BIOENSAYO

DE
TOXICIDAD
CON
SEMILLAS DE
LECHUGA

2015

[ BIOQUIMICA ]

Calderon Chipayo, Anthony

Camargo Zamora, Claudia
Manrique Tito, Anderson
Vasquez Cabrera, Andy

ORIA

DEDICAT

Este trabajo est dedicado a todas

aquellas
personas
que
buscan
mecanismos para remediar aquellos
lugares
contaminados
por
hidrocarburos y metales.

INTRODUCCION
Las diversas actividades del hombre ha constituido el frecuente uso de metales
pesados los cuales han sido de gran ayuda en la fabricacin de productos pero
hoy en dia han dejado grandes problemas ecolgicos en el ambiente y los seres
vivos. El gran poder de contaminacin que estos elementos posee un alto riesgo
de enfermedades muy dainas para nuestro sistema.
La tcnica del bioensayo busca evaluar y determinar el efecto de agentes fsicos
y qumicos sobre organismos de prueba bajo condiciones experimentales
especficas y controladas. Esta tcnica la usaremos para evaluar al Plomo a
travs del crecimiento de las lechugas en su medio.
Esta tcnica tambin puede ser aplicado para la evaluacin de la toxicidad de
compuestos puros solubles, de aguas superficiales (lagos, ros), aguas
subterrneas, aguas para consumo humano, aguas residuales domsticas e
industriales, adems de lixiviados de suelos, sedimentos, lodos u otras matrices
slidas.

OBJETIVOS:

Evaluar el comportamiento de la semilla de lechuga para ser utilizada

como indicador biolgico de contaminacin ambiental de plomo en
relacin a las variables (tiempo, cantidad de contaminante. Agua).
Evaluar el efecto txico potencial del plomo como contaminante sobre el
crecimiento de la raz de las semillas de lechuga no permitiendo un
ptimo crecimiento, notndose en el momento de la medicin de las
semillas con diferentes concentraciones de plomo y otras con agua.
Establecer criterios o patrones de calidad de aguas superficiales o
efluentes y as poder hacer una mejor evaluacin del impacto ambiental y
del riesgo ecolgico y el monitoreo de las condiciones de un cuerpo de
agua.

PRINCIPIO DE LA PRUEBA

Bioensayo de Toxicidad con semillas de

lechuga
El bioensayo de toxicidad con semillas de lechuga (Lactuca sativa) es una
prueba esttica de toxicidad aguda (120 horas de exposicin) en el que se
pueden evaluar los efectos fitotxicos de compuestos puros o de mezclas
complejas en el proceso de germinacin de las semillas y en el desarrollo de las
plntulas durante los primeros das de crecimiento. Como puntos finales para la
evaluacin de los efectos fitotxicos, se determina la inhibicin en la germinacin
y la inhibicin en la elongacin de la radcula y del hipocotilo.
Es importante destacar que durante el perodo de germinacin y los primeros
das 56 Ensayos para agua dulce de desarrollo de la plntula ocurren
numerosos procesos fisiolgicos en los que la presencia de una sustancia txica
puede interferir alterando la supervivencia y el desarrollo normal de la planta,
siendo por lo tanto una etapa de gran sensibilidad frente a factores externos
adversos. Por otra parte, muchas de las reacciones y procesos involucrados son
generales para la gran mayora de las semillas, por lo que la respuesta de esta
especie y los datos obtenidos a partir de la aplicacin de esta prueba son en
gran medida representativos de los efectos en semillas o plntulas en general. El
xito o aptitud de una plntula para establecerse en un ambiente determinado es
de gran importancia para garantizar la supervivencia de la especie. La
evaluacin del desarrollo de la radcula y del hipocotilo constituyen indicadores
representativos para determinar la capacidad de establecimiento y desarrollo de
la planta.
A diferencia de la prueba tradicional de germinacin de semillas, la evaluacin
del efecto en la elongacin de la radcula y del hipocotilo de las plntulas permite
ponderar el efecto txico de compuestos solubles presentes en niveles de
concentracin tan bajos que no son suficientes para inhibir la germinacin, pero
que sin embargo pueden retardar o inhibir completamente los procesos de
elongacin de la radcula o del hipocotilo, dependiendo ello del modo y sitio de
accin del compuesto.
De esta manera, la inhibicin en la elongacin de la radcula e hipocotilo
constituyen indicadores subletales muy sensibles para la evaluacin de efectos
biolgicos en vegetales, aportando informacin complementaria a la
proporcionada al estudiar el efecto en la germinacin.

Morfologa de la semilla y la plntula de lechuga Lactuca sativa L.

Ensayos de toxicidad aguda con semillas de lechuga 57 ensayo puede ser
aplicado para la evaluacin de la toxicidad de compuestos puros solubles, de
aguas superficiales (lagos, ros), aguas subterrneas, aguas para consumo
humano, aguas residuales domsticas e industriales, adems de lixiviados de
suelos, sedimentos, lodos u otras matrices slidas (Bowers et al, 1997; Cheung
et al, 1989; Dutka, 1989).
A diferencia de otras pruebas en las que se consideran algas o plantas
acuticas sumergidas como organismo de diagnstico, el bioensayo con
semillas permite evaluar la fitotoxicidad de muestras coloreadas o con elevada
turbiedad de manera directa y sin necesidad de filtracin previa, reducindose
as las interferencias debidas al pretratamiento y simplificando el procedimiento
de prueba. Si bien L. sativa no es una especie representativa de ecosistemas
acuticos, la informacin generada a partir de esta prueba de toxicidad
proporciona datos acerca del posible efecto de los contaminantes en las
comunidades vegetales cercanas a las mrgenes de cuerpos de agua
contaminados, siendo tambin una especie interesante de considerar por su
importancia desde el punto de vista hortcola. Por otra parte, es de fcil y rpida
germinacin por lo que es posible desarrollar la prueba en pocos das. Este
bioensayo de toxicidad ha sido recomendado y aplicado por diferentes
organismos de proteccin ambiental para la evaluacin ecotoxicolgica de
muestras ambientales y compuestos puros, adems de la evaluacin del efecto
fitotxico de plaguicidas sobre especies no blanco, necesarios para el registro de
estos compuestos (OECD, 1984; Wang, 1987; USEPA, 1989). En la
incorporacin de esta prueba en una batera de bioensayos es importante
considerar el compromiso entre la sensibilidad de la especie L. sativa, el
reducido tiempo de exposicin de la prueba con semillas, los bajos costos
asociados y que no requiere equipamiento sofisticado, en particular en la
aplicacin a muestras ambientales o en el monitoreo de procesos de
detoxificacin, saneamiento, control de efluentes o reuso de bioslidos.

CONDICIONES RECOMENDADAS PARA LAS PRUEBAS DE TOXICIDAD

AGUDA CON LACTUCA SATIVA L.

Tipo de ensayo
Temperatura
Calidad de luz
Volumen de la solucion de prueba
Agua de dilucion
Numero de semillas por replica
Numero de replicas
Duracion de la prueba
Efecto medido
.
.
Resultado final
Aceptabilidad de los resultados

.
.
.
Control positivo

Estatico
20+- 2 C
Oscuridad
4 mL
Agua dura reconstituida
20
3
120 horas
Inhibicion en la elongacion
de la radicula e hipocotilo.
Inhibicion en la germinacion
CE50 o CI50 o % inhibicion
Germinacion > 90%
Control positivo y negativo
de acuerdo con los valores
admitidos en las cartas
control
Zn (II) a partir de ZnSO4

METALES PESADOS
Son aquellos cuya densidad es por lo menos cinco veces mayor que la del agua.
El trmino de metal pesado refiere a cualquier elemento qumico metlico que
tenga una relativa alta densidad y sea txico o venenoso en concentraciones

bajas. Los ejemplos de metales pesados o algunos metaloides, incluyen el

mercurio (Hg), cadmio (Cd), arsnico (As), cromo (Cr), talio (Tl), y plomo (Pb),
entre otros (Lucho et al., 2005a).
Los metales pesados se encuentran generalmente como componentes naturales
de la corteza terrestre, en forma de minerales, sales u otros compuestos. No
pueden ser degradados o destruidos fcilmente de forma natural o biolgica ya
que no tienen funciones metablicas especficas para los seres vivos (Abollino
et al., 2002).
BIOACUMULACION
Los metales pesados son peligrosos porque tienden a bioacumularse en
diferentes cultivos. La bioacumulacin significa un aumento en la concentracin
de un producto qumico en un organismo vivo en un cierto plazo de tiempo,
comparada a la concentracin de dicho producto qumico en el ambiente
(Angelova et al., 2004).
En el caso de las plantas se incorpora a ellas a travs del agua, aire y/o suelo.
La absorcin de metales pesados por las plantas es generalmente el primer
paso para la entrada de stos en la cadena alimentaria. La absorcin y posterior
acumulacin dependen en primera instancia del movimiento (movilidad de las
especies) de los metales desde la solucin en el suelo a la raz de la planta. En
plantas, el concepto de bioacumulacin se refiere a la agregacin de
contaminantes; algunos de ellos son ms susceptibles a ser fitodisponibles que
otros (Kabata-Pendias, 2000).
TOXICIDAD
Los metales pesados pueden clasificarse en dos grupos:
Al que pertenecen elementos como Cu, Zn y Cr+3, incluyen aquellos
requeridos por el organismo en dosis moderada, pero que pasan a ser
toxicos al superar cierta concentracin.
El segundo grupo esta constituido por aquellos metales que no tienen un
rol biolgico conocido, pero si una clara toxicidad. Ejm: As, Cd, Hg y Pb, y
el Cr+6.
La toxicidad del metal depende de su va de administracin y del compuesto
qumico al que est ligado. La combinacin de un metal con un compuesto
orgnico puede aumentar o disminuir sus efectos txicos sobre las clulas.

