UNIVERSIDAD TCNICA DE MANAB

FACULTAD DE CIENCIAS MATEMTICAS, FSICAS

Y QUMICAS.
CARRERA DE ING. QUMICA
PROYECTO DE INVESTIGACIN DE LA CTEDRA DE
BIOPROCESOS
AUTORES:
BARREIRO CHERREZ JAIME ANDRES
ZAMBRANO ROMERO CARLOS JAVIER
MENDOZA CARREO CARLOS ALBERTO
HUIZA MENENDEZ JHON FERNANDO

CATEDRTICO:
Ing. Ulbio Alcvar
FECHA DE ENTREGA:
Portoviejo, 01 de Septiembre del 2015

TEMA: BIOPRODUCCIN DE CIDO LCTICO A PARTIR DE

RESIDUOS DE CSCARA DE NARANJA: PROCESOS DE
SEPARACIN Y PURIFICACIN

1. ANTECEDENTES

Los sistemas productivos actuales tienden a un aprovechamiento lo ms completo posible de

las materias primas, ya que se considera que la generacin de subproductos no aprovechables
supone una prdida econmica que puede llegar a ser muy importante cuando se trabaja en
sectores como la industria alimentaria donde los mrgenes comerciales son muy pequeos,
esta materia prima de bajo costo se utiliza en procesos biotecnolgicos para la obtencin de
productos qumicos finos que se perfila como una opcin atractiva para reducir la
dependencia del petrleo y, al mismo tiempo, obtener nuevos compuestos que son econmica
o tcnicamente inviables de obtener por sntesis qumica.
En el Ecuador, la provincia que posee mayor produccin de naranja es Manab especialmente
en los cantones Chone y Flavio Alfaro. La produccin de la naranja en el pas ha aumentado
en los ltimos aos, de acuerdo a la fuente del Instituto Nacional de Estadsticas y Censos, en
el pas se genera un gran volumen de desechos slidos (cscara y bagazo), producto de la
obtencin de jugo de naranja dulce, siendo deseable su aprovechamiento para la produccin
de productos de alto valor agregado y la eliminacin de una fuente de contaminacin
importante. Actualmente, existen varios estudios encaminados al aprovechamiento de la
fraccin slida de la naranja, como substrato de bio reaccin en fase slida para la produccin
a bajo costo de cidos orgnicos, particularmente cido L (+) lctico

2. JUSTIFICACIN

En la actualidad han aumentado los esfuerzos en la investigacin de la produccin del cido

lctico, enfocados a disminuir costos a travs de nuevos sustratos, nuevas tecnologas de
fermentacin y separacin, as como tambin nuevos microorganismos capaces de alcanzar
altas concentraciones de cido lctico, altos rendimientos y altas productividades, esto es
debido al uso tan verstil que posee.
El cido lctico es el hidroxicido ms sencillo que existe. Su molcula contiene un tomo de
carbono asimtrico. Presenta isomera ptica: L(+) o D(-), aunque es ms comn encontrarlo
como mezcla racmica. Est presente en alimentos como yogurt, suero de leche, panes, queso
y muchos otros alimentos fermentados (Menndez-Gonzlez, 1999) y es uno de los
principales intermediarios metablicos en la mayora de los organismos vivos, desde
procariotas anaerobios hasta humanos. El cido lctico es ampliamente utilizado en las
industrias alimentaria, mdica, farmacutica y cosmtica, como materia prima para sntesis
orgnica, como purgante en forma de lactato de calcio o lactato de magnesio, como
removedor de sales de calcio, en el curtido de pieles, en la produccin de plsticos
biodegradables, agroqumicos, etc. En soluciones acuosas, el cido lctico no ionizado existe
en equilibrio con los aniones lactato y los iones hidrgeno (Kulprathipanja y Oroskar, 1991).
Es fuertemente higroscpico y la presencia de dos grupos funcionales en su estructura (-OH,
-COOH) lo hace formar, espontneamente, dmeros y polmeros de cido lctico (Bello-Gil,
2007). Es soluble en ter, miscible con agua y alcohol e insoluble en cloroformo, ter del
petrleo y disulfuro de carbono. Sus dos grupos funcionales permiten llevar a cabo diferentes
reacciones qumicas de oxidacin, reduccin, condensacin y substitucin del grupo alcohol
(Vaidya y col., 2005). En cuanto a las reacciones de condensacin, las ms importantes, por
los altos rendimientos de producto, son: Esterificacin, deshidratacin y aminlisis
(KirkOthmer, 2001). El cido lctico puede producirse por biotransformacin (biorreaccin) o
sntesis qumica. Normalmente, la sntesis qumica requiere de caros y complejos
procedimientos de obtencin y separacin para lograr la pureza deseada del producto final, as
como costos significativos asociados con la disposicin de los desechos (Yin y col., 1997). La
produccin de cido lctico se ha incrementado en pocas recientes, llegando a alcanzar en el
ao 2002 una produccin mundial de 100,000 ton/ao en los sectores farmacutico, cosmtico
y qumico (Purac, 2002).

