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Gua para el Cuidado y

Uso de Pequeos
Roedores de
Laboratorio
Unidad de Animales Transgnicos
y de Experimentacin
G
MSScc
Geerraallddiinnee SScchhllaapppp,, M
AAnnaa PPaauullaa AArrvvaalloo,, TTM
MN
N

INDICE

PRO

SECCION 1 .............................................................................................................................................................5
PROCEDIMIENTOS EXPERIMENTALES..................................................................................................................5
TCNICAS BSICAS DE OBTENCIN DE MUESTRAS IN VIVO ............................................................................... 6
1. EXTRACCIN DE SANGRE ..........................................................................................................................6
1.1. Vena submandibular..........................................................................................................................6
1.2. Puncin intracardaca ........................................................................................................................7
2. BIOPSIA DE COLA ...................................................................................................................................8
3. MARCADO DE OREJAS.............................................................................................................................9
4. PERFUSIN INTRACARDACA IN VIVO.................................................................................................. 10
TCNICAS DE ADMINISTRACIN DE SUSTANCIAS ............................................................................................. 11
VIAS DE ADMINISTRACION PARENTERAL .................................................................................................. 11
5. SUBCUTNEA (SC).............................................................................................................................. 12
6. INTRAPERITONEAL (IP) ...................................................................................................................... 13
7. INTRAMUSCULAR (IM) ....................................................................................................................... 14
8. INTRADRMICA (ID) ........................................................................................................................... 15
9. INTRAVENOSA (IV) ............................................................................................................................ 16
10. ALMOHADILLAS PLANTARES ........................................................................................................... 17
VIA DE ADMINISTRACION ENTERAL .......................................................................................................... 17
11. ORAL ................................................................................................................................................ 17
IMPACTO DE LOS PROCEDIMIENTOS EN EL BIENESTAR ANIMAL.............................................................. 19
ANEXO SECCION 1 ..................................................................................................................................... 20
TABLA 1 - Volmenes de extraccin referidos a Vc (volumen circulante) ................................................ 20
TABLA 2 - Volmenes de extraccin referidos a Vt (Volumen total)......................................................... 20
TABLA 3 - Tamao de aguja para la administracin de sustancias............................................................ 20
TABLA 4 - Volmenes de inoculacin ........................................................................................................ 21
Valores de pH de las soluciones a inyectar ............................................................................................... 21
REFERENCIAS SECCION 1 ................................................................................................................................... 22
SECCION 2 .......................................................................................................................................................... 23
RECONOCIMIENTO Y ALIVIO DEL ESTRS Y EL DOLOR ...................................................................................... 23
SITUACIONES QUE CAUSAN DOLOR .................................................................................................................. 23
2

CMO DETECTAR SITUACIONES DE DOLOR ...................................................................................................... 24


Signos y sntomas de dolor y estrs .......................................................................................................... 25
CMO TRATAR Y ALIVIAR EL DOLOR ................................................................................................................. 25
ANALGESIA......................................................................................................................................................... 26
Tipos y efectos de las drogas analgsicas.................................................................................................. 26
Opioides (morfina, buprenorfina, butorfanol) ....................................................................................... 26
AINEs (flunixin, meloxicam, carprofeno) ............................................................................................... 27
Anestsicos locales (lidocana) .............................................................................................................. 27
Analgsicos usados en la UATE para ratones ............................................................................................ 27
ANESTESIA ......................................................................................................................................................... 28
Tipos y efectos de las drogas anestsicas ................................................................................................. 29
Agentes inhalantes ................................................................................................................................ 29
Isofluorano y halotano ...................................................................................................................... 29
Agentes inyectables ............................................................................................................................... 29
Barbitricos (pentobarbital sdico, tiopental sdico) ....................................................................... 29
Tribromoetanol.................................................................................................................................. 29
Ketamina............................................................................................................................................ 30
Tranquilizantes asociados a la ketamina ........................................................................................... 30
Anestesia en ratones neonatos ................................................................................................................. 31
Anestsicos usados en la UATE para ratones ............................................................................................ 31
DETERMINACIN DE PUNTO FINAL................................................................................................................... 33
PARMETROS USADOS PARA DETERMINAR EL PUNTO FINAL .................................................................. 33
PROCEDIMIENTOS ESTABLECIDOS EN LA UATE PARA PUNTOS FINALES .................................................. 35
EUTANASIA ........................................................................................................................................................ 35
Mtodos fsicos (dislocacin cervical, decapitacin)................................................................................. 36
Mtodos qumicos (sobredosis de anestsicos inyectables o inhalatorios) ............................................. 36
Signos de dolor y angustia ......................................................................................................................... 37
Reconocimiento y confirmacin de la muerte .......................................................................................... 37
METODOS DE EUTANASIA USADOS EN LA UATE PARA RATONES ............................................................. 37
1.