METALES PESADOS EN EL AMBIENTE

Las actividades geolgicas naturales, como desgastes de cerros y volcanes,
constituyen una fuente de aportaciones importante de metales pesados al suelo.

Tambin las actividades antropognicas como la industria minera, que est

catalogada como una de las actividades industriales ms generadora de metales
pesados. En el suelo, los metales pesados, pueden estar presentes como iones
libres o disponibles, compuestos de sales metlicas solubles o bien, compuestos
insolubles o parcialmente solubilizables como xidos, carbonatos e hidrxidos.
Cuando el contenido de metales pesados en el suelo alcanzan niveles que
rebasan los lmites mximos permitidos causan efectos inmediatos como
inhibicin del crecimiento normal y el desarrollo de las plantas, y un disturbio
funcional en otros componentes del ambiente as como la disminucin de las
poblaciones microbianas del suelo, el trmino que se usa o se emplea
es polucin de suelos (Martn, 2000).

Va de contaminacin
Aguas procedentes de desechos de minas, aguas residuales contaminadas de
parques industriales y municipales, filtraciones de presas de jales, etc.

Los factores que influyen en la movilizacin de metales pesados :

Son caractersticas del suelo:
pH
Potencial redox
Composicin
inica
de
la
solucin del suelo
y
lugares
acuaticos
Capacidad
de
intercambio

(catinico
y/o
aninico)
Presencia
de
carbonatos
Materia orgnica
Textura
Entre otras

La naturaleza de la contaminacin y el origen de los metales

y formas de deposicin y condiciones medio ambientales
producen acidificacin, cambios en las condiciones redox,
variacin de temperatura y humedad en los suelos
(Sauquillo et al., 2003).

Va de los metales pesados en el suelo:

La Primera, quedar retenidos en el suelo, ya sea
disueltos en la fase acuosa del suelo u ocupando
sitios de intercambio
Segunda,
especficamente
adsorbidos
sobre
constituyentes inorgnicos del suelo
Tercera, asociados con la materia orgnica del suelo
Cuarta, precipitados como slidos puros o mixtos.
Tambin pueden ser:
Absorbidos por las plantas y as incorporarse a las
cadenas trficas
Pasar a la atmsfera por volatilizacin
Ser movilizados a las aguas superficiales o
subterrneas
Consecuencias
La inactivacin enzimtica por la formacin de enlaces entre
el metal y los grupos SH (sulfhidrilos) de las protenas,
causando daos irreversibles en los diferentes organismos.

EL PLOMO
Segn Nriagu, (1978) el plomo ha sido el veneno de la
antigedad porque reside en el suelo y, debido a su baja
solubilidad, resiste la degradacin microbiana; en suma,
permanece biodisponible para el futuro. Este se caracteriza
por:
Es un miembro del Grupo IVB de la tabla
peridica de los elementos.
Tiene dos estados de oxidacin, Pb (II) y Pb (IV)
Es un elemento estable
Para la qumica ambiental del elemento es dominada
2+

por el ion plumboso (Pb ).

El Pb elemental es un denso metal azul grisceo
3

(11.3 g/cm )
Punto de fusin a 327 C y de ebullicin a 1744 C.

 El bajo punto de fusin permiti fundirlo y trabajarlo

en las sociedades primitivas.
El metal es muy blando y tiende a deslizarse, por
ello, puede cortar y moldear y durante mucho
tiempo ha sido usado sobre tejados o para la
fabricacin de caeras.
El plomo metlico es relativamente opaco a la
radiacin ionizante
Forma un escudo de defensa al trabajar con rayos X
y radioistopos.

CONTAMINACION POR PLOMO

FUENTES NATURALES
El
plomo
es
un
elemento relativamente
abundante que se
encuentra en aire,
agua, suelo, plantas y
animales. Sus fuentes
naturales son:
Erosion
del
suelo
Desgaste de los
depsitos de los
minerales
de
plomo
Emanaciones
volcnicas
Su proporcin en la
corteza terrestre es de
aprox. 15ppm (mg/kg)
y la cantidad total se estima en 3.8x1014 toneladas.
FUENTES ANTROPOGENICAS
La principal fuente de difusin del plomo en el ambiente son
las actividades antropognicas. La contaminacin por plomo
originariamente es debida a la extraccin de minerales de
plomo del suelo utilizando el calor en los afloramientos
naturales.
El agua transportada por percolacin, lixiviacin o
escorrenta, es decir, por procesos propios del ciclo

hidrolgico transporta plomo en pequeas partculas

provenientes de las minas (Laxen y Harrison, 1977).
Las principales fuentes de contaminacin por plomo son:
Deposicin area en minas explotadas
Gases contaminantes urbanos
Partculas de combustible no quemado
Deposicin de residuos slidos urbanos
Fundicin de minerales
Efluentes de plantas de reciclaje de bateras
industriales
Chimeneas de fbricas
Aditivos para pinturas y gasolina
Uso de municiones militares
Procesos de plateado y terminacin de metales
Uso de fertilizantes
CONSECUENCIAS DEL PLOMO
En la salud humana
El plomo es uno de los cuatro metales que tienen un mayor
efecto daino sobre la salud humana. Este puede entrar en el
cuerpo humano por medio de la comida (65%), agua (20%) y
aire (15%). Es un veneno bien conocido para los mamferos y
en humanos se teme a los sndromes clnicos de la toxicidad
por plomo.
El plomo afecta:
El sistema
nervioso humano
La produccin de
clulas
sanguneas

Los riones
El sistema
reproductivo
La conducta.

La intoxicacin producida por el plomo se denomina saturnismo

y sus sntomas se manifiestan como la aparicin de fatiga,
dolores de cabeza, dolores musculares y de estmago,
anorexia, estreimiento y, en su fase ms crtica, "clico del
plomo", es decir, calambres abdominales intensos,
acompaados de nuseas, vmitos y presin arterial elevada.
El plomo tras entrar al cuerpo humano, circula por la sangre
depositndose inicialmente en tejidos blandos, en los huesos
(94%) y en otros tejidos (6%), incluido el cerebro, al mismo

tiempo en los glbulos rojos. La exposicin humana al plomo

por perodos prolongados, mayores o iguales a un ao, tiene
incidencia en la salud de las personas, pudiendo producir
efectos crnicos.
Los efectos en salud del plomo inhalado dependen, entre otros,
del tamao de las partculas.
Particulas con un tamao menor a 2.5 micrmetros, se
depositan en la parte ms profunda del sistema
respiratorio, alvolos, desde donde el plomo difunde casi
en un 100% al torrente sanguneo.
Las partculas en un rango de tamao de 2.5 a 10
micrmetros, se depositan preferentemente en la regin
traqueobronquial y nasofarngea.

En el ambiente
Las partculas grandes precipitarn en el suelo o la superficie de
aguas, las pequeas partculas viajarn largas distancias a
travs del aire y permanecern en la atmsfera.