3. OBJETIVOS

3.1.

OBJETIVO GENERAL
Desarrollar experimentalmente un proceso de obtencin de cido L (+) lctico por
medio de la biotransformacin utilizando el

microorganismo (Rhizopus spp.) en

medio slido a partir de residuos de naranja

3.2.
OBJETIVOS ESPECFICOS
Estudiar los distintos mtodos de remocin de color e impurezas en el efluente,
tomando en cuenta el grado de perdida de cido lctico que provocan.

Evaluar procesos de separacin solido-liquido determinando cual es el mtodo ms

efectivo para la recuperacin de la fas liquida del producto de la bioreaccion.

Calificar el proceso de produccin de cido lctico, a partir de la

fermentacin de residuos de naranja por (Rhizopus spp.), a travs de cinticas de
produccin de biomasa y cido lctico, y de consumo de sustrato para demostrar que
el proceso es tcnicamente viable.

4. HIPTESIS

H1: Existen microorganismo (Rhizopus spp.) capaces de producir acido L (+) lctico a partir de
residuo de naranja
H0: No existen microorganismo en medio solido productores de cido L (+) lctico

5. VARIABLES

Variables Independientes

Variables Dependientes
Temperatura

Produccin de
cido lctico
Cintica
microbiana

Produccin de
biomasa
PH

6. REVISIN DE LITERATURA
CIDO LCTICO
Generalidades
El cido lctico o cido 2-hidroxipropanoico (CH3CHOHCOOH), fue aislado e identificado por
el qumico Scheele en 1780 de leche agria, en 1847 fue reconocido como producto de fermentacin
por Blondeaur, sin embargo no fue hasta 1881 que Littlelon inicio la produccin por fermentacin a
escala mundial (Altiok et al., 2006, Serna y Rodrguez, 2005).

Molcula de cido lctico vista desde diferente perspectiva

El cido lctico tiene un carbono asimtrico (Figura 1) lo cual da lugar a actividad ptica. Existen dos
ismeros pticos, el D(-) cido lctico y L(+) cido lctico, adems de una forma racmica constituida
por fracciones equimolares de las formas L(+) y D(-). A diferencia del ismero D(-), la configuracin
L(+) es metabolizada por el organismo humano (Altiok, 2004). Tanto las dos formas pticamente
activas como la forma racmica se encuentran en estado lquido, siendo incoloros y solubles en agua.
En estado puro son slidos altamente higroscpicos de punto de fusin bajo, el cual es difcil de
determinar debido a la extrema dificultad de producir el cido de forma anhidra; es por esta razn que
se manejan rangos de 18- 33C. El punto de ebullicin del producto anhidro esta entre 125140C. Ambas formas isomricas del cido lctico pueden ser polimerizadas y se pueden producir
polmeros con diferentes propiedades dependiendo de la composicin. Las propiedades
fisicoqumicas del cido lctico se muestran en la Tabla 1 (Serna y Rodrguez, 2005).

Aplicaciones
Actualmente la demanda mundial de cido lctico est en aumento, debido a sus
mltiples aplicaciones en el campo alimentario y no alimentario, en especial en la fabricacin
de biopolmeros (Cui et al., 2012). Esto se debe en gran medida por la propiedad nica de
tener presente en su estructura un grupo cido carboxlico y un hidroxilo, lo cual hace
posible su participacin en una ampliavariedad

de

reacciones

qumicas

como

esterificacin, condensacin, polimerzacin, reduccin y sustitucin, y esto contribuye a su

