UNIVERSIDADE ESTADUAL DE FEIRA DE SANTANA

DEPARTAMENTO DE SADE
CURSO DE FARMCIA

LEONARDO LEAL MACEDO

WENDY MORAES

RELATRIOS DE BIOFSICA

FEIRA DE SANTANA BA
2015

LEONARDO LEAL MACEDO

WENDY MORAES

RELATRIOS DE BIOFSICA

Relatrio apresentado Universidade Estadual

de Feira de Santana - UEFS para fins
avaliativos da Disciplina de biofsica do curso
de Farmcia, sob a orientao do Professor
Hilberto.

FEIRA DE SANTANA BA
2015

CENTRIFUGAO
Princpio
Baseia-se no princpio da teoria dos campos como, por exemplo, de
aproveitamento de campo gravitacional, realizando experincias simples de laboratrio
mostrando efeitos deste campo nas aplicaes biolgicas e mdicas.

Introduo
A centrifugao um mtodo de separao de misturas que se baseia na diferena
de densidade entre os seus componentes.
Geralmente, quando temos disperses grosseiras de um slido misturado a um
lquido, como no caso da areia misturada com gua, basta deixar o recipiente em
repouso e esperar que, pela ao da gravidade, o slido que mais denso que o lquido
se deposite no fundo. Esse mtodo de separao chamado de sedimentao.
A centrifugao usada para acelerar esse processo ou para separar solues
coloidais, em que as partculas do slido ficam dispersas no lquido e no se
sedimentam. Para tal usado um equipamento chamado de centrfuga, mostrado abaixo:

Na centrfuga, colocamos um tubo de ensaio contendo a mistura que se quer

separar e, ento, ligamos o aparelho, que comea a rotacionar de forma bem acelerada.
A velocidade de ultracentrfugas, que so centrfugas bem mais potentes, pode chegar a
60 000 rpm (rotaes por minuto), o que gera foras centrfugas at 750 000 vezes mais
intensas que a da gravidade. A fora centrfuga (da o nome do processo) empurra o
slido para o fundo do recipiente, enquanto que a parte lquida fica lmpida na parte de
cima.
Essa tcnica usada principalmente em laboratrios para separar protenas e
cidos nucleicos (DNA, RNA) das solues e at mesmo para separar fraes do
sangue. Nesse fracionamento do sangue pela centrifugao so obtidos os seus
principais componentes, que so: concentrado de hemcias (parte do sangue que contm

os glbulos vermelhos), concentrado de plaquetas (parte slida do sangue) e plasma

(parte lquida do sangue).

Clulas sanguneas:
O sangue composto aproximadamente 90% de gua sendo dividido em plasma
e clulas, no processo de centrifugao do sangue no-coagulado ocorrer essa diviso.
1- Eritrcitos/Hemcias/Clulas vermelhas do sangue: so os mais numerosos
dos elementos celulares no sangue. As hemcias do a cor vermelha ao sangue. So
responsveis por transportar o oxignio dos pulmes aos tecidos e o dixido de carbono
dos tecidos de volta aos pulmes. Esta ao realizada pela hemoglobina, o principal
componente das clulas vermelhas do sangue. Os eritrcitos realizam suas funes no
sistema circulatrio.
2- Leuccitos/Clulas brancas do sangue: so os menos numerosos. Existem 5
tipos: neutrfilos, basfilos, eosinfilos, linfcitos e moncitos. Cada tipo tem funo
diferente, mas todos associados a imunidade ou defesa. Executam suas funes dentro
dos tecidos. Usam o sangue apenas como meio de transporte entre um lugar do corpo
para outro.
3- Plaquetas/Trombcitos: so fragmentos do citoplasma que foram liberados no
sangue circulante por grandes clulas da medula ssea. Plaquetas so importantes nos
vrios estgios da hemostasia. Ex.: agem nas paredes dos vasos parra estancar
hemorragias.
Diferena entre soro e plasma:

A centrifugao do sangue sem anticoagulante levar coagulao do

centrifugado; durante este processo, h o consumo de fibrinognio, assim como todos os
fatores envolvidos na coagulao, com liberao de substncias que se encontravam
dentro das plaquetas, dessa forma, constitui-se o soro.
Para a obteno do plasma, faz-se a centrifugao do sangue com
anticoagulante. Observa-se, ento que o fibrinognio no est presente no soro, pois este
foi utilizado para a formao de fibrina, ao contrrio do plasma, que o possui.
Encontram-se no soro, mediadores liberados pelas plaquetas, que no esto presentes no
plasma. Pode-se dizer que o soro , basicamente, o plasma sem o fibrinognio.
Hematcrito
o volume de eritrcitos compactados por centrifugao em um dado volume
de sangue e expressos em porcentagem. um teste ideal para acompanhar o progresso
de pacientes anmicos ou com hemorragia.
Micro Hematcrito
um hematcrito feito em pequeno volume de sangue utilizando tubo capilar.
Tanto no hematcrito quanto no micro hematcrito, o teste baseado no
princpio de separao dos elementos celulares do plasma. Em ambas as tcnicas, o
processo de separao acelerado pela centrifugao. Aps a centrifugao do sangue
em um tubo, as clulas brancas e as plaquetas formam uma camada no topo das clulas
vermelhas e o plasma estar na parte de cima. As clulas vermelhas estaro no fundo do
tubo.
O hematcrito ou micro hematcrito determinado comparando o volume de
hemcias com o volume total da amostra de sangue.
Valores de referncias de micro hematcrito: Homens (42-52) e mulheres (3648).
OBS.: Valor baixo de micro hematcrito: pode indicar anemia ou a presena de
hemorragias no paciente.
OBS.: Valor alto de micro hematcrito: pode ser causado por desidratao ou
condio de policitemia (um excesso de hemcias no sangue perifrico).