Animales:
El Plomo se acumula en los cuerpos de los organismos
acuticos y terrestres. Estos experimentarn efectos en su
salud por envenenamiento con Plomo.
Los crustceos son altamente vulnerables al plomo, pues
incluso cuando slo hay pequeas concentraciones de
Plomo presente pueden presentar grandes daos en su
salud.
Las funciones en el fitoplancton pueden ser perturbados tras
interferir con el Plomo. El fitoplancton es una fuente muy
importante de produccin de oxgeno en los ocanos y es el
alimento de muchas especies marinas.
Suelo:
Las funciones del suelo son alteradas por la intervencin del
Plomo, especialmente en zonas cercanas de las autopistas y

tierras de cultivos, donde concentraciones extremas pueden

estar presentes. Los organismos del suelo tambin sufren
envenenamiento por Plomo, tras la propagacin de las
partculas.
Plantas:
En la vegetacin el plomo se acumula primariamente en las
hojas por deposicin atmosfrica. El plomo presente en la
hoja rompe la cutcula y pasa al interior de la misma, se
acumula en las vesculas y puede originar efectos como
Inhibicin de la mitosis y por tanto del crecimiento de la
planta.
Inhibicin de la sntesis del ATP y del rendimiento
energtico.
Disminucin de la viabilidad de las semillas

CICLO BIOGEOQUIMICO DEL PLOMO

El plomo, al igual que el mercurio, se encuentra distribuido por

todo el planeta con el agravante de ser mucho ms abundante.
As, aunque el plomo es algo menos txico que el mercurio de

forma absoluta, al final la intoxicacin por plomo es mucho ms

probable. Desde 1750, su aumento ha sido gradual y ha ido
paralelo al progreso de la revolucin industrial, sufriendo un
importante aumento a finales de la segunda guerra mundial
como consecuencia de la introduccin del plomo en las gasolinas
como agente antidetonante. Afortunadamente, la retirada del
plomo de las gasolinas permitir depurar en unas dcadas gran
parte del plomo presente, pero es necesario considerarlo an en
su ciclo biogeoqumico para entender su distribucin actual en el
medio ambiente.

FITORREMEDIACIN
La fitorremediacin (phyto = planta y remediacin = mal por
corregir), es un proceso que utiliza plantas para remover,
transferir, estabilizar, concentrar y/o destruir contaminantes
(orgnicos e inorgnicos) en suelos, lodos y sedimentos, y puede
aplicarse tanto in situ como ex situ. Los mecanismos de
fitorremediacin incluyen la rizodegradacin, la fitoextraccin, la
fitodegradacin y la fitoestabilizacin.
La rizodegradacin se lleva a cabo en el suelo que rodea
a las races. Las sustancias excretadas naturalmente por
stas, suministran nutrientes para los microorganismos,
mejorando as su actividad biolgica.
Durante la fitoextraccin, los contaminantes son
captados
por
las
races
(fitoacumulacin),
y
posteriormente stos son traslocados y/o acumulados
hacia los tallos y hojas (fitoextraccin).
En la fitoestabilizacin, las plantas limitan la movilidad y
biodisponibilidad de los contaminantes en el suelo, debido
a la produccin en las races de compuestos qumicos,
que pueden adsorber y/o formar complejos con los
contaminantes, inmovilizndolos as en la interfase
races:suelo.
La fitodegradacin consiste en el metabolismo de
contaminantes dentro de los tejidos de la planta, a travs
de enzimas que catalizan su degradacin.

La fitorremediacin puede aplicarse eficientemente para tratar

suelos contaminados con compuestos orgnicos como benceno,
tolueno, etilbenceno y xilenos (BTEX); solventes clorados; HAPs;
desechos
de
nitrotolueno;
agroqumicos
clorados
y
rganofosforados; adems de compuestos inorgnicos como Cd,
Cr(VI), Co, Cu, Pb, Ni, Se y Zn. Se ha demostrado tambin su
eficiencia en la remocin de metales radioactivos y txicos de
suelos y agua. Existen varias limitaciones que deben
considerarse para su aplicacin:

El tipo de plantas utilizado: determina la profundidad a

tratar.
Altas concentraciones de contaminantes pueden resultar
txicas.
Puede depender de la estacin del ao.
La toxicidad y biodisponibilidad de los productos de la
degradacin no siempre se conocen y pueden movilizarse
o bioacumularse en animales.

Cuando las plantas han absorbido los contaminantes

acumulados, pueden ser cosechadas y ser desechadas. Si los
contaminantes qumicos orgnicos se degradan en las molculas
como el dixido de carbono, las plantas pueden no requerir
ningn mtodo especial de disposicin. La incineracin
controlada es el mtodo ms comn para disponer las plantas
que han absorbido cantidades grandes de contaminantes. Este
proceso produce cenizas, que se pueden desechar en los sitios
destinados para tal fin. Para las plantas que han absorbido los
metales, la incineracin controlada produce las cenizas con altos
contenidos de metales.
VENTAJAS Y DESVENTAJAS DE LA FITORREMEDIACIN:
En el siguiente cuadro se muestra las principales ventajas que
ofrece la fitorremediacin, en comparacin con otras tecnologas
convencionales.

VIAS DE ENTRADA DE LOS NUTRIENTES EN LA RAZ

En funcin de las caractersticas estructurales de la raz, el agua
y las sales minerales, una vez que ya han entrado en su interior,
pueden seguir dos vas diferentes: la va A, o va simplstica, y la
va B , o va apoplstica.

Va A o va simplstica
Una parte del agua y la mayora de las
sales minerales circulan por el interior
de la raz, hasta los vasos leosos, a
travs del citoplasma de las clulas
que forman el parnquima cortical.
De una a otra clula pasan a travs de
las membranas plasmticas y de los
plasmodesmos;las sales minerales lo
hacen mediante transporte activo y el
agua lo hace por smosis.

. Va B o va apoplstica
La mayor parte del agua y una parte
de las sales minerales circulan por el
interior de la raz a travs de las
paredes celulares y de los espacios
intercelulares, hasta llegar a la
endodermis.
A partir de aqu, el agua atraviesa la
membrana y el citoplasma de las
clulas de la banda de Caspari por
smosis, mientras que las sales
minerales penetran en las clulas de la
endodermis por transporte activo

El conjunto de agua y sales minerales que han llegado hasta el

xilema se denomina sabia bruta y ser transportada por los
vasos leosos hasta las hojas, donde se utilizar en la
fotosntesis.

FITORREMEDIACION DE MICORRIZAS:
Los HMA son un componente natural de los suelos en la mayora de
los ecosistemas terrestres. Se sabe que ms del 80 % de las plantas

terrestres son capaces de presentar una asociacin simbitica con

ellos y pueden ser considerados como una extensin de las races de
las plantas ya que amplan considerablemente el volumen de suelo
que puede ser explorado y por ende se incrementa la cantidad de
nutrientes que pueden ser obtenidos por la planta (Harrison 1999). El
incremento de nutrimentos es ms evidente cuando las plantas
micorrizadas se encuentran en condiciones adversas para su
crecimiento, como es el caso de suelos contaminados con plomo. Bajo
esta condicin, se ha reportado que en algunos casos las plantas
micorrizadas pueden mostrar mayor captacin de metales pesados por
la raz y aumentar el transporte de estos a la parte area de la planta
(fitoextraccin) (Rabie 2005), mientras que en otros casos el uso de
HMA contribuye a la inmovilizacin del metal en las races de las
plantas (Gaur y Andholeya 2004) o en el suelo (GonzlezChvez et
al. 2004) (fitoestabilizacin). Esto muestra que el resultado de la
micorrizacin de plantas con fines de fitorremediacin de suelos
contaminados depende de la combinacin plantahongometal y est
influenciado por las condiciones del suelo.

Las esporas de los HMA normalmente tienen diferente nivel de

sensibilidad a la presencia de metales pesados en ausencia de las
plantas dependiendo de la especie del hongo. En la fase
presimbitica, Glomus intrarradiceses uno de los hongos micorrzicos
que ha mostrado mayor tolerancia a metales como Cd y Pb

(Pawlowska y Charvat 2004). En fase simbitica, este hongo tambin

ha mostrado tolerancia a metales pesados; un ejemplo de ello es la
mayor acumulacin de Pb en las races micorrizadas de Vetiveria
zizanioides con dicho hongo (Wong et al. 2007).
Los mecanismos de transporte de Pb en el micelio externo de los HMA
han sido poco estudiados. Sin embargo, existen datos que sugieren
que el movimiento del Pb hacia el micelio interno podra ser a travs
del fsforo. El fsforo en HMA es transportado del micelio externo al
interno principalmente en forma de polifosfato (Harrison y Van Buuren
1995, MaldonadoMendoza et al. 2001). La unin del Pb y polifosfato
ha sido observada como un mecanismo de estabilizacin de Pb en
suelo (Gaur y Adholeya 2004). El complejo Pbpolifosfato tambin ha
sido observado en el micelio interno de HMA (Turnau et al. 1993). Por
lo tanto, existe la posibilidad de que el Pb sea transportado a la raz
micorrizada va el micelio externo. Sin embargo, se requiere
profundizar aun ms en el estudio de los mecanismos del transporte de
Pb a travs del micelio de HMA.

