AO DE Y LA INDUSTRIA RESPONSABLE Y DEL

FORTALECIMIENTO DE LA EDUCACION

Universidad Nacional De Piura

Facultad de ciencias
Escuela profesional de ciencias biolgicas

FUNDAMENTOS DE LAS
PRUEBAS GENETICAS DE
FILIACION
CURSO:

Gentica de Poblaciones

DOCENTE:

Blgo. Jaime Fernndez Ponce

CICLO:

VIII

INTEGRANTES:

Alvarado Moscol Alessandra Beatriz.

Piura, 20 de Octubre del 2015

Fundamentos tcnicos de las

pruebas de ADN
La informacin gentica de cualquier persona es idntica en todas las
clulas nucleadas de su cuerpo y es distinta a la de cualquier otro
individuo (exceptuando el caso de hermanos gemelos). Todos los
seres humanos reciben la mitad de la informacin gentica de su
padre y la otra mitad de su madre. Esta informacin gentica se
localiza en una molcula situada en el ncleo de las clulas del
organismo llamada cido desoxirribonucleico o ADN.
En nuestro laboratorio extraemos y aislamos el ADN de las muestras
biolgicas que recibimos y, a partir de l, realizamos una seleccin de
determinadas regiones empleando una tcnica muy sofisticada
conocida como la amplificacin en cadena de la polimerasa o PCR.
Estas regiones son los llamados marcadores genticos, microsatlites
o STRs.
Estos marcadores genticos son regiones conocidas del ADN, muy
variables de un individuo a otro (son muy "polimrficos") y que se
heredan sin cambios de una generacin a la siguiente. A las distintas
formas heredables de estos marcadores genticos las denominamos
"alelos". Por lo tanto constituyen una herramienta muy valiosa en los
estudios de identificacin gentica y filiacin ya que:
Cada individuo tendr unos marcadores genticos distintos a los del
resto, tendr sus propios alelos.
Necesariamente, la mitad de estos marcadores sern idnticos a los
de su padre y la otra mitad idnticos a los de su madre. Para un
determinado marcador gentico el hijo tiene dos alelos, uno cedido
por el padre y otro cedido por la madre (y stos a su vez los
heredaron de sus padres, los abuelos, del mismo modo).
La informacin sobre los alelos de cada individuo la obtenemos del
anlisis mediante un secuenciador automtico de ADN del producto
de la amplificacin por PCR.
De la comparacin de los alelos encontrados en el hijo se deducen
aquellos que obligadamente han debido ser aportados por el padre
biolgico. De la comparacin se puede desprender que:
El presunto padre biolgico estudiado no ha podido aportar al hijo los
marcadores correspondientes al padre biolgico, es decir, existen
determinados alelos en el hijo que no estn presentes en el padre en
cuestin, en cuyo caso la paternidad quedar excluida.

El presunto padre biolgico s ha podido aportar esos marcadores, es

decir, los alelos encontrados en el hijo estn presentes en el padre en
cuestin, en cuyo caso procedemos a realizar un complejo anlisis
estadstico que contrasta la probabilidad de que esa persona sea el
padre con la probabilidad de que lo sea cualquier otra persona
tomada al azar de la poblacin, dada la evidencia gentica que se
desprende del anlisis.

La Informacin Gentica como

herramienta: El ADN
El cido Desoxirribonucleico o ADN es una molcula grande, de
estructura compleja, que porta la informacin gentica del organismo.
Esta informacin gentica es importantsima ya que es la que nos
hace lo que somos y cmo somos y est basada en un cdigo
derivado de la combinacin de cuatro elementos que son las bases
nitrogenadas: Adenina, Timina, Citosina y Guanina.
Dentro de los seres humanos podemos encontrar ADN dentro del
ncleo de cada clula (ADN nuclear) y fuera del ncleo, en el
citoplasma de la clula, dentro de unos orgnulos pequeos
denominados mitocondrias (ADN mitocondrial).
El ADN nuclear se estructura en grandes "paquetes" denominados
cromosomas. Los seres humanos tenemos 46. Exactamente, 23
pares.
Por qu decimos mejor 23 pares? Porque, en realidad, la informacin
gentica de un ser humano est integrada en un "juego" de 23
cromosomas, 22 autosmicos (cromosomas 1 al 22) y 1 sexual
(cromosoma X o Y), lo que sucede es que los seres humanos somos
organismos diploides, esto es, todas nuestras clulas (salvo las
germinales) tienen dos de estos "juegos" completos: uno que
recibimos un de nuestra madre (22 + 1X) y otro que recibimos de
nuestro padre (22 + 1X 1Y).
En total pues, 46 cromosomas. De los cuales, los cromosomas
sexuales determinan el sexo de la persona. Dos cromosomas X (XX):
sexo femenino; Un cromosoma X y un cromosoma Y (XY): sexo
masculino.
Curiosamente, de todo el ADN nuclear, slo aproximadamente el 10 %
es el que porta el cdigo gentico con la informacin que configuran
los genes (ADN codificante), el restante 90% es, simplemente, ADN
no codificante.