Eutanasia mediante CO2 ................................................................................................................ 37

2.

Dislocacin cervical........................................................................................................................ 38
3

3.

Decapitacin .................................................................................................................................. 38

Mtodos NO ACEPTABLES para la eutanasia de roedores .................................................................... 38


ANEXO SECCION 2 ............................................................................................................................................. 39
2.1. Analgesia y anestesia .................................................................................................................................. 39
TABLA 1 - Analgsicos de uso comn en ratn ........................................................................................ 39
TABLA 2 - Anestsicos inhalatorios usados en ratn................................................................................. 39
TABLA 3- Anestsicos inyectables usados en ratn .................................................................................. 40
2.2. Puntos finales ............................................................................................................................................. 40
Seleccin de punto final en reas especficas de investigacin ........................................................................ 40
1.

Produccin de anticuerpos monoclonales en ratones .................................................................. 40

2.

Investigacin en cncer ................................................................................................................. 41

3.

Estudios toxicolgicos.................................................................................................................... 41

4.

Estudios de enfermedades infecciosas, ensayos de vacunas ........................................................ 41

REFERENCIAS SECCION 2 ................................................................................................................................... 43

SECCION 1
PROCEDIMIENTOS EXPERIMENTALES
PRINCIPIOS DE LAS BUENAS PRCTICAS
Cuando se administra una sustancia a un animal por cualquier va, el objeto debe ser conseguir la mejor
prctica, puesto que los errores pueden provocar un sufrimiento evitable y/o un gasto de animales vivos. La
mejor prctica se basa en minimizar o evitar efectos adversos, disminuir cuanto se pueda el nmero de
animales utilizados y maximizar la calidad y aplicabilidad de los resultados.

Objetivos:
Refinar los procedimientos de administracin de sustancias para asegurar un buen nivel de bienestar
para los animales.
Obtener la mayor precisin en los datos cientficos obtenidos.

Tcnicas bsicas de obtencin de muestras in vivo


1. Extraccin de sangre
1.1 - Vena submandibular
1.2 - Intracardaca
2. Biopsia de cola
3. Marcado de orejas
4. Perfusin intracardaca in vivo

Vas de inyeccin de sustancias


Vas de administracin parenteral
5.

Subcutnea

6.

Intraperitoneal

7.

Intramuscular

8.

Intradrmica

9.

Intravenosa

10. Almohadillas Plantares


Vas de administracin enteral
11. Oral

TCNICAS BSICAS DE OBTENCIN DE MUESTRAS IN VIVO


1. EXTRACCIN DE SANGRE
1.1. Vena submandibular
Anestesia: no requerida
Material: agujas 19 21G
Volumen de extraccin:
La cantidad y frecuencia de extraccin de sangre aceptable dependen del volumen de sangre circulante (Vc)
del animal. El Vc de un ratn es aproximadamente 55-70 ml/kg de peso corporal. El 10% del Vc puede ser
removido de manera segura para el animal cada 2-4 semanas, y slo el 1% diariamente. En la tabla 1 se
muestran los rangos de volmenes de extraccin de sangre y en la tabla 2 los perodos de recuperacin.
Tabla 1
Peso corporal
(g)

Vc (ml)

1% (ml)

7.5% (ml)

10% (ml)