HONGOS
MICORRIZICOS
ARBUSCULARES
FITOESTABILIZACIN DE PLOMO

EN

LA

La fitoestabilizacin consiste en inmovilizar metales pesados mediante

el uso de especies de plantas tolerantes, con un sistema radicular que
provea una buena cobertura de suelo. Las plantas con este tipo de
sistemas radiculares pueden acumular una gran cantidad de Pb en las
races. Adems la presencia de HMA puede contribuir a una mayor
inmovilizacin del metal. Entre las posibles estrategias de
inmovilizacin de Pb por el hongo se encuentran: la inmovilizacin del
Pb soluble mediante glicoprotenas secretadas por el hongo, la
adsorcin del Pb en las paredes celulares y la quelacin de metales al
interior de la hifa, siendo estas estrategias similares a las utilizadas por
las plantas (Gaur y Andholeya 2004).
La glomalina es una glicoprotena insoluble secretada por el hongo que
se ha encontrado en el suelo ligada a metales pesados. Para el caso
especfico de suelos contaminados con Pb se ha logrado extraer hasta
1.12 mg de Pb por gramo de glomalina (GonzlezChvez et al. 2004)
y recientemente se ha observado que la concentracin de Pb en la
glomalina puede variar entre 0.8 y 15.5 % del total de Pb en el suelo
(Vodnik et al.2008).
Por otro lado, es ampliamente conocido que los HMA pueden producir
una gran cantidad de micelio externo. Tambin es conocido que la
pared celular de este micelio est compuesta mayormente por quitina y
que este compuesto estructural provee una eficiente superficie para la

adsorcin de los metales pesados del suelo (Galliet al. 1994,

GonzlezChvez et al. 2004). Este potencial de adsorcin se debe a
que las hifas del hongo presentan una mayor afinidad (2 a 4 veces
ms) que las races (Joner et al. 2000), por lo que la inoculacin de
plantas tolerantes con HMA podran incrementar significativamente la
estabilizacin de metales pesados contenidos en el suelo.
Otros agentes potenciales de retencin del Pb en el micelio de los
HMA son las metalotioneinas. En plantas acumuladoras de metales
(Clemens 2001) y en hongos ectomicorrzicos (Morselt et al. 1986,
Galli et al. 1994) se ha observado la presencia de estos polipptidos
capaces de adsorber metales pesados. Aunque estos compuestos no
han sido an observados en unin con Pb, se ha detectado en el
micelio de HMA una alta expresin de un gen que codifica para la
sntesis de este tipo de polipptido en presencia de metales pesados
(Lanfranco et al. 2002).
La absorcin e inmovilizacin del Pb es mayor por las races que se
encuentran micorrizadas en comparacin con las races no
micorrizadas (Gaur y Andholeya 2004, Chen et al. 2005). La forma en
que el metal se incorpora al interior de la raz micorrizada es
desconocida. Sin embargo, el hecho de que se ha observado un
aumento en el nmero de vesculas con el incremento de
concentracin de Pb en el suelo (Joner et al. 2000) sugiere que el Pb
en las races micorrizadas podra ser inmovilizado en las vesculas o
en el interior del micelio interno.
Se ha documentado la acumulacin de metales pesados, tales como
Cd, Zn y Cu, en el interior del micelio interno de HMA especialmente en
grnulos de polifosfato en el interior de la vacuola (Turnau et al. 1993).
En el caso de hongos micorrzicos arbusculares no se ha observado la
acumulacin de Pb en grnulos de polifosfato. Sin embargo los HMA
se caracterizan por adquirir una gran cantidad de fsforo y
transportarlo de la solucin del suelo al interior de la raz en forma de
polifosfato. Una vez que el polifosfato llega a los arbsculos, es
liberado en la reaccin de hidrlisis del polifosfato en las vacuolas de
las clulas (Capaccio y Callow 1982, Saito 1995, Kojima et al. 1998,
Ezawa et al. 2001). Lo anterior refleja el gran potencial de los HMA con
fines de fitoestabilizacin. Sin embargo, se desconoce si la mayor
estabilizacin de Pb en las races micorrizadas se realiza mediante: a)
acumulacin de Pb en vesculas, b) absorcin en pared celular y en
vacuolas en micelio interno, y c) absorcin en pared celular y en
polipptidos en micelio externo. Probablemente la estabilizacin podra
darse a travs de un mecanismo como el propuesto por Ezawa et
al. (2001) para el fsforo, donde el metal pesado podra quedarse en la
vacuola o incorporarse a la pared celular del micelio (Fig. 2).

2.5

ABSORCION DE METALES POR LAS

PLANTAS
Las plantas han desarrollado mecanismos altamente especficos
para absorber y acumular nutrientes, sin embargo, algunos
metales y metaloides no esenciales son absorbidos y
acumulados en la planta debido a que presente un

compartimiento electroqumico similar a los elementos nutritivos

requeridos.
La absorcin de metales pesados por las plantas es
comunmente el paso inicual para su entrada en la cadena
alimenticia. La absorcin y posterior acumulacin dependen del
movimiento de los metales desde la solucin del suelo a la raiz
de la planta, su transporte y movilizacin hacia las raices y los
tallos. Despues de este proceso de absorcin en los vegetales,
los metales estn disponibles para los herbivoros y humanos a
traves de la cadena alimenticia.
Otro mecanismo de ingreso de sustancias potencialmente
txicas a las plantas como los metales pesados en mediante la
absorcin foliar. La disponibilidad a travs de las hojas de
algunos elementos de traza provenientes de fuentes puede tener
un impacto significativo en la contaminacin de las plantas y
tambin es de particular importacia en la aplicacin de
fertilizantes foliares. La absorcin foliar es mediada por una fase
de penetracin cuticular y un mecanismo de carcter metablico
que considera la acumulacin de los elementos contra una
gradiente de concentracin.
Las plantas capaces de absorber y acumular metales sobre lo
establecido como normal para otras especies en los mismos
suelos se llaman hiperacumuladoras generalmente tiene poco
biomasa debido a que ellas utilizan ms energa en los
mecanismos necesarios para adaptarse a altas concentraciones
de metal en sus tejidos.
La absorcin y traslocacin de plomo por depositacin
atomosfrica en las hojas puede llegar a ser un 73% - 95% del
contenido de plomo total en las plantas de hoja como la lechuga
donde tiene un raango de 8 micro gramos de peso seco.

MECANISMOS DE RESPUESTA DE
LAS PLANTAS A LA PRESENCIA
DE METALES PESADOS
Las plantas tienen diferentes mecanismos de respuesta
ante la presencia de compuestos txicos como los metales
pesados (Reed y Gadd, 1990). Entre ellos, destacan los
mecanismos
de exclusin, mineralizacin, reduccin,
solubilizacin, acumulacin, quelacin y translocacin (Salt et
al., 1995; Lytle et al., 1998). Algunos son pasivos, como la
adsorcin por exclusin y otros son activos, es decir, que
requieren energa metablica para llevarse a cabo, como la
acumulacin, translocacin o relocalizacin. La translocacin es
un tipo de alteracin de un patrn de compartamentalizacin
del metal, es decir, algunas plantas translocan o transfieren el
exceso de metal a las hojas viejas, otras limitan el transporte de
la raz al tallo.
La vacuola tiene un funcionamiento especial en el
almacenamiento de metales. Los iones metlicos se
transportan de manera activa al interior del tonoplasto como
iones libres o como complejos metal-molcula quelante
(Moreno y Devars, 1999).
La pared celular vincula la disminucin de
permeabilidad de la membrana celular, y en algunas
ocasiones activa la extrusin, la absorcin por orgnulos y
vacuolas o complejacin con agentes quelantes tales como las
protenas, por ejemplo, metalotionenas y fitoquelatinas
(Gekeler et al. 1988; Rauser, 1990).
Los procesos de destoxificacin que usualmente se
conocen son la adsorcin y bioacumulacin (Verma y Singh,
1995; Sandau et al., 1996; Rehman y Shakoori, 2003; Gin et
al., 2002). En aos recientes, la habilidad de las plantas para
acumular contaminantes ha recibido mayor atencin (Black,
1995). Hay informes que indican que algunas especies pueden
acumular metales pesados especficos, por ejemplo, Spirodela
polyrhiza que acumula Zn (Markert, 1992). Adems, se han
encontrado algunas especies con la capacidad de acumular
altas concentraciones de metales pesados en su biomasa las
cuales son llamadas hiperacumuladoras.

