Mutagênese

Mutações: definição, classificações,

consequências, origens, aplicações
experimentais
 Genoma
• Todo ser vivo tem um
genoma
• Defina genoma
• O genoma é
transmitido para as
gerações futuras, isto
sugere que o material
genético tem de ser
estável
• Mas será imutável?
 Genoma – material genético
• características do material
genético que garantem
estabilidade da informação
• estrutura do DNA: dupla
fita, fitas complementares, 2
vezes a mesma informação,
redundante
• DNA compactado,
associado a proteínas,
estruturas como nucleóide
ou núcleo, proteção
• Fidelidade da replicação
• Apesar de estável, a estrutura do material
genético é dinâmica, sujeita a alterações –
mutações

– mutação:
“alteração hereditária do conteúdo genético da célula
(sequência de pares de base do ácido nucléico)”
 Efeitos das mutações
• Efeitos no fenótipo
• Em geral resultam em alteração na função de
proteínas

• A seleção natural atua sobre o fenótipo

 Mutações, boas ou ruins, por que
se mantêm nas populações?
• Mutações prejudiciais:
a maioria das mutações traz prejuízos ao indivíduo. Por
que?
• Alguma taxa de mutação sempre presente nas
populações
• Mutações benéficas:
fonte da variabilidade genética, matéria-prima da a
seleção natural, base de todo processo evolutivo
• E podem ser neutras
Efeito benéfico das mutações:
fonte de variabilidade
 Classificação das mutações
Quanto ao tipo de célula afetada (organismos superiores)

• Somática: incide em células

somáticas e suas descendentes
geradas por mitose (ex. câncer)
• Germinativa: incide em
gametas, pode afetar a prole do
indivíduo (ex. trissomia do
cromossomo 21)
• São sempre hereditárias!
 Classificação das mutações
Quanto à localização no genoma:

• Podem incidir em regiões

codificantes: genes estruturais,
alteram a composição de
aminoácidos de proteínas e sua
função afetando o metabolismo ou
estrutura da célula
• Podem incidir em regiões
reguladoras: ex. promotores de
genes, alterando a sua expressão
• Podem incidir em regiões sem função
definida e assim ter efeitos neutros
Mutações – localização no genoma
• O que você espera obter ao medir a taxa de mutação
em regiões codificantes x regiões sem função definida
do genoma. Por que?
• O genoma de qualquer organismo é formado por regiões
transcritas e não transcritas. Que efeitos podem ter as
mutações que incidam nestes locais?
• Que efeito as mutações de troca de base que incidam
sobre regiões não transcritas podem trazer sobre a
síntese de proteínas específicas?
 Classificação das mutações
Quanto à extensão da alteração no genoma
• Gênicas ou pontuais: afetam um • Cromossômicas: afetam a
ou poucos pares de base, ex. estrutura dos cromossomos e a
trocas de base, adições e expressão de muitos genes, ex.
deleções. inversões, translocações,
deleções

• Genômicas: afetam todo o

genoma, ex. duplicações do
genoma, poliploidias em
vegetais
 Classificação das mutações

• No caso particular de mutações pontuais em genes

estruturais, segundo as consequências para a proteína
codificada:

• Troca de sentido
• Sem sentido
• Neutra
• Silenciosa
• Troca de referencial de
leitura
 Mutações pontuais em região
codificante
• Troca de sentido: altera o codon e o aminoácido
presente na proteína
• Neutra: altera o codon mas o novo aminoácido
codificado tem propriedades químicas
semelhantes ao original
• Silenciosa: altera o codon mas não o
aminoácido, código genético degenerado
 Mutações pontuais em região
codificante
• Troca de referencial de leitura (frameshift): adição ou
deleção de pares de base em número diferente de 3 ou
múltiplo de 3
– altera o quadro de leitura do gene e toda a sequência de
aminoácidos a partir do ponto de mutação
 Mutações pontuais em região
codificante
• Dentre os tipos de mutações citados, qual ou quais você
espera que tenha efeitos mais danosos para a função do
produto gênico? Por que?
• No caso de uma mutação de troca de referencial de
leitura, é possível relacionar a gravidade do seu efeito
de acordo com o local da sequência do gene em que
ocorrra (iníco ou final)? Explique.
• Por que a maioria das substituições de pares de base
encontradas em regiões codificantes está presente na 3a
posição do codon?
Tendo em vista todos os exemplos de
mutações apresentados, é importante
notar que mutações sempre ocorrem ao
acaso
 Origem das mutações
• Espontâneas:
consequências de erros na replicação de DNA
ou lesões espontâneas no DNA
– Toda população apresenta uma taxa de mutação
basal
ex. 10-8 célula/geração
• Induzidas:
consequência de exposição a agentes
mutagênicos no ambiente
 Mutações espontâneas devido a
erros de replicação do DNA
• DNA polimerase bacteriana, taxa de erro
na incorporação de bases durante a
replicação do DNA
(10-4 célula / geração)

• Atividade exonucleásica 3´-5´, correção

de parte dos erros
 Mutações espontâneas devido a
erros de replicação do DNA
• Se permanecer a base errada
na nova fita de DNA, podem
atuar mecanismos de reparo
(ou não)

• No momento da próxima
replicação, se a fita molde
apresenta a base errada, vai
levar à incorporação de uma
base diferente da original na
fita nova. Formação de um par
de base diferente da
sequência original: mutação.
Fixada. Alteração hereditária.
Mutações espontâneas devido a
erros de replicação do DNA
tautômeros

• Tautômeros: formas
Amino Imino
Amino
raras das bases com
propriedades de
pareamento diferentes.
 Mutações espontâneas devido a
erros de replicação do DNA
• incorporação de tautômeros na replicação de DNA
• Pareamento incorreto no momento da replicação, incorporação de
base errada
• Se não for corrigido por mecanismos de reparo, no momento da
próxima replicação levam a mutação pontual tipo troca de base.

• A forma tautomérica da adenina, imino, pareia com citosina.

– Esquematize um evento em que a presença de uma forma tautomérica desta
base causa uma mutação de troca de base, mostrando as sucessivas
replicações do DNA até a fixação da mutação.
 Mutações espontâneas devido a
erros de replicação do DNA
• escorrgamento DNA pol
em regiões repetitivas
• levam a adição ou
deleção, troca de
referencial de leitura

– Esquematize de que forma a

dobra de uma fita de DNA no
momento da replicação pode
gerar uma deleção ou um
adição, segundo ocorra na fita
molde ou na fita filha.
 Mutações espontâneas devido a
lesões espontâneas no DNA
• Desaminação: lesão por perda
do grupamento amino. Ex.
citosina desamina e gera uracil
– A lesão altera as propriedades de
pareamento da base
– Par original C:G passa a U:A

• Se não for corrigido por

mecanismos de reparo, no
momento da próxima
replicação leva a mutação
pontual tipo troca de base.

Esquematize um evento em que a presença de uracil no DNA causa uma mutação

de troca de base, mostrando as sucessivas replicações do DNA até a fixação da
mutação.
 Mutações espontâneas devido a
lesões espontâneas no DNA
• Depurinação: perda da base • Se sítio AP não for corrigido
purina, em geral G, restando por reparo, no momento da
apenas a ribose e o fosfato na próxima replicação leva a
fita de DNA, gera sítio mutação pontual tipo troca de
base.
apurínico (AP), perda da
informação codificante

É possível que um evento de depurinação ocorra e não gere uma mutação. Como?
 Hot spot
• Locais no genoma mas propensos do que a
média a uma determinado tipo de mutação
 Lesões x Mutações
• Mutação: alteração na
sequência de bases do DNA,
uma vez fixada é herdada
por todas as células filhas.
Pode resultar de uma lesão G

ou não.

• Lesão: alteração na estrutura

química do DNA com
modificação do fosfato, base
nitrogenada ou ribose, pode
impedir a replicação do DNA,
pode ser corrigida por
mecanismos de reparo.
Por que a taxa de mutação (medida
pela freqüência de mutações)
observada é sempre menor do que a
taxa de erros durante o processo de
replicação do DNA?
 Mutações induzidas
• Ocorrem por exposição das células a agentes
químicos, físicos ou biológicos que elevam a
taxa de mutação basal da população
• Efeito dose resposta:
exposição ao agente x taxa de mutação
• Agentes mutagênicos químicos
• Agentes físicos
• Agentes biológicos
 Mutações induzidas por agentes
químicos
• Análogos de base: ex. 5
bromo uracil (5BrU)
• Incorporado no lugar da
base normal pela DNA
pol no momento da
replicação
• formas ionizadas com
propriedades de
pareamento alternativas
• se não forem corrigidas A=T U

por mecanismos de U
reparo causam mutação
pontual tipo troca de base
 Mutações induzidas por agentes
químicos
• Agentes alquilantes
– Ex. MMNG, mostardas nitrogenadas
(componente do gás mostarda)

• Transferem grupo alquil ou metil

para bases no DNA
• alteram as propriedades de
pareamento da base
• se não forem corrigidas por
mecanismos de reparo causam
mutação pontual tipo troca de base
• A guanina metilada, O6mG, passa
a parear com T em vez de C.
• Esquematize um evento em que a
presença dessa base alterada no DNA
molde causa uma mutação de troca de
base, mostrando as sucessivas
replicações do DNA até a fixação da
mutação.
 Mutações induzidas por agentes
químicos
• Agente intercalante
– Ex. benzopireno (fumaça de
cigarro)
• Intercala entre pares de base
do DNA, pode formar ligações
covalentes com as bases,
impede a replicação
• É acionada resposta celular
para síntese de DNA passar
pela lesão, porém com menor
fidelidade, coloca qualquer par
de base da fita nova
• Por que?
 Mutações induzidas por agentes
químicos
• Radiação UV: lesão comum • se não forem corrigidas por
dímeros de pirimidina mecanismos de reparo causam
• Na fita molde durante a mutação pontual tipo troca de
replicação causam erros de base
pareamento, incorporação de
bases erradas.

A presença de um dímero C-C na fita

molde durante a replicação de DNA
leva à incorporação errada de A na
fita filha. Que tipo de trocas de base
são esperados?
 Mutações induzidas por agentes
biológicos
• Elementos de transposição:
moléculas de DNA móvel,
capazes de mudar de local no
cromossomo, ou entre
diferentes replicons.
• Codificam a enzima
transposase e alguns outros
genes (como genes de
resistência a antibiótico)
• são flanqueados por
seqüências de DNA repetidas
e invertidas, reconhecidas pela
transposase como locais de
corte
Mutações induzidas por elementos
de transposição
• Ação mutagênica: •Saída incorreta pode levar ou
movimento de transposição, deixar pares de base extra
entrada e saída do elemento
altera a sequência de bases
 Aplicações experimentais da
mutagênese
• mutantes - fundamentais para a compreensão
de princípios básicos de genética: código
genético, definição de gene, vias metabólicas,
controle da expressão gênica, função de
proteínas etc

• técnicas para criar e detectar mutantes

 Aplicações experimentais da
mutagênese
• Como detectar mutantes em laboratório
• sequenciamento de DNA - polimorfismos

• fenótipo marcador - fenótipo

mutante indica função celular
afetada, depois se caracteriza o
gene mutado
• gene marcador: alteração de
função facilmente observável no
fenótipo
• Ex: em bactérias mutantes
auxotróficos
• Ex: resistência a antibióticos
 Aplicações experimentais
como criar mutantes em laboratório
• Mutagênese generalizada • mutação pode gerar
• uso de agentes produto com função
mutagênicos, mutações alterada ou não gerar
incidem em todo o genoma produto (nocaute gênico)
• cada agente gera um tipo • efeito no metabolismo -
de mutação predominante noções sobre a função
• necessária posterior
seleção de mutantes e
caracterização do tipo de
mutação
 Alguns mutagênicos usados
experimentalmente
tipo de mutação
Agente mutagênico mecanismo de ação vantagem desvantagem
gerada
MMNG N-metil N-
potente, alta taxa de perigoso, altamente
nitro N- transições GC- AT agente alquilante
mutação tóxico
nitrosoguanidina
transversões GC-TA, Replicação potente, alta taxa de perigoso, altamente
BPDE (benzopireno)
troca de referencial mutagênica mutação tóxico
troca de referencial,
Replicação a maioria da
radiação UV substituições de
mutagênica população morre
base, deleções
2AP (2 aminopurina) transições análogo de base uso seguro Mutagênico fraco
não requer
Linhagem de substituição de defeito na capacidade
tratamento químico, Requer manipulação
bactéria mutadora bases, troca de de edição da DNA
apenas cultivo da genética
mutD referencial polimerase
linhagem
mutações “tudo ou manipulação
Elementos de inserções e elementos genéticos
nada”, facilitam genética, gera
transposição rearranjos móveis
seleção mutações letais
 Aplicações experimentais
como criar mutantes em laboratório
• mutagênese sítio específica • objetivo de alterar propriedades
de uma proteína para uso em
• alteração precisa de processos biotecnológicos, ou
determinados pares de base • gerar conjunto de mutantes,
em uma seqüência de DNA. cada um com um ou poucos
aminoácidos alterados, e
mapear importância de cada
região da proteína para sua
função.
• Manipula a informação genética
em laboratório de forma
planejada.

• Além da alteração de aminoácidos

em uma proteína, que tipo de
conclusões poderiam ser tiradas no
caso de se utilizar a mutagênese
dirigida em regiões que controlam a
expressão de um gene
 Aplicações experimentais
Engenharia de proteínas
• Visa obter variantes de enzimas adaptadas ao uso
industrial
• Objetivos: aumentar atividade catalítica, resistência a
solventes, a temperatura, a pH, aumentar gama de
substratos ou afinidade por substrato ou especificidade
• Ex. adição de proteases a sabão em pó (tira manchas);
indústria de alimentos: amaciantes de carne,
clareadores de sucos, cervejarias; aplicações médicas:
insulina recombinante, antígenos vacinais estáveis
 Aplicações experimentais
Engenharia de proteínas
• Estratégia:
• Disponibilidade da
sequência de DNA de
interesse
• Muatgênese sítio dirigida
• Produção da enzima
mutante em larga escala
em sistema de expressão
recombinante
• O que alterar? Decisão
com base em informação
estrutural / funcional da
proteína
 Aplicações experimentais
Engenharia de proteínas
• Exemplo:
• Adição de pontes de sulfeto
aumenta a estabilidade de uma
enzima
• Substituição de certos resíduos
de aa por cisteínas
• Cuidados: não alterar
drasticamente a estrututra da
proteína, escolher resíduos de
aa que fazem contato na
estrutura 3D da enzima, gerar
mutações neutras, não alterar
sítio catalítico, manter a função
 Engenharia de proteínas

Enzima resíduo de AA n o pontes estabilidade

 Conclusão
• Ao final deste módulo você deve ser capaz de:
– Definir mutação
– Discutir sua importância biológica
– Exemplificar tipos de mutação
– Descrever de que forma podem ser geradas,
espontaneamente ou induzidas
– Definir agente mutagênico
– Discutir usos experimentais das mutações e de que
forma podem aprofundar o conhecimento biológico