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UNIDAD IZTAPALAPA
Manual de prcticas
de laboratorio
QumicaOrgnica
analticaI
Qumica
Jos Ramn Verde Calvo
Elisa Vega vila
Francisco
Cruz Sosa
Javier
Isidoro Lpez
Cruz
Ma. Elena Estrada Ziga
Ignacio Lpez y Clis
Frida P. Malpica Snchez
Felipe
Orta
Jorge Armando
HaroMartnez
Castellanos
Clara Pelayo Zaldvar
Jos Mara Adolfo Barba Chvez
Mara del Carmen Prez Csar
Patricia Ruiz Snchez
Gloria Maribel Trejo Aguilar
Luz Mara Zenit Tovar Castro
Prefacio
En el ao 2002 se actualizaron los contenidos temticos de las asignaturas que componen las licenciaturas de Ingeniera de los
Alimentos e Ingeniera Bioqumica Industrial. Para llevar a cabo esta actualizacin se crearon academias de profesores al interior
del Departamento de Biotecnologa y de la Divisin de Ciencias Biolgicas y de la Salud, entre ellas la Academia de Qumica Analtica. Posteriormente, se inici la revisin de los planes de estudio de ambas licenciaturas y su adecuacin a un nuevo modelo
educativo, con base en esta nueva concepcin y teniendo como marco de referencia las Polticas Operativas de Docencia de la
Unidad Iztapalapa, se plantearon nuevos planes de estudio y elaboraron las cartas descriptivas de los cursos que los componen.
Como resultado de este proceso, las asignaturas de Qumica Analtica I y Qumica Analtica II, que se imparten en los trimestres
V y VII-VIII, quedaron fusionadas en una sola denominada Qumica Analtica, la cual se ubic en el trimestre II de los nuevos
programas de licenciatura. Asimismo, se propuso como materia optativa Qumica Analtica Avanzada para ser cursada en uno de
los trimestres VII al XI y que cubre en su totalidad procedimientos analticos instrumentales.
El presente manual contiene las prcticas de laboratorio que acompaan al nuevo programa de Qumica Analtica y que
fueron elaboradas por los profesores de la Academia de Qumica Analtica. Considerando la normatividad existente en cuanto
al uso de los servicios e instalaciones de los laboratorios de docencia de nuestra unidad, el manual se inicia con un captulo
que contiene las medidas de seguridad que se deben conocer y adoptar en los laboratorios de docencia, as como informacin
relativa a grados o calidades de reactivos qumicos, el sistema internacional de unidades, las cifras significativas y los conceptos
de exactitud y precisin.
Las diez prcticas que integran el manual incluyen la preparacin de disoluciones y formas de expresar su concentracin,
gravimetra, valoracin de disoluciones y uso de patrones primarios, disoluciones amortiguadoras, titulaciones cido base y por
xido-reduccin, cromatografa en columna, capa fina y papel, y espectrofotometra en la regin del visible. Asimismo, el manual
contiene algunos apndices con informacin relativa al uso apropiado de varios instrumentos y materiales de laboratorio, y guas
para la operacin de algunos equipos. Considerando que el manual va dirigido a estudiantes de las licenciaturas de Ingeniera de
los Alimentos e Ingeniera Bioqumica industrial, cuando fue posible, se incorporaron como materiales de anlisis tanto alimentos
como formulaciones farmacuticas.
No se incluyeron prcticas de cromatografa de gases (CG) ni de cromatografa de lquidos de alta resolucin (HPLC) en este
curso bsico, debido a que son temas que se cubren ampliamente en forma terica y prctica en el curso de Qumica Analtica
Avanzada, en su lugar se elaboraron dos videos que ya se encuentran a disposicin de los estudiantes en la pgina de la Academia de Qumica Analtica (http:/docencia.izt.uam.mx).
Cabe mencionar que este manual no sustituye a las publicaciones La Teora y la Prctica en el Laboratorio de Qumica
General para Ciencias Biolgicas y de la Salud, La Teora y la Prctica en el Laboratorio de Qumica Analtica I y al Manual de
Prcticas de Qumica Analtica II, que se encuentran en lnea a travs del Sistema Multimedia de Apoyo a la Docencia de nuestra
unidad (http/:www.uamelinea.uam.mx) y que han sido y continuarn siendo materiales didcticos tiles para la enseanza de
la qumica analtica.
Finalmente, una breve mencin a la pgina de la Academia de Qumica Analtica. Esta pgina se elabor con el propsito de
poner a la disposicin de los estudiantes materiales e informacin que faciliten y complementen su aprendizaje, y para establecer
una comunicacin continua entre ellos y los profesores que impartimos estas asignaturas. Les invitamos cordialmente a que
visiten esta pgina y a que den sus opiniones del material aqu presentado. Asimismo, todas las observaciones y comentarios
acerca del contenido del presente manual son bienvenidos.
Los Autores
Contenido
Lo que debes saber antes de iniciar el trabajo en el laboratorio.
Medidas de seguridad en laboratorios de docencia . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 9
Prctica 1.
Preparacin de disoluciones. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 21
Prctica 2.
Prctica 3.
Prctica 4.
Disoluciones amortiguadoras . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 43
Prctica 5.
Prctica 6.
Prctica 7.
Cromatografa en columna. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 63
Prctica 8.
Prctica 9.
Prctica 10.
Apndice 1.
Apndice 2.
Jos Ramn Verde/Elisa Vega/Javier Isidoro Lpez/Ma. Elena Estrada/Frida P. Malpica/Felipe Martnez/Clara Pelayo/
Mara del Carmen Prez/Patricia Ruiz/Gloria Maribel Trejo/Luz Mara Zenit
Jos Ramn Verde/Elisa Vega/Javier Isidoro Lpez/Ma. Elena Estrada/Frida P. Malpica/Felipe Martnez/Clara Pelayo/
Mara del Carmen Prez/Patricia Ruiz/Gloria Maribel Trejo/Luz Mara Zenit
las asignaturas de Qumica Analtica I y Qumica Analtica II en el nivel de licenciatura. Desarrolla investigacin en el rea de
Ingeniera de Procesos Biotecnolgicos. Ha publicado artculos de investigacin en revistas internacionales y ha participado en
eventos de difusin cientificos nacionales e internacionales. rusanp_2002@yahoo.com.mx
Elisa Vega vila. Obtuvo la licenciatura en Qumica en la Escuela de Ciencias Qumicas de la Universidad Autnoma de
San Luis Potos. Obtuvo la Maestra en Biologa Experimental y el Doctorado en Ciencias Biolgicas en la Universidad Autnoma
Metropolitana. Labora en la UAM-I desde 1975, en donde actualmente es Profesora Titular C de tiempo completo. Imparte cursos
de Qumica General, Qumica Orgnica, Qumica Analtica y Mtodos Instrumentales en el nivel licenciatura, realiza actividades
docentes en el posgrado en Biologa Experimental. Ha publicado, con profesores de la Divisin de Ciencias Biolgicas y de la
Salud, libros que apoyan la enseanza de qumica general y qumica analtica en la DCBS de la UAM-I. Tambin ha publicado
artculos de investigacin y difusin en revistas nacionales e internacionales. vega@xanum.uam.mx
Jos Ramn Verde Calvo. Doctor en Ciencias por la Universidad Nacional Autnoma de Mxico. Efecta actividades de docencia e investigacin en enologa, alimentos fermentados, inocuidad alimentaria y productos nutracuticos en el Departamento
de Biotecnologa de la Universidad Autnoma Metropolitana - Unidad Iztapalapa. Es Profesor Investigador Titular desde 1986.
Ha participado en la elaboracin de 6 libros de texto, dos de los cuales son sobre qumica analtica; asimismo, ha colaborado
en la elaboracin de varios captulos de libros, publicaciones cientficas nacionales e internacionales, asesoras de tesis de licenciatura y posgrado y ha impartido ms de 200 cursos de licenciatura y posgrado adems de haber asumido diversos cargos de
participacin universitaria. Pertenece al Sistema Nacional de Investigadores. jrvc@xanum.uam.mx
Gloria Maribel Trejo Aguilar. Obtuvo su licenciatura en Ingeniera Bioqumica Industrial y su Maestra en Ingeniera Qumica
en la Universidad Autnoma Metropolitana Unidad Iztapalapa. Actualmente, est por concluir el Doctorado en Ciencias en la
misma institucin. Ha impartido cursos de licenciatura y posgrado durante los ltimos 10 aos en las divisiones de CBS y CBI de
la UAMI. Ha sido coautora de manuales de Laboratorio. Actualmente imparte Qumica Analtica I a nivel licenciatura y Mtodos
Analticos Instrumentales a nivel posgrado. Es responsable del Laboratorio de Cromatografa y Microscopa, en donde desarrolla
actividades de instruccin y capacitacin tcnica para alumnos de posgrado, adems de colaborar en proyectos de investigacin.
gmta@xanum.uam.mx
Luz Mara Zenit Tovar Castro. Realiz sus estudios de licenciatura en la Universidad Veracruzana en Xalapa, Veracruz obteniendo el ttulo de Qumico Farmacutico Bilogo, y sus estudios de Maestra y Doctorado en Biotecnologa en la Universidad Autnoma Metropolitana Unidad Iztapalapa. Ha sido Profesora Asociada en este mismo plantel desde 2007, en donde ha impartido
cursos de Anlisis Funcional Orgnico y los laboratorios de Qumica Orgnica I, Qumica Analtica I y II, y Bioqumica y Fisiologa
Vegetal; actualmente imparte el laboratorio de Qumica Analtica II. As mismo, ha colaborando en diferentes proyectos de investigacin relacionados con procesos de fermentacin en medio slido derivando en la publicacin de artculos de investigacin y
difusin en revistas nacionales e internacionales. Pertenece al Sistema Nacional de Investigadores. luzzenit@hotmail.com
Qu es la Seguridad?
Es un conjunto de medidas tcnicas, educacionales, mdicas y psicolgicas empleadas para prevenir accidentes, tendientes a
eliminar las condiciones inseguras del ambiente y a instruir o convencer a las personas acerca de la necesidad de implementar
prcticas preventivas.
El alumno estar obligado a utilizar el llamado Equipo de Proteccin Personal (EPP) y seguir al pie de la letra las indicaciones
dadas por el profesor acerca de cmo preparar reactivos y como llevar a cabo la prctica. El EPP se refiere a los objetos diseados
para proteger a los alumnos y al profesor durante su estancia en el laboratorio, stos son de uso personal y podrn variar segn
lo requiera la prctica a realizar.
Lentes de seguridad. Tambin llamados gafas, goggles, o anteojos panormicos, deben proteger toda la superficie frontal y
lateral de los ojos y ser de un material transparente que permita una completa visibilidad (Fig. 2).
Figura No. 2. Lentes de seguridad para el manejo de sustancias corrosivas como los cidos fuertes.
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Mascarilla. Protege las vas respiratorias de polvos y/o vapores txicos o corrosivos. Las hay con diferentes filtros, para polvos
finos, vapores orgnicos y cidos (Fig. 3).
Figura No. 3. Mascarilla protectora contra polvos y/o vapores txicos o corrosivos.
Guantes. Los hay de diferentes materiales, de ltex o neopreno para el trabajo habitual de laboratorio, de asbesto para sujetar
objetos calientes y de neopreno para manejo de cidos (Fig. 4).
Para objetos calientes
Para manejo de cidos
Figura No. 4. Diferentes tipos de guantes para uso en el laboratorio.
Zapato. Se recomienda usar zapato cerrado, de suela antiderrapante. La zapatilla de tacn alto, las sandalias y en general los
zapatos abiertos no se consideran adecuados para trabajo de laboratorio.
Otras recomendaciones. Traer el cabello recogido, evitar el uso de anillos, pulseras y gorras, y en el caso de las mujeres, las
uas largas no son apropiadas para el trabajo de laboratorio y no se recomienda el uso de medias.
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En el caso de salpicaduras de cidos sobre la piel lavar inmediatamente con agua abundante, teniendo en cuenta que en el
caso de cidos concentrados la reaccin con el agua puede producir calor. Es conveniente retirar la ropa de la zona afectada
para evitar que el corrosivo quede atrapado entre sta y la piel.
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No se deben oler directamente los vapores de sustancias voltiles, cuando se requiera dirija los vapores con las manos hacia
la nariz para percibirlos.
Nunca regrese reactivos (slidos o lquidos) al recipiente original, a menos que est seguro de su buen manejo y de que no
estn contaminados.
Grado reactivo
Estas sustancias cumplen las especificaciones del Comit de Reactivos Qumicos de la Sociedad Qumica Americana (Reagent
Chemical Committee of the American Chemical Society) y son los indicados para el trabajo analtico. Se identifican por las siglas
en ingls ACS que aparecen en la etiqueta, la cual adems declara el porcentaje mximo de impurezas permitido por dicha
entidad internacional, as como el porcentaje de las impurezas que contiene.
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Nivel de riesgo
4 Mortal
3 Muy peligroso
2 Peligroso
1 Poco peligroso
0 Sin riesgo
Inflamabilidad
4 Debajo de 25C
3 Debajo de 37C
2 Debajo de 93C
1 Sobre 93C
0 No se inflama
Inflamabilidad
Salud
Riesgo
especfico
OX -Oxidante
COR-Corrosivo
Radiactivo
W No usar agua
ALC -Alcalino
Reactividad
Riesgo especfico
Reactividad
0 Estable
1 Inestable si se calienta.
2 Inestable en caso de cambio qumico violento.
3 Puede explotar en caso de
choque o calentamiento.
4 Puede explotar.
Figura 5. Smbolo en forma de rombo o diamante de la National Fire Protection Association (NFPA).
En cuanto a los smbolos de riesgo empleados por las empresas fabricantes de reactivos qumicos, algunos se encuentran ejemplificados en la Fig. 6. Finalmente, la Fig. 7 presenta algunos smbolos de riesgo empleados en laboratorios e industrias.
Corrosivo
Corrosive
Corrosif
Irritante
Irritant
Irritant
Xi
Txico
Toxic
Toxique
Explosivo
Explosive
Explosible
Comburente
Oxidising
Comburant
Nocivo
Hamful
Nooil
Muy Txico
Very Toxic
Trs Toxique
T+
Xn
Peligroso
para el Medio
Ambiente
Inflamable
Flammable
Inflammable
Figura 6. Algunos smbolos de riesgo empleados por las compaas fabricantes de reactivos qumicos.