La hiperacumulacin combina los aspectos de

adsorcin, transporte y translocacin de metales. Se considera
que existe hiperacumulacin en las plantas, cuando la
concentracin del metal acumulado en los tejidos de las plantas
se encuentra en el rango de 0.1-1% del peso seco de

la planta, este porcentaje es particular para diferentes metales (Suresh y

Ravishankar, 2004). Hasta la fecha, han sido reportadas ms de 430 especies como
hiperacumuladoras de metales pesados, desde hierbas anuales hasta arbustos
perennes y rboles. Por ejemplo, manglares como Avicenia, han sido reportados como
hiperacumulares de cobre, plomo y zinc (Mac y Burchett, 2002).
Las estrategias para evitar que los metales pesados aumenten en las plantas son
diversas. Extracelularmente se incluyen las micorrizas, la pared celular y exudados
extracelulares. La tolerancia puede adems involucrar la membrana plasmtica y el
citosol. Dentro del protoplasto existe una variedad de mecanismos potenciales, por
ejemplo, para la reparacin de los daos de estrs se ha involucrado a proteinas de
choque trmico o a las metalotionenas, as como la quelacin de metales por cidos
orgnicos, aminocidos o pptidos, o su compartamentalizacin a procesos metablicos
para el transporte dentro de la vacuola (Hall, 2002). Esta gama de mecanismos esta
resumido en la Figura.

Figura. Resumen de los mecanismos potenciales celulares disponibles para la

destoxificacin y tolerancia de metales en plantas. 1. Restriccin del movimiento del
metal a las races por micorrizas. 2. Unin a la pared celular y exudados de las races.
3. Entrada del flujo reducido frente a la membrana plasmtica. 4. Salida activa dentro
del apoplasto. 5. Quelacin en citosol por varios ligandos. 6. Reparacin y proteccin
de la membrana plasmtica bajo condiciones de tensin. 7. Transporte del complejo
PC-Cd dentro de la vacuola. (Modificado de Marschner, 1995).

ADSORCIN DE METALES PESADOS A SUPERFICIES BIOLGICAS

La adsorcin es un proceso por el cual las molculas se adhieren a
superficies slidas. La adsorcin fsica no es especfica, y las fuerzas que
atraen a las molculas a las superficies de los slidos son relativamente
frgiles. La energa de activacin por adsorcin fsica usualmente no es
mayor de una Kcal/gmol. En la adsorcin, los iones metlicos son
secuestrados de la solucin a travs de algunos mecanismos como
intercambio inico, quelacin, adsorcin por fuerzas fsicas y atrapamiento
de iones (Stirk y Staden, 2001).
Se ha reportado que la temperatura puede influenciar al proceso de
adsorcin (Volesky, 2003). Kuyucak y Volesky (1989), demostraron que el
cobalto (Co) adherido a un alga caf, (Ascophyllum nodosum) aument de
un 50 a un 70%, cuando la temperatura increment de 4 hasta 23 C.
En general, los mecanismos de remocin son diferentes entre las distintas
especies de plantas y estarn determinados por el tipo de metal. Sin
embargo, la adsorcin es sin duda el mecanismo de remocin extracelular
ms reportado en plantas acuticas (Stirk y Staden, 2001).
Por otro lado, la biomasa usualmente contiene ms de un tipo de sitios
disponibles para el secuestro de metales y el efecto de la temperatura en
cada tipo de sitio puede, adems, contribuir al total del metal secuestrado.
Esto fue confirmado con la adsorcin de Cu a una biomasa microbiana
saturada con potasio (Weppen y Hornburg, 1995). Para muchos de los
metales, el calor de reaccin fue constante, independientemente del grado
de ocupacin de los sitios. Sin embargo, para el Cu el calor de reaccin
decreci con el aumento del grado de ocupacin delos sitios de 27 a 14
KJ/mol, indicando la unin de varios sitios de ligandos o la formacin de
diferentes tipos de complejos de Cu con la biomasa. Para otros metales
pesados, el calor de reaccin de adsorcin fue entre 7 y 11 KJ/mol, para
metales ligeros entre 2.1 y 6 KJ/mol (Weppen y Hornburg, 1995).
Quelantes intracelulares
Por otro lado, a nivel intracelular los metales forman complejos con un
ligando existente o sintetizado de nuevo, que pueden ser cidos
orgnicos, algunos aminocidos, metalotionenas y fitoquelatinas,
siendo los dos ltimos los ms importantes (Rauser, 1999; Cobbett,
2000).

MATERIALES
1. Papel toalla
2. Tubos de ensayo
3. Mascarilla
4. Probetas
5. Placa Petri
6. Leja
7. Gotero
8. Matraz Erlenmeyer
9. Bureta
10. Agua destilada
11. Semillas de lechuga

PROCEDIMIENTO

Preparacin de las concentraciones de acetato de plomo

1. Primero prepararemos 4 concentraciones de acetato de plomo a

50mM, 100mM, 150mM y 200mM

Desinfeccin de las semillas de lechuga y placas petri

2. Primero contamos 100 semillas

3. Una vez que tengamos nuestras semillas, las desinfectamos,

mezclando 18ml de agua y 2ml de hipoclorito de sodio

4. La desinfeccin debe hacerse en una placa Petri limpia y

esterilizada( durante 15 minutos)

5. Seguidamente tambin desinfectamos 5 placas petri, para lo cual

mezclamos en un recipiente 900ml de agua y 100ml de hipoclorito de
sodio ( durante 25 minutos)

Lavado y secado de las semillas

6. Cortamos el papel toalla en formas circulares para usarlo como papel
filtro

7.

Seguidamente lavamos nuestras

semillas con agua destilada para poder evitar que queden residuos de
hipoclorito en estas

8. Luego ponemos nuestro papel toalla en 5 placas petri

Cultivo de las semillas de lechuga

9. A continuacin pondremos 20 semillas en cada placa petri

10. A nuestra 1ra placa le echamos 3ml de agua destilada ( placa de

control)

11. Extraemos 3 ml de cada concentracin realizada y le echamos a

nuestras placas Petri 2,3, 4 y 5 respectivamente

12. Finalmente las dejamos incubar por 72horas( 3dias) a una

temperatura de 22C

RESULTADOS
MEDICIONES DE LA PLACA 1 DE CONTROL:

Placa Con 20 Semillas + 3ml De Agua

semilla radicul
hipocot foliolo
s
a
ilo
1
0,9
0,8
0,4
2
0,7
0,7
0,3
3
0,65
1,1
0,4
4
1,1
0,7
0,4
5
0,6
0,7
0,3
6
0,65
0,8
0,3
7
0,6
0,9
0,3
8
0,9
0,7
0,3
9
0,6
0,6
0,3
10
0,8
0,6
0,3
11
0,8
1,1
0,4
12
0,7
0,7
0,4
13
1,1
0,8
0,4
14
1
1
0,3
15
1,1
0,6
0,4
16
0,5
0,5
0,3
17
1
0,5
0,3
18
0,6
0,3
0,4
19
0,5
0,4
0,4
20
0,5
0,4
0,3

semillas
promedio
desv.
Estandar

hipocot foliolo
ilo
0,765
0,695
0,345
0,21
0,22
0,051

NOTA: fue la nica placa en la cual germinaron las placas.

RESULTADOS GENERALES:
Muestra
s
crecimie
nto
inhibicio
n

1:
Agua

2: 3ml de
Pb 50M

3. con
3ml de
Pb 100mL

20

4. 3ml
de
Pb
150ml
0

20

20

20

5. 3ml
de
Pb
20ml

TOT
AL
%
0

80%

20

20%

N semillas

Muestras

N semillas

Muestras

Se dej germinar la muestra por 3 das (el tiempo adecuado son 120
horas pero por cuestin de tiempo no se pudo dar). Al examinar la
muestra despus de este tiempo se observ que solo creci el de la
placa control que estaba con agua.
En las placas que contenan la solucin del plomo en sus diferentes
concentraciones no se observ cambio alguna, esto puede ser por
dos motivos el primero que el plomo inhibi el crecimiento de las
semillas y el segundo que retraso la germinacin de estas.
Debido a que el plomo casusa desordenes en la actividades
fisiolgicas de la semilla es decir mata poco a poco las clulas esto
depende a la cantidad de la concentracin al que esta expuesta (mata
eventualmente las clulas a altas concentraciones), dado que los
mayores daos se dan en la actividad enzimtica, en su estructura y
transporte de oxgeno.
Unos ejemplos de su dao en la semilla son:
A altas concentraciones reduce el nmero de semillas en
germinacin y encogimiento del hipoctilo.
Las actividades de un amplio rango de enzimas de diferentes
vas metablicas son afectadas por el plomo. La inhibicin del
50 % de la mayora de enzimas se produce a una
concentracin de entre 10-5 y 210-4 M de plomo.
A nivel celular el plomo tambien inhibe las actividades
de enzimas que contienen grupos sulfhidrilo (-SH)
necesarios para su actividad

A altas concentraciones, la barrera funcional de plasmalema es

daada y una gran cantidad de plomo penetra dentro de las
clulas.
En las plantas altera la fotosntesis de las plantas debido a que
los cloroplastos son alterados por la toxicidad por plomo
causando innumerables efectos adversos.