Precisamente, en el ADN no codificante, es donde la gentica forense

ha encontrado una herramienta valiossima para la identificacin de
las personas: los polimorfismos de ADN.

Los Polimorfismos de ADN

Ya hemos visto que tan slo el 10% del ADN nuclear codifica lo que
somos y como somos. Pues, por si fuera poco, de ese 10% los seres
humanos compartimos casi todo... (Si no, no seramos seres
humanos). As que, si lo que queremos es algo que nos sirva para
discriminar a unas personas de otras, el ADN codificante, en trminos
generales y aunque tambin tenga sus polimorfismos, nos va a servir
de poco.
En cambio, dentro del ADN no codificante nos encontramos con zonas
de una extraordinaria variabilidad de unas personas a otras, de ah
que las denominemos "polimorfismos". Tambin, por el uso que le
damos, los llamamos "marcadores" de ADN.
Hay distintos tipos de polimorfismos pero para entender lo que son,
su utilidad y no extendernos demasiado, nos basta con referirnos slo
a los denominados STR (del ingls Short Tandem Repeats, o
"repeticiones cortas en tandem").
Un STR est formado por una secuencia corta de bases (por ejemplo,
de cuatro, "AATG", como en el sistema TPOX) que se repite un nmero
determinado
de
veces
(...AATGAATGAATGAATGAATGAATGAATGAATGAATG...). La secuencia
"AATG" forma lo que denominamos la unidad de repeticin. Esta
unidad de repeticin "AATG" es igual para todas las personas; lo que
vara de unas personas a otras, y esto es muy importante, es el
nmero de veces que se repite.
Cada STR tiene su "unidad de repeticin" caracterstica. Y el nmero
de repeticiones ser variable desde un nmero mnimo a uno
mximo.
Cada nmero de repeticiones concreto constituir un "alelo", que es
como denominamos a cada forma que puede tomar este sistema en
funcin del nmero de repeticiones.
Si seguimos con nuestro STR ejemplo, en la secuencia anterior, la
unidad "AATG" se repite 9 veces. Estamos, pues, ante el alelo 9 de
muestro ejemplo.

Cada persona tendr, para cada sistema o marcador gentico

analizado, sus propios dos alelos, uno procedente del padre y otro
procedente de la madre.
Los polimorfismos de ADN que utilizamos en gentica forense han
sido previamente validados para tal uso, es decir, cumplen una serie
de requisitos cuyo fin ltimo es que su poder de discriminacin entre
personas sea lo suficientemente alto.

Polimorfismos de ADN y las Pruebas de

Paternidad
En el apartado anterior, hemos descrito como todos los seres
humanos recibimos la mitad de la informacin gentica de nuestro
padre y la otra mitad de nuestra madre. Es decir, heredamos un
"juego" completo de 23 cromosomas (22 autosmicos + 1 sexual) de
nuestro y otro "juego" completo de nuestra madre.
As que tenemos dos cromosomas 1, dos cromosomas 2, dos
cromosomas 3, y as hasta el 22 y dos cromosomas sexuales.
Entonces, de nuestros dos cromosomas 1, uno de ellos contendr
informacin gentica procedente exclusivamente de los cromosomas
1 de nuestro padre y el otro contendr exclusivamente informacin
gentica de los cromosomas 1 de nuestra madre.
Llegados a este punto podemos deducir que, si queremos saber si
alguien es el padre biolgico de una persona, y basndonos en el
principio anterior, deberamos comprobar que ambas comparten la
mitad de su informacin gentica. Cmo?, mediante el estudio de
polimorfismos de ADN. Veamos un ejemplo:
Investigamos una paternidad biolgica y contamos con la madre, el
hijo y un presunto padre biolgico. Decidimos analizar el polimorfismo
denominado TPOX y obtenemos los siguientes resultados:
El hijo porta los alelos 9 y 10 (se informa como [9,10]); la madre,
[9,11] y el presunto padre biolgico, [7,8].
Nos encontramos con una EXCLUSIN de paternidad, ya que los
posibles hijos de esa pareja slo pueden ser, para ese marcador
analizado: [7,9], [7,11], [8,9] y [8,11], como combinacin de sus
alelos correspondientes, y el genotipo del hijo [9,10] no se encuentra