gran potencial como plataforma qumica para una amplia gama de productos con extensas
aplicaciones industriales (Altiok 2004; Pal et al., 2009).
El cido lctico se utiliza en muchos alimentos; en su mayora es empleado para la
produccin de emulsificantes, aditivos alimentarios, aplicaciones farmacuticas y de
cosmticos. Es un cido orgnico muy importante con un gran mercado debido a sus
mltiples propiedades (Altiok et al., 2006). Por ejemplo, el cido lctico y sus sales son
preferidos a otros cidos orgnicos en la industria de alimentos ya que no dominan otros
sabores, es no voltil, no tiene olor y es clasificado como GRAS por la FDA en Estados
Unidos y por otras agencias reguladoras en otros pases, algunos de sus usos es como
conservador, acidulante y potenciador de sabor en muchos alimentos o bebidas (ej., cerveza,
gelatina, quesos, entre otros) (John et al., 2007). Por otra parte, la posibilidad de la conversin
directa de cido lctico a cido acrlico, lo ha convertido en una importante materia prima
para la industria qumica (Alonso et al., 2010).
Recientemente la produccin de plsticos biodegradables a partir de cido lctico ha
acelerado la investigacin sobre su produccin como materia prima a granel (Altiok et
al., 2006). Algunos ejemplos de productos derivados del cido lctico que han tenido una
gran demanda en los ltimos aos, son: termoplsticos biodegradables (ej., cido polilctico),
solventes verdes (ej., etil, propil, butil) y qumicos oxigenados (ej., glicol de propileno) (Pal
et al., 2009; Young-Jung y Ryu, 2009).
Produccin mundial
La produccin mundial de cido lctico en 2011 fue mayor a 300 000 toneladas y se estima
un incremento promedio del 10% anualmente (Higson, 2011). En la ltima dcada,
la produccin de cido lctico ha crecidoconsiderablemente, debido principalmente al
desarrollo de nuevas aplicaciones del cido lctico, como la sntesis de cido polilctico y al
avance de tecnologas para su produccin, donde el 90% de la produccin se lleva a cabo
mediante procesos de fermentacin (Cui et al., 2012).

Las principales empresas manufactureras de cido lctico en el mundo incluyen a CCA

Biochemical BV con plantas en Europa, Brasil y Estados Unidos, Archer Daniels Midland
(ADM) y NatureWorks LLc en Estados Unidos, Musahino Chemical en Japn, Purac en
Holanda, Galactic en Blgica, entre otras. Las cuales emplean vas tecnolgicas para la
produccin de cido lctico (Datta y Henry, 2006; John et al., 2007).
Procesos de produccin
El cido lctico puede ser producido por sntesis qumica o biotecnolgica. La produccin
qumica, est basada en la reaccin de acetaldehdo con cido cianhdrico (HCN) lo cual
produce un lactonitrilo que puede ser hidrolizado a cido lctico (Amrane y Prigent, 1994).
Otro tipo de reaccin se basa en la reaccin a alta presin de acetaldehdo con monxido de
carbono y agua en presencia de cido sulfrico como catalizador (Gonzlez et al., 2008). Este
proceso es costoso debido a que el petrleo es la base de la materia prima. Adems que, las
rutas de la sntesis qumica producen una mezcla de L-cido lctico y D-cido lctico. Los
problemas de alto costo de materia prima as como la dependencia de otras industrias para su
obtencin aunado a la impureza del producto, hacen de los procesos basados en
fermentaciones la mejor opcin para producir cido lctico (Narayanan et al., 2004; Fontes et
al., 2010).
La produccin biotecnolgica est basada en procesos de fermentacin de sustratos ricos
en carbohidratos por bacterias u hongos, y tiene la ventaja de formar enantimeros D(-) y/o
L(+), pticamente activos, o una mezcla racmica, dependiendo del microorganismo
involucrado en el proceso, la inmovilizacin o recirculacin del microorganismo, el pH, la
temperatura, la fuente de carbono y nitrgeno, el modo de fermentacin empleado y la
formacin de subproductos, siendo de mayor inters el ismero (L) porque puede ser
asimilado por el organismo y la mezcla racmica, la cual se emplea para la elaboracin de
polmeros y para uso industrial (Hofvendahl y Hanh, 2000; Litchfield, 2009).
Ambos mtodos para la produccin de cido lctico, qumico y biotecnolgico, son
asequibles, sin embargo la produccin biotecnolgica ofrece un gran nmero de ventajas
comparada con la sntesis qumica como el bajo costo de sustratos, temperaturas de operacin
moderadas, y bajo consumo de energa (John et al., 2007). Por otra parte, la produccin de
cido lctico por procesos de fermentacin ha incrementado su demanda de mercado,
particularmente en industrias alimentarias, dado a la preferencia de productos de origen
natural por parte de los consumidores, as como tambin en la industria de polmeros, debido

a las perspectivas de respeto al medio ambiente y por el uso de fuentes renovables en

lugar de petroqumicos (John et al., 2007).
Recientemente se ha investigado la aplicacin de diferentes microorganismos en los
procesos de fermentacin, as como mezclas de stos con el objetivo de alcanzar altas
concentraciones de cido lctico, altos rendimientos y altas productividades en un menor
tiempo. Los microorganismos mayormente investigados se encuentran dentro del grupo de las
bacterias cido lcticas (BAL) como el Lactobacillus helveticus y ms recientemente el
Lactobacillus casei (John et al., 2007).