CONCLUSIONES

Se observ que el plomo tuvo un efecto nocivo contra las

plantas inhibiendolas o retardando su germinacin, sea esta
por el efecto toxico que posee. Esta se pudo comprobar por el
anlisis fisiolgico de la muestra con agua, en la que si
germino, mientras que en ninguna de las concentraciones con
plomo germino.
La elongacin de la radcula o del hipocotilo varan de acuerdo
al tipo y cantidad de concentracin de una solucin.
Algunos metales como el acetato de plomo son abdorvidos y
acumulados por plantas (lechuga)debido a que presentan un
comportamiento electroquimico .
La sensibilidad de la lechuga (Lactuca sativa L.) en las pruebas
de germinacin de este estudio, y los antecedentes registrados
en la literatura que indican que esta especie es una buena
acumuladora de metales pesado, en menor proporcin.
Los bioensayos nos permiten determinar y evaluar los efectos
en los agentes fisicos y qumicos de distintas sustancias.
La temperatura medio ptimo para el desarrollo de la lechuga
es de15 a 18 grados.
Cada ves que sea mayor la concentracin de un metal ser
ms toxico o perjudicial para el desarrollo de una semilla.

CUESTIONARIO
1.

EXPLIQUE COMO SE TRANSPORTA EL Pb EN LA RAIZ DE

LA PLANTA.

Hacia la superficie de la raz el Pb2+ se une a los grupos carboxilo del

cido urnico del muclago. El muclago establece una barrera
importante protegiendo el sistema radicular del metal entrante.
Algunas de las uniones de los metales son liberadas cuando el
muclago es biodegradado (Morel et al., 1986).
Los microorganismos del suelo pueden afectar la disponibilidad del
metal pesado por procesos de biosorcin, bioacumulacin y
solubilizacin. Adicionalmente, las ectomicorrizas pueden influenciar
la entrada, transporte y toxicidad del Pb2+ en abeto noruego
(Marschner et al. 1996).

Plomo en el apoplasto

PARED CELULAR
La retencin de plomo en las races est basada en la unin de Pb2+
hacia iones con sitios intercambiables sobre la pared celular formando
depsitos en la misma. Esta precipitacin extracelular corresponde
principalmente a la forma de carbonato de plomo.

La adicin de quelantes sintticos, tal como H-EDTA o EDTA, en

combinacin con un bajo pH, previene la retencin de Pb2+en la
pared celular, permitiendo su absorcin y translocacin hacia la parte
area (Jarvis y Leung, 2002), siendo la localizacin del metal mayor
en races que en otras partes de la planta. El Pb2+ se une
fuertemente a los grupos carboxilo del cido galacturnico y al propio
cido galacturnico en la pared celular, el cual restringe su transporte
va apoplasto (Rudakova et al., 1988).
MEMBRANA PLASMTICA
En general, las plantas dicotiledneas acumulan significativamente
altas cantidades de plomo en races en comparacin con las races de
las plantas monocotiledneas
El plomo transportado desde el suelo hacia las clulas tiene que
cruzar la membrana plasmtica de las clulas de la raz. Una posible
va de transporte de plomo a travs de la membrana plasmtica
parece que es a travs de los canales catinicos de la msma, tales
como canales de Calcio. En este sentido, ha sido caracterizado un
canal de Ca+2 operado por voltaje en la membrana plasmtica de raz
en trigo y maz
encontraron que el Pb2+ inhibe significativamente el voltaje medido
como consecuencia de la actividad de los canales de Ca+2 en el
plasmalema de races de trigo. La inhibicin de los canales de Ca+2
por Pb2+ puede originarse por bloqueo del canal por el Pb2+ o debido
a transporte competitivo de Pb2+ a travs del canal de Ca+2.
Los bloqueadores de los canales del calcio son capaces de inhibir la
proliferacin celular y la falta de calcio ocasiona la apoptosis o muerte
celular.
Por otra parte, el Ca2+ bloquea el transporte de Pb2+ dentro de la
raz y, en consecuencia, disminuye la toxicidad por Pb2+ sobre el
crecimiento de la misma. El efecto protector del Ca+2 sobre la
toxicidad del Pb2+ puede ser relacionada con su inhibicin para ser
acumulado el metal pesado en la punta de la raz, sitio potencialmente
blanco de la toxicidad del Pb2+. El Mg2+, a pesar de que bloquea
tanto como el calcio la absorcin de Pb2+, no mejora la toxicidad por
Pb2+ sobre el crecimiento de la raz tanto como el calcio. Estos
resultados sugieren que el efecto protector del Ca+2 sobre la
toxicidad del Pb2+ involucra mltiples mecanismos, incluyendo la
competicin para entrar, y que el Pb2+ y el Cd2+ pueden competir
con cationes divalentes por el transporte dentro de las races de
plantas de arroz.

TRANSPORTE DE PLOMO EN LA RAZ DE LA PLANTA

El plomo se mueve predominantemente dentro del apoplasto de la
raz en una forma radial a travs del crtex y se acumula cerca de la
endodermis. La endodermis acta como una barrera parcial al
movimiento de plomo entre la raz y la parte area. Tal y como
muestran la mayora de datos referidos a la elevada acumulacin de
plomo en races comparada con la de la parte area
El transporte limitado de plomo desde las races hacia otros rganos
es debido a la barrera de la endodermis de la raz. Parece ser que la
banda de Caspari de la endodermis es el mayor factor limitante que
restringe el transporte de plomo dentro del tejido del cilindro central.
La posibilidad de transporte simplstico del plomo ha sido demostrada
en races de cebolla e hipoctilos de berro (Wierzbicka, 1987). Altas
concentraciones de plomo causan lesiones e interrupcin en la
funcin de la barrera del plasmalema tanto en la permeabilidad
selectiva del plasmalema como en el tonoplasto.
Se ha demostrado que el plomo se retiene ms en la superficie del
plasmalema que en las paredes celulares. El plomo puede entrar en
clulas daadas junto con otros componentes como determinados
colorantes, los cuales no entran en clulas no daadas (Seregin et al.,
2004).
El patrn de distribucin de plomo en la raz difiere considerablemente
dependiendo de concentraciones de plomo y variando segn la
concentracin (Seregin et al., 2004). A bajas concentraciones de
plomo predomina el flujo de iones plomo en el apoplasto, mientras
que a altas concentraciones, la barrera funcional de plasmalema es
daada y una gran cantidad de plomo penetra dentro de las clulas.
El contenido de plomo en varios rganos de la planta tiende a
decrecer en el siguiente orden: races > hojas > tallos > inflorescencia
> semillas. Sin embargo, este orden puede presentar variaciones
intraespecficas.
En plantas de cebolla (Allium cepa), el plomo absorbido es localizado
en altas
Concentraciones en las puntas de la raz seguidas por partes
proximales de la raz, mientras que bajas concentraciones han sido
encontradas en la base de la raz (Michalak y Wierzbicka, 1998). Las
hojas difieren su capacidad para acumular plomo dependiendo de la
edad. El mximo contenido de plomo es encontrado en hojas
senescentes y el mnimo en hojas jvenes (Godzik, 1993).
Estudios ultraestructurales han revelado que cantidades variables de
depsitos de plomo estn presentes principalmente en el espacio
intercelular, pared celular y vacuolas, mientras que pequeos
depsitos de este metal han sido vistos en el retculo endoplasmtico,
dictiosomas y vesculas derivadas de los mismos. El factor por el cual

el plomo es encontrado en el retculo endoplasmtico y dictiosomas

est aparentemente relacionado con la secrecin del metal de la
superficie celular dentro de la vacuola. Puesto que una pequea
cantidad de plomo alcanza el ncleo, cloroplastos y mitocondrias, es
lgico suponer que ejerce su efecto txico sobre estos orgnulos.

2. EFECTOS BIOLOGICOS DE LA FITOTOXICIDAD DE Pb E

PLANTAS EXPUESTAS A ALTAS Y BAJAS CONCENTRACIONES
DE Pb.
EFECTOS FISIOLGICOS
La fitotoxicidad por plomo ocasiona desordenes en las actividades
fisiolgicas normales de las plantas hasta matar eventualmente las
clulas a altas concentraciones (Ernst, 1998; Seregin e Ivanov, 2001).
Los principales procesos fisiolgicos afectados son la actividad
enzimtica, la nutricin mineral, el potencial hdrico, el estatus
hormonal, la estructura de la membrana y el transporte de electrones.
Los sntomas de toxicidad por Pb pueden dividirse en sntomas no
especficos y especficos.
los sntomas visuales no especficos consisten en una inhibicin
rpida del crecimiento radicular, reduccin del rea foliar, clorosis y
aparicin de manchas pardo-rojizas fenlicas en tallos, pecolos y
hojas, y necrosis folia
Los sntomas especficos consisten en una disminucin del porcentaje
e ndice de germinacin, de la proporcin longitud radicular/parte
area, del ndice de tolerancia a plomo y mercurio, y del peso seco de
las races y de la parte area.
I)

A altas concentraciones de Pb

Los efectos ocasionados por el plomo a altas concentraciones son:

Disminucin del 14 al 30 % en la germinacin de semillas de

arroz y reduccin del crecimiento de semillas de 13 a 45 % con
1mM Pb (Verma y Dubey, 2003)
Reduccin del nmero de semillas en germinacin y
encogimiento del hipoctilo de Lupinus (Wozny, et al., 1982).
Inhibicin de crecimiento de la raz a 10-2 - 10-6 M Pb in vitro o
con un contenido superior a 10 mg / kg de contenido de plomo
en el suelo (Breckle, 1991).
A nivel celular el plomo inhibe las actividades de enzimas que
contienen grupos sulfhidrilo (-SH) necesarios para su actividad
(Van Assche y Clijsters, 1990).