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ATENCION
ATENCION RIESGO
DE INCENDIO
ATENCION RIESGO
DE EXPLOSION
ATENCION RIESGO
DE CORROSION
ATENCION RIESGO
DE TOXICO
ATENCION RIESGO
DE RESBALAR
ATENCION RIESGO
CAIDA DE OBJETOS
ATENCION RIESGO
VEHICULOS INDUSTRIALES
ATENCION RIESGO
GARGAS SUSPENDIDAS
ATENCION HOMBRES
TRABAJANDO
ATENCION MAQUINAS
EN MOVIMIENTO
RIESGO CHOQUE
ELECTRICO
ATENCION
PEATONES
ATENCION MATERIAL
INFECCIOSO
ATENCION RIESGO
DE RADIOACTIVIDAD
ATENCION MATERIAL
COMBUSTIBLE
ATENCION RIESGO
DE ELECTROCUCION
ATENCION GAS
ENVASADO
ATENCION PUESTA
A TIERRA
color
Agua
azul
Gas
Amarillo
Aire
verde
Electricidad
rojo
Valor mximo
Valor mnimo
Cifras significativas
23.863 m
23.885 m
23.841 m
Precisin
Se refiere a la dispersin del conjunto de valores obtenidos de mediciones repetidas de una magnitud. Cuanto menor es la
dispersin mayor la precisin. Una medida comn de la dispersin o variabilidad de los datos es la desviacin estndar, la cual
se utiliza para describir la reproducibilidad de los resultados experimentales. Se puede definir como el nivel de similitud entre los
valores numricos de varias medidas de la misma propiedad, realizadas bajo las mismas condiciones experimentales.
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Exactitud
Se refiere a que tan cerca del valor real se encuentra el valor medido. En trminos estadsticos, la exactitud est relacionada con
el sesgo de una estimacin. Cuanto menor es el sesgo ms exacta es una estimacin. La Fig. 8 ilustra ambos conceptos.
Alta exactitud, pero baja precisin.
En la Fig. 8 aparece el resultado de varios tiros con arco hacia un objetivo. La exactitud describe la proximidad de las flechas al
centro del objetivo, las flechas que llegaron ms cerca del centro se consideran ms exactas. Cuanto ms cerca estn las medidas
a un valor real o aceptado, ms exacto es el sistema de medicin.
La precisin, en este ejemplo, es la distancia entre los impactos de las flechas, es decir, que tan distantes quedaron unos de
otros; cuanto ms cercanos entre s hayan quedado estos impactos, ms precisos fueron los lanzamientos. Similarmente, entre
ms cercanos estn los resultados de varias mediciones efectuada, ms preciso ser el sistema de medicin. En s, se puede decir
que la precisin es el grado de repetitividad del resultado.
Hay que notar que el hecho de que las flechas estn muy cercanas entre s es independiente al hecho que estn cerca del
centro del objetivo. Resumiendo, se puede decir que exactitud es el grado de veracidad, mientras que precisin es el grado de
reproducibilidad.
Ejemplo. Un reloj analgico, de manecillas, desplaza su minutero slo de minuto en minuto, si bien lo hace en absoluta
sincrona con el horario oficial o real (el objetivo en el tiro al blanco). Un segundo reloj utiliza minutero, segundero e incluso
est dotado de un sistema de medicin de dcimas de segundo, sin embargo observamos que su horario no coincide plenamente con el horario oficial o real (que sigue siendo el objetivo). Por lo tanto, concluiremos que el primer reloj es altamente exacto,
aunque no sea preciso, mientras que el segundo, es altamente preciso, aunque no se muestra exacto.
La Media Aritmtica
En una medicin experimental se obtiene un resultado, al realizar varias corridas cada una dar un valor distinto, Qu valor se
reportar cmo resultado del ensayo? El resultado numrico representativo de una serie de pruebas es la media aritmtica de
los resultados individuales, la cual se encuentra dividiendo la suma de los resultados entre el nmero de determinaciones en
serie y se expresa matemticamente como sigue:
i Xi = X
N
donde:
X representa la media aritmtica.
Xi representa el resultado numrico de la i-sima corrida
N es el nmero total de corridas.
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El Error Experimental
La exactitud de un resultado se expresa mediante el error experimental que es la diferencia entre el valor real o aceptado (medicin correcta) y el obtenido experimentalmente. El error puede expresarse en por ciento de la medicin correcta o tambin
como un porcentaje de todo el rango de medicin del instrumento utilizado.
E (%) = [dato obtenido dato verdadero o correcto / dato verdadero o correcto] x 100
Otra forma de expresar el error experimental es mediante el error absoluto que es la diferencia entre el valor experimental y el valor verdadero.
Ea = Valor verdadero o correcto Valor experimental
La Desviacin Estndar
La precisin de un resultado se puede expresar mediante la desviacin estndar que es una medida de la dispersin de los
resultados obtenidos experimentalmente.
Ejemplo
Aqu se muestra como calcular la desviacin estndar de un conjunto de datos. Los datos representan la edad de los miembros
de un grupo de nios. { 4, 1, 11, 13, 2, 7 }.
1. Calcular el promedio o media aritmtica
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1 6
x = xi
6 i=1
Sustituyendo N por 6
1
x = (x1 + x 2 + x 3 + x 4 + x 5 + x 6 )
6
1
x = (4 + 1+ 11+ 13 + 2 + 7)
6
x = 6.33 Este es el promedio.
2. Calcular la desviacin estndar
1
xi + x)2
N 1 i=1
1
x i x ) 2 Sustituyendo N - 1 por 5; ( 6 - 1 )
5 i=1
1
x i 6.33) 2 Sustituyendo
5 i=1
1
[(4 6.33) 2 + (1 6.33) 2 + (11 6.33) 2 + (13 6.33) 2 + (2 3.66) 2 + (7 6.33) 2 ]
5
por 6,33
1
[(2.33) 2 + (5.33) 2 + 4.67 2 + 6.67 2 + (4.66) 2 + (0.67 2 )]
5
1
(5.43 + 28.4 + 21.8 + 44.5 + 18.7 + 0.449)
5
119.28
5
23.86
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Bibliografa
Direcciones Electrnicas
El Circo de la Ciencia.
http://ciencias.unizar.es/circo/images/chemistry.jpg
Fundacin CIENTEC
http://www.cientec.or.cr/exploraciones/ponenciaspdf/WagnerCastro.pdf
Ministerio de Trabajo y Asuntos Sociales. Espaa.
http://www.mtas.es/insht/ntp/ntp_459.htm
Universidad de Antioqua. Vicerrectora de Docencia
http://docencia.udea.edu.co/cen/tecnicaslabquimico/01intro/intro01.htm
http://www.texca.com/simbolos.htm
Libros
Osorio Giarldo Rubn D., 2009. Manual de tcnicas de laboratorio qumico. Medellin, Colombia. Ed. Universidad de Anioquia.
Rubinson, Judith, R., Rubinson Kenneth A. 2000 Qumica Analtica Contempornea. New Jersey, U.S.A. Primera edicin. Prentice hall Hispanoamericana, S.A.
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Practica 1
Preparacin de disoluciones
Introduccin
En la naturaleza encontramos dos clases de substancias puras, los elementos y los compuestos, las dems son mezclas. Una
mezcla o dispersin consiste en dos o ms substancias puras, separables por medios fsicos, cuyas propiedades dependen de su
composicin y de las propiedades de las substancias que la componen. Las mezclas son de dos tipos: heterogneas y homogneas. Una mezcla heterognea no es completamente uniforme y sus componentes son distinguibles, en ocasiones, a simple vista
(por ejemplo, una mezcla de azcar y arena). Una mezcla homognea por el contrario tiene apariencia uniforme, las disoluciones
son ejemplos de mezclas homogneas.
En una disolucin, las partculas dispersas son invisibles a simple vista, ya que son partculas de dimensiones atmicas con
dimetro menor de 1 nm, no pueden detectarse por mtodos pticos y atraviesan las membranas permeables, tampoco pueden
separarse por filtracin, ni ultracentrifugacin. Las disoluciones no presentan opalescencia porque las partculas disueltas no
dispersan la luz pero s pueden absorberla y tener color. En el cuerpo humano por ejemplo, los nutrientes estn disueltos en
la sangre, la cual los transporta a todas las clulas donde se incorporan a un sinfn de reacciones bioqumicas que en conjunto
conocemos como metabolismo. Otros ejemplos de dispersiones homogneas son las disoluciones salinas fisiolgicas y las de
glucosa, urea y aminocidos contenidos en la sangre.
Al hablar de disoluciones es muy comn usar los trminos soluto y disolvente. El disolvente, tambin conocido como componente continuo o dispersor, es el que se encuentra en mayor cantidad y su estado fsico no cambia cuando se forma la disolucin.
Todos los dems componentes que se disuelven en el disolvente se llaman solutos o bien componentes dispersos o discontinuos. Durante el proceso de disolucin de los solutos se debe suministrar energa para romper las fuerzas que mantienen unidas
las partculas de soluto entre s y separarlas en iones o molculas individuales. En general, la energa que se requiere para romper
los enlaces entre las partculas del soluto es aportada por la que se libera cuando interactan las molculas de soluto y disolvente.
Un aspecto importante de los solutos es su solubilidad, que es la capacidad que tienen para disolverse en otra sustancia y
se mide como la cantidad mxima de soluto que se puede disolver en un volumen definido de disolvente, a una temperatura
y presin determinadas. En el caso de las mezclas gas en gas, la solubilidad es ilimitada, mientras que en el resto de las disoluciones existe un lmite a la cantidad de soluto que se puede disolver en un volumen. La solubilidad se mide como el coeficiente
de solubilidad o simplemente solubilidad. Para los lquidos y slidos, la solubilidad se reporta en gramos de soluto por 100 g de
disolvente (Brady, 2003).
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Disoluciones acuosas
Los disolventes polares como el agua, tienen dipolos cuyo extremo positivo atrae a los iones negativos del soluto y el extremo
negativo del agua a los iones positivos de soluto, estos enlaces llamados in-dipolo. Individualmente son dbiles pero en grandes
cantidades, como sucede en las disoluciones, aportan suficiente energa para vencer la atraccin electrosttica que mantiene
unidos a los iones en el cristal slido. En la disolucin, cada in est rodeado por muchas molculas de disolvente por lo que se
dice que est solvatado y si el disolvente es agua, entonces se dice que est hidratado.
Por otro lado, para que un disolvente pueda disolver compuestos inicos debe tener tambin una constante dielctrica
elevada, que le permita disminuir la atraccin entre iones de carga opuesta, una vez que se encuentran solvatados. El agua debe
sus relevantes propiedades como disolvente de substancias inicas a su polaridad y su elevada constante dielctrica. Adems, el
agua forma puentes de hidrgeno, lo que le permite disolver tambin compuestos polares, aunque no sean inicos.
Cuando se quiere indicar la cantidad relativa de soluto y disolvente presentes en una disolucin, se usa el trmino de concentracin. Existen dos maneras de expresar la concentracin, en una se indica la cantidad de soluto en relacin con la cantidad
de disolucin y en la otra, la cantidad de soluto con respecto a la cantidad de disolvente. Las formas ms comunes de expresar
la concentracin corresponden al primer tipo y son: molaridad, normalidad, osmolaridad, fraccin molar y por ciento. Entre las
formas ms tiles del segundo tipo estn la molalidad y la osmolalidad
M=
22
gsoluto
PM V
Prctica 1
Donde:
M = es la molaridad (molL-1)
g soluto = es la cantidad de soluto en la disolucin (g)
PM = peso molecular del soluto (gmol-1)
V = volumen de disolucin (L)
Normalidad. Es el nmero de equivalentes qumicos (# eq) de soluto, disueltos en un litro de disolucin. Se representa
con la letra N y sus unidades son eqL-1. El equivalente qumico de una sustancia depende del tipo de reaccin en la que va a
participar dicha sustancia. El peso equivalente qumico se calcula dividiendo el peso molecular entre la valencia del compuesto
en la reaccin considerada, y el equivalente qumico ser la cantidad en gramos igual al peso equivalente de la sustancia.
En reacciones cido - base la valencia ser igual al nmero de protones donados por el cido o aceptados por la base, en
cambio, en reacciones de xido - reduccin ser el nmero de electrones que gana o pierde un tomo o molcula. Un ejemplo
es cuando el cido oxlico H2C2O4, se oxida para producir CO2 segn la reaccin:
En donde el nmero de equivalentes por mol de soluto (n) es igual al nmero de electrones ganados o perdidos, por lo
tanto, el nmero de equivalentes qumicos para una disolucin de acido oxlico (con un peso molecular de 90 g/mol) es:
Peso Equivalente =
90 g mol 1
g
= 45
Eq
2 Eq mol -1 H 2 C 2 O4
En disoluciones de cidos y bases, n es el nmero de H+ que proporciona una unidad frmula de cido o tambin el nmero
de OH- que suministra una unidad frmula de la base. La forma matemtica para calcular la normalidad de una disolucin es:
Donde:
N = es la normalidad (eqL-1)
g soluto = es la cantidad de soluto en la disolucin (g)
N = n M
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Donde:
N = normalidad (eqL-1)
M = molaridad (molL-1)
n = nmero de electrones transferidos por unidad de frmula.
Osmolaridad. Se define como el nmero de osmoles de soluto por litro de disolucin, se representa son el smbolo Os y
tiene unidades de osmolL-1. El osmol es la cantidad de soluto que ejerce una presin osmtica igual a la de un mol de partculas
disueltas, que es de 22.4 atmsferas a 25 C; cuando los solutos no se disocian la osmolaridad (Os) y la molaridad (M) son
iguales, pero en solutos disociables, la osmolaridad depende del grado de disociacin.
Fraccin Molar. Es la fraccin del total de moles de una sustancia en disolucin, que representa el nmero de moles de
un componente particular. Su smbolo es x y se calcula dividiendo el nmero de moles del isimo componente (ni) entre el
nmero total de moles en la disolucin (nT):
n
xi = i
nT
Donde:
%p
g soluto
100
g soluto + g disolvente
%p
g soluto
100
g disolucin
As pues en una disolucin de cloruro de sodio al 5.0% en peso, 5.0 gramos de NaCl se disuelven en 95.0 gramos de agua.
Por ejemplo, los cidos clorhdrico, sulfrico, etc. son envasados de esta manera. As, para al cido clorhdrico (HCl) al 37%
(p /p) en cada 100 gramos de disolucin, 37 gramos son de HCl puro.
Por ciento volumen en volumen (% v/v). Es el nmero de mililitros de soluto en 100 mililitros de disolucin.
Por ciento peso en volumen (% p/v). Es el nmero de gramos de soluto en 100 mililitros de disolucin y es la forma ms
comn de las expresiones porcentuales.
Moles por ciento (moles %). Es el nmero de moles de soluto disueltas en 100 mililitros de disolucin.
24
Prctica 1
Milimoles por ciento (mmoles %). Es el nmero de milimoles de soluto disueltas en 100 mililitros de disolucin. Un milimol
es la milsima parte de un mol.
Miliequivalentes porciento (meq %). Es el nmero de miliequivalentes qumicos de soluto en 100 mililitros de disolucin.
Un miliequivalente qumico es la milsima parte del peso de un eq. Esta forma de expresar la concentracin es muy utilizada en
qumica clnica.
Los por cientos en peso y peso/volumen se relacionan con la densidad (r) de la siguiente manera:
p p
= % (r )
V p
El % p/p puede tambin relacionarse con la molaridad (M) y normalidad (N) mediante las siguientes expresiones:
% p r ( Peso equivalente) 10
p
N=
PM
% p r 10
p
M =
PM
V1C1 = V2C2
Donde:
V1 = Volumen de la disolucin madre que se deber tomar para obtener la nueva disolucin
C1 = Concentracin de la disolucin madre
V2 = Volumen que se desea obtener de la nueva disolucin
C2 = Concentracin que tendr la disolucin nueva
Las concentraciones pueden estar expresadas en trminos de molaridad, normalidad, porcentuales, molales u otras.