RHIZOPUS SPP
Rhizopus es un gnero de mohos que incluyen especies cosmopolitas de hongos filamentosos hallados en
el suelo, degradando frutos y vegetales, heces animales, y residuos.

Diagrama equemtico de Rhizopus spp

Las especies de Rhizopus producen esporas asexuales

sexuales.

Las esporangiosporas asexuales se producen dentro de una estructura aguzada, el

esporangium, y son genticamente idnticas a su padre. En Rhizopus, el esporangio es
soportado por una gran columela apofisada, y el esporangiforo asoma entre rizpodes
distintivos. Zigosporas negras

se

producen

despus

de

dos

fusiones

compatibles

de micelios durante la reproduccin sexual. Y hacen colonias que pueden ser genticamente
diferentes de sus padres.
Algunas spp. de Rizopus son agentes oportunistas de zigomicosishumana. Pueden causar
serias (y con frecuencia mortales) infecciones en humanos y en animales debido a su rpido
crecimiento a relativamente altas temperaturas. Algunas especies son patgenos vegetales.
Dos son usados en fermentacin:Rhizopus oligosporus, en la produccin de tempeh, un
alimento fermentado derivado de grano de soja; R. oryzae se usa en la produccin de bebidas
alcohlicas, en partes de Asia y de frica. Hongo filamentoso que presenta esporangiforos
sin ramificar (de hasta 2 mm x 20 m), de color pardo oscuro que nacen de un gran nudo de
rizoides bien desarrollados. Esporangios esfricos negros (de hasta 275 m de dimetro) con
columela. Esporangiosporas negras de 8 a 15 m. Abundantes rizoides y zigosporas esfricas
de pared gruesa, desnuda (de hasta 200 m de dimetro). Clamidosporas ausentes.

7. DISEO METODOLGICO
7.1.

MTODO

La metodologa de investigacin que se va a aplicar tiene un enfoque de tipo cualitativo, el

cual usa la recoleccin de datos.
7.2.

TCNICA

Las diferentes tcnicas de ensayo de laboratorio se conoci de la metodologa descrita en la

literatura (Gil-Horn, 2007; Pacho-Carrillo y Domnguez-Espinosa, 2005).
7.3.

TCNICAS DE ANLISIS

Las tcnicas a ser utilizadas se resumen a continuacin con un breve procedimiento y frmulas
a utilizar.
7.4.

MATERIALES Y MTODOS

La cepa utilizada fue Rhizopus oryzae, que ha sido usada para producir cido lctico.
Se utiliz la fermentacin en estado slido) de cscara y bagazo de naranja con Rhizopus
orizae para la produccin de cido lctico, se llev a cabo en un birreactor de 500ml
siguiendo la metodologa descrita en la literatura (Gil-Horn, 2007; Pacho-Carrillo y
Domnguez-Espinosa, 2005). Lotes de 400 g de harina de naranja fueron adicionados con
(NH4)2SO4 como fuente de nitrgeno y CaCO3 como regulador de pH para ajustar el pH
inicial a 5
Los residuos slidos de naranja que fueron obtenidos del mercado nmero 1 de Portoviejo
fueron cortados y los dejamos secar hasta alcanzar una humedad de 12% (base seca). Y
cortadas en pequeas partculas

Los residuos de naranja fueron colocados dentro del birreactor junto con la solucin de espora
durante un periodo de 8 das a 37C
Para la extraccin del cido de la materia slida se lo hizo por prensado mecnico,
posteriormente se utiliz operaciones de intercambio inico (zeolita catinica cida y/o
carbn activado) como pasos intermedios para la reduccin de impurezas.
Luego de la biorreaccin, se obtuvo cido lctico en forma de lactato con un pH 3.4 y As
mismo, el producto slido obtenido present un exceso de azcares no consumidos por el
Rhizopus oryzae.