II)

A bajas concentraciones de Pb

Los efectos ocasionados por el plomo a bajas concentraciones

son:
Mayor sensibilidad en el desarrollo y la extensin de la raz
principal a diferencia de las races laterales (Obroucheva et
al., 1998).
Incremento del contenido de plomo en las races en relacin
directa con la concentracin en niveles de entre 0.1 y 2 M
de Pb en Picea abies. Paralelamente, cuando se realiza una
exposicin de las plantas a 0.5 M de Pb durante 4 semanas
se reduce el crecimiento de las races primaria, secundaria y
terciaria (Godbold y Kettner, 1991).
En semillas se ha observado una fuerte inhibicin del
crecimiento de la raz primaria y una corta zona de
ramificacin cuyas races laterales son ms compactas,
ocupando una posicin mucho ms ntima en la punta de la
raz con respecto a races crecidas en la ausencia de plomo
(Obroucheva et al., 1998)

DESCRIBA LOS EFECTOS BIOQUIMICOS DEL Pb EN LAS

PLANTAS
Efectos bioqumicos
Los primeros estudios sobre la accin del plomo a nivel bioqumico
se centraron en descripciones sobre la considerable reduccin de
la sntesis de DNA, RNA y protenas en el embrin axial, y en los
endospermos de plantas de arroz en germinacin sometidos a
concentraciones crecientes de plomo
Asimismo se ha aceptado que la toxicidad por plomo adems de
disminuir los niveles del contenido de protenas en tejidos tambin
causa alteraciones significativas en la composicin lipdica
En el caso de P. vulgaris y Z. mays se observaron cambios
sustanciales a nivel de glucolpidos, especialmente monogalactosil
y diacilgliceroles, los cuales fueron asociados con alteraciones en
la permeabilidad de la membrana en los cloroplastos (Stefanov et
al., 1993). Especficamente, al incubar cloroplastos con
concentraciones constantes de sales de plomo, los niveles de

cidos grasos insaturados ascendieron notablemente con respecto

a los cidos grasos saturados.
Efectos sobre las actividades enzimticas
Las actividades de un amplio rango de enzimas de diferentes vas
metablicas son afectadas por el plomo. La inhibicin del 50 % de
la mayora de enzimas se produce a una concentracin de entre
10-5 y 210-4 M de plomo. A esta concentracin se hace referencia
en trminos de la constante de inactivacin (Ki).
La inhibicin sobre la actividad enzimtica es causada por la
interaccin de Pb con los grupos sulfidrilo (SH) que estn
presentes en el centro activo de los enzimas, los cuales son
esenciales para la estabilizacin de su estructura terciaria. Adems,
la reaccin con los grupos (SH) puede bloquear los grupos
COOH con iones plomo, lo que parecer tambin juega un papel
importante en la inhibicin de la actividad enzimtica bajo el
tratamiento con este metal (Levina, 1972).
El plomo forma un mercptido con el grupo (SH) de la cistena y
tambin forma complejos con grupos fosfato. La inhibicin de
metaloenzimas bajo tratamiento con plomo parece ser debida a un
desplazamiento del metal esencial por plomo. La inhibicin de la
actividad enzimtica debdida al plomo no parece ser especiifica
para este metal : tales inhibiciones son tambin evidente con otros
cationes que tienen comparables afinidades por grupos proteicos
funcionales. Sin embargo, las actividades de algunos enzimas se
han visto incrementadas al ser expuestas a plomo. Tales resultados
aparentemente conciernen a cambios en la sntesis enzimtica,
inmovilizacin de los inhibidores de los enzimas, o como un
resultado efector de molculas, las cuales son sintetizadas bajo
fitotoxicidad con plomo.

PROCESOS

ESPECIES

EFECTO

VEGETALES

DEL Pb

Pennisetum
typhoideum

(-)

Prassad &
Prassad (1987)

Ribulosa-1,5 bis
fosfato
Fosfoenol
Piruvato
Carboxilasa

Avena sativa

(-)

Zea mays

(-)

Moustakas et al.
(1994)
Vojtechova

Ciclo de Calvin

Gliceraldehido 3-

Va Pentosa

fosfato
dehidrogenasa
Ribulosa 5
fosfato
kinasa
Glucosa 6-fosfato

Spinach
oleracea
Spinach
oleracea

Fosfato

Dehidrogenasa

Asimilacin

Nitrato reductasa

De N2

Glutamina
sintetasa
Deoxyribonucleas
a

METABLIC
OS
Sntesis de
Clorofila
Fijacin de CO2

ENZIMAS

-amino levulinato

dehidrogenasa

REFERENCIA
S

& Leblova (1991)

(-)

Vallee & Ulmer

(1972)

(-)

Vallee & Ulmer

(1972)

(-)

Vallee & Ulmer

(1972)

Cucumis
sativus
Glicine max

(-)

Burzynski (1984)

(-)

Lee et al. (1976)

Hydrilla

(+)

Jana & Choudhary

(1982)

Ribonucleasa

verticillata
Hydrilla

(+)

Jana & Choudhari

(1982)

Proteasa

verticillata
Hydrilla

(+)

Jana &
Choudhari
(1982)

Alcalina fosfatasa

verticillata
Hydrilla

(+)

Jana & Choudhari

(1982)

Acido fosfatasa

verticillata
Glycine max

(+)

Lee et al. (1976)

Metabolismo

-amilasa

Oryza sativa

(-)

Mukherji & Maitra

(1977)

De Glucosa
Generacin de

ATP sintetasa

(-)

Energa

ATPasa

Zea mays

(-)

Metabolismo

Catalasa

Oryza sativa

(-)

Antioxidativo

Guiacol
peroxidasa
Ascorbato
oxidasa

Glicine max

(+)

Tu Shu &
Brouillette (1987)
Tu Shu &
Brouillette (1987)
Verma & Dubey
(2003)
Lee et al. (1976)

Phaseolus
aureus

(+)

Enzimas
Nucleolticas

Hidrlisis de
Protenas
Fosfohidrolasa

Spinach
oleracea

Zea mays

Rashid &
Mukherjee (1991)

Ascorbato
peroxidasa
Glutatin
reductasa
Superxido
dismutasa

Oryza sativa

(+)

Oryza sativa

(+)

Oryza sativa

(+)

Verma & Dubey

(2003)
Verma & Dubey
(2003)
Verma & Dubey
(2003)

4 EXPLIQUE LOS EFECTOS DEL PLOMO EN LA FOTOSINTESIS,

RESPIRACION Y ABSORCION DE NUTRIENTES.

EFECTOS SOBRE LA FOTOSNTESIS

El proceso de la fotosntesis de las plantas es alterado en los

cloroplastos por la toxicidad por plomo causando innumerables
efectos adversos. Sin embargo, se pueden resumir a continuacin
para facilitar su comprensin:
Disminucin de la tasa fotosinttica
Distorsin de la ultraestructura del cloroplasto
Restriccin de sntesis de clorofila, plastoquinona y
carotenoides o Obstruccin de transporte de electrones
Inhibicin de actividades enzimticas del ciclo de
Calvin. o Deficiencia de CO2 como un resultado de
cierre estomtico.
Los cloroplastos son los principales rganos indicadores de los daos
ocasionados por el plomo sobre el proceso metablico de la
fotosntesis. Plantas de Ceratophyllum demersum crecidas en medio
acutico con Pb (NO3)2 mostraron distintos cambios en la
ultraestructura de los cloroplastos (Rebechini y Hanzely, 1974). Las
clulas de las hojas de tales plantas exhibieron reduccin de
apilamientos de granas junto con una reduccin en la cantidad de
estroma en relacin con la del sistema lamelar. Tambin exhibieron
ausencia de granos de almidn. El tratamiento con plomo tambin
cambi la composicin lipdica de las membranas tilacoidales en
hojas de Zea mays L. (Stefanov et al., 1995).
El plomo perjudica la absorcin de elementos esenciales tales como
hierro y magnesio en plantas de pepino y, como consecuencia, inhibe
la sntesis de clorofila
(Burzynski, 1987). Estos daos de los aparatos fotosintticos son
debido a la afinidad del plomo por ligandos de protenas N- y S(Ahmed y Tajmir-Riahi, 1993). Asimismo se ha observado degradacin
de la clorofila debido al incremento de la actividad clorofilasa
(Drazkiewicz, 1994). Tambin se ha hallado que la clorofila b es ms
afectada que la clorofila a por tratamiento con plomo en abetos de
Noruega (Vodnik et al., 1999).
Acerca del efecto sobre la obstruccin del transporte de electrones
(Rashid et al., 1994) se sabe que el plomo afecta el sitio donador y el