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25
Objetivos
El alumno deber ser capaz de realizar los clculos de la concentracin de diversas disoluciones, llevar a cabo su preparacin y
distinguir las diferencias entra las distintas formas de expresar su concentracin.
Materiales y reactivos
Balanza analtica
1 esptula
4 vasos de precipitados de 100 mL
4 matraces volumtricos de 100 mL
3 pipetas graduadas de 10 mL
1 propipeta
1 agitador magntico
1 varilla de vidrio
1 piseta
1 probeta de 100 mL
1 pipeta Pasteur con bulbo
Cloruro de sodio
Sacarosa
Etanol
cido sulfrico
cido clorhdrico
Hidrxido de sodio
Carbonato de sodio
Agua destilada (disolvente)
26
Prctica 1
Procedimiento
Preparacin de 100 mL de disolucin 0.10 M de carbonato de sodio
Pese en un vaso se precipitados de 100 mL, 1.0600 g de carbonato de sodio (Na2CO3). Recuerde registrar el peso mostrado en
la balanza. Aada una porcin de agua para disolver con agitacin completamente la sal. Transfiera la disolucin a un matraz
volumtrico de 100 mL con la ayuda de una varilla de vidrio para no derramarla ni gotear. El vaso se lava dos veces con porciones
de 2.0 mL de agua y dichas porciones se transfieren al matraz volumtrico. Contine lentamente la adicin de agua hasta llegar
al aforo, tape el matraz y agtelo invirtindolo varias veces. Haga los clculos con el fin de rectificar la concentracin.
Preparacin de 100 mL de HCl 0.10 M, a partir de HCl concentrado (37% p/p y densidad de 1.18 g/mL)
Coloque 50.0 mL de agua en un matraz volumtrico de 100 mL. Con ayuda de una propipeta y en una campana de extraccin
de vapores, tome el volumen necesario de cido concentrado para preparar la disolucin requerida. Agregue el cido lentamente
al matraz con agua, deslizndolo gota a gota por las paredes del recipiente. Agite ligeramente la disolucin y lleve hasta el aforo
con agua. Tape el matraz y agtelo nuevamente.
Preparacin de 100 mL de H2SO4 0.20 N, a partir de H2SO4 concentrado (98% p/p y densidad de 1.87 g/mL)
Coloque 50.0 mL de agua en un matraz volumtrico de 100 mL. Con ayuda de una propipeta y en una campana de extraccin
de vapores, tome el volumen necesario de cido concentrado para preparar la disolucin requerida. Agregue el cido lentamente
al matraz con agua, deslizndolo gota a gota por las paredes del recipiente, agite ligeramente la disolucin y lleve hasta el aforo
con agua, tape el matraz y agite nuevamente.
Recuerde: nunca pipetee un cido, y ningn reactivo en general, con la boca y siempre adicione el cido al agua, nunca el
agua al cido! Use su bata cerrada (completamente abotonada) y trabaje en la campana de extraccin cuando se trate de cidos
fuertes.
Reporte de la prctica
Al terminar el desarrollo experimental, deber entregar al profesor el registro de los pesos o volmenes medidos durante la
sesin, ya que efectuar un anlisis del desempeo grupal a travs del clculo del promedio, desviacin estndar y coeficiente
de variacin.
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27
En el reporte de resultados deber registrar los clculos efectuados para cada una de las disoluciones preparadas, as como
expresar las concentraciones experimentales en las diferentes formas como son normalidad, molaridad, y porciento en peso y
volumen, tomando como base el volumen adicionado con la pipeta y /o el peso registrado en la balanza.
Cuestionario
1. Cmo preparara 200 mL de una disolucin 2.0 N de NaHCO3?
2. Qu le pasar a la concentracin de una disolucin 1.0 M de HCl si se deja largo tiempo en un recipiente destapado?
3. Qu entiende cuando le piden preparar un litro de una disolucin de NaCl a una concentracin de 20 partes por milln
(ppm)? Qu clculos hara?
4. Qu peso de NaOH se necesita para preparar 500 mL de una disolucin 0.10 M?
5. El frasco de donde se obtuvo el H2SO4 tiene las siguientes especificaciones: peso molecular = 98.08 g/mol, densidad = 1.87
g/mL, % de pureza = 98.0. Reporte la concentracin de H2SO4 en:
a. % Peso
b. % Peso/volumen
c.
Molaridad
d. Normalidad
28
Prctica 1
Bibliografa
Brady James. E. 2003. Qumica Bsica. Principios y Estructura. 2 edicin, Editorial Limusa Wiley, Mxico.
Burns Ralph A. 2003. Fundamentos de Qumica. 4 edicin, Pearson Education, Mxico D. F.
Skoog Douglas Arvid., West Donald M., Holler James F., Crouch Stanley R. 2008. Fundamentos de Qumica Analtica. 8
edicin, Thomson Learning, Mxico.
Whitten Kenneth. L. Gailey Kenneth. D., Davis Raymond. E. 1992. Qumica General. 3 edicin. Editorial Mc Graw Hill Interamericana de Mxico.
Ocampo Glafira Angeles. 1991. Fundamentos de Qumica III, Editorial Publicaciones Cultural Mxico, D. F.
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29
Prctica 2
Determinacin gravimtrica de calcio como oxalato de calcio monohidratado
Introduccin
En una determinacin gravimtrica se mide el peso de un compuesto para determinar la cantidad de analito presente en la
muestra (Rubinson & Rubinson, 2000). Los anlisis gravimtricos pueden ser por desprendimiento, precipitacin y electrodeposicin (Flascka et al, 1986). Al primer tipo de anlisis tambin se le conoce como termografa (Rubinson & Rubinson, 2000;
Skoog et al, 2005) y consiste en medir los cambios de masa de la muestra sujeta a un proceso de calentamiento; en este tipo
de anlisis es importante realizar el calentamiento en una atmsfera y velocidad controladas.
En la electrodeposicin (o electrogravimetra), se determinan los iones metlicos presentes en una disolucin depositndolos cuantitativamente en forma de un slido sobre la superficie de un electrodo (Harris, 2001; Flascka et al 1986; Rubinson &
Rubinson, 2000).
En esta prctica realizaremos una precipitacin cuantitativa al formar un compuesto de baja solubilidad (Kps de CaC2O4 = 1.3
x 10-8). El anin oxalato (C2O42-) es una base dbil por lo que el oxalato de calcio es soluble en cido y la precipitacin del Ca2+
deber hacerse en medio alcalino al elevar el pH lentamente por descomposicin trmica de la urea (Harris, 2001).
A fin de que los cristales sean grandes y se puedan filtrar rpidamente se requiere mantener la velocidad de sobresaturacin
baja, condicin que se obtiene al agregar el agente precipitante en forma de disolucin diluida y hacerlo lentamente. Tambin
es importante evitar excesos locales del agente precipitante ya que stos conducen al fenmeno de nucleacin, en lugar del
crecimiento cristalino (Vega et al, 2003, Skoog et al, 2005).
La separacin de un precipitado de su lquido madre requiere de una serie de tcnicas entre las que se incluyen la decantacin y la filtracin. El precipitado debe separarse lo ms completamente posible de la disolucin madre y con un mnimo
de contaminacin, o cuando menos, que los contaminantes se puedan eliminar durante el lavado del precipitado o durante su
calcinacin. El precipitado separado se calcina a una temperatura predeterminada con el objetivo de que se transforme en un
compuesto de estequiometra conocida, de tal forma que el peso de este compuesto pueda relacionarse al de la sustancia que se
determina, por medio de un factor qumico que en este caso se llama factor gravimtrico (Flascka et al, 1986, Skoog et al, 2005).
El factor gravimtrico se determina con la ecuacin:
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Objetivo
El alumno realizar una precipitacin cuantitativa del analito (Ca2+) y mediante la determinacin de la masa del compuesto
formado (oxalato de calcio) obtendr el contenido del analito en la muestra problema.
Materiales y reactivos
Balanza analtica
Mufla
Horno de Microondas (opcional)
2 matraces volumtricos de 200 mL
1 matraz volumtrico de 100 mL
3 vasos de precipitados de 250 mL
1 pipeta volumtrica de 20 mL
1 matraz volumtrico de 250 mL
1 pipeta graduada de 5 mL
Pinzas de diseccin
1 propipeta
1 pipeta Pasteur con bulbo
1 probeta de 100 mL
1 crisol de porcelana
1 pinzas para crisol
1 desecador
1 piseta con agua destilada
1 esptula
1 varilla de vidrio
1 vidrio de reloj
1 embudo
1 tripie
1 mechero
1 rejilla de asbesto
1 tringulo de porcelana
Papel filtro Whatman # 41
Hielo
Oxalato de potasio
Acido clorhdrico concentrado
Carbonato de calcio
Rojo de metilo
Urea
32
Prctica 2
Procedimiento
Preparacin de Reactivos y Muestra Problema para un grupo de 10 equipos
a) Disolucin de oxalato de potasio. Pese 10 gramos de oxalato de potasio y disuelva completamente con agua destilada en
un vaso de precipitado y trasvase a un matraz volumtrico de 200 mL y afore.
b) cido clorhdrico 0.10 M. En la campana de extraccin, coloque en un matraz volumtrico de 250 mL, 200 mL de agua
destilada y aada lentamente y resbalando por la pared, 2.1 mL de HCl concentrado. Mezcle y afore con agua destilada hasta
la marca.
c) Rojo de metilo al 0.02%. Pese 0.02 gramos de rojo de metilo y disulvalo en un vaso de precipitado con 60 mL de etanol,
trasvase a un matraz volumtrico de 100 mL y afore con agua destilada. Guardar en frasco mbar.
d) Muestra problema. En la campana de extraccin, prepare 200 mL de una disolucin que contenga entre 3 a 3.6 gramos de
CaCO3 y 3.5 mL de HCl concentrado.
(Disuelva el carbonato en el cido y luego transfiralo al matraz volumtrico con 100 mL de agua. Enjuague varias veces el
vaso de precipitado para no perder muestra y afore hasta la marca).
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Reporte de la prctica
Datos Obtenidos
Peso del crisol vaco
Peso del crisol con el oxalato
Peso del papel filtro
Clculos
Peso de CaC2O4.H2O
Exprese el contenido de calcio en la disolucin problema en trminos de:
a) % peso/volumen
b) Molaridad
34
Prctica 2
Cuestionario
1. Cules son los tipos de precipitados y que caractersticas presentan?
2. Defina los siguientes conceptos en sus propias palabras: disolucin saturada, disolucin sobresaturada, nucleacin, crecimiento cristalino, digestin del precipitado, precipitacin, y Kps.
3. Cuntos tipos de contaminacin existen y como pueden eliminarse?
4. Calcule la Kps para el AgCl sabiendo que la concentracin en el equilibrio para los iones es de 1.34x10-5 M
5. Qu masa de yodato de plata se pude obtener a partir de 0.50 g de yodato de sodio? Suponga que la solubilidad del AgIO3
en agua es despreciable.
6. Una alcuota de 50.0 ml de una disolucin que contiene 0.500g de cloruro de bario se mezcla con 50.0 mL de una disolucin que contiene 0.600 g de yodato de sodio. Suponga que la solubilidad del yodato de bario en agua es despreciable,
calcule: a) La masa que precipita como yodato de bario y b) la masa del compuesto que queda sin reaccionar.
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35
Bibliografa
Judith F. Rubinson & Kenneth, A. Rubinson., 2000. Qumica Analtica Contempornea. 1 edicin. Prentice Hall, Mxico.
Flascka, H.A., Barnard, Jr. A. J., Sturrock, P.E., 1986. Qumica Analtica Cuantitativa. Vol II. 6 edicin. C.E.C.S.A., Mxico.
Harris Daniel C., 2001 Anlisis Qumico Cuantitativo. 2 edicin. Editorial Revert, S.A. Mxico.
Skoog Douglas A., West Donald M., Holler F. James, Crouch Stanley R., 2005. Fundamentos de Qumica Analtica. 8a edicin.
International Thomson Editores, Mxico.
Vega Avila Elisa, Verde Calvo Ramn, Prez Cesar Mara del Carmen, 2003 La teora y la prctica en el laboratorio de Qumica
Analtica I. 1 edicin. Universidad Autnoma Metropolitana, Mxico.
36
Prctica 2
Prctica 3
Valoracin de disoluciones cido-base
Introduccin
Las valoraciones son ampliamente utilizadas en qumica analtica para la determinacin de la concentracin de cidos, bases, oxidantes, reductores, iones metlicos, protenas y muchas otras especies. Las valoraciones o titulaciones se basan en una reaccin
entre un analito y un reactivo patrn, conocido como valorante. La reaccin tiene una estequiometra conocida y reproducible.
En una valoracin, se determina el volumen (o masa) del valorante necesario para reaccionar de manera completa con el analito
y se emplea dicho volumen para obtener la cantidad o concentracin del analito (Harris et al., 2001). La valoracin se realiza
agregando lentamente la disolucin patrn desde una bureta a una disolucin del analito hasta que la reaccin entre los dos se
completa.
El punto de equivalencia de una valoracin es un punto terico que se alcanza cuando la cantidad de valorante aadido es
qumicamente equivalente a la cantidad de analito en la muestra. Resulta imposible determinar experimentalmente el punto
de equivalencia de una valoracin, en su lugar se determina un cambio fsico (visual) relacionado con la condicin de equivalencia y a este cambio se le llama punto final de la valoracin. Es muy comn agregar indicadores a la disolucin del analito
para producir un cambio fsico observable (punto final) cerca del punto de equivalencia. Entre los cambios tpicos de los indicadores se tiene la aparicin o desaparicin de un color, un cambio de color, o bien la aparicin o desaparicin de turbidez
(Skoog et al., 2008).
Tipos de valoraciones
Existen distintos tipos de valoraciones, entre stas se encuentran las de neutralizacin, en las que el analito y el valorante experimentan reacciones cido base. Se tienen tambin las valoraciones que implican reacciones de formacin de complejos, estos
mtodos son de particular importancia para la determinacin de diversos cationes. Igualmente, existen valoraciones en las que la
reaccin qumica implica la transferencia de electrones, estos mtodos se denominan valoraciones rdox. En la presente prctica
se abordan nicamente las valoraciones cido base.
Objetivo
El alumno emplear patrones primarios para la valoracin de disoluciones con propiedades cido base y aprender el uso
adecuado de los correspondientes indicadores.
Materiales y reactivos
1 balanza analtica
1 bureta de 50 mL
1 soporte universal
1 pinza para bureta
3 matraces Erlenmeyer de 250 mL
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3 pipetas volumtricas de 10 mL
1 propipeta
1 piseta con agua destilada
2 vasos de precipitados de 250 mL
1 probeta de 100 mL
1 parrilla con agitacin magntica
4 matraces volumtricos de 100 mL
2 frascos con gotero
1 varilla de agitacin
1 barra magntica
2 cpsulas de porcelana
1 desecador
1 pinzas para crisol
1 espatula
1 vidrio de reloj
Anaranjado de metilo al 0.10 % p/v
Fenolftalena al 0.10 % p/v
HCl 0.1M
NaOH 0.1 M
2.5 g de carbonato de sodio (Na2CO3)
5 g de ftalato cido de potasio (FAP, KHC8H4O4).