8. RESULTADOS Y DISCUSIN
Luego de la biorreaccin, se obtuvo cido lctico en forma de lactato de calcio. El
producto obtenido present un pH de 3.4 con alto grado de hidrlisis. El rendimiento
msico obtenido de cido lctico en la biotransformacin fue de 8.2 mg/g equivalente al
0.82%.
La duracin de la biorreaccin de 192h puede ser extendida para lograr una mayor hidrlisis
del material biotransformable; sin embargo, para el propsito de esta investigacin, que no
era el de optimizar esta fase del proceso, el tiempo de biorreaccin definido fue adecuado
para producir cantidades adecuadas del producto. Naturalmente, se tuvo la desventaja de la
presencia de los productos no deseados de la hidrlisis del material biotransformable como
azcares, protenas, cidos orgnicos secundarios, cationes Ca+2 y NH +1 y aniones CO3-2
y SO4 as mismo el producto solido obtenido present un exceso de azcares no consumidos
por el Rhizopus oryzae (13,722.95 ppm p/v), el cual tambin debe tomarse en cuenta para
una segunda etapa de optimizacin de la biotransformacin a nivel de laboratorio.
En las pruebas de separacin slido-lquido result que el mejor mtodo para la recuperacin
de la fase lquida del producto de biorreaccin fue el prensado mecnico. Adicionalmente, se
obtuvo que la mxima cantidad de agua que puede ser utilizada para la homogeneizacin del
producto slido para la posterior recuperacin de la fase lquida es de 8 mL por cada gramo de
slido en base seca obteniendo as una recuperacin mxima en el prensado mecnico del 85%
del cido lctico producido en la biotransformacin.
100%
90%
80%
70%
60%

%DE RECUPERACION DE ACIDO LACTICO

50%
40%
30%
20%
10%
0%
PRENSADO MECANICO

FILTRACION

OPERACION
CARBON ACTIVADO

PRINCIPALES IMPUREZAS
RETENIDAS
Azcares, steres, protenas,

ACIDO LACTICO
% DE PERDIDA
33.12

Ca+2, color, cidos orgnicos

secundarios

ZEOLITA CATIONICA

NH+1 y Ca+2, protenas, cidos

58.16

orgnicos
CA + ZC

Todas las anteriores

( Tecnol.Ciencia Ed. (IMIQ) vol. 23 nm. 2,, 2008)

62.66

9. CONCLUSIONES
Se desarroll experimentalmente un proceso de obtencin de cido L(+) lctico por medio
de la biotransformacin en medio slido de residuos de naranja. En este proceso la
biotransformacin y la secuencia de separacin juegan papeles muy importantes en el diseo. El
prensado mecnico result ser la mejor operacin de separacin slido-lquido, utilizada en
conjunto con una relacin de homogeneizado de 8:1 agua-slido en base seca para la extraccin
del cido lctico hacia la fase lquida. As mismo, en base a la literatura de Ricardo
Heliodoro Gil-Horn, Rosa Mara Domnguez-EspinoSA , Juan Daniel Pacho-Carrillo

se

mostr que es indispensable el uso de carbn activado como mtodo de remocin de color e
impurezas en el efluente. Por otro lado, aunque la zeolita catinica demostr ser adecuada para la
remocin de impurezas, no se recomienda su uso debido al alto grado de prdida de cido lctico
que provoca.
El diseo de fermentacin y separacin

propuesto permiti obtener como producto final

lactato de calcio que al pasar por esterificacin debe cumplir los estndares para cido
lctico grado alimenticio, demostrndose que el proceso es tcnicamente viable.

10.RECOMENDACIONES
Se recomienda llevar a cabo estudios ms detallados encaminados a obtener mejores
condiciones de biorreaccin que lleven al Rhizopus oryzae a consumir los azcares degradados
durante la hidrlisis de la cscara de naranja, y que, al mismo tiempo, permitan ofrecer un mayor
rendimiento de produccin de cido lctico durante su desarrollo. Asimismo, la optimizacin global
del proceso debe LLEVARSE A CABO EN PARTICULAR atendiendo al entorno econmico
actual que ofrece incentivos econmicos claros para el establecimiento de biorrefineras.

11.BIBLIOGRAFIA

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Proyecto Fin de Carrera. Universidad de Oviedo. Oviedo, Espaa
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MK-96-1196 in airlift bioreactors. J. Biosci. Bioeng.
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Lactic acid bioproduction from orange rind:Separation and purification processesRicardo
Heliodoro Gil-Horn, Rosa Mara Domnguez-Espinosa, Juan Daniel Pacho-Carrillo