sitio receptor del fotosistema II (PS II), el complejo citocromo b/f y el

fotosistema I (PS I). Esto ha sido en su mayor parte aceptado ya que
la inhibicin del transporte de electrones del PS I es ms sensible que
la del PS II en cloroplastos de espinaca (Mohanty et al., 1989; Sersen
et al., 1998).
El plomo tambin causa una fuerte disociacin del polipptido
extrnseco del complejo disociador de oxigeno del PS II originando
desplazamiento de Ca, Cl- y Mn desde este sitio donador del PSII
(Rashid et al., 1991). Esto hace proponer que los cambios
conformacionales de las LHC II (Light Harvesting Complexes)
subunidades fundamentales del PSII, conllevan al no ensamblaje de
los componentes redox, de los cofactores y de las protenas
extrnsecas, conduciendo a la degradacin de las subunidades PSII
(Ahmed y Tajmir-Riahi, 1993). En suma, el plomo in vitro altera los
complejos protena-pigmento responsables de la absorcin de la
radiacin incidente.

.
EFECTOS SOBRE LA RESPIRACIN Y
CONTENIDO EN ATP
En relacin con los enzimas fotorrespiratorios el mecanismo sobre la
estimulacin de la respiracin por plomo an no est claro. Se
plantean varias incongruencias; una de stas es que se inhibe la
actividad cloroplstica de la ATP sintetasa /ATPasa (Tu Shu y
Brouillette, 1987) y no se afectan otros enzimas como NADHhidroxipiruvato reductasa, glicolato oxidasa y el enzima NAD-mlico
(Romanowska et al., 2002) bajo exposicin a plomo.
Aunque la sensibilidad de la fotofosforilacin a los iones de los
metales pesados est bien documentada, no hay un acuerdo general
sobre el sitio de accin ni sobre el mecanismo sealado. Solamente
algunos experimentos pueden sugerir diferentes mecanismos
existentes para la accin de los iones de los metales pesados sobre la
actividad ATPasa cloroplstica cuando estos iones metlicos son
aplicados bajo condiciones in vivo o in vitro.

.
EFECTOS SOBRE LA ABSORCIN DE
NUTRIENTES
Muchas de las acciones atribuidas al plomo parecen ser indirectas
como un resultado del desequilibrio mineral dentro de los tejidos. As,
se sabe que altas concentraciones de plomo en el suelo causan
desequilibrio en las proporciones de nutrientes minerales dentro de
los tejidos de las plantas en crecimiento.

Cambios significativos se han observado tanto en los contenidos de

nutrientes como en las proporciones internas de nutrientes en plantas
bajo la toxicidad con plomo (Kabata-Pendias y Pendias, 1992). En la
mayora de los casos, el plomo bloquea la entrada de cationes (K+,
Ca+2, Mg+2, Mn+2, Zn+2, Cu+2, Fe+3) y aniones (NO3-) en el
sistema radicular
Hasta el momento, los mecanismos sugeridos para regular la entrada
de micro- y macronutrientes bajo toxicidad por plomo consisten en el
mecanismo fsico y qumico.
El primer mecanismo, se relaciona con el tamao de los radios inicos
del metal, que pueden actuar bloqueando el acceso de muchos iones
en los sitios de absorcin de las races (Godbold y Kettner, 1991).
Aunque tanto el contenido de plomo en la punta como en la base de
la raz pueden parecer similares, el plomo altera los niveles de
elementos minerales en las mismas.
El plomo influye en la distribucin total de los elementos nutritivos
dentro de los diferentes rganos de la planta. Ya que, la distribucin
total de Mn y S cambi a favor de la raz por encima de la parte area
bajo condiciones de toxicidad con plomo, lo cual representa retencin
de estos iones en la raz. Con respecto al contenido de fsforo, en
Pisum sativum siempre se han hallado correlaciones negativas con el
contenido de plomo en el suelo, y tambin se ha detectado que la
actividad fitasa es afectada por el contenido de plomo (Paivoke,
2002).
El segundo mecanismo sugerido para explicar la disminucin de la
absorcin de micro y macronutrientes bajo toxicidad con plomo se
relaciona con el desorden que induce el plomo en el metabolismo
celular causando cambios en las actividades enzimticas de la
membrana y en la estructura de la membrana. Aparentemente, un
ejemplo puede ser el eflujo de K+ desde las races, el cual es debido
a la extrema sensibilidad de la ATPasa y de los grupos SH de las
protenas de la membrana celular hacia el plomo.

RECOMENDACIONES:

 Utilizar guantes en el movimiento de las semillas para evitar su

contaminacin con algunos agentes externos.
Para la medicin de la radcula y el hipocotilo utilizar hojas
milimetradas para una mayor precisin.
Utilizar proteccin para evitar ser afectados con el xenobiotico.
En el momento de rociar el contaminante en la placa,
asegurarnos que este equitativamente rociado por toda la
circunferencia.
Seleccionar las semillas adecuadas y de calidad, para prevenir
que el ensayo realizado sea alterado.

BIBLIOGRAFIA

Annimo. (2006). CRITERIOS DE CALIDAD DE SUELOS Y DE

AGUAS O EFLUENTES TRATADOS PARA USO EN RIEGO. 2015,
de annima. Sitio web:
http://bibliotecadigital.sag.gob.cl/documentos/medio_ambiente/criter
ios_calidad_suelos_aguas_agricolas/pdf_aguas/anexo_A/plomo.pd
f
Cesar Marc. (2005). Bioensayos de toxicidad. 2015, de
monografias Sitio web:
http://www.monografias.com/trabajos12/neon/neon.shtml.
Annimo. (2014). Ensayo de toxicidad aguda con semillas de
lechuga Lactuca sativa L.. 2015, de Universidad Nacional de
Avellaneda Sitio web:
http://ibio.ddns.net/Ensayo_de_Ecotoxicidad.pdf
Herman Tarazona Mirabal. (2011). FITOTOXICIDAD DE COBRE Y
LECHUGA. 2015, de concytec. Sitio web:
http://www.concytec.gob.pe/portalsinacyt/images/stories/corcytecs/
huanuco/fitotoxicidad_de_cobre_en_lechuga_unh.pdf

P. Bohrquez-Echeverry, C. Campos-Pinilla. (2007). EVALUACIN

DE Lactuca sativa Y Selenastrumcapricornutum COMO
INDICADORES DE TOXICIDAD ENAGUAS. 2015, de Pontificia
Universidad Javeriana Sitio
web:http://www.academia.edu/2915582/EVALUACI
%C3%93N_DE_Lactuca_sativa_Y_Selenastrum_capricornutum_C
OMO_INDICADORES_DE_TOXICIDAD_EN_AGUAS
Rubn Sierra Villagrana. (2010). Fitorremediacin de un Suelo
Contaminado con Plomo por Actividad Industrial. Sitio web:
http://www.monografias.com/trabajospdf/fitorremediacion/fitorremediacion2.shtml
CASTILLO BRAVO Azael, NETZAHUAL NAVA Marina, PREZ
PREZ Fanny y GUEVARA GARCA Jos Antonio. (2006).
ESTUDIO DE LA ABSORCIN DE METALES PESADOS POR LA
PLANTA DE NOPAL OPUNTIA FICUS INDICA.. 2015, de
Laboratorio de Investigacin en Bioinorgnica y Biorremediacin
(LIByB). Departamento de Ciencias Bsicas, Universidad
Autnoma de Tlaxcala Sitio web:
http://www.uaemex.mx/Red_Ambientales/docs/memorias/Resumen
/TA/RC/TAC-26.pdf
P.delaVega. (abril 24, 2014). La fitorremediacin: plantas para tratar
la contaminacin ambiental. 2015, de La Mama Pacha Sitio web:
http://lamamapachama.com/2014/04/24/la-fitorremediacion-plantaspara-tratar-la-contaminacion-ambiental/
Anlisis del crecimiento de lechuga Lactuca sativa L.
'Bativia'cultivada en un suelo salino de la Sabana de Bogata, 19 de
febrero 2009