Procedimiento
Preparacin de Patrones Primarios
Patrn primario de carbonato de sodio (NaCO3)
El carbonato de sodio (Na2CO3) grado analtico se seca previamente durante media hora dentro de una estufa a una temperatura
entre 240 250 C y posteriormente se transfiere al desecador. Pese con precisin 0.5300 g de Na2CO3 y anote en su bitcora la
masa, use 4 cifras significativas. Coloque en un vaso de precipitado 50 mL de agua hervida y disuelva el Na2CO3, una vez disuelto
trasvasar a un matraz volumtrico de 100 mL, y afore con agua destilada previamente hervida.
Valoracin de Disoluciones
Valoracin de la disolucin de cido clorhdrico
Utilizando anaranjado de metilo como indicador
Coloque en un vaso de precipitado 50 mL de agua hervida y disuelva el Na2CO3, una vez disuelto trasvasar a un matraza volumtrico de 100 mL, y afore con agua destilada previamente hervida.
38
Prctica 3
Anaranjado de metilo
Na2CO3(ac) + 2HCl(ac)
Na2CO3(ac) + HCl(ac)
C8H4O2-4(ac)+ H2O
Reporte de la prctica
Valoracin de la disolucin de cido clorhdrico
Anote los siguientes datos obtenidos durante la prctica:
Cantidad pesada de Na2CO3
Por ciento de pureza del Na2CO3
Volumen en el que se disolvi el Na2CO3(s)
Volumen de la alcuota de Na2CO3 que se us para titular el HCl
En el apartado, Reporte de la prctica:
Consumo de HCl en mL cuando se utiliz anaranjado de metilo como indicador.
Cosumo de HCl en mL cuando se utiliz fenolftalena como indicador.
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40
Prctica 3
Cuestionario
1. Qu significa el trmino error de valoracin?
2. Cul es la diferencia entre el punto de equivalencia y el punto final de una valoracin?
3. Una muestra de 0.4512 g de patrn primario Na2CO3 requiri 36.44 mL de una disolucin de H2SO4 para alcanzar el punto
final de la reaccin, el indicador empleado fue fenolfatelena. Escriba la reaccin que se lleva a cabo y calcule la molaridad
del H2SO4.
4. En la titulacin de carbonato de sodio con cido clorhdrico que diferencia tiene utilizar como indicadores anaranjado de
metilo y fenolftalena.
5. Diga por qu se debe emplear fenolftalena y no anaranjado de metilo, en la titulacin del ftalato cido de potasio con
hidrxido de sodio.
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Bibliografa
Harris D. C., 2001 Anlisis Qumico Cuantitativo. 2 edicin. Editorial Revert, S.A. Mxico.
Skoog Douglas A., West Donald M., Holler F. James, Crouch Stanley R. 2008. Fundamentos de Qumica Analtica. 8 edicin.
Thomson Learning, Mxico.
Vega vila Elisa, Verde Calvo Jos Ramn, Prez Csar Ma. del Carmen. 2003. La teora y la prctica en el laboratorio de
Qumica Analtica I. 1 edicin. Universidad Autnoma Metropolitana-Iztapalapa, Mxico.
42
Prctica 3
Prctica 4
Disoluciones amortiguadoras
Introduccin
Las disoluciones amortiguadoras son frecuentes en la naturaleza, como es el caso del sistema H2CO3/NaHCO3 que predomina
en el plasma y fluido intersticial (Vega & Konigsberg, 2001). Asimismo, los amortiguadores tienen diversas aplicaciones, como en
los medios empleados en los cultivos bacterianos que requieren de cierto valor de pH para que las bacterias crezcan (Umland
& Bellama, 1999).
Una disolucin amortiguadora, llamada tambin disolucin reguladora, buffer o tampn (Harris, 2001), es aquella que
tiene la capacidad de regular los cambios bruscos de pH debidos a la adicin de cidos o bases fuertes y de resistir los cambios
de pH por efecto de diluciones (Skoog et al, 2001). Una disolucin amortiguadora est formada por un cido dbil y su base
conjugada o bien por un base dbil y su cido conjugado; de manera tal que en la misma disolucin coexisten un componente
que reacciona con los cidos (la base) y otro que reacciona con las bases (el cido) (Cuadro 1).
Cuadro 1. Algunos ejemplos de disoluciones amortiguadoras.
Amortiguador
cido
Base
pKa
[cido] M
[Base] M
pH
[Amorti] M
Acetatos
CH3COOH
CH3COONa
4.74
1.0
1.0
4.74
2.0
Fosfatos
NaH2PO4
Na2HPO4
7.2
0.5
1.0
7.50
1.5
Amoniacal
NH4Cl
NH4OH
9.24
0.15
0.45
9.71
0.60
Carbonatos
NaHCO3
Na2CO3
10.33
.07
0.08
10.38
0.15
Como podemos observar en el cuadro anterior, la concentracin molar del amortiguador se obtiene al sumar las concentraciones que tienen en la disolucin el cido y la base. Para obtener el valor de pH de una disolucin amortiguadora se emplea la
ecuacin de Henderson-Hasselbach (Rubinson & Rubinson, 2000):
pH = pKa + log ([base] / [cido])
En donde:
pKa = -logKa
El valor de pKa es constante y como se observa en esta ecuacin, se requiere un cambio en la proporcin base/cido de 10
(log 10 = 1) para cambiar el pH en una unidad. Mientras ms grandes sean las concentraciones del par cido-base mayor ser la
capacidad amortiguadora (Harris, 2001). Se define como capacidad amortiguadora el nmero de moles de H3O+ (o de OH) que
se requieren para cambiar en una unidad el pH de un litro de disolucin reguladora (Vega et al, 2003).
Objetivos
Que el alumno conozca los valores de pH que se obtienen al variar la relacin del cido y su base conjugada, as como al diluir
o adicionar una base fuerte a un amortiguador en comparacin con una disolucin de una sal.
Materiales y reactivos
1 potencimetro
4 matraces Erlenmeyer de 125 mL
2 matraces volumtricos de 100 mL
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2 pipetas volumtricas de 10 mL
1 bureta
1soporte universal
1 pinzas para bureta
1 propipeta
1 piseta con agua destilada
5 vasos de precipitados de 100 mL
1 parrilla de agitacin
1 barra magntica
Disoluciones amortiguadoras de pH 7 y 10
100 ml de Na2CO3 1.0 M
100 mL de NaHCO3 1.0 M
100 mL NaOH 0.10 M
Procedimiento
Efecto de la relacin cido/base conjugada sobre el pH
1. Siguiendo las instrucciones del profesor, calibre el potencimetro con los amortiguadores de pH 7 y/o 10, segn el pH a
trabajar.
2. Marque los matraces Erlenmeyer de 125 mL con nmeros progresivos del 1 al 4.
3. Adicione 20 mL de la disolucin de NaHCO3 1.0 M ms 30 mL de Na2CO3 1.0 M en el matraz No.1.
4. Adicione 30 mL de la disolucin de NaHCO3 1.0 M ms 20 mL de Na2CO3 1.0 M en el matraz No.2.
5. Coloque en un vaso de precipitados 25.0 mL de la disolucin contenida en el matraz No.1 y mida el pH.
6. Coloque en un vaso de precipitados 25.0 mL de la disolucin contenida en el matraz No.2 y mida el pH.
44
Prctica 4
Figura 1. Acomodo de la bureta y del electrodo del potencimetro en el vaso de precipitados conteniendo la disolucin
amortiguadora y la barra magntica.
Reporte de la prctica
Anote los datos que se indican.
Cuntos moles de NaOH se requieren para cambiar en una unidad el pH de un litro de la disolucin de Na2CO3 ?
5. Determine la capacidad amortiguadora para ambas disoluciones con la siguiente frmula: B=dB/dpH, donde dB=moles de
base agregada; dpH=cambio de valores de pH
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Cuestionario
1. Cul es la concentracin, en trminos de molaridad, del amortiguador formado con 20.0 mL de la disolucin de NaHCO3
1.0 M y 30.0 mL de Na2CO3 1.0 M? Cul es la concentracin de este amortiguador, cuando se le adicionan 50.0 mL de
agua destilada?
2. Cul es el pH terico que obtendra al mezclar 15.0 mL de Na2CO3 0.15 M con 75.0 mL de NaHCO3 0.30 M?
3. Qu efecto observara en el pH si la disolucin amortiguadora de NaHCO3 - Na2CO3 0.1 M se hubiera diluido?
4. Calcule el pH que se obtiene al mezclar 50.0 mL de NaHCO3 0.10 M con 25.0 mL de NaOH 0.10 M?
5. Calcule el pH que obtiene al mezclar 50.0 mL de NaHCO3 0.10 M con 25.0 mL de HCl 0.10 M?
46
Prctica 4
Bibliografa
Harris Daniel C. 2001. Anlisis qumico cuantitativo. 2 edicin. Editorial Revert, S.A. Mxico.
Rubinson J.F., Rubinson K.A. 2000. Qumica Analtica Contempornea. 1 ed. Prentice Hall, Mxico.
Skoog Douglas A., West Donald M., Holler F. James, Crouch Stanley R. 2008. Fundamentos de Qumica Analtica. 8 edicin.
Thomson Learning, Mxico.
Umland J.B., Bellama J.M. Qumica General. 2000. 3a edicin. International Thomson Editores, S.A. de C.V.
Vega Avila Elisa, Konigsberg Fainstein Mina. 2001. La importancia biolgica de los sistemas amortiguadores. Contactos 42:
23-27.
Vega Avila Elisa, Verde Calvo Ramn y Prez Csar Mara del Carmen. 2003. La teora y la prctica en el laboratorio de qumica
analtica I, 1 ed. Universidad Autnoma Metropolitana. Mxico.
Jos Ramn Verde/Elisa Vega/Javier Isidoro Lpez/Ma. Elena Estrada/Frida P. Malpica/Felipe Martnez/Clara Pelayo/
Mara del Carmen Prez/Patricia Ruiz/Gloria Maribel Trejo/Luz Mara Zenit
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Prctica 5
Aplicaciones de las titulaciones de neutralizacin cido - base
Introduccin
La valoracin o titulacin es un mtodo comn de anlisis qumico cuantitativo en el laboratorio, que se utiliza para determinar
la concentracin desconocida de un analito en una disolucin. Se requiere de un reactivo llamado valorante, disolucin estndar
o patrn de concentracin conocida, la cual se hace reaccionar con el analito de la disolucin cuya concentracin se desconoce
(Harris, 2001). La reaccin que ocurre entre el valorante y el analito es una reaccin de neutralizacin cuando los compuestos
qumicos involucrados son un cido y una base.
Las titulaciones de neutralizacin se utilizan para determinar gran variedad de especies inorgnicas, orgnicas y biolgicas
que posean propiedades cidas o bsicas. Igualmente importantes son las numerosas aplicaciones en las que un analito se
transforma, con un tratamiento adecuado, en un cido o base, y posteriormente se titula con un patrn cido o base fuerte
(Skoog y col. 2008). El objetivo de toda valoracin es el adicionar la sustancia patrn en una cantidad tal que sea qumicamente
equivalente con la sustancia que reacciona, condicin que se consigue en el punto de equivalencia. El punto de equivalencia
es un concepto terico, lo que en realidad se observa es el punto final de la titulacin el cual corresponde al volumen necesario
de valorante para completar la neutralizacin. El punto final frecuentemente es detectado mediante el uso de un indicador de
pH. En una titulacin o valoracin cido-base simple, puede usarse un indicador como la fenolftalena, que es incolora en medio
cido y de color rosa cuando el pH es igual o mayor a 8.2. Otro ejemplo es el anaranjado de metilo, de color rojo en medio cido
y amarillo en soluciones bsicas.
Existen dos tipos principales de titulacin, la titulacin directa y la titulacin por retroceso. En la titulacin directa el valorante
cido o bsico reacciona directamente con el analito (bsico o cido) mientras que en la titulacin por retroceso en vez de valorar
el analito original se aade un exceso conocido de reactivo estndar a la disolucin, y luego se valora el exceso. Este mtodo es
til si el punto final de la valoracin por retroceso es ms fcil de identificar que el punto final de la valoracin normal (Harris,
2001). Se usa tambin si la reaccin entre el analito y la sustancia titulante es muy lenta.
Objetivo
El alumno aplicar los conocimientos tericos adquiridos acerca de la teora de neutralizacin cido-base a la determinacin de
acidez en productos comerciales como vinagre y cido acetilsaliclico en tabletas de aspirina.
Materiales y reactivos
Balanza analtica
6 matraces Erlenmeyer de 250 mL
1 matraz volumtrico de 500 mL
2 vasos de precipitados de 250 mL
1 esptula
1 bureta de 50 mL
1 pinza para bureta
1 pipeta volumtrica de 25 mL
1 pipeta Pasteur
1 embudo de vidrio
1 probeta de 100 mL
1 propipeta
1 varilla de agitacin
1 soporte universal
1 piseta con agua destilada
1 parrilla con agitacin magntica
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1 barra magntica
1 pinzas de diseccin
1 mortero con pistilo
1 picnmetro de 20 mL
Gasa
Disolucin valorada de NaOH 0.1 M
Disolucin valorada de HCl 0.1M
Disolucin de fenolftalena al 0.1% p/v
Vinagre comercial (5% acido actico)
Tabletas de aspirina
Procedimiento
Determinacin de acidez de vinagre comercial
1. Mida 50 mL de vinagre comercial, pselos, colquelos en un matraz volumtrico de 500 mL y dilyalos con agua destilada
hasta la marca del aforo. Tape el matraz y agite cuidadosamente para homogeneizar la disolucin.
2. Mida una alcuota de 25 mL de la disolucin anterior con una pipeta volumtrica y depostela en un matraz Erlenmeyer de
250 mL, adicione 3 4 gotas de indicador de fenolftalena.
3. Llene la bureta con la disolucin valorada de NaOH 0.1 M, cuidando que no se formen burbujas de aire.
4. Titule la disolucin problema de vinagre, adicionando lentamente el hidrxido de sodio hasta que la disolucin vire de
incoloro a rosa. Anote el volumen de NaOH gastado para alcanzar la neutralizacin. Repetir la titulacin por triplicado.