Dentre os exames realizados em laboratrios, tem-se o hematcrito que um exame de

diagnstico que serve para avaliar a percentagem dos glbulos vermelhos ou hemcias
no volume total de sangue, sendo dividido em hematcrito alto ou baixo. O valor de
referncia para homens de 40 50% e para mulheres de 35 45%, caso o resultado
apresente valores diferentes, pode ser gerado alguma doena.
Outro exame realizado o de VHS, velocidade de hemo-sedimentao, um fenmeno
que acontece quando o sangue deixado em repouso na posio vertical, dentro de um
tubo. Nessa situao, as hemcias se depositam no fundo do tubo, separando-se do
plasma, que permanece na parte superior. Aps uma hora de repouso, a linha de
separao entre as hemcias e o plasma serve para a leitura direta do resultado do exame
em uma escala numrica.
Sedimento urinrio
A urina um liquido excretado pelos rins atravs das vias urinrias, pelo qual
so eliminadas substncias desnecessrias ao organismo.
Desempenha um papel importante na regulao do balano de lquidos e no
equilbrio entre cidos e bases. Nas pessoas sadias possui colorao clara (amarelada).
Alm disso, a urina composta aproximadamente por 95% de gua e 2 % de uria. Nos
3% restantes, podemos encontrar fosfato, sulfato, amnia, magnsio, clcio, cido rico,
creatina, sdio, potssio e outros elementos.
Componentes do sedimento urinrio:
1- Leuccitos e hemcias: na urina normal pode conter poucas dessas clulas.
2- Clulas epiteliais: so constantemente descamadas do revestimento do trato urinrio.
3- Micro-organismos (bactrias, leveduras, protozorios): no devem estar presentes em
urina fresca, normal e colhida de maneira adequada. A presena de micro-organismos
em grande nmero indica infeco.
Objetivos
Observar e aplicar a centrifugao como procedimento clnico de fracionamento de
clulas e molculas e separar ou fracionar substratos biolgicos de interesse mdico e
biolgico.

Materiais
Microcentrfuga, tubos de micro hematcritos, carto de leitura de hematcritos, sangue,
urina, microscpio, luvas, fsforo, lamparina, lcool e papel toalha.
Mtodo
Centrifugao sangunea - Enchemos 4 tubos capilares de micro hematcrito
com a amostra de sangue, fechando uma das pontas, de cada tudo, com a chama da
lamparina. Depois de vedados, foram levados a macro centrfuga, dentro de tubos de
ensaio, passando pelo procedimento de centrifugao por 5 minutos na velocidade
adequada. Em seguida observamos o sedimento e o sobrenadante resultante da
centrifugao dos tubos na escala para micro hematcrito.
Centrifugao da urina - Colocamos em 4 tubos a amostra de urina, com
aproximadamente igual volume cada, sendo submetida macro centrfuga por 5
minutos na velocidade adequada. Em seguida, colocamos o sobrenadante de 2 tubos na
lmina e o sedimento dos outros dois tubos em outra lmina para podermos visualizar
no microscpio.

Discusso e resultados
Aps a centrifugao as clulas e partculas presentes, respectivamente, no
sangue e na urina, que so mais densas se depositaram no fundo do tubo.
Com o tubo centrifugado, levamos ao carto de leitura de hematcritos, que
permitiu quantificar a porcentagem de volume de clulas presentes na amostra de
sangue. O tubo, que possua uma parte sedimentada e outra sobrenadante, foi colocado
sobre o carto, onde o sobrenadante ficou na parte superior, com o menisco ajustado a
linha 100% e o fundo das clulas ajustado a linha 0. A partir desse ajuste pudemos ento
ler o alto da coluna das clulas, contatando a porcentagem de volume de clulas que
aquele sedimento possua.
Com a amostra centrifugada de urina, disposta nas lminas, pudemos
visualizar pelo microscpio, as partculas encontradas no seu sedimento e sobrenadante.
Dentre outros, encontramos no sedimento os lactobacilos.

Concluso

Com a prtica, conclui-se que os mtodos de fracionamento celular

consistem na separao e isolamento de diversos componentes celulares, para seu
posterior estudo atravs de tcnicas bioqumicas ou de biologia molecular. E que um dos
mtodos mais utilizados o mtodo de fracionamento por centrifugao
Pudemos aplicar na prtica, a centrifugao e a partir dela, realizar
procedimentos clnicos, como a anlise microscpica dos sedimentos encontrados na
urina. Sendo assim, este mtodo concretiza a sua importncia, principalmente nos
exames de sumrio de urina, possibilitando os diagnsticos mais fidedignos
possveis.Pudemos separar os substratos estudados: sangue e urina por meio da
utilizao da centrfuga.

MICROSCOPIA
.Introduo

A microscopia a percepo dos corpos de um modo que no podemos

enxergar a olho nu. Ela tem como componente principal a LUZ, e segundaria as lentes,
que compe o microscpio (instrumento utilizado na microscopia), que captada a luz e
aumentada a sua resoluo. O contraste tambm possui relevncia, pois ao interagir com
a matria nos permite a distino das estruturas.
A partir disto, a ampliao dos objetos, se d com a produo de contrastes,
por diferenas nos ndices de refrao da luz (os quais dependem do meio) e por
induo de colorao. Portanto as propriedades fsicas das substancias observadas so
determinantes na produo dos efeitos de ampliao e contraste.

Objetivo
- Observar efeitos dos contrates em sistemas a fresco e em sistemas fixados e corados.
- Observar o poder de resoluo nos diferentes sistemas a fresco e corado.