20

1.10 -1.40

0.011 - 0.014

0.082 - 0.105

0.11 - 0.14

25

1.37 - 1.75

0.014 - 0.018

0.10 - 0.13

0.14 - 0.18

30

1.65 - 2.10

0.017 - 0.021

0.12 - 0.16

0.17 - 0.21

35

1.93 - 2.45

0.019 - 0.025

0.14 - 0.18

0.19 - 0.25

40

2.20 - 2.80

0.022 - 0.028

0.16 - 0.21

0.22 - 0.28

Tabla 2

Extraccin nica

Extracciones mltiples

% Vc extrado

Perodo de
recuperacin

% Vc extrado en
24h

Perodo de
recuperacin

7.5 %

1 semana

7.5 %

1 semana

10 %

2 semanas

10 %

2 semanas

15 %

4 semanas

15 %

3 semanas

Descripcin de la tcnica:
1) Sujetar firmemente el ratn de manera que la cabeza quede alineada con el cuerpo.
2) Usando una aguja 19-21G, dependiendo de la edad y/o tamao del ratn, realizar la puncin en
la zona indicada en la figura 1. La profundidad ptima es de 2-3 mm.
3) Recoger la sangre en un tubo tipo Eppendorf teniendo en cuenta que el flujo ser de
aproximadamente una gota (20l) por segundo.
4) Una vez obtenida la muestra ejercer una leve presin sobre la zona de puncin para detener la
hemorragia y luego retornar el ratn a su caja. El sangrado se detendr automticamente.

Figura 1

www.medipoint.com

1.2. Puncin intracardaca


Anestesia: requerida (ver Seccin Anestesia)
Material: agujas 21 G; tijeras y pinzas de diseccin (tcnica alternativa)
Volumen de extraccin: total
Descripcin de la Tcnica:
1) Anestesiar al ratn y preparar una jeringa con aguja 21 G.
2) Colocar al animal decbito dorsal.
3) Introducir la aguja debajo y ligeramente a la derecha del cartlago xifoides (izquierda del animal) con
una inclinacin de 15-20, aspirando suavemente con el mbolo.
4) La sangre entra en la jeringa cuando la aguja penetra en el corazn. Aspirar lentamente hasta que el
flujo de sangre se detenga. Mover la aguja hacia delante y atrs para extraer la mayor cantidad
posible de sangre.
5) Proceder a la inmediata eutanasia del animal una vez concluido el procedimiento.
Tcnica alternativa:
1) Anestesiar al ratn y preparar una jeringa con aguja 21 G.
2) Colocar al animal decbito dorsal.
7

3) Empleando las tijeras de diseccin, realizar un corte longitudinal desde la parte media del
abdomen hasta el cuello. Despejar la zona y generar una abertura en la caja torcica sobre la lnea
media, hasta dejar completamente destapado el corazn.
4) Ingresar al corazn introduciendo la aguja en el pice del ventrculo izquierdo y realizar la
extraccin.
5) Proceder a la inmediata eutanasia del animal una vez concluido el procedimiento.

2. BIOPSIA DE COLA
Anestesia: segn la edad y longitud de cola que se quiera obtener (ver Seccin Anestesia)
Material: tijeras pequeas
Tener en cuenta:
1) La longitud mxima a cortar es de 0.5 cm. De este fragmento se obtiene 50 g de ADN, suficiente
para mltiples ensayos de genotipado.
2) La edad ptima para la realizacin de este procedimiento es de 15 a 21 das, antes de la calcificacin
de las ltimas vrtebras.
3) Requerimientos de anestesia:
-

ratones de menos de 28 das: no requerida

ratones de ms de 28 das: requerida para muestras de ms de 2mm.

segunda biopsia: requerida independientemente de la longitud de la muestra.

4) Este procedimiento no debe ser desarrollado ms de dos veces en el mismo ratn, salvo autorizacin
de la CEUA (Comisin de tica en el Uso de Animales) institucional.
Descripcin de la tcnica:
1) Inmovilizar al ratn con la mano o introducirlo en un cepo.
2) Seccionar 0.2-0.5 cm de cola usando las tijeras (previamente desinfectadas).
3) Presionar la zona de corte con papel o cauterizar para detener la hemorragia.
4) No devolver el ratn a su jaula hasta comprobar que el sangrado se detuvo completamente.
5) Limpiar las tijeras por friccin (toalla de papel mojada en alcohol 70%). Este procedimiento es
importante tambin en el caso de que se realicen varias biopsias contiguas usando el mismo
instrumento con el fin de eliminar posibles restos de tejido del animal anterior.

3. MARCADO DE OREJAS
Anestesia: no requerida
Material: sacabocados
Descripcin de la tcnica:
1) Inmovilizar al ratn con la mano de forma que las orejas queden accesibles.
2) Proceder al marcado siguiendo el cdigo indicado en la figura 2. En la oreja derecha del ratn se marcan
las unidades, desde el 1 en la regin ventral hasta la 9 en la