UNIVERSIDAD PEDRO DE VALDIVIA

FACULTAD DE SALUD

PROFESOR: NIBALDO PASTN R.

COLORIMETRA Y
LEY DE LAMBERT Y BEER

Todo mtodo colorimtrico se basa en la comparacin de la intensidad del color de una

solucin de una sustancia de concentracin desconocida con la de una solucin de la misma sustancia de
concentracin conocida, la cual se denomina solucin estndar o patrn.
El color de una solucin es la resultante del color del soluto ms el color del solvente. En el
caso de una reaccin qumica los solutos estn constituidos tanto por los reactantes como los productos
de la reaccin. Para poder medir solamente la intensidad del color de la sustancia cuya concentracin se
desea conocer, es necesario descartar el color de las otras sustancias (solvente, reactivos), por lo tanto es
necesario en todo mtodo colorimtrico hacer siempre una muestra que contenga todas las sustancias de
la reaccin menos aquella que se desea medir. Esta muestra se denomina blanco de la reaccin y la
intensidad de su color debe restarse a las muestras problemas y a los patrones.
La relacin entre la intensidad de un color de un soluto y su concentracin se rigen por la ley
de Lambert-Beer, que como se indico establece una proporcionalidad directa entre la concentracin e
intensidad del color de una sustancia en solucin medida como absorbancia. Si esta proporcionalidad no
se cumple este sistema de medicin no puede aplicarse. Es indispensable por lo tanto, al usar cualquier
mtodo colorimtrico conocer la sensibilidad de ste, determinando el rango de concentraciones en la
cual se cumple la ley de Lambert Beer, para lo cual debe hacerse una curva de calibracin.
La curva de calibracin consiste en la determinacin de la absorbancia de una serie de
soluciones de concentraciones conocidas de una sustancia tratadas con el mismo mtodo y medidas en el
mismo tipo de fotocolormetro.
Si la razn entre la concentracin de la sustancia en estudio y su absorbancia (c/Ab) es
constante, significa que el mtodo sigue la ley de Lambert-Beer. Esto se puede analizar mejor utilizando
una grfica de la absorbancia en funcin de la concentracin.

Si la grfica da una lnea recta al igual que la figura significa que la relacin es directamente
proporcional, cumpliendo as con la Ley de Lambert-Beer, cualquier otro tipo de curva indica que el
mtodo no sigue la Ley de Lambert-Beer.

Leyes fundamentales de colorimetra.

Cuando la luz atraviesa un medio transparente parte de ella puede ser absorbida, de modo que
la intensidad de la luz transmitida, It (luz que sale del medio) es siempre menor que la intensidad de la
luz incidente, I0 (luz que llega al medio).Dos leyes fundamentales sostienen la prctica de la fotometra.

La ley de Bourguer o de Lambert; establece que si un haz de luz monocromtica (luz

incidente) entra en un medio absorbente por ngulos rectos al plano, la cantidad de luz transmitida
disminuye en progresin geomtrica al aumentar el espesor del medio absorbente en progresin
aritmtica. En otras palabras la ley establece que la cantidad de luz absorbida es directamente
proporcional al logaritmo de la longitud de onda de la luz incidente o bien al espesor del medio
absorbente, se expresa matemticamente as.

I / I0 = e-kb
En las cuales I es la intensidad de la luz transmitida, I0 es la intensidad de la luz incidente, b es
el espesor de la cubeta de vidrio que guarda la solucin y k es el coeficiente de absorcin lineal
caracterstico del medio.
Usando la forma logartmica obtenemos:

ln (I0/ I) = k b
en logaritmos decimales es:

log (I0/ I) = k b/2.303

Ley de Beer; establece en los casos en que el medio absorbente son soluciones coloreadas y
transparentes que a medida que la concentracin del medio aumenta en progresin aritmtica la
intensidad de luz transmitida disminuye en progresin geomtrica. En palabreas simples establece que la
cantidad de luz absorbida es proporcional a la concentracin del medio absorbente. Usando la forma
logartmica obtenemos:

ln (I0/ I) = k c
en la que c es la concentracin del soluto.

En logaritmos decimales es:

log (I0/ I) = k c/2.303

Combinando ambas leyes se obtiene la ley de Lambert-Beer:

log (I0/ I) = k x b x c
La ley de absorcin se expresa tambin en trminos de absorbancia:

A = log (I0/I) = k x b x c
tambin:

A = log (1/T) = k x b x c
donde T es la transmitancia.

La transmitancia se expresa a menudo en porcentaje:

La absorbancia puede ser calculada a partir de la transmitancia por:

A = 2 log %T
EJEMPLO:
Calcular la absorbancia y el coeficiente de extincin molar a 351 nm para la acuocobalamina
en tampn de fosfato 0,1 M, pH = 7,0 a partir de los datos siguientes, obtenidos en una celda de 1 cm.
Solucin

I0

Concentracin
mMoles/L
2.23

93.1

27.4

1,93

94.2

32.8

RESPUESTA

1.- Calcular la absorbancia.

Reorganizando las frmulas para nuestro objetivo, tenemos:

A = 2 log [(I/I0) x100]

Solucin A
A = 2- log [(27.4/93.1)x100]
A= 0.53
Solucin B
A = 2- log [(32.8/94.2)x100]
A= 0.46

Calculo del coeficiente de extincin molar:

A=kxbxc
Solucin A
0,53 = k x 1 cm x 2.23x10-5 mol/L
k = 0,53 / 2,23 cm mMol/L
k = 0,238 cm mMol/L

Solucin B
0,46 = k x 1 cm x 1,90x10-5mol/L
k = 0,46 / 1,93 cm mMol/L
k = 0,238 cm mMol/L