- Ter o primeiro contato com amostras de sangue afresco e realizar a tcnica do

esfregao sanguneo para identificar os seguintes componentes do sangue humano:
linfcitos, neutrfilos, moncitos, basfilos e eosinfilos.
Microscopia do sedimento urinrio
Material: Microscpio ptico, luva de procedimento, lmina, lamnulas, papel
toalha, centrfuga, vasilhame para desprezar o material e urina.
Metodologia: Observar colorao, aspecto e odor da urina. Colocar em tubos e
posicion-los na centrfuga de maneira equilibrada. Centrifugar por cinco minutos. Aps
centrifugao retira-se o excesso de lquido e homogeneizar. Colocar uma gota de urina
em uma lmina limpa. Fazer esfregao. Iniciar a observao microscpica com objetiva
de 10.
Resultado e discusso: Durante a observao microscpica das duas amostras
dos sedimentos urinrios pode-se encontrar clulas epiteliais, diversas bactrias como:
cocos, estafilococos e bastes. Foram encontrados tambm leuccitos, raras hemcias,
cristais de oxalato de clcio, os que so indicadores de pH como os uratos amorfos
(cido) e os fosfatos (bsicos), aglomerados de clulas epiteliais provenientes do trato
urinrio, cilindros (so complexos grandes e elementos exclusivamente renais) e muco
que protege a mucosa da acidez urinria.
O sedimento urinrio dos alunos se diferenciava nas coloraes um mais
amarelo que o outro, ambos com odor caracterstico.
Microscopia do Sangue
Materiais: Microscpio ptico, lminas, lamnulas, sangue total, soluo
corante, luvas, galeria de colorao, papel toalha, vasilhame para desprezar material.
Metodologia: Conforme a orientao do professor, para comear o experimento
foi necessria colher amostras de sangue humano e coloca-las em tubos de ensaios
tampados. Essa parte no foi realizada na aula, as amostras foram colhidas pelo
professor e j estavam prontas para serem utilizadas.

Resultado e discusso: Os resultados do experimento foram satisfatrios, pois

nas lminas foi possvel obervar :

Hemcias
- Uma contagem elevada de hemcias pode indicar policitemia absoluta ou relativa.
- Uma contagem deprimida de hemcias pode indicar anemia, sobrecarga de lquido ou
hemorragia alm de 24 horas. Teste adicionais, como, por exemplo, exame de clula
colorida, hematcritos, hemoglobina, ndices hematimtricos e estudos de glbulos
brancos so necessrios para confirmar o diagnstico.

Leuccitos
- A contagem de leuccitos varia de 4.000 a 10.000/ml.
- Os glbulos brancos so classificados de acordo com os cinco tipos principais:
Neutrfilos - Fazem parte da poro do sangue responsvel pela defesa ou imunidade
do organismo. Eles so responsveis por envolver as clulas doentes matando-as a
seguir e so especializados no combate bactrias e fungos. A correta interpretao de
seus valores no sangue pode auxiliar no diagnstico de diversas doenas. Os valores de
neutrfilos estaro altos, condio conhecida como neutrofilia, quando houver:
infeces, desordens inflamatrias, diabetes, uremia, eclampsia, necrose heptica,
leucemia mielide crnica, policitemia, ps-esplenectomia, anemia hemoltica. A
neutropenia, ou a baixa concentrao de neutrfilos, ocorre quando existem: infeces,
anemia aplstica, leucemias agudas, anemia megaloblstica, anemia ferropriva,
hipotireoidismo, cirrose.
Eosinfilos - So leuccitos granulares com um ncleo que usualmente apresenta
dois lobos conectados por um filamento delgado de cromatina. Essas clulas fagocitam
e eliminam complexos de antgenos com anticorpo que aparecem em casos de alergia,
como a asma brnquica. Os valores de eosinfilos abaixo no normal podem ocorrer
quando o paciente est em eclampsia, aps grandes cirurgias ou est em choque.

Quando os valores dos eosinfilos esto altos ou levemente aumentados significa que o
indivduo pode ter alguma alergia; asma; ou infeco parasitria.
Basfilos um tipo de clula que fazem parte da poro do sangue responsvel pelas
defesas ou imunidade do organismo. Eles so avaliados pelo hemograma e ajudam na
deteco de vrias doenas. Acredita-se que eles tambm esto relacionados s alergias
assim como os eosinfilos, pois produzem histamina e heparina. Os nmeros de
basfilos estaro aumentados, condio chamada de basofilia, quando o paciente
apresentar: colite ulcerativa, nefrose, anemia hemoltica, doena de hodgking. Os
valores de basfilos estaro baixos, condio chamada de basopenia, quando houver:
hipertiroidismo, infeco aguda, sndrome de cushing.

Moncitos
um grupo de clulas que tem a funo de defender o organismo de corpos estranhos.
Os valores de moncitos esto altos, condio denominada monocitose, na presena de:
tuberculose; leucemia monoctica aguda, lpus. Os moncitos baixos, condio
chamada de monocitopenia, podem ser causados por: anemia aplstica, uso de
corticoides, terapia com imunossupressores, leucemia aguda, Infeces.
Linfcitos
Os linfcitos so um tipo de clula de defesa do organismo que um timo indicador do
estado de sade do indivduo. Os valores de linfcitos estaro altos (linfocitose) quando
o paciente apresentar alguma infeco, como hepatite viral, toxoplasmose, rubola,
infeco aguda por HIV, leucemia linfoctica crnica ou aguda, por exemplo. Os
linfcitos baixos podem significar a presena de infeces e enfermidades agudas,
doena de Hodgkin, lpus, anemia aplsica, insuficincia renal, Aids e estado terminal
de cncer, por exemplo. Os valores tambm ficam alterados quando o paciente est
desnutrido, situao que se normaliza assim que o estado de desnutrio se reverte.
A contagem diferencial o valor percentual de cada tipo de glbulo branco no
sangue. Para adultos, os valores absolutos e porcentagens normais incluem o seguinte:

- Basfilos: 0 a 200/ml; 0 a 2%
- Eosinfilos: 40 a 500/ml; 1 a 5%
- Linfcitos: 880 a 4.000/ml; 22 a 40%
- Moncitos: 120 a 1.000/ml; 3 a 10%
- Neutrfilos: 1.800 a 7.500/ml; 45 a 75%.
Plaquetas
- As plaquetas ou trombcitos, promovem a coagulao, ou seja, a formao de um
cogulo hemosttico em locais de comprometimento vascular.
- As contagens normais de plaquetas variam entre 130.000 a 370.000/ml
- Uma contagem diminuda de plaquetas (trombocitopenia) pode resultar de medula
ssea aplstica ou hipoplstica; uma doena infiltrativa de medula ssea, como, por
exemplo, carcinoma ou leucemia; hipoplasia megacarioctica; trombopoiese infecciosa
proveniente de deficincia de cido flico ou vitamina B12; acmulo de plaquetas em
um bao aumentado; destruio aumentada de plaquetas devido drogas ou desordens
imunes; coagulao intravascular disseminada; sndrome de Bernard-Soulier; ou leses
mecnicas s plaquetas.
- Uma contagem aumentada de plaquetas (trombocitose) pode resultar de hemorragias,
desordens infecciosas; cncer; anemia por deficincia de ferro; cirurgia recente,
gravidez, ou esplenectomia e desordens inflamatrias. Em tais casos, a contagem de
plaquetas retorna ao normal aps o paciente recuperar-se da desordem primria.
Todavia, a contagem permanece elevada em trombocitemia primria, mielofibrose com
metaplasia mielide, policitemia vera e leucemia mielide crnica. Em tais desordens,
as plaquetas podem estar disfuncionais, resultando em sangramento.
Microscopia da Citologia Vaginal
A vagina possui uma flora bastante rica e nos permite avaliar seus diversos
elementos atravs da observao microscpica de uma amostra dessa secreo. O

preventivo, tambm conhecido como Papanicolau um exame no qual a secreo

vaginal colhida para anlise microscpica. Aps ser colhido o material fixado e seco
e ento corado com dois corantes a hematoxilina e a eosina. A hematoxilina um
corante bsico que possui afinidade com o ncleo da clula, j a eosina um corante
cido que cora o citoplasma que tem natureza bsica.
Mtodo Corado
Ao observar a mucosa vaginal em microscpio, foi possvel identificar as
diversas clulas existentes ali. As clulas superficiais possuem ncleo pequeno e
amadurecem mais rapidamente por conta do hormnio estrognio. As clulas
intermedirias e profundas possuem ncleos de maiores extenses. Encontramos
tambm lactobacilos (essenciais na defesa da mucosa vaginal), leuccitos, cocos e
bacilos.
O material colhido de mulheres mais maduras possui uma colorao azulada
e clulas que possuem ncleos maiores, j o material de mulheres mais jovens possui
justamente o contrrio uma colorao rosa - avermelhada com ncleos menores.
vlido ressaltar que o material recolhido em mulheres jovens mais rico (cheio de
clulas) do que de mulheres mais velhas. Porm as clulas vaginais assim como
qualquer outra, podem sofrer modificaes a depender do estmulo que lhes aplicado,
como por exemplo, na presena de herpes e de HPV. O vrus do herpes e do HPV fazem
reaes celulares diversas como as modificaes perinucleares, ou seja, mudanas
reativas ao redor do ncleo. Estas modificaes so consideradas como atpicas, afinal
fogem da normalidade. Clulas binucleadas; clulas dicariticas (com ncleo grande);
clulas multinucleadas; com reaes perinucleares; clulas com ncleo e citoplasma
alterados; aspecto de vidro fosco. Todas estas so determinantes no que diz respeito
normalidade da amostra.
A partir do momento em que estas modificaes celulares ocorrem, as
clulas passam a se comportar tambm de modo diferente. Quanto mais tempo levam,
ou a depender da carga gentica individual, podem se desenvolver patologias graves,
como o cncer do colo do tero. As leses consideradas como percussoras do cncer so
denominadas: neoplasias intraepiteliais de grau I, II e III (NIC), as leses prneoplsicas so atpicas (binucleaes e multinucleaes). A depender da quantidade de
alteraes, e da profundidade das leses estas podem ser estadeadas e tambm

classificadas em NIC I, NIC II e NIC III. Sendo a NIC I designada como leso de baixo
grau e as NIC II e NIC III como alto grau.
Resultados e discurso
Aps a anlise de lminas de mulheres de vrias idades, foi possvel
constatar a presena em grande quantidade de neutrfilos e hemcias. Assim como, a
dificuldade em encontrar basfilos e eosinfilos, possibilitou a concluso de que estes
esto presentes em menor quantidade em nosso corpo. A idade na citologia vaginal trs
grandes diferenas entre os materiais de mulheres de acordo com as faixas etrias,
ficando evidente que quanto mais jovem a mulher, mas rico era o material biolgico
que foi recolhido.

REFRATOMETRIA
INTRODUO:
A velocidade da luz depende do meio no qual esta se propaga, por exemplo, se
um feixe de luz propagado por um equipamento atravessar a gua, a velocidade da luz
diminui e sua direo muda, diz-se ento que a luz foi refratada, portanto a refratometria
da luz nada mais do que conhecer o quanto a luz que esta sendo propagada em um
meio ao penetrar um novo meio desviada por este, isto que chamamos de refrao da
luz.
O ndice de refrao uma propriedade fsica importante de slidos, lquidos e
gases e este varia de acordo com a concentrao de uma substancia em um destes
estados fsicos.
O ndice de refrao til na caracterizao e identificao de lquidos ou para
indicar a pureza deste liquido.
Este ndice definido como sendo a razo entre a velocidade da luz no vcuo e
na substncia analisada, ou seja, quando um feixe de luz se desloca em um meio
homogneo e incide sobre a superfcie de outro meio, este ser refratado e mudar de
direo em relao trajetria original.
Este fenmeno regido pela lei da refrao onde a relao do seno do ngulo de
incidncia para o ngulo de refrao sempre uma constante.
n1 sen i = n 2 sen r

sen i = n2 = N
sen r

n1

Onde:
i = ngulo de incidncia
r = ngulo de refrao
n1 = ndice de refrao do meio 1
n2 = ndice de refrao do meio 2
N = ndice de refrao relativa
O ndice de refrao varia de acordo com a temperatura, comprimento de onda e
com o teor de slidos dissolvidos, alm de ser proporcional concentrao em
porcentagem de slidos dissolvidos em solues aquosas (%Brix), o que, no caso dos
alimentos corresponde principalmente ao acar que eles contm.
A escala Brix calibrada pelo nmero de gramas de acar contidos em 100 g de
soluo. As escalas em percentagem de Brix apresentam as concentraes percentuais
dos slidos solveis contidos em uma amostra (soluo com gua). Os slidos solveis
contidos em uma soluo o total de todos os slidos dissolvidos na gua, comeando
com acar, sais, protenas, cidos, etc.
O instrumento empregado para a determinao do ndice de refrao ou
diretamente Brix chamado de refratmetro.
O refratmetro um instrumento simples que pode ser usado para medir
concentraes de solues aquosas, consumindo apenas umas poucas gotas da soluo.
Sua aplicao estende-se pelas reas de alimentos, agricultura, qumica e em indstrias
de manufaturados.
Existem refratmetros para diversas finalidades, como refratmetros de campo,
de laboratrio e industrial, sendo todos baseados no mesmo princpio.
OBJETIVO:
- Observar o ndice de refrao (IN) e a densidade (D) da gua destilada para servir de
base

para

outras

solues

biolgicas.