5. A partir del volumen anterior y del valor de la densidad del vinagre y el factor de dilucin, calcule mediante la Ecuacin 1
el porcentaje de cido actico en el vinagre comercial, teniendo en cuenta que la reaccin que tiene lugar es la siguiente:
%AA=(V)(N)(meq)100/alcuota
(Ec.1)
Donde :
v= volumen gastado del NaOH
N= Normalidad del NaOH
meq= miliequivalentes del c. Actico
alcuota= volumen de la muestra en ml
vinagre (Ec.2)
50
Prctica 5
Donde:
= densidad del picnmetro vaco
= densidad del vinagre
= densidad del agua
(Ec.3)
Reporte de la prctica
Acidez del vinagre comercial
1. Calcule la densidad aparente del vinagre comercial.
2. Calcule la concentracin en porcentaje peso/peso del cido actico en la muestra de vinagre.
3. Compare sus resultados con los reportados en la literatura.
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Cuestionario
1. Defina los siguientes trminos: neutralizacin, punto final, punto de equivalencia, titulacin directa y retrotitulacin.
2. 1.00 g de una disolucin que contiene HNO3 (PF = 63.0) y H2SO4 (PF = 98.0) se neutraliza con una disolucin de NaOH 0.10
M utilizando fenolftalena como indicador, gastndose 40.0 mL del valorante. Otra porcin de disolucin de igual peso se
trata adecuadamente para reducir el HNO3 a NH3, se destila este ltimo y se recoge en 50 mL de HCl 0.10 M, cuyo exceso
consume 45.0 mL de NaOH 0.1 M. Cul es el porcentaje de cada cido en la muestra?
52
Prctica 5
Bibliografa
Harris Daniel C. 2001. Anlisis Qumico Cuantitativo. 2 edicin. Editorial Revert, S.A. Mxico.
Skoog Douglas A., West Donald M., Holler James F., Crouch S.R. 2008. Fundamentos de Qumica Analtica. 8 edicin. Thomson Learning, Mxico.
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Prctica 6
Determinacin de hierro (II) en vitaminas comerciales por xido-reduccin
Introduccin
Dentro del grupo de los minerales, el hierro es un elemento imprescindible para el organismo humano. Sin el hierro necesario,
nuestro cuerpo se vuelve lento debido a que una de sus funciones ms importantes es oxidar la glucosa para convertirla en
energa; el hierro interviene, por lo tanto, en el buen funcionamiento de la respiracin. Adems se combina con protenas para
formar la hemoglobina y as poder transportar el oxgeno a los tejidos; tambin sirve para activar el grupo de vitaminas B, y para
estimular la inmunidad y la resistencia fsica. El hgado, el bazo y los huesos acumulan la mayor parte de este mineral.
La deficiencia del hierro est muy difundida tanto en pases pobres como ricos debido a que slo una pequea parte del
hierro ingerido pasa a la corriente sangunea. La carencia se manifiesta en la anemia cuyas caractersticas son la fatiga, palidez
de la piel y mucosas, palpitaciones con taquicardia, piel seca y cabellos quebradizos, disminucin de las defensas y trastornos
gastrointestinales. Tambin los estados de desnimo crnico estn relacionados muy a menudo con niveles bajos de hierro.
Una de las formas de cuantificar el hierro, es por medios volumtricos, haciendo uso de agentes oxidantes fuertes como
lo son el dicromato de potasio y el permanganato de potasio. En soluciones de cido sulfrico el producto de reduccin del
permanganato es el in manganeso (II).
MnO4- + 8 H+ + 5e-
Mn2+ + 4H2O
E= 1.507v
Las disoluciones acuosas de permanganato no son totalmente estables debido a que el in permanganato tiene tendencia
a reaccionar con el agua:
6H2O
4MnO2 + 8H2O
E= 1.7V
E = -1.23 V
4MnO4- + 4H+
Con base en los potenciales estndar de reduccin (E) de esta reaccin se puede ver que el equilibrio debe estar desplazado
a la derecha, incluso en soluciones neutras; sin embargo, la pequea velocidad de reaccin de este sistema es la responsable
de que las soluciones de permanganato tengan estabilidad suficiente para ser usadas con fines analticos (Skoog et al. 2008).
Las disoluciones de hierro (II) pueden ser fcilmente cuantificadas por mtodos de xido reduccin, por ejemplo, es factible
su titulacin con una disolucin estandarizada de permanganato de potasio en medio cido.
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Volumetra
2
4
1
Figura 1. Materiales y reactivos bsicos utilizados en las titulaciones volumtricas. 1. Soporte universal; 2. Pinzas para bureta; 3. Bureta con el
reactivo titulante o valorante; 4. Matraz Erlenmeyer conteniendo al analito cuya concentracin se desea conocer.
La volumetra se utiliza para anlisis cuantitativos. La base del mtodo es determinar el volumen del reactivo titulante (3) que reacciona estequiomtricamente con una sustancia dada que contiene al analito (4). El tipo de reaccin entre el titulante y el analito
determina el nombre de la valoracin, bien sea cido-base, de complejos, de precipitacin, o en este caso de xido reduccin.
Un volumen conocido de uno de los reactivos (analito, 4) se deposita en un matraz Erlenmeyer y el otro en una bureta
(valorante, 3) y se va adicionando el valorante al analito en el Erlenmeyer. Cuando se llega al punto en que se termina la reaccin, el valorante y el valorado (analito) han reaccionado estequiomtricamente, momento en que se alcanza el punto de
equivalencia. Conociendo el volumen del valorante (3) y la estequiometria de la reaccin, se calcula la cantidad de sustancia que
se ha valorado (analito, 4). Para poder determinar el punto de equivalencia se utiliza alguna propiedad del sistema que cambie
drsticamente en las proximidades del punto de equivalencia (Harris, 2001) y como normalmente no suceden cambios visuales
en la reaccin, se utiliza un indicador, sustancia que se aade en una concentracin muy pequea y experimenta cambios de
color alrededor del punto de equivalencia. El punto de la valoracin en que se produce el cambio de color se llama punto final.
Normalmente el punto de equivalencia y el final no son iguales y esta diferencia es precisamente el llamado error sistemtico de
la valoracin. Tambin se puede utilizar un mtodo instrumental para determinar el punto de equivalencia.
Las volumetras deben cumplir los siguientes requisitos:
1. La estequiometria de la reaccin entre el analito y el valorante debe ser fija y perfectamente conocida para, de esta manera
realizar correctamente los clculos.
2. La reaccin debe ser rpida.
3. La reaccin debe ser cuantitativa y comprobarse que se completa en un 99.9 %.
4. Para determinar el punto de equivalencia se debe disponer de un mtodo adecuado pues el error sistemtico de la valoracin debe ser pequeo.
56
Prctica 6
Valoracin del Permanganato de Potasio (KMnO4) con una Disolucin Estndar de Oxalato de Sodio (Na2C204)
El KMn04 no es patrn primario (las caractersticas de los patrones primarios ya fueron mencionadas en la prctica No. 3) pues
aunque puede obtenerse puro, sus disoluciones se descomponen parcialmente dando Mn02 y debe ser valorado utilizando un
patrn primario como el Na2C204. La reaccin que tiene lugar es (Vega et al, 2003):
Como se mencion, el H2S04 proporciona el medio cido necesario para la reaccin. En esta valoracin no es necesario utilizar
un indicador para detectar el punto final ya que el mismo KMn04 acta como tal pues en la forma oxidada es de color violeta
e incoloro en la reducida. Las disoluciones de KMn04 se deben guardar en frascos de color mbar o topacio para evitar su descomposicin por la luz.
Objetivo
El alumno aplicar sus conocimientos de xido reduccin en la determinacin de hierro (II) en una vitamina, complemento
vitamnico comercial o en una muestra problema.
Materiales y reactivos
1 vidrio de reloj
1 esptula
1 piseta con agua destilada
1 vaso de precipitados de 100 mL
1 vaso de precipitados de 250 mL
2 matraces volumtricos de 100 mL
1 agitador de vidrio
3 matraces Erlenmeyer de 250 mL
1 bureta de 25 50 mL
1 soporte universal
1 pinzas para bureta
1 probeta de 50 mL
1 pipeta volumtrica de 10 mL
1 pipeta graduada de 10 mL
KMnO4
H2SO4
FeSO4
Na2C2O4
Procedimiento
1. Realice los clculos y prepare 100 mL de disolucin 0.1 N de KMNO4 en cido sulfrico al 5% (p/v).
2. Realice los clculos y prepare 100 mL de disolucin 0.1 N de Na2C2O4 y utilcelo como estndar primario para conocer la
concentracin de la disolucin de permanganato.
3. Investigue cuales son las condiciones adecuadas de pH y temperatura, para que la reaccin se lleve a cabo.
4. Efecte la titulacin de estandarizacin del permanganato de potasio.
5. Solicite al profesor una muestra problema de hierro (II) y titlela para conocer su concentracin.
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Sulfato ferroso
Utilice una solucin de sulfato ferroso 0.1 N. Para prepararla pese en balanza analtica 1.5184 g de FeSO4, disulvalos en 50 mL
de cido sulfrico al 5% (p/v) y afrelos a 100 mL.
Producto comercial
Adquiera cualquier jarabe o pastilla que contenga el hierro en su estado de oxidacin (II), tome en cuenta que puede contener
otros compuestos que reaccionen con la solucin de permanganato de potasio. Como ejemplo, se puede trabajar con el complemento vitamnico Vitavern flico, que contiene 497 mg de sulfato ferroso heptahidratado por cada 100 mL del jarabe (vase
la formulacin ms adelante). Titule alcuotas de 10 mL de este jarabe con solucin 0.01 N de permanganato de potasio.
Reporte de la prctica
1. Con el volumen de KMnO4 gastado en la titulacin con el estndar de oxalato de sodio, calcule la verdadera concentracin
de la disolucin de permanganato de potasio.
2. Con el volumen de KMnO4 gastado en la titulacin de la muestra problema de Fe (II), calcule la concentracin de la disolucin de permanganato en N, M y los % p/p (si la muestra fue una pastilla), el % p/v (si la muestra fue un jarabe o disolucin
problema).
58
Prctica 6
Cuestionario
1. Qu es un patrn primario? Cules son sus caractersticas?
2. Por qu no se puede utilizar KMn04 como patrn primario?
3 Por qu se adiciona cido sulfrico al valorar con KMn04? Se debe utilizar preferentemente, por qu?
4. Escriba las semirreacciones y balancee por el mtodo del in electrn la reaccin de la valoracin en medio cido del Fe2+
con MnO4-.
5.- Calcule el % p/v de hierro (II) en una muestra problema de 50 mL, la cual fue aforada a 100 mL en un matraz volumtrico,
de esta disolucin se tomaron 25 mL y se titularon con una disolucin de permanganato de potasio 0.098 N, gastndose
34.5 mL.
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Bibliografa
Harris Daniel, 2001 Anlisis Qumico Cuantitativo. 2 edicin. Revert. Mxico.
Skoog Douglas A., West Donald M., Holler F. James, Crouch Stanley R. 2008. Fundamentos de Qumica Analtica. 8 edicin.
Thomson Learning, Mxico.
Vega vila Elisa, Verde Calvo Jos Ramn, Prez Csar Mara del Carmen. 2003. La teora y la prctica en el laboratorio de
Qumica Analtica I. 1 edicin. Universidad Autnoma Metropolitana-Iztapalapa, Mxico.
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Prctica 6
VITAVERN FLICO
Jarabe
Polvo
CALCIO
COBRE
FLICO, CIDO
HIERRO
VITAMINA B, COMPLEJO DE
VITAMINA B3
VITAMINA C
FORMA FARMACUTICA Y FORMULACIN
Cada 100 mL de JARABE contienen:
Sulfato ferroso heptahidratado.............. 497.82 mg
equivalente a .............................................. 99.99 mg
de hierro elemental
Sulfato de cobre.......................................... 52.37 mg
equivalente a .............................................. 3.33 mg
de cobre elemental
Excipiente, c.b.p. 100 mL.
Cada sobre con 2 g de POLVO (para disolver en el frasco contiene):
cido flico .............................................. .2.933 mg
Niacinamida .............................................. 300 mg
Pantotenato de calcio................................. 50 mg
equivalente a .............................................. 4.205 mg
de calcio
Clorhidrato de tiamina
(vitamina B1) .............................................. 50 mg
equivalente a .............................................. 39.480 mg
de tiamina base
Riboflavina (vitamina B2).......................... 20 mg
Clorhidrato de piridoxina
(vitamina B6) .............................................. 25 mg
equivalente a .............................................. 20.560 mg
de piridoxina
Cianocobalamina
(vitamina B12)............................................. 0.070 mg
cido ascrbico (vitamina C)................... 660 mg
Excipiente, c.b.p. 2 g.
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Prctica 7
Cromatografa en columna
Introduccin
Las tcnicas cromatogrficas se emplean para separar los componentes individuales de una mezcla, adems pueden ser utilizadas para identificar un compuesto comparando su comportamiento cromatogrfico con el de sustancias conocidas (empleadas
como patrn). Son tcnicas analticas y cuantitativas que han alcanzado un alto grado de desarrollo en los laboratorios de
qumica y bioqumica. En sus diversas aplicaciones, la cromatografa sirve para separar compuestos qumicos diferentes a partir
de mezclas multicomponentes, las cuales pueden contener varios centenares de sustancias diferentes; por ejemplo, es capaz de
identificar y separar los 350 compuestos que dan su sabor y bouquet caractersticos al caf.
La tcnica se basa en la interaccin de una determinada muestra (soluto) con dos fases, una de ellas, habitualmente llamada
fase estacionaria, puede ser un lquido o un slido. La fase estacionaria puede retrasar la salida de las muestras, por las interacciones que pueden presentarse entre ambas. Por otra parte una fuerza contraria (de arrastre) es la determinada por la fase mvil.
Cuando la fase mvil y la fase estacionaria son lquidas (cromatografa de reparto), la muestra puede encontrarse en equilibrio
entre ambas fases, siendo la relacin del soluto en ambas fases constante, y se le denomina coeficiente de reparto. Si en una
mezcla, cada componente tiene un coeficiente de reparto diferente, la separacin ser buena. Naturalmente, dicho coeficiente
depende de la naturaleza de las fases, as como de las condiciones de la cromatografa.
Una de las tcnicas cromatogrficas ms sencillas es la de adsorcin en columna. Una columna de cromatografa es un tubo
de vidrio relleno con un slido poroso de propiedades adsorbentes constituido por pequeas partculas, siendo el gel de slice
y la almina los slidos ms usados. Este relleno es lo que se conoce en cromatografa como la fase estacionaria. A travs de la
columna se har pasar un flujo de un disolvente o mezcla de disolventes en diferentes proporciones denominada eluyente o fase
mvil. La fase mvil emigra por la fase estacionaria debido, sobre todo, a la gravedad y en su movimiento, arrastra ms o menos a
los componentes de una mezcla en funcin de sus cargas, adsorbiendo o no a las muestras para separarlas. El disolvente tambin
puede pasar a travs de la columna por aplicacin de presin. La eleccin del disolvente es crucial para una buena separacin.
La mezcla de compuestos a separar se disuelve en una pequea cantidad de disolvente y se coloca sobre el adsorbente, en
la parte superior de la columna, quedando adsorbida por l. A continuacin se pasa un flujo de eluyente a travs de la columna
y as los compuestos constituyentes de la mezcla son arrastrados por el eluyente a su paso, hacindoles avanzar a lo largo de la
columna. Sin embargo, no todos los compuestos avanzan a la misma velocidad, y esta es precisamente la clave de la cromatografa; algunos compuestos se ven ms fuertemente retenidos por el adsorbente (fase estacionaria) y por lo tanto avanzarn ms
despacio, por el contrario, otros apenas son retenidos y avanzarn a mayor velocidad. En general se dice que la separacin en la
cromatografa se basa en la afinidad diferencial de los distintos compuestos por la fase mvil y la fase estacionaria.
