoencefalitis pueden
asociarse aminoglucsidos,
administrados por va intratecal, al tratamiento base de penicilina oampicilina.
IDENTIFICACION DE LA LISTERIA

LABORATORIO

DE MICROBIOLOGA |5

La combinacin de trimetoprim y sulfametoxazol se ha utilizado con xito en pacientes

alrgicos a penicilinas, considerndose en la actualidad la terapia alternativa en esta
circunstancia.
La duracin apropiada del tratamiento tampoco est clara. Tras dos semanas de terapia se
han descrito recurrencias en pacientes inmunodeprimidos. Parece conveniente, por tanto,
prolongar la terapia entre tres y seis meses en estos casos. En general dos semanas
parecen ser suficientes en bacteriemias mientras que en meningitis se deberan utilizar
ciclos ms largos.

Resistencia antibitica
Listeria es resistente a las penicilinas naturales (penicilina G, penicilina V), penicilinas
resistentes
a -lactamasa (meticilina,nafcilina, isoxazoilpenicilina
oxacilina, cloxacilina, dicloxacilina) y a todas las cefalosporinas. Pero es susceptible a
las penicilinas de espectro ampliado.

Alternativas
Otras alternativas son cotrimoxazol,
tetraciclinas, carbapenmicos, entre otros.

eritromicina,

cloranfenicol,

rifampicina,

Igualmente, en agosto de 2006, la FDA (Food and Drug Administration) de Estados

Unidos aprob el uso de bacterifagosen ciertas carnes con el fin de acabar con la
bacteria Listeria monocytogenes.

Profilaxis
Es necesario un control exhaustivo en todas las fases. En las empresas alimentarias se
debe implantar un programa de autocontrol de los procesos segn el Sistema APPCC:
[cita requerida]

En la granja hay que controlar el ensilado para que acidifique cuanto antes,
porque en el medio cido la bacteria se desarrolla muy mal.
IDENTIFICACION DE LA LISTERIA

LABORATORIO

DE MICROBIOLOGA |6

Almacenar la leche a menos de

4 C, para evitar el desarrollo
microbiano.

Durante el procesado de los

alimentos se debe evitar la
contaminacin cruzada, evitando
que contacten los alimentos ya
cocinados con los crudos.

El trabajador que tenga sntomas

de padecer la enfermedad debe abstenerse de manipular alimentos.

Se deben cocinar los alimentos a temperaturas elevadas y durante el tiempo

suficiente, as mismo evitar consumir alimentos crudos.1

Los vegetales se deben lavar y desinfectar si se van a consumir crudos.

Es de suma importancia su control en la industria crnica, evitando

contaminaciones cruzadas de los canales con materias fecales durante el sacrificio de
los animales.

La bacteria crece con relativa facilidad a temperaturas bajas, por ello es

importante que los equipos de refrigeracin funcionen dentro de unos rangos de
temperatura menores de 4 C.

IDENTIFICACION DE LA LISTERIA

LABORATORIO

DE MICROBIOLOGA |7

MATERIALES Y REACTIVOS
-

Solucin salina al 8%
25g de queso fresco
Agua destilada
Agar Base Sangre
Placas Petri
Pipetas
Vaso
Probeta
Mechero

PARTE EXPERIMENTAL

1. Primero colocamos el Agar Base Sangre en un vaso precipitado de 250ml

que para someterlo a calor por medio de un mechero y as fusionar al
agar.

IDENTIFICACION DE LA LISTERIA

LABORATORIO

DE MICROBIOLOGA |8

2. Luego preparamos la solucin salina al 0,08%

10 gr de sal en agua destilada

3. Pesamos 25g de muestra que es QUESO.

IDENTIFICACION DE LA LISTERIA

LABORATORIO

DE MICROBIOLOGA |9

4. A los 10gr de la muestra, agregamos 90ml de solucin salina

(concentracin de la solucin = 10-1 g/ml), luego de sta mezcla
separamos 1ml en un tubo y agregamos 9ml de solucin salina
(concentracin de la nueva solucin = 10-2 g/ml).

IDENTIFICACION DE LA LISTERIA

LABORATORIO

D E M I C R O B I O L O G A | 10

5. De la solucin de 10-2 g/ml, tomamos 1ml, colocamos en la caja Petri y

adicionamos 20ml del medio lquido (agar Base Sangre) y lo dejamos
enfriar.

IDENTIFICACION DE LA LISTERIA

LABORATORIO

D E M I C R O B I O L O G A | 11

6. Colocamos a la incubadora a 37o C por un tiempo de 2 o 3 das.

7. Despus sacamos nuestra muestra de la incubadora y contamos colonias.

IDENTIFICACION DE LA LISTERIA

LABORATORIO

D E M I C R O B I O L O G A | 12

Conclusiones
La inocuidad de las muestras no se ve comprometida en cuanto a los resultados

obtenidos, ya que si cumplen con todos los parmetros microbiolgicos

establecidos por la R.M 591-2008 1.I.8
En el recuento de Listeria de la muestra, esta en el limite de lo recomendado por

la R.M 591-2008 1.I.8. Por lo tanto, si cumplen con la inocuidad y al cumplir con
sta, si estn aptas para su consumo.

INFORME DE ENSAYO
Anlisis:

Microbiolgico de queso fresco

IDENTIFICACION DE LA LISTERIA

LABORATORIO

D E M I C R O B I O L O G A | 13

Lugar :
Supermercado Metro Brea-Av. Alfonso Ugarte 15082
interseccin con Av. Venezuela (Lima)
Fecha de muestreo:
Ejecucin:

06 / 05 / 2015
06 / 05 /2015

Resultados microbiolgicos

Microorganismo

Queso fresco

Limite permisible

Listeria monocytogenes

Ausencia/25g

Ausencia/25g

Listeria monocytogenes

El producto analizado es apto para el consumo

IDENTIFICACION DE LA LISTERIA