- Saber manusear e aferir o refratmetro com gua destilada considerando o IN: 1,33 e
D=1000.
- Aferir o aparelho com gua destilada utilizando a escala de concentrao.
- Criar diferentes solues (Ex: Glicose 1%, sacarose 2%, dextrose1%), conhecidas e ou

desconhecidas

aferir

na

escala

de

concentrao.

- Observar a densidade de diferentes solues biolgicas (Ex: urina, saliva, etc.).

MATERIAL:
- Refratmetro
- Soluo de glicose 1%
- Soluo de sacarose 2%
- Soluo de dextrose 1%
- Urina
- Saliva
- Gases
- Pipetas volumtricas
- gua destilada
- bquer
- Proveta
MTODO:
-

Preparar

as

Aferir

solues
o

de

glicose

refratmetro

3%,

sacarose

2%

com

dextrose

gua

1%

destilada

- Testar cada soluo no refratmetro, construir tabelas e grficos, relacionando

densidade,

ndice

de

refrao

concentraes.

- Testar a urina e a saliva.

RESULTADOS/ CONCLUSO:
Amostra
Sol. Glicose
Sol. Sacarose
Sol. Lactose
Urina

Densidade
1013
1035
1015
1022

n
1337,5
1,346
1,3385
1,341

g/100ml
2,4
7,6
3,2
4,4

%
2,4
7,6
3,2
4,4

A partir dos experimentos realizados em laboratrio foi possvel perceber que a

refratometria uma tcnica de simples utilizao sem necessitar de grandes recursos.
bastante til para analisar substncias atentando assim para a sua qualidade.

Para validar a teoria vista foram analisadas diferentes substncias no

experimento e a cada anlise tornou-se possvel conhecer a %Brix de cada uma, alm do
seu ndice de refrao, temas abordados anteriormente nesse relatrio.

ESPECTROFOTOMETRIA
INTRODUO

A Colorimetria e a Espectrofotometria podem ser conceituadas como um

procedimento analtico atravs do qual se determina a concentrao de espcies
qumicas mediante a absoro de energia radiante (luz).
A variao da cor de um sistema com a mudana da concentrao de um
componente base da anlise colorimtrica. A cor , usualmente, devida formao de
um composto colorido pela adio de um reagente apropriado ou inerente ao
constituinte que se deseja analisar. A intensidade da cor comparada com a intensidade
da cor que se obtm com o mesmo procedimento pelo tratamento de uma amostra cuja
quantidade e concentrao so conhecidas. Na anlise espectrofotomtrica usa-se uma
fonte de radiao que alcana a regio ultravioleta do espectro. Para isso, escolhem-se
comprimentos de onda de radiao bem-definidos e com largura de banda de menos de
um nanmetro, o que exige um espectrofotmetro, um instrumento mais complicado e,
conseqentemente, mais caro.
A luz pode ser entendida como uma forma de energia, de natureza ondulatria,
caracterizada pelos diversos comprimentos de onda (( lambda), expressos em m ou
nm) e que apresenta a propriedade de interagir com a matria, sendo que parte de sua
energia absorvida por eltrons da eletrosfera dos tomos constituintes das molculas.
Uma soluo quando iluminada por luz branca, apresenta uma cor que
resultante da absoro relativa dos vrios comprimentos de onda que a compem. Esta
absoro, em cada comprimento de onda, depende da natureza da substncia, de usa
concentrao e da espessura da mesma que atravessada pela luz.

Atravs da Lei de Beer, intensidades da radiao incidente e emergente podem

ser relacionadas com as concentraes do material presente na soluo.
A Lei de Beer dada por:
A = bc, onde
A Absorbncia
constante
b- distncia percorrida pelo feixe luminoso atravs da amostra
c- concentrao da soluo absorvente
Como normalmente usam-se cubetas de 1 cm de comprimento, a equao fica:
A = c
Ou seja, a absorbncia da luz a cada comprimento de onda diretamente
proporcional concentrao da soluo contida na cubeta. Esta linearidade deixa de
ocorrer a concentraes muito elevadas da substncia, podendo nesses casos diluir
previamente a amostra a medir.
A equao A= bc mostra que a absorbncia depende da quantidade total de
substncia absorvedora que h no caminho tico atravs da cuba com a soluo.
O conjunto de solues de nmeros 1 a5 constitui o que se denomina curva de
calibrao ou curva padro, indispensvel para determinar concentrao de qualquer
soluo,desde que conhea sua absorbncia. Na plotao do grfico absorbncia versus
concentrao, teremos uma reta., como j era indicado pela Lei de Beer, que permite
calcular concentraes graficamente.
Na maioria das anlises espectrofotomtricas, importante preparar um reagente
branco contendo todos os reagentes, mas com o constituinte em anlise substitudo por
gua destilada. Tambm importante usar uma srie de padres para estabelecer uma
curva de calibrao. Os padres devem ser preparados pelo mesmo procedimento usado
nas amostras desconhecidas. A absorbncia da amostra desconhecida de diminuir dentro

da regio coberta pelos padres, de forma que no haja questionamento sobre a validade
da curva de calibrao.

METODOLOGIA
ESPECTROFOTMETRO:
O aparelho contem comprimentos de ondas diversos e o material
utilizado se sensibiliza por algum dos valores de comprimentos de onda que o
mesmo possui.
um aparelho amplamente utilizado em laboratrios, cuja funo a
de medir e comparar a quantidade de luz (energia radiante) absorvida por uma
determinada soluo. Ou seja, ele usado para medir (identificar e determinar)
a concentrao de substncias, que absorvem energia radiante, em um solvente.
Este aparelho possui uma gama de aplicaes e est presente em vrias reas,
tais como em qumica, fsica, bioqumica e biologia molecular. O grande
inventor deste instrumento to fundamental nos dias de hoje foi o qumico
americano Arnold O. Beckman, em 1940.
Em geral, um espectrofotmetro possui uma fonte estvel de energia
radiante (normalmente uma lmpada incandescente), um seletor de faixa
espectral (monocromatizadores como os prismas, que seleciona o comprimento
de onda da luz que passa atravs da soluo de teste), um recipiente para
colocar a amostra a ser analisada (a amostra deve estar em recipientes
apropriados como as cubetas e tubos de ensaio) e, um detector de radiao, que
permite

uma

medida

relativa

da

intensidade

da

luz.

base

da espectrofotometria, portanto passar um feixe de luz atravs da amostra e

fazer a medio da intensidade da luz que atinge o detector. O
espectrofotmetro compara quantitativamente a frao de luz que passa atravs
de uma soluo de referncia e uma soluo de teste.
Antes de utilizar um espectrofotmetro sempre feita uma calibrao,
que fundamental para garantir que as medies obtidas no aparelho sejam

precisas. Esta calibrao pode variar em vrios espectrofotmetros. A maioria

dos fabricantes fornece um guia sobre como calibrar o aparelho.
muito importante ao colocar a amostra a ser analisada, no tocar no
tubo de ensaio na parte do meio, para evitar manchas de dedo que alteram a
leitura do aparelho. Assim, o ideal pegar na parte superior do tubo e coloc-lo
no aparelho para que ele faa a leitura e d o resultado almejado. Alm disto,
para que um espectrofotmetro funcione corretamente, deve ser aquecido antes
de usar. Muitos dispositivos demoram cerca de 10 minutos para aquecer.
CURVA DE ABSORO ESPECTRAL: Significa a impresso digital da
substncia, sendo assim o maior valor de absoro.
RESULTADOS:
Atravs de processos fsicos realizados pelo aparelho de espectrofotometria,
podemos analisar as propriedades das solues, por exemplo: as concentraes.
E com a utilizao de clculos juntamente com os resultados obtidos, pela
aparelhagem, possvel definir a concentrao, em margens muito
aproximadas, de solues de concentraes desconhecidas.

41

480

520

58

660

0.6

0
0.1

0.0

Glicose

0.7

Uria

0.1

0.2

0.4

1
0,2

Protenas

6
0,1

6
0,3

0,7

0,8

Totais

Curva de Absoro Espectral

0.9
0.8
0.7
0.6
0.5
Glicose

0.4

Uria

Protenas

0.3
0.2
0.1
0
410

480

520

580

660

CROMATOGRAFIA
INTRODUO
A cromatografia envolve uma srie de processos de separao de misturas,
acontece pela passagem de uma mistura atravs de duas fases: uma estacionria (fixa)
e outra mvel. A interao dos componentes da mistura com estas duas fases
influenciado por diferentes foras intermoleculares, incluindo inica, bipolar, apolar, e
especficos efeitos de afinidade e solubilidade.
A cromatografia pode ser utilizada para a identificao de compostos, por
comparao com padres previamente existentes, para a purificao de compostos,
separando-se as substncias indesejveis e para a separao dos componentes de uma
mistura. As diferentes formas de cromatografia podem ser classificadas considerandose diversos critrios:
1.
2.
3.

Classificao

pela

Classificao
Classificao

forma
pela
pela

fsica

do

sistema

cromatogrfico

mvel

empregada

fase
fase

estacionria

4. Classificao pelo modo de separao

1. Classificao pela forma fsica do sistema cromatogrfico

utilizada

Em relao forma fsica do sistema, a cromatografia pode ser subdividida

em cromatografia em coluna e cromatografia planar. Enquanto a cromatografia planar
resume-se cromatografia em papel (CP), cromatografia por centrifugao e
cromatografia em camada delgada (CCD), so diversos os tipos de cromatografia em
coluna.

2. Classificao pela fase mvel empregada

So de 3 tipos: a cromatografia gasosa, a cromatografia lquida e a
cromatografia supercrtica (CSC). A cromatografia lquida apresenta uma importante
subdiviso: a cromatografia lquida clssica (CLC) e a cromatografia lquida de alta
eficincia (CLAE). No caso de fases mveis gasosas, separaes podem ser obtidas por
cromatografia gasosa (CG) e por cromatografia gasosa de alta resoluo (CGAR).
3. Classificao pela fase estacionria utilizada
Quanto fase estacionria, distingue-se entre fases estacionrias slidas,
lquidas e quimicamente ligadas. No caso da fase estacionria ser constituda por um
lquido, este pode estar simplesmente adsorvido sobre um suporte slido ou
imobilizado sobre ele. Suportes modificados so considerados separadamente, como
fases quimicamente ligadas, por normalmente diferirem dos outros dois em seus
mecanismos de separao.
4. Classificao pelo modo de separao
Separaes cromatogrficas se devem adsoro, partio, troca inica,
excluso ou misturas desses mecanismos.

Cromatografia planar
A cromatografia em papel (CP) uma tcnica de partio lquidolquido.
Baseia-se na diferena de solubilidade das substncias em questo entre duas fases
imiscveis, sendo geralmente a gua um dos lquidos. Este mtodo muito til para a
separao de compostos polares, sendo largamente usado em bioqumica.
A cromatografia em camada delgada (CCD) uma tcnica de adsoro
lquidoslido. Nesse caso, a separao se d pela diferena de afinidade dos
componentes de uma mistura pela fase estacionria.

Cromatografia em coluna

A cromatografia lquida clssica muito utilizada para isolamento de

produtos naturais e purificao de produtos de reaes qumicas. As fases estacionrias
mais utilizadas so slica e alumina, entretanto estes adsorventes podem servir
simplesmente como suporte para uma fase estacionria lquida. Fases estacionrias
slidas levam separao por adsoro e fases estacionrias lquidas por partio.

A Cromatografia Lquida de Alta Eficincia (CLAE) uma tcnica analtica usada para
separar e quantificar componentes numa mistura lquida. A utilizao de suportes com
partculas diminutas so os responsveis pela alta eficincia desse mtodo de
cromatografia. A fase mvel (lquida) movimenta-se continuamente atravs da coluna
contendo a FASE ESTACIONRIA (slido). O soluto interage com as fases
estacionria e mvel por adsoro, partio, excluso molecular, troca inica. As
separaes em CLAE podem se dar por adsoro (separao slido-lquido), partio
(separao lquido-lquido) ou ambos. O detector mais utilizado para separaes por
CLAE o detector de ultravioleta (Absoro da luz na faixa UV visvel), sendo
tambm empregados detectores de fluorescncia, de ndice de refrao, e
eletroqumicos, entre outros.

OBJETIVOS
- Enunciar o princpio da separao cromatogrfica
- Descrever as fases da cromatografia e suas funes
- Saber construir um modelo cromatogrfico simples de separao e identificao pela
cromatografia.

MATERIAL UTILIZADO:
- Corantes: verde malaquita, azul de metileno, vermelho neutro.
- soluo eluente: lcool absoluto, ter, acetona.
- Papel filtro
- Becker
- Pipetas de 10 ml

- Micropipetas de 20um
- Placa de Petri

MTODO:
Construir sistemas bifsicos em placas com fase fixa e fase mvel, respectivamente de
lcool, gua destilada, ter, acetona.
Obs: a mistura do substrato deve ter afinidade pelos eluentes do sistema que se move e
arrasta os componentes. Os componentes da mistura devem apresentar velocidade de
corrida, tempo de corrida, ou distncia percorridas que devero ser tomadas e
normatizadas. Construir um sistema suporte devidamente mensurado onde deveremos
observar as distncias percorridas para aplicao do Rf e para serem relacionados com
padres conhecidos.

PROCEDIMENTOS:
Misturaram-se diversos pigmentos de cores variadas e fez uma listra no papel
filtro que foi colocado na fase mvel.

CONCLUSES:
Os componentes de uma mistura so identificados pela cor. Colocando a tira
de papel com os pigmentos na soluo mvel possvel identificar os componentes da
mistura. Os componentes da fase mvel so absorvidos gradativamente pela fase
mvel, devida as diferentes solubilidades de tamanho das molculas, seus componentes
sobem com diferentes velocidades, permitindo a identificao das substncias.

ELETROFORESE
INTRODUO:
Grande parte das pesquisas atuais em biologia estuda os aspectos ligados s
protenas e aos cidos nuclicos. Essas macromolculas apresentam como caracterstica
importante um grande nmero de regies (grupamentos) com cargas eltricas, sendo
estas cargas, positiva ou negativas, provenientes dos aminocidos que as constituem.
Estas cargas so resultado da ligao ou perda de prtons. Alguns grupos so

neutros e ao receberem um prton, tornam-se positivos (como por exemplo, o grupo

NH2, que, ligando-se a prtons, convertido a NH3+). Outros grupos so neutros,
mas, ao perderem um prton, tornam-se negativos ( o caso do grupo COOH, que se
converte em COO-). Estas perdas e adio dependem do pH do meio em que a protena
se encontra.
A somatria das cargas de todas as regies carregadas de uma protena confere
uma carga total protena, sendo que esta carga varia com o pH do meio.Para os cido
nuclicos (DNA e RNA), estes apresentam uma situao mais simples do que as
protenas, pois apenas apresentam cargas negativas dos grupos fosfato. Outra
caracterstica interessante dos cidos nuclicos que surge de sua estrutura polimrica
repetitiva a razo entre o nmero de cargas negativas e o nmero de tomos que
compem o cido nuclico sendo praticamente constante, independentemente do
tamanho ou da sequncia de nucleotdeos da molcula.
A migrao das cargas eltricas quando so submetidas a uma diferena de
potencial chamada de eletroforese. Isto ocorre porque uma das propriedades das
cargas eltricas em soluo quando uma diferena de potencial aplicada a soluo ou
seja, quando os plos de uma bactria so conectados soluo as cargas negativas so
atradas pelo plo positivo e as cargas positivas so atradas pelo plo negativo,
deslocando-se em direo a eles.

Os cidos nuclicos, como so carregados

negativamente, migram em direo ao plo positivo.

Apesar de corresponder a uma migrao de cargas em soluo, a eletroforese
no normalmente realizada em solues puras. Isso porque as solues esto
sujeitas a uma srie de influncias fsicas do ambiente que lhes causam perturbaes.
Dentre as inmeras fontes dessas perturbaes destacam-se as ondas mecnicas e at
mesmo os movimentos de conveco do lquido pelo aquecimento da soluo
causado pela aplicao da diferena de potencial. As perturbaes fazem com que a
eletroforese, nessas condies, seja um processo muito pouco reprodutvel, com as
cargas de mesma natureza no migrando juntas, mas sim, dispersas.Para reduzir tal
problema, desenvolveram-se sistemas nos quais as perturbaes eletroforese so
reduzidas. Tais sistemas utilizam matrizes rgidas conhecidas como suportes onde
a soluo interage e diminuindo as perturbaes mecnicas e os movimentos de
conveco no lquido. Existem dois tipos bsicos de suportes: os suportes de papel e os
suportes de gel.

Nos suportes de papel, a natureza hidroflica da celulose faz com que uma
pelcula de lquido sobre o papel seja formada. Como a interao entre a fase aquosa
e celulose intensa, a soluo sofre pouca influncia de fatores 6 mecnicos.
Exemplos de suportes desse tipo so o papel de filtro e a acetato de celulose.
Para os suportes de gel os exemplos encontrados so os gis de agarose e a
poliacrilamida, onde as macromolculas ficam retidas dentro dos poros da trama do
polmero que compe o gel. Dessa formam, a soluo tambm pode ser poupada de
turbulncias e conveces.
Como visto, diversos fatores fsicos como choques mecnicos e alteraes na
temperatura podem ento drasticamente a migrao de cargas em soluo. Estes fatores
podem ser contornados pelo uso de suportes para a eletroforese. Alm destes, outros
fatores tambm podem interferir na prtica da eletroforese. A intensidade da diferena
de potencial, a carga total da macromolcula e o tamanho da macromolcula podem
influenciar o movimento de cargas, principalmente a velocidade de migrao de
macromolculas, mesmo se o suporte for utilizado. A diferena de potencial a
principal fora motriz para o movimento das cargas em soluo. Conseqentemente,
quanto maior a intensidade da voltagem aplicada, maior ser a velocidade com que as
cargas se dirigem ao plo de sinal oposto.
Por outro lado, se considerarmos a carga total da macromolcula, quanto maior
for essa carga, maior ser a atrao eletrosttica da molcula pelo plo de sinal oposto.
Dessa forma, quanto maior for a carga da macromolcula, maior ser a sua velocidade
de migrao eletrofortica.
O tamanho da macromolcula tambm influi decisivamente na sua velocidade
de migrao. Isso porque existe um componente friccional entre a macromolcula, o
solvente, o suporte e os demais ons em soluo que faz com que quanto maior a
macromolcula, menor ser a sua velocidade de migrao em direo ao plo de sinal
oposto.
Tendo em vista todos os fatores influentes sobre a migrao eletrofortica,
consideramos uma soluo em que haja uma mistura de macromolculas com tamanho
e/ou cargas diferentes. Ao aplicarmos uma diferena de potencial a esta soluo, as
molculas migraro com velocidades e/ou direes diferentes, dependendo de seus
tamanhos e cargas. Ao final de um dado intervalo de tempo, ao desligarmos a fonte da

diferena de potencial, cada tipo de molcula estar em um lugar diferente da soluo

no espao entre o plo positivo e o negativo.
Dependendo do suporte que utilizamos para a eletroforese e da natureza das
macromolculas, podemos separ-las mais com base na carga ou mais com base em seu
tamanho.

Na eletroforese, o suporte de papel, a frico com o suporte que as

macromolculas experimentam pequena, o que faz com que o tamanho da molcula

no influencie profundamente a sua velocidade de migrao. Sendo assim, as molculas
so preferencialmente separadas com base em suas cargas. Esse tipo de eletroforese
encontra grande utilidade na separao de protenas que, devido variada composio
de seus aminocidos, apresentam grandes diferenas na carga total.
OBJETIVO:
- Enunciar os princpios Qualitativos e Quantitativos do mtodo.
- Descrever o mecanismo da participao das solues tampes que condicionam o
perfil e a direo da corrida das cargas.
- Relacionar a migrao das protenas em funo do PI e PH do meio
- Descrever o instrumento bsico da eletroforese, e o modo de executar o processo.

CONCLUSO:
Ao trmino deste trabalho de pesquisa conclumos que a eletroforese um
processo analtico de separao de misturas, cujo principal agente o campo eltrico.
Essa tcnica passou por evolues, com a introduo de um suporte como papel de
filtro, slica gel, membranas de acetato de celulose, gel de agarose, amido ou
poliacrilamida, entre outros.
Atualmente o campo de aplicao da eletroforese tem sido amplamente
difundido, devido simplificao de aparelhagem utilizada e tambm disponibilidade
de meios de suporte altamente purificados, o que veio diminuir em muito o tempo gasto
na separao.
As principais tcnicas de eletroforese so: eletroforese em gel, eletroforese
capilar e capilar em gel. A tcnica de eletroforese capilar possui uma srie de vantagens,
tais como a rapidez, versatilidade, um baixo custo por anlise, alto poder se separao

(resoluo) e um consumo mnimo de amostras, reagentes e solventes. Alm disso,

oferece a possibilidade de automao e deteco on-line.
Entretanto esta tcnica oferece algumas limitaes, pois no adequada para a
determinao de compostos volteis, no polares e de massa molar baixa, os quais so
melhores determinados por cromatografia gasosa. Tambm no muito adequada para a
anlise de polmeros no inicos de massa molar alta e no to sensvel quanto a
cromatografia lquida de alta eficincia.
A eletroforese de grande importncia para as cincias, permitindo a separao
e identificao de molculas de DNA por meio da diferena de velocidade de migrao,
identificao de pessoas em testes de paternidade pela comparao de DNA, na
indstria farmacutica e at mesmo na agropecuria.

Referncias
CROMATOGRAFIA. Disponvel em:<http://www.infoescola.com/quimica/
cromatografia/>. Acesso em: 23 de setembro de 2015.

ESFREGAO SANGUNEO. Disponvel em:<http://www.biomedicinabrasil.com/

2011/03/esfregaco-sanguineo.html>. Acesso em: 23 de setembro de 2015.

ELETROFORESE. Disponvel em:<http://www.infoescola.com/bioquimica/

eletroforese/>. Acesso em: 23 de setembro de 2015.
ESPECTROFOTOMETRIA. Disponvel em:<http://www.ebah.com.br/
content/ABAAAAiFkAE/espectrofotometria>. Acesso em: 23 de setembro de 2015.
FOGAA, Jennifer Rocha Vargas. Centrifugao - Mtodo de Separao de
Misturas. 2015. Disponvel em:
<http://www.alunosonline.com.br/quimica/centrifugacao-metodo-separacaomisturas.html>. Acesso em: 23 set. 2015.

LEUCCITOS. Disponvel em:<http://www.tuasaude.com/leucocitos/>. Acesso em: 23

de setembro de 2015.

REFRATOMETRIA. Disponvel em:

<http://www.ebah.com.br/content/ABAAAfe9oAF/relatorio-refratometria>. Acesso em:
23 de setembro de 2015.

VOGEL, A. I. Anlise qumica quantitativa. 6. Ed. Rio de Janeiro: LTC, 2002.