Objetivo
Mediante la aplicacin de cromatografa en columna, el alumno conocer y analizar la separacin de colorantes. Asimismo, el
alumno podr saber como se controla y determina el proceso de separacin de mezclas de substancias.
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Materiales y reactivos
Espectrofotmetro Genesys o Biomate con dos celdas de medida para la regin del visible
1 columna cromatogrfica de 15 cm, con tubo de ltex y pinza de regulacin de goteo (el tubo ltex y las pinzas pueden obtenerse de los equipos de venoclisis para sueros).
Tubos de ensayo de de 10x100 mm con tapn de rosca
3 vasos de precipitados de 100 mL
1 gradilla para tubos de ensayo
5 pipetas graduadas de 10 mL
Algodn
Almina o slica para cromatografa en columna (60 - 200 Mallas)
Mezcla de n- butanol, etanol y amoniaco 2N (60: 20: 20 por volumen), (segunda opcin)
Mezcla de n- butanol, cido actico glacial y agua (60: 15: 25 por volumen), (primera opcin)
Disolucin de una mezcla de tinta negra, azul y marrn en etanol, conteniendo aproximadamente 0.05 g/l de cada tinta. No
deber usarse la tinta en forma de gel.
Prec auciones. La inhalacin de altas concentraciones de polvo de almina puede originar irritacin de los ojos y tracto
respiratorio superior. Las mezclas indicadas de los disolventes irritan los ojos, la piel y el tracto respiratorio por lo que deben
manejarse en la campana.
Procedimiento
Preparacin de la columna
Coloque en la base de la columna una pequea cantidad de algodn verificando que haya flujo en la columna.
Adicione almina o slica poco a poco, con ligeros golpes a la columna, no golpear la columna con almina porque se sobreempaca y disminuye drsticamente el flujo, ste es un paso importante para una buena separacin. Cuando obtenga un depsito
homogneo de fase estacionaria de una altura entre 10 y 12 cm, adicione 15 mL de butanol, manteniendo abierta la columna por
su extremo inferior y evitando que el nivel de butanol descienda por debajo del nivel superior de la almina o la silica.
64
Prctica 7
Reporte de la prctica
1. Fotografe o dibuje la columna cromatogrfica en uno de los momentos de la elucin de la tinta (emplear lpices de colores
para indicar la posiciones de las dos bandas cromatogrficas).
2. Graficar los espectros de absorcin para cada color resaltando los mximos de absorbancia de cada fraccin colectada,
complete el siguiente cuadro.
Cuadro 1. Absorbancia de las fracciones colectadas durante la separacin de una mezcla de tintas por cromatografa en columna.
Absorbancia
( = 450 a 665 nm)
Volumen de los
eluatos o fracciones
(mL)
3. Incluya en el reporte sus observaciones.
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Cuestionario
1. Si una mezcla de antraceno y naftaleno se separa por cromatografa en columna sobre almina, cul de los dos hidrocarburos eluir primero y cul al ltimo? Cul sera el ms polar?
2. Se piensa que un colorante desconocido puede ser azul de metileno, cmo se podra comprobar esta suposicin usando
un procedimiento basado en una tcnica cromatogrfica?
3. Qu debe hacerse para encontrar el eluyente adecuado para separar una mezcla por cromatografa en columna?
66
Prctica7
Bibliografa
Abbot David y Andrew Roberts S. 1973. Introduccin a la Cromatografa. 3a edicin. Coleccin Exedra. Editorial Alhambra,
Madrid, Espaa.
Browning, D. R. 1971. Cromatografa-Toray-Masson. 1a edicin, Barcelona, Espaa.
Waksmundzka-Hajnos Monika, Joseph Sherma, Teresa Kowalska. 2008. Thin Layer Chromatography in Phytochemistry. Chromatographic Sciences Series. Jack Cazes (ed). Vol. 99. CRC Press, Boca Raton, Fla, USA.
Jork H, Wimmer H. 1986. TLC Report. A Collection of Quantitative Papers. GIT Verlag. Germany.
Skoog Douglas, West Donald, Holler James, Crouch Ray. 2008. Fundamentos de Qumica Analtica. 8 edicin. Thomson
Learning, Mxico.
Rubinson A. K., Rubinson F. J. 2001. Anlisis Instrumental. 1 edicin. Prentice- Hall, Espaa.
Harris Daniel C. 2003. Anlisis Qumico Cuantitativo. 3a edicin. Editorial Revert. Espaa.
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Prctica 8
Cromatografa en capa fina
Introduccin
La Cromatografa en Capa Fina (CCF) es uno de los mtodos ms verstiles de anlisis cromatogrfico para la separacin e identificacin de sustancias qumicas, la cual se basa en el principio de reparto entre dos fases. En general, una cromatografa se realiza
permitiendo que las molculas de la mezcla que se desea separar (muestra) interaccionen con un medio o matriz de soporte que
se denomina fase estacionaria; un segundo medio (fase mvil) que es inmiscible con la fase estacionaria se hace fluir a travs de
sta para separar o elur a las molculas de la muestra. Debido a que estas molculas presentan diferente coeficiente de reparto,
la fase mvil separar los distintos componentes con diferente eficiencia, de modo que aquellos que sean ms afines a la fase
mvil sern eludos ms rpido que aquellos que sean preferentemente solubles en la fase estacionaria.
En la cromatografa de capa fina un adsorbente se deposita en forma de una capa delgada sobre una placa de vidrio, aluminio u otros materiales por la que ascienden, arrastradas por un disolvente (eluyente), una o ms sustancias que se pretenden
separar. El disolvente asciende entonces por capilaridad a lo largo de la placa arrastrando los compuestos a diferentes velocidades, segn el grado de adsorcin de stos a la fase estacionaria de la placa y su afinidad por el eluyente, producindose as su
separacin en forma de manchas (Abbot y Andrews, 1970). Generalmente, la fase estacionaria es un componente polar y la fase
mvil es menos polar, de manera que los componentes que se desplazan con mayor velocidad son los menos polares (Bauer y
col., 1991). Dentro de los adsorbentes o fases estacionarias ms comunes para CCF se encuentran: el gel de slice, el cual se usa
en el 80 % de las separaciones; el xido de aluminio o almina, disponible comercialmente en las formas cida, neutra o bsica;
la celulosa, la hay nativa y microcristalina; y las poliamidas.
Es importante tomar en cuenta algunas consideraciones para la seleccin de la fase estacionaria como su polaridad, el
tamao de partcula, la homogeneidad y su pureza. Mientras que los eluyentes ms comunes para CCF son el acetato de etilo,
cloroformo, hexano, acetona, etanol, metanol e isopropanol, entre otros (vila, 2001). La seleccin adecuada de ambas fases permitir la separacin de aquellos compuestos presentes en la muestra. Los compuestos orgnicos pueden presentar la siguiente
polaridad en orden creciente: hidrocarburos < olefinas < fluor < cloro < nitro < aldehdo < ster < alcohol < cetonas < aminas
< cidos < amidas.
Cuando los compuestos que se separan en una CCF son manchas coloridas es fcil observar cunto se desplazaron durante
su separacin, pero cuando son incoloras se debe hacer uso de reveladores como: luz UV cuando las substancias a separar
o algn compuesto que se ha mezclado con la fase estacionaria absorben luz en el UV, generalmente se usan longitudes de
onda entre 254 y 366 nm; vapores de yodo, el cual se combina reversiblemente con los compuestos orgnicos que entonces
aparecen de color caf; reveladores ms especficos como la ninhidrina para los aminocidos, cuyas manchas pasan de incoloras
a prpura; y como ltimo recurso una disolucin de agua-cido sulfrico 1:1, la cual se roca dentro de un compartimiento protegido, bajo la campana de extraccin de gases y despus se calienta intensamente en mechero o parrilla hasta carbonizar los
compuestos que aparecen entonces como manchas de color negro.
La manera como se identifican los componentes separados de la mezcla por cromatografa en capa fina es por su valor de
Rf (referencia frontal) que se calcula con la siguiente expresin (Clement, 2002):
Rf =
Distancia (cm) que recorre cada compuesto separado desde el punto de aplicacin (a)
Distancia (cm) que recorre el disolvente hasta el frente del eluyente (b)
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69
Figura 1. Cromatografa en capa fina. Se muestran el sitio de aplicacin de la muestra y las distancias recorridas por un compuesto
separado (a) y el eluyente (b).
El Rf es adimensional, siempre inferior a 1 y depende de las condiciones en las cuales se corre la muestra, por ejemplo depende
del tipo de adsorbente, del eluyente, de las caractersticas de la placa, temperatura, etc. (Abbot y Andrews, 1970; Skoog y col.,
2008).
La cromatografa en capa fina es un mtodo de separacin sencillo, rpido y efectivo para el anlisis tanto cualitativo como
cuantitativo, que va de la mano con la cromatografa en columna y con el que se obtienen resultados reproducibles, caractersticas que lo convierten en un mtodo excelente para fines analticos.
Objetivo
El alumno ser capaz de separar e identificar los compuestos presentes en una mezcla de analgsicos comerciales por cromatografa en capa fina.
Materiales y reactivos
Cmara de luz UV
Cromatofolios
6 portaobjetos
3 capilares
1 varilla de vidrio
4 vasos de precipitado de 100 mL
1 caja Koplin
1 pinza de diseccin
1 piseta con agua destilada
1 piseta con acetona
1 piseta con etanol
1 gradilla
1 propipeta
1 esptula
1 frasco de boca ancha mbar
2 pipetas graduadas de 10 mL
2 pipetas graduadas de 5 mL
4 tubos de rosca pequeos
Papel aluminio
70
Prctica 8
Procedimiento
Preparacin de soluciones patrn
Se toma 1 pastilla de cada analgsico y se tritura por separado en mortero (excepto la cafena que es polvo). Se toma 4 tubos
de ensayo con tapn de rosca y se etiquetan de tal manera que cada tubo contendr 20 mg de un polvo. Posteriormente se les
adicionan 3 mL de acetato de etilo a cada tubo y se agita vigorosamente hasta disolucin parcial de las muestras.
Aplicacin de la muestra
Una vez activados las cromatoplacas o cromatofolios se procede a la aplicacin de la(s) muestra(s). En este caso se utilizan
capilares que previamente fueron estirados en la flama de un mechero con el fin de conseguir dimetros menores que permitan la aplicacin de muestras pequeas, de lo contario, si se aplican muestras grandes se producirn colas que evitarn una
buena separacin. Con el capilar se toma un pequeo volumen de la muestra problema (1-5 L) y se aplica una gota sobre la
cromatoplaca (o cromatofolio) a 0.5 cm aproximadamente del borde inferior de la placa. Si trabaja con cromatofolios trace esta
marca con un lpiz fino y aplique de la misma manera (evitando llevarse la fase estacionaria). Ser necesario tocar suavemente
el punto de aplicacin (2 3 veces), esperando el tiempo suficiente para que seque despus de cada aplicacin. Se debe evitar
rayar la capa adsorbente con el capilar porque puede haber prdida de resolucin o desplazamiento deficiente del disolvente.
Experimento 1
Se desea conocer el tamao de las manchas que se separan cuando se aplican en el cromatofolio diferentes cantidades de un
patrn de cido acetilsaliclico o cafena parcialmente disuelto en acetato de etilo. Para ello se harn tres aplicaciones de la disolucin del patrn en un solo cromatofolio, aplicando primero una gota, en la segunda aplicacin dos gotas y por ltimo tres gotas.
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Introduzca el cromatofolio en una cmara de elucin (caja Koplin) a la que previamente se le adicionaron aproximadamente
2 mL de acetato de etilo y tpela (en caso de emplear vaso del precipitado, tpelo con papel aluminio teniendo cuidado de
no mover el cromatofolio). Cuando el frente del eluyente est casi en el borde de la parte superior del cromatofolio destape la
cmara, retrelo con cuidado y marque el frente del eluyente con un lpiz de punta fina. Djelo secar al aire libre. Para visualizar
las manchas, primero revele con la lmpara de luz UV de onda corta y larga, marcando el contorno de las manchas con el mismo
lpiz y luego introduzca el cromatofolio en una cmara con cristales de yodo (en cmara de koplin adicionar un poco de yodo y
tapar) por 5 min aproximadamente en campana de extraccin. Cuando se lleve a cabo el revelado con yodo es recomendable
trabajar con guantes.
Experimento 2
Se desea comparar el corrimiento de dos compuestos con diferente polaridad en diferentes eluyentes. Para esto se preparan 3
cromatoplacas o cromatofolios y se aplican en cada una de ellas las soluciones patrn de cido acetilsaliclico y cafena. Se eluye
la primera con hexano, la segunda con acetato de etilo y la tercera con metanol. Para cada caso, se sigue el procedimiento de
elucin y revelado indicado en el experimento anterior. Anote los resultados obtenidos en cada cromatofolio.
Experimento 3
Se desea identificar el principio activo de analgsicos comerciales como cafiaspirina y sacidol o bioelectro, comparndolos con
las muestras patrn de cafena y cido acetilsaliclico. Las disoluciones de los analgsicos estarn marcadas como problema 1 y
problema 2 (muestras proporcionados por el profesor) sin que usted sepa cul corresponde a qu analgsico. Prepare 2 cromatoplacas (o cromatofolios) iguales, aplicando las muestras como se indica en la Fig. 2.
Figura 2. Aplicacin de las muestras para identificar los principios activos de dos analgsicos comerciales.
Una vez aplicadas las muestras, eluya un cromatafolio o cromatoplaca en metanol y el otro en acetato de etilo. Para cada caso se
sigue el procedimiento de elucin y revelado indicado en el experimento 1. Anote los resultados obtenidos en cada uno de ellos.
72
Prctica 8
Reporte de la prctica
Experimento 1
1. Cul es la relacin entre el tamao de las manchas con la cantidad aplicada del patrn en cada caso?
2. Cul es el Rf en cada caso?
Experimento 2
1. Cul es el eluyente adecuado para cada uno de los patrones aplicados y por qu?
2. Cul de los dos compuestos es el ms polar y por qu?
3. Cul es el Rf en cada caso?
Experimento 3
1. Cul eluyente permiti una mejor separacin? Con base en su respuesta conteste lo siguiente:
2. Cul es el Rf de la cafena y cul el del cido acetilsaliclico?
3. A qu analgsico corresponde el problema 1 y por qu?
4. A qu analgsico corresponde el problema 2 y por qu?
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73
Cuestionario
1. Qu factores influyen en una separacin por cromatografa en capa fina?
2. Cul es la finalidad de activar los agentes adsorbentes?
3. Menciona las caractersticas a tomar en cuenta del adsorbente, soluto y disolvente para una separacin por CCF.
4. En el experimento 3, cul de los dos eluyentes permiti mayor separacin de la mezcla?, a qu se debe esto?
74
Prctica 8
Bibliografa
Abbott David y Andrews Robert. 1970. Introduccin a la Cromatografa. 3a edicin. Alhambra, Madrid, Espaa.