entre ellos. El resultado no es compatible con la hiptesis de que sean

padre e hijo biolgicos.
Imaginemos que analizamos a un segundo presunto padre biolgico y
resulta ser [7,10] para el sistema TPOX.
Nos encontramos con una compatibilidad gentica que implica NO
EXCLUSIN de paternidad ya que los posibles hijos de esta nueva
pareja pueden ser: [7,9], [7,11], [9,10] y [10,11]. El hijo analizado es
portador de la tercera combinacin posible. El resultado es
compatible con la hiptesis de que sean padre e hijo biolgicos. Un
solo sistema no es suficiente para alcanzar una respuesta
concluyente, debemos analizar el mayor nmero posible (en principio,
cuantos ms, mejor) para encontrar el mayor nmero de exclusiones
de paternidad o una compatibilidad gentica completa que no
permita excluir la relacin y permita alcanzar unos valores elevados
para el ndice y la Probabilidad de Paternidad.

La Exclusin de Paternidad
Cuando se afronta un estudio de paternidad se deben estudiar el
mayor nmero de marcadores posibles para poder encontrar el mayor
nmero de exclusiones o la mayor compatibilidad gentica entre el
presunto padre biolgico y el hijo.
De forma clsica y general se puede considerar que una paternidad
queda excluida si se encuentran ms de 2 exclusiones entre los
marcadores analizados, en cuyo caso, podremos considerar que la
persona estudiada no puede ser la padre biolgico del hijo.
En nuestras pruebas de paternidad, en los que analizamos un gran
nmero de marcadores, solemos obtener entre seis y diez exclusiones
cuando la madre ha participado en el estudio y entre cuatro y seis
exclusiones cuando slo hemos estudiado al presunto padre biolgico.

La Probabilidad de Paternidad
Ahora bien, si la compatibilidad gentica entre el presunto padre
biolgico analizado y el hijo es completa podramos ya afirmar que
es su padre biolgico?
Nuestro sentido comn nos dice que s: primero sospechamos que
una persona es el padre biolgico de otra, para comprobarlo,

decidimos analizar sus perfiles genticos y, al final, resultan ser

perfectamente compatibles!. Parece muy poco probable que se
produzca esa compatibilidad y despus de todo el padre biolgico sea
otro.
Pues bien, podemos y debemos cuantificar esa incertidumbre.
Tenemos herramientas para calcular, una vez comprobada esa
compatibilidad gentica, cunto es de probable un hecho (S es el
padre) y cuanto es de probable el otro (NO es el padre). En 1938, Eric
Essen-Mller, basndose en el Teorema de Bayes, describi su
frmula para calcular la probabilidad de paternidad (W):
W = X / ( X + Y ), donde X es la probabilidad de que la evidencia
biolgica observada en el hijo proceda del presunto padre biolgico
analizado e Y la probabilidad de que la evidencia biolgica observada
en el hijo proceda de cualquier otro varn tomado al azar de entre la
poblacin. Esto significa asumir que, antes de hacer la prueba de
ADN, el presunto padre biolgico analizado tiene tantas posibilidades
de ser el padre como de no serlo y que, de no serlo, cualquier otro
varn de la poblacin tiene la misma probabilidad "a priori" de ser el
padre.

En 1981, K. Hummel describi sus predicados verbales, que

conjugaban distintos intervalos de valores de Probabilidad de
Paternidad (W) con sus respectivas interpretaciones, con el objetivo
de hacer comprensibles los valores y armonizar las interpretaciones.
Consider que un valor de W igual o superior a 99,73% era suficiente
para considerar probada una paternidad desde un punto de vista
prctico (W mayor o igual al 99,73% igual a "paternidad
prcticamente probada").
Los
predicados
verbales
de
Hummel
fueron
aceptados
internacionalmente. Tambin la Jurisprudencia Espaola los ha
descrito y admitidos como vlidos (ver Sentencia del Tribunal
Supremo del 24 de noviembre de 1992).

El ndice de Paternidad
Cuando afrontamos una prueba de investigacin biolgica de la
paternidad tratamos de averiguar, mediante evidencias biolgicas, si
una persona es el padre biolgico de otra, por lo tanto, nos
planteamos dos hiptesis mutuamente excluyentes:

H1 = "El presunto padre biolgico analizado S es el padre biolgico"

H2 = "El presunto padre biolgico analizado NO es el padre biolgico,
lo es cualquier otro varn de la poblacin no relacionado
familiarmente con l".
No existen ms hiptesis posibles, por lo tanto las probabilidades de
las dos hiptesis tienen que sumar 100%. SI queremos calcular la
probabilidad de paternidad utilizando la ecuacin de Essen-Mller
debemos asumir que la probabilidad "a priori" de ambas hiptesis es
del 50% (esto es, que tan probable es una como otra). Esto
tericamente es vlido pero, en general, es bastante conservador.
(Baste un ejemplo: Para poder ser padre biolgico hay que cumplir,
respecto a la madre, ciertos requisitos sobran las explicaciones - y
este requisito no parece lgico que lo pueda cumplir cualquier otro
varn escogido al azar de entre la poblacin, y al revs, si el presunto
padre nunca hubiese cumplido tal requisito, la probabilidad "a priori"
debera ser 0%).
Para evitar tener que comunicar una probabilidad de paternidad "a
priori", que siempre distorsiona la realidad por ser subjetiva, podemos
informar mediante el uso de un ratio denominado ndice de
Paternidad o IP:
ndice de Paternidad = Probabilidad de la hiptesis 1 / Probabilidad de
la hiptesis 2 [IP = P(H1) / P(H2) ]
Si en un determinado estudio la probabilidad de H1 resulta ser del
99,99% entonces la probabilidad de H2 ser del 0,01%, el ndice de
Paternidad ser del 9.999 (IP = 99,99 / 0,01 = 9.999)
Esto significa que el perfil gentico observado en el hijo es nueve mil
novecientas veces ms probable si procede del presunto padre
biolgico analizado que si procede de cualquier otro varn tomado al
azar de entre la poblacin.
Los predicados verbales de Hummel consideran que un valor de IP
igual o superior a 400 se corresponde con "una paternidad
prcticamente probada".

La "fiabilidad" de la prueba
Es habitual encontrar en Internet, incluso en sitios web de
laboratorios que se dedican a realizar pruebas de paternidad, a
quienes identifican el valor obtenido de Probabilidad de Paternidad
con la fiabilidad de la prueba y esto es FALSO.

Y es fcil de entender y deducir si sabe, se asume y se tiene en

cuenta que el valor que se obtiene de probabilidad de paternidad
depende directamente de la informacin gentica que poseen los
participantes y slo indirectamente de la forma que el laboratorio
aborda la investigacin.
Si el presunto padre biolgico y el hijo son totalmente compatibles
genticamente,
pero
comparten
una
informacin
gentica
relativamente frecuente en la poblacin, el valor que obtendremos de
probabilidad de paternidad ser menor que si la informacin gentica
que comparten es relativamente rara.
Si afrontamos las pruebas exactamente de la misma manera en
ambos casos, utilizando los mismos recursos tcnicos y humanos, y
aplicando exactamente los mismos criterios de calidad y control, y en
el primer caso obtenemos una probabilidad de paternidad del
99,995% y en el segundo del 99,9995%, significa que es ms fiable
el segundo resultado que el primero? La respuesta es NO. Ambos son
igual de fiables.
Como la informacin gentica de los participantes no se conoce "a
priori", es por lo que se establecen criterios homogneos a la hora de
abordar una investigacin gentica de paternidad y umbrales de
decisin que se deben alcanzar para considerar concluyentes los
resultados.
En condiciones normales, cualquier prueba de paternidad normal
puede considerarse probada si la probabilidad de paternidad alcanza
o supera el 99,9%.

Ahora bien Cules son los recursos tcnicos y humanos y los criterios
de calidad y control, que utilizar y aplicar el laboratorio que va a
hacer la prueba? Llegados a este punto, quizs la cuestin ms
importante que debamos plantearnos sea, qu laboratorio me inspira
ms confianza a la hora de afrontar mi investigacin gentica?

Limitaciones de las pruebas de ADN

Todo lo descrito en los apartados anteriores es vlido para aquellas
pruebas de ADN que investigan la paternidad o maternidad biolgicas
y en las que son analizables, como mnimo, el hijo y el progenitor
cuya relacin biolgica se investiga.

El ADN se hereda de padres a hijos. Si tratamos de investigar

cualquier otra relacin biolgica la eficacia de la prueba desciende
notablemente, lo que hace delicada su valoracin.
El que una prueba de investigacin biolgica de parentesco (distintas
de la paternidad y/o la maternidad) se pueda afrontar con unas
mnimas garantas de xito depender, fundamentalmente, del
nmero de personas necesarias para la investigacin que puedan o se
presten a participar.
En cualquier caso es necesario plantear una hiptesis concreta. En los
estudios de ADN no se pueden plantear cuestiones abiertas, del tipo:
"Creo que una persona es familiar mo pero no se qu podemos ser,
puedo hacer una prueba de ADN que me diga qu somos?,
planteada as la investigacin la respuesta es NO.
Hay que plantear preguntas concretas basadas en indicios previos no
biolgicas, que permitan establecer hiptesis claras y mutuamente
excluyentes. Por ejemplo: "Creo haber encontrado una persona que
puede ser mi hermano biolgico por parte de padre". Este caso s es
abordable ya que nos permite plantear dos hiptesis mutuamente
excluyentes:

Hiptesis A: "los individuos analizados son hijos del mismo

padre biolgico"
Hiptesis B: "los individuos analizados no son hijos del mismo
padre biolgico".

La prueba de ADN nos permitir calcular las probabilidades de ambas

hiptesis. Es decir, nos permitir saber cuntas veces es ms
probable una hiptesis que otra una vez obtenidos los respectivos
perfiles de ADN. Pero esta prueba necesitara de la participacin de
las madres biolgicas de los dos participantes, ya que su estudio
pondra en evidencia qu informacin gentica procede de sus
madres y as poder comparar slo aquella que necesariamente
debieron recibir de sus respectivos padres biolgicos.
Existe adems el problema aadido de desconocer "a priori" el poder
de discriminacin intrnseco que tendrn los perfiles genticos de las
personas analizadas. Si dos personas comparten en un determinado
marcador gentico un alelo rarsimo de la poblacin la hiptesis del
parentesco biolgico estudiada podra verse muy favorecida, pero si
la informacin gentica encontrada en ambos individuos analizados
es bastante comn, el estudio podra no alcanzar resultados
concluyentes.
Con todo lo explicado queremos sealar que cualquier prueba de
parentesco biolgico debe ser consultada con el laboratorio para que
ste aconseje respecto a cmo afrontarla con unas garantas mnimas

de xito. Existen infinidad de detalles a tener en cuenta antes de

decidir si merece la pena realizar el estudio.
Como norma general, desconfe de aquel laboratorio que le diga que
cualquier estudio se puede afrontar con una prueba de ADN.

El ADN Mitocondrial
Las mitocondrias son orgnulos citoplasmticos con carga gentica
propia: el ADN mitocondrial. Su funcin es proporcionar energa a la
clula y su nmero vara entre 100 y 1000 por clula. Hasta lo que
conocemos hoy, todas las mitocondrias que tienen nuestras clulas
proceden de las que portaba el vulo de nuestra madre en la
fecundacin, lo que hace que el ADN mitocondrial sea de herencia
exclusivamente materna.
As pues, una madre y todos sus hijos (independientemente de su
sexo) tendrn el mismo ADN mitocondrial. Es por esto que el estudio
del ADN mitocondrial es especialmente til en el estudio de linajes
maternos y en pruebas complejas de maternidad.
La interpretacin de los resultados del anlisis del ADN mitocondrial
es compleja, y su poder de discriminacin relativamente bajo. Si el
ADN mitocondrial encontrado en dos individuos no coincide, se puede
concluir que no tienen un mismo origen materno, pero si s coinciden,
no es evidencia suficiente para considerar probada una madre comn.
El ADN mitocondrial tiene tres caractersticas fundamentales que lo
hacen especialmente resistente a la degradacin frente al ADN
nuclear a la hora de estudiar muestras biolgicas crticas: su reducido
tamao (16.569 pares de bases frente a los 6.000 millones del ADN
nuclear), su estructura es circular y su gran cantidad de copias
(dentro de cada clula, por cada copia de ADN nuclear puede haber
entre 100 y 1.000 copias de ADN mitocondrial).

El Cromosoma Y
De los 23 pares de cromosomas presentes en los seres humanos slo
uno determina el sexo.

El par de cromosomas sexuales puede estar formado por 2

cromosomas X, en cuyo caso el individuo ser mujer o 1 cromosoma
X y 1 cromosoma Y, en cuyo caso el individuo ser varn.
As pues, el cromosoma Y slo est presente en los varones y slo los
varones lo dan en herencia a sus hijos que, por recibirlo, sern
varones.
El cromosoma Y apenas recombina con el X, as que se puede
considerar, a efectos prcticos, que todos los hijos varones de un
mismo padre comparten idntico cromosoma Y.
El anlisis de polimorfismos propios del cromosoma Y nos permite
abordar investigaciones de linaje paterno, siempre y cuando en todas
las generaciones involucradas se analicen varones.