Bauer Karin, Gros Leo y Sauer Werner. 1991. Thin Layer Chromatography: An Introduction. Hthig Verlag, Germany.
vila Zrraga Jos Gustavo. 2001. Qumica Orgnica. Experimentos con un enfoque ecolgico. Direccin General de Publicaciones y Fomento Editorial. UNAM, Mxico.
Clement Bernard. 2002. Organic Chemistry Laboratory Manual. Texas A&M University. USA. pp 143-146.
Skoog Douglas, West Donald, Holler James, y Crouch Ray. 2008. Fundamentos de Qumica Analtica. 8 edicin. Thomson
Learning, Mxico.
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Prctica 9
Cromatografa en papel. Separacin de mezclas de indicadores de pH
Introduccin
La cromatografa agrupa a un conjunto de diversos mtodos de separacin, que permiten adems identificar y cuantificar compuestos afines en mezclas complejas. La caracterstica que comparten estos mtodos es que la muestra a separar se disuelve
en una fase mvil (que puede ser un gas, un lquido o un fluido supercrtico) que pasa a travs de una fase estacionaria inmiscible, fija en una columna o una superficie slida. Ambas fases se eligen de manera tal que los componentes de la muestra se
distribuyan de manera diferente entre las dos fases, por lo que los ms afines a la fase estacionaria se movern ms lentamente
(Skoog et al, 2008).
En la cromatografa en papel, la fase mvil se mueve sobre las tiras de papel filtro. Esta tcnica se puede realizar de manera
ascendente o descendente, unidimensional o bidimensional. En caso de que los componentes de la mezcla no sean coloridos,
se les puede hacer visibles mediante el empleo de luz ultravioleta o mediante el uso de reveladores qumicos (Smith y Feinberg,
1979).
El ltimo punto alcanzado por la fase mvil en su avance se denomina frente del disolvente y se puede usar como referencia
para expresar la distancia relativa recorrida por cada sustancia en un cromatograma. El smbolo que se emplea para designar
dicha distancia relativa es Rf y se obtiene al dividir la distancia recorrida por el compuesto desde el origen entre la distancia que
migr el disolvente.
Objetivos
El alumno separar los componentes de una mezcla, observar el corrimiento cromatogrfico de un compuesto puro y en mezcla, y reafirmar el concepto de migracin relativa de una sustancia.
Materiales y reactivos
Papel para cromatografa Whatman No.1
1 frasco de boca ancha de 15 cm de alto y 7 cm de dimetro
1 cuter
1 regla
1 lpiz
1 probeta 10 mL
1 caja de Koplin
1 pipeta graduada de 10 mL
1 pipeta graduada de 2 mL
1 pipeta graduada de 5 mL
3 capilares
1 propipeta
Rojo congo
Rojo de fenol
Azul de bromofenol
n-butanol
cido actico glacial
Agua
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Procedimiento
1. Prepare las muestras de indicadores en una concentracin de 1.0 % p/v (se sugiere preparar 10 ml para todo el grupo).
Emplee como disolvente NaOH 0.010 M.
2. Prepare 10.0 mL de la fase mvil (6.0 mL de n-butanol:1.5 mL de cido actico glacial: 2.5 mL de agua). Coloque en el fondo
del frasco 4.0 mL de la fase mvil.
3. Aplique calor en el centro de un capilar hasta que est al rojo vivo y estrelo. Corte el capilar as como las puntas para
obtener dos pipetas pequeas con las que aplicar las muestras.
4. Corte una tira de papel filtro, de 5.0 cm de ancho y 10.0 cm de alto. Marque, con un lpiz, una lnea a 0.5 cm del inicio
del papel y distribuya los cuatro puntos donde se aplicarn las muestras de forma equidistante (a 0.5 cm de separacin
aproximadamente), de manera tal que se tendrn 4 orgenes.
5. Aplique en cada uno de los tres primeros orgenes, una gota pequea de diferente indicador. En el cuarto origen, coloque
la mezcla de los tres indicadores.
6. Coloque la tira de papel, con los indicadores, en el frasco que contiene la fase mvil, cercirese de que la fase mvil no est
por encima del sitio donde se encuentran las muestras.
Figura 1. Cromatografa en papel. Se muestra el procedimiento para realizar este tipo de cromatografa.
7. Cierre el frasco y deje que corra la muestra hasta que la fase mvil este a un cm de distancia de la parte final del papel.
8. Retire la tira de papel del frasco y seale con lpiz el frente del disolvente.
9. Mida la distancia entre el origen y el frente del disolvente.
10. Mida la distancia entre el origen y el centro de cada mancha coloreada.
Reporte de la prctica
Con base a la informacin obtenida del cromatograma:
1. Calcule los valores de Rf para cada uno de los componentes. Exprese los resultados con dos cifras decimales.
2. Compare los Rf de los tres indicadores obtenidos cuando corren individualmente con los determinados cuando estn en
una mezcla.
3. Cul de los compuestos presentes fue ms afn con la fase mvil?
4. Cmo esperara los valores de Rf de los componentes si la fase mvil tuviera una mayor proporcin de acido actico?
78
Prctica 9
Cuestionario
1. Se desea separar una muestra que contiene varios aminocidos. Qu agente revelador empleara para conocer la posicin
de los componentes?
2. Qu sistema de disolvente empleara para separar por cromatografa en papel una muestra de esteroides? Cul sera la
fase estacionaria adecuada? Cmo podra conocer el tipo de esteroides que tiene la muestra problema?
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Bibliografa
Smith I., Feinberg, J.G. 1979. Cromatografa sobre papel y capa fina. Electroforesis. Exedra 128. Alhambra.
Espaa.
Skoog Douglas, West Donald, Holler James, Crouch Ray. 2008. Fundamentos de Qumica Analtica. 8
edicin. Thomson Learning, Mxico.
Touchstone Joseph C., 1992, Practice of thin leyer chromatography. Tercera edicin Ed. John Wiley&Sons
Inc. United States of America.
80
Prctica 9
Prctica 10
Cuantificacin de hierro por espectrofotometra en el visible
Introduccin
Las tcnicas espectroscpicas o espectrofotomtricas se basan en la utilizacin de energa luminosa de cierta longitud de onda
para identificar y cuantificar analitos de una muestra. Es comn clasificar estas tcnicas atendiendo a la regin del espectro electromagntico que utilizan, y as por ejemplo se tiene la espectroscopa de rayos X (usa longitudes de onda que van de 100 pm a
10 nm), la espectroscopa en el ultravioleta (de 180 a 380 nm), espectroscopa en el visible (de 380 a 780 nm) y espectroscopa
de infrarrojo (de 0.78 a 50 m) (Harris, 2001). Las radiaciones ultravioleta y visible (UV-Visible) se usan ampliamente con fines
analticos y ambas pueden ser medidas con los espectrofotmetros comunes.
Cuando un analito en disolucin capaz de absorber luz se coloca en la celda de un espectrofotmetro y se le hace incidir
luz de cierta longitud de onda (monocromtica o de un solo color), parte de la luz incidente es absorbida por el analito y otra
parte atraviesa y llega al fototubo del equipo que la detecta y mide (Verde y col., 1999). Estas propiedades se conocen como
absorbancia y transmitancia y se definen como se indica a continuacin.
REFLEXIN
REFRACCIN
LUZ EMERGENTE
LUZ INCIDENTE
Po
P
LUZ
DISPERSA
b
CELDA O DEPSITO
TRANSPARENTE
Figura 1. Fenmenos de absorbancia y transmitancia. Parte de la luz monocromtica que incide en la celda es absorbida por el
analito en disolucin y otra parte es transmitida.
Si Po es la energa radiante incidente y P la energa radiante transmitida, la transmitancia, definida como la fraccin de la energa
radiante que pasa a travs de la muestra (disolucin conteniendo al analito), se expresa como:
T = P/Po, o bien T % = (P/Po)100
Mientras que la absorbancia, definida como la fraccin de la energa radiante que es absorbida por la muestra y que est relacionada logartmicamente con la transmitancia, se expresa como:
A = -log T = log (Po /P)
La ley de Lambert y Beer, indica cuantitativamente como la absorbancia depende de la concentracin de las molculas absorbentes y de la longitud del trayecto, paso ptico o recorrido de la luz en la celda. Cuanto mayor sea la concentracin de las
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molculas absorbentes mayor ser la absorbancia pues habr ms molculas por unidad de volumen absorbiendo, e igualmente
entre mayor sea la longitud del paso ptico, mayor ser la absorbancia pues existirn ms molculas en el trayecto recorrido
por la luz (Skoog y col., 2008). La ley de Lambert y Beer dice por lo tanto, que la absorbancia es directamente proporcional a la
concentracin de la especie absorbente (c) y a la longitud del paso ptico (b) y se expresa como:
A = bc
En donde:
= constante de proporcionalidad llamada absortividad molar en M-1cm-1
b = longitud de paso ptico en cm
c = concentracin de la especie absorbente en M
Ntese que A es adimensional.
La ley de Lambert y Beer slo se cumple con radiacin monocromtica y en disoluciones diludas (10-2-10-6 M) debido a que
en disoluciones concentradas las molculas de soluto interaccionan entre s y cambian sus propiedades, entre ellas, la absortividad (Harris, 2001). Bajo estas condiciones, un gran nmero de compuestos siguen la ley de Beer, pero algunos no muestran
una relacin lineal entre absorbancia y concentracin. Para saber el intervalo de concentraciones en el que un compuesto sigue
una relacin lineal con la absorbancia (ley de Lambert y Beer), se elabora una curva de calibracin midiendo las absorbancias de
disoluciones del analito de concentraciones conocidas.
Las mediciones espectrofotomtricas son ms confiables con valores de absorbancia en el intervalo de 0.187 a 0.824, o bien,
con valores de transmitancia entre 15 y 65%, debido a que si la absorbancia es muy grande y pasa muy poca luz a travs de
la muestra es difcil medir esta energa radiante, y si por el contrario pasa demasiada luz (absorbancia muy pequea), es difcil
apreciar la diferencia entre la muestra y el blanco o referencia (disolucin que lleva todos los reactivos menos el analito) (Harris,
2001).
En el anlisis espectrofotomtrico, normalmente se escoge la longitud de onda de mxima absorbancia del analito ( Max)
debido, entre otras razones, a que la sensibilidad del anlisis es mxima a esta , es decir, se consigue la mxima respuesta
para una concentracin dada de analito. La Max se obtiene mediante un espectro de absorcin que es una grfica que muestra
como vara la absorbancia (A) o la absortividad molar () al variar la longitud de onda y se obtiene efectuando mediciones de
absorbancia del analito en un intervalo amplio de longitudes de onda, por ejemplo de 380 a 780 nm en la regin del visible.
Espectro de absorcin
0.8
_ _ _ _ Conc. 1
Absorbancia
0.7
Conc. 2
0.6
Conc. 3
0.5
Conc. 4
0.4
Conc. 5
0.3
Conc. 6
0.2
Conc. 7
0.1
0.0
200
250
300
350
400
Longitud de onda (nm)
Figura 2. Espectros de absorcin (barrido) en la regin de 180 a 400 nm de un analito en disolucin a diferentes concentraciones,
en donde 1 corresponde a la disolucin de mayor y 7 a la de menor concentracin. Note como la absorbancia es proporcional a la
concentracin.
82
Prctica 10
Las celdas o depsitos transparentes que contienen la muestra (analito en disolucin) o el blanco pueden ser de cuarzo,
vidrio ptico o plstico y generalmente tienen 1 cm de longitud de paso ptico. Las de cuarzo se usan para medidas espectrofotomtricas en el UV-Visible, las de vidrio ptico, como absorben radiacin ultravioleta, slo son apropiadas para mediciones
en la regin del visible, y las de plstico slo se utilizan para disoluciones acuosas y las hay para mediciones en el visible, y
recientemente, en el ultravioleta.
Objetivo
El alumno determinar el espectro de absorcin y elaborar la curva patrn de un analito y usar esta informacin para cuantificar una muestra problema del mismo analito.
Materiales y reactivos
Balanza analtica
Espectrofotmetro Genesys o Biomate
2 celdas de acrlico o de vidrio ptico
Papel seda
1 matraz volumtrico de 50 mL
2 matraces volumtricos de 500 mL
1 pipeta graduada de 1 mL
1 pipeta graduada de 5 mL
2 pipetas graduadas de 10 mL
12 tubos de ensayo con tapones de rosca
1 gradilla para tubos de ensayo
4 vasos de precipitados de 100 mL
1 esptula
1 propipeta
1 agitador de vidrio
Disolucin de cido clorhdrico (HCl) 0.05 M, 500 mL
Disolucin de cloruro frrico (FeCl3) 1 X 10-4 M en HCl 0.05 M, 500 mL
Tiocianato de amonio (NH4SCN) 0.5 M, 50 mL
Disolucin problema de cloruro frrico. Concentracin aproximada: 5 x 10-5 M
Procedimiento
Preparacin de Disoluciones
Prepare las disoluciones de cido clorhdrico (HCl) 0.05 M (en campana de extraccin), cloruro frrico (FeCl3) 1 X 10-4 M y
tiocianato de amonio (NH4SCN) 0.5 M. Antes de proceder a su preparacin verifique con su profesor los clculos y forma de
preparacin.
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83
Disolucin de FeCl3 1
X 10-4 M (mL)
0.3
8.7
0.3
7.7
0.3
6.7
0.3
4.7
0.3
2.7
0.3
0.7
0.3
9.7
Mezcle por inversin y lea inmediatamente la absorbancia a la longitud de onda de mxima absorbancia (Max) encontrada en
su espectro de absorcin. Ajuste la absorbancia con el blanco (tubo 7).
Reporte de la prctica
Determinacin del Espectro de Absorcin del Complejo Tiocianato de Fierro (III)
Con los resultados construya una grfica de absorbancia contra longitud de onda y determine la longitud de onda de mxima
absorbancia para el complejo rojo de tiocianato de fierro (III). Muestre a su profesor la longitud de onda seleccionada antes de
continuar con la elaboracin de la curva de calibracin y la cuantificacin de hierro en su muestra problema.
84
Prctica 10
Cuestionario
1. El cloruro frrico no absorbe en la regin del visible, qu pasa cuando se le combina con el tiocianato de amonio? Por qu
se desarroll un color rojo? Cmo se llama a los reactivos como el tiocianato de amonio que al combinarse con el analito
generan un color que puede absorber en la regin del visible?
2. Qu factores se deben tomar en cuenta para la determinacin espectrofotomtrica de iones inorgnicos por formacin de
complejos?
3. Cul es la diferencia entre absortividad (a) y absortividad molar ()?
4. Qu cuidados se deben tener con las celdas del espectrofotmetro?
Notas: Se sugiere al profesor contar con un frasco para la colecta de los desechos de los reactivos.
Se sugiere al profesor ensear a los alumnos el uso de la aplicacin curva estndar en el espectrofotmetro Biomate 3 o
Gnesys 5.
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Bibliografa
Harris Daniel C., 2001. Anlisis Qumico Cuantitativo. 2 edicin. Editorial Revert, S.A. Mxico.
Skoog Douglas A., West Donald M., Holler F. James, Crouch Stanley R. 2008. Fundamentos de Qumica Analtica. 8 edicin.
Thomson Learning, Mxico.
Verde Calvo Jos Ramn, Escamilla Hurtado Ma. de Lourdes, Reyes Dorantes Alberto y Malpica Snchez Frida. Manual de
Prcticas de Qumica Analtica II. 1 edicin. Universidad Autnoma Metropolitana-Iztapalapa, Mxico.
86
Prctica 10
Apndice 1
Uso adecuado de instrumentos y materiales de laboratorio
Para un uso adecuado de los diferentes instrumentos y materiales de trabajo con que cuenta un laboratorio de docencia, se
debe saber en qu tipo de anlisis se les puede emplear, cules son sus limitaciones de medicin, sus condiciones ptimas de
operacin y los cuidados que se les debe brindar.
Balanzas
Su propsito es medir el peso de un material o pesar cierta cantidad de una sustancia, las hay de varios tipos pero dos son los
ms comunes en el laboratorio de docencia.
Balanza granataria
Tiene una sensibilidad de 0,1 g por lo que no tiene capacidad para medir miligramos, est diseada para pesar desde dcimas
de gramo hasta algunos kilogramos. Cuidados: se le debe mantener limpia, no derramar slidos ni lquidos sobre el rea de
pesado (plato) y dejarla en ceros despus de su uso.
Balanza analtica
Este tipo de balanza cuenta con una sensibilidad de 0,01 g hasta 0,0001 g. Pasos a seguir para un manejo adecuado:
Antes de pesar, ajuste la burbuja (se puede encontrar en la parte trasera, lateral o frontal) haciendo girar los tornillos de las
patas de soporte.
Elimine con una brocha pequea todos los residuos slidos que se hayan acumulado debajo del plato.
No la mueva del lugar donde se encuentra pues la puede desequilibrar.
Si as lo requiere, puede tarar el recipiente donde pesar el reactivo antes de tomar su peso definitivo.
Mantenga las puertas laterales y la frontal de la balanza cerradas al tomar la ltima lectura, ya que el sistema de pesado es
muy sensible a las corrientes de aire.
No se recarga a los lados de la balanza pues es muy sensible al movimiento.
Balanza analtica
Balanza granataria
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Material de Vidrio
El vidrio es un material durable, transparente y resistente, el que se emplea en la fabricacin de material de laboratorio es adems
resistente a cidos y otras sustancias corrosivas, as como a cambios bruscos de temperatura. Las dos marcas que dominan el
mercado son Pyrex y Kimax.
Matraz volumtrico
Pipeta volumtrica
No volumtrico
Estos materiales de vidrio no miden volmenes exactos por lo que se utilizan slo para contener lquidos. Una excepcin son las
pipetas graduadas que poseen una buena exactitud para trabajo analtico cuantitativo.
Matraz Kitazato
Matraz Erlenmeyer
Instrumentos de Medicin
Dentro de esta categora se encuentran las pipetas graduadas y las probetas para la medicin de volmenes de lquidos, el picnmetro para medir la densidad de un slido o de un lquido y el termmetro para la medicin de temperaturas.
88
Pipeta graduada
Picnmetro
Apndice 1
Probeta
Termmetro
Desecador
Los desecadores tienen paredes gruesas de vidrio, forma cilndrica y una tapa esmerilada que se ajusta hermticamente para evitar que penetre la humedad del medio ambiente. En su parte interior tienen una placa o plato con orificios que vara en nmero
y tamao, estos platos pueden ser de diferentes materiales como porcelana o nucerite (combinacin de cermica y metal). Se
utilizan para mantener temporalmente sustancias exentas de humedad.
Figura 5. Desecador para proteger reactivos qumicos de la humedad del medio ambiente.
Otros Materiales
La Fig. 6 ilustra una campana de extraccin y diferentes materiales de uso comn en el laboratorio.
Tela de asbesto
Tripi
Soporte universal
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Embudo de filtracin
Tubos de ensayo
Parrilla
Mortero
Escobilln
Piseta
Mechero Bunsen
Propipeta
Figura 6. Campana de extraccin y diferentes materiales de uso comn en los laboratorios de qumica analtica.
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Apndice 1
Apndice 2
Instrucciones de operacin del potencimetro conductronic pH 120
Usos y Partes que lo Componen
El potencimetro Conductronic Modelo pH 120 es un instrumento que se usa para efectuar mediciones de pH, determinaciones
de iones especficos, titulaciones de xido reduccin, establece el punto final Kart Fischer y lleva a cabo otras titulaciones con
electrodos polarizados. El equipo tiene un panel que proporciona lecturas de dos dgitos y la compensacin de temperatura es
automtica de 0 a 100 C. Su alta impedancia de entrada (1012W) permite su uso con todos los electrodos actualmente disponibles, incluyendo los diseados para iones especficos. La Figura 1 muestra las controles e indicadores que lo componen y en el
apartado siguiente se indica la funcin de cada una.
Controles e Indicadores
1. Panel de control. Estas teclas permiten la seleccin de las diferentes funciones como son pH, mV, mVrel. y C. Si se va a
medir la temperatura se requiere el sensor de temperatura.
2. Control de pendiente (Slope). Compensa la desviacin del valor terico de la pendiente del electrodo. Funciona nicamente en el modo de pH.
3. Control de Calibracin (Calibrate). Permite calibrar el instrumento en las funciones de pH y mVrel.
4. Panel de Lectura. Indica el valor del pH medido por el electrodo, tambin proporciona datos de temperatura y mV.
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Calibracin a un punto
(Cuando el valor de pH de la solucin problema est en el intervalo de 3.0 unidades, respecto al pH 7.0 de la solucin patrn)
1. Asegrese que el electrodo este bien conectado en la parte trasera del equipo y conecte el equipo a la corriente elctrica.
2. Seleccione la tecla pH en el panel de control.
3. Lave el electrodo con agua destilada y squelo con un papel absorbente suave tocando solamente el bulbo.
4. Fije la perilla Slope en 100% en la escala.
5. Introduzca el electrodo y el sensor de temperatura en la solucin patrn de pH 7.0 y permita que la lectura se estabilice
(aproximadamente 30 seg).
6. Ajuste la perilla de calibracin Calibrate, hasta que el medidor indique el valor pH 7.0 de la solucin patrn.
7. Retire el electrodo y enjuguelo con agua destilada, pero no seque el electrodo.
8. Introduzca el electrodo en la solucin a medir y lea el valor de pH en el panel de lectura. Despus de cada medicin, retire
el electrodo y enjuguelo con agua destilada.
92
Apndice 2
Problemas y Precauciones
Si el instrumento no funciona, revise que el cable de corriente est bien conectado a la toma de corriente y que el cable del
electrodo este firmemente conectado a la parte trasera del equipo.
Verifique que las soluciones patrn estn completamente transparentes y que no contengan partculas extraas. La solucin
patrn de pH 7.0 debe ser incolora, la de pH 4.0 roja y la de pH 10.0 azul. Cambie las soluciones patrn, en caso de que la
perilla Calibrate o la perilla Slope, lleguen al tope midiendo estas soluciones.
Las soluciones de baja conductividad, tales como el agua destilada y desionizada, responden ms lentamente, dando la
apariencia de lecturas errticas.
Si el instrumento no responde, verifique que el electrodo no est daado, de estarlo sustityalo por otro y hgalo saber al
profesor y al laboratorista. Si el electrodo no est daado, sumrjalo en agua tibia por una hora para destapar la referencia
y que los cristales de KCl fluyan adecuadamente. Si el instrumento sigue sin responder correctamente despus de haber
verificado los puntos anteriores, informe a su profesor y a la Coordinacin de Laboratorios para su reparacin o sustitucin.
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Apndice 3
Instrucciones de operacin del espectrofotmetro biomate tm 3 thermo spectronic
Usos y partes que lo componen
El espectrofotmetro UV-Visible es un equipo de uso fcil y las determinaciones que en l se realizan son de tipo cuantitativo,
con aplicaciones en diferentes campos como:
Industria de alimentos, qumica, farmacutica y en el tratamiento de aguas residuales, en donde se le utiliza en los anlisis
rutinarios de control de calidad.
Laboratorios de investigacin para el anlisis de diversos compuestos de inters.
Enseanza, en el desarrollo de prcticas acadmicas en los laboratorios de docencia.
El espectrofotmetro Biomate tm 3 Thermo Spectronic (Fig. 1) ofrece:
Un sistema ptico nico que aumenta la precisin y exactitud.
Calibracin automtica de la longitud de onda.
Programacin para la determinacin de curvas estndar, cinticas qumicas y bioqumicas, anlisis a mltiples longitudes de
onda y diversas formas de expresar los resultados (por ejemplo, diferencia de absorbancias).
Compuerta para el
portaceldas
Panel
de lectura
Teclado del
espectrofotmetro
Controles e indicadores
Panel de lectura. Muestra las lecturas de absorbancia, transmitancia y la concentracin de los compuestos en las soluciones
contenidas en la celda. Asimismo, indica la programacin que se est haciendo del equipo.
Teclados. Ajusta y establece cambios en los parmetros de medicin, a travs de los teclados numrico, de programacin
y de funciones (Fig. 2). El teclado numrico ajusta los cambios en la longitud de onda y tiempo de la determinacin, y los de
programacin y funciones incluyen las teclas esc, clear, enter,
y , test, utility, print que permiten que el espectrofotmetro funcione como una microcomputadora.
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Panel de lectura
Teclas de funcin
Teclas numrica y de
programacin y numricas
96
Apndice 3
Botn de encendido
Figura 3. Vista trasera del equipo. Se observa el panel de conexin y el botn de encendido.
3. Abra la compuerta del portacelda (Fig. 4) y asegrese de que no existe ninguna muestra, cierre la compuerta y presione el
botn de encendido. El equipo empezar por darle la bienvenida con el logotipo de la marca, despus calibrar los filtros y
ajustar la lmpara automticamente (escuchar un sonido). Durante el proceso no abra la compuerta del portacelda y no
presione ninguna tecla, slo espere.
Compuerta del
portacelda
Portacelda
Lente receptor
(interior)
Figura 4. Vista superior del equipo con la compuerta abierta, se observa el portacelda
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FECHA Y HORA
FECHAS DE
PROGRAMAS
PROGRAMAS
RUTINAS
RUTINAS
Anlisis
Almacenados
2. Presione la tecla ESC del panel de programacin una o dos veces hasta que escuche un sonido. El panel de lectura
cambiar, mostrando lo siguiente:
MENU
FECHA Y HORA
Iniciar Smart
General Test
Anlisis
A lmacenados
3. En el panel de funciones pulse la tecla GENERAL TEST y posteriormente ATC bsica. El panel de lectura mostrar lo siguiente:
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Apndice 3
GENERAL-TEST
FECHA Y HORA
ABSORBANCIA
0.000 A
Medir Blanco
General Test
Ajustar nm
4. Ajuste la longitud de onda, presionando primero la tecla Ajustar nm y despus las teclas numricas necesarias y por ltimo
oprima ENTER.
5. Con la tecla de cambiar modo, puede alternar la determinacin de absorbancia, transmitancia o concentracin.
6. Prepare la solucin blanco o de referencia, colquela en la celda y sta a su vez en el portaceldas (la celda se debe orientar
con el lado transparente frente a la persona que opera el espectrofotmetro, el ancho de la celda es de 1.0 cm). Ajuste la
absorbancia a cero oprimiendo la tecla medir blanco.
7. Retire la celda y cambie la solucin de referencia por la muestra problema. Tome la lectura de la absorbancia que se muestra
en el panel. Es recomendable, ajustar nuevamente con el blanco antes de tomar la lectura de otra muestra.
8. Cuando termine de efectuar todas las determinaciones, no se olvide de retirar la celda. Presione la tecla ESC tres veces
para terminar.
9. Para apagar el equipo, presione el botn de apagado (el mismo de encendido pero en la segunda posicin, Fig. 3) y desconecte el cable del tomacorriente y del equipo. Evite desconectar el cable antes de presionar el botn de apagado, ya que se
puede daar la lmpara de Xenon y/o el fusible del aparato. No guarde el cable en el interior del equipo (en el portaceldas).
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1. Siga los pasos indicados en la seccin Conexin y Calibracin Automtica del Equipo.
2. Una vez calibrado el equipo, el panel mostrar lo siguiente:
MENU
FECHA Y HORA
FECHAS DE
PROGRAMAS
PROGRAMAS
RUTINAS
RUTINAS
Anlisis
Almacenados
3. Presione la tecla ESC del panel de programacin una o dos veces hasta que escuche un sonido. El panel de lectura cambiar, mostrando lo siguiente:
MENU
Iniciar
Smart
100
General
Test
Anlisis
A lmacenados
Apndice 3
FECHA Y HORA
4. En el panel de funciones pulse la tecla GENERAL TEST. El panel de lectura mostrar lo siguiente:
TIPOS DE ANALISIS
FECHA Y HORA
Iniciar
Smart
General
Test
Anlisis
Almacenados
Ensayos
Biomate
5. Con la tecla
del teclado de programacin, baje el cursor y seleccione la opcin Mltiples longitudes de onda y oprimir
la tecla ENTER. El panel cambiar y mostrar lo siguiente:
FECHA Y HORA
----------NOMBRE DE ANALISIS
ABSORBANCIA
MODO DE MEDICION
# ID (0=OFF)
Ajuste
nm
Almacenar
analisis
Anlisis
almacenados
6. Presione la tecla Ajuste nm del panel de funciones. Oprima la opcin Agregar nm y combinando las teclas numricas y la
tecla ENTER, ingrese las longitudes de onda deseadas, las que aparecern en la pantalla. Si requiere borrar alguna de estas
longitudes, oprima Borrar nm.
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FECHA Y HORA
ABS
1. 190
2. 200
3. 210
Agregar
nm
Anlisis
Almacenados
Correr
muestra
7. Una vez ingresadas las longitudes de onda a las que efectuarn las determinaciones, elija la opcin Correr muestra, la
pantalla cambiar y mostrar los siguiente:
nm
FECHA Y HORA
ABS
Medir
Blanco
Medir
Muestra
8. Prepare la solucin blanco o de referencia, colquela en la celda e introduzca sta en el portaceldas (la celda se debe orientar
con el lado transparente frente a la persona que opera el espectrofotmetro). Ajuste a cero la absorbancia para cada longitud
de onda, oprimiendo la opcin medir blanco. Se activar despus de unos segundos la opcin medir muestra. Retire
la celda y cambie la solucin de referencia por la muestra problema. Oprima el botn medir muestra y registre la lectura
de la absorbancia que se muestre en el panel.
9. Anote las lecturas y cuando termine de efectuar todas las determinaciones, retire la celda. Presione la tecla ESC cuatro veces
para terminar.
10. Para apagar el equipo, presione el botn de apagado (el mismo de encendido pero en la segunda posicin, Fig. 3) y desconecte el cable del tomacorriente y del equipo. Evite desconectar el cable antes de presionar el botn de apagado, ya que se
puede daar la lmpara de Xenon y/o el fusible del aparato. No guarde el cable en el interior del equipo (en el portaceldas).
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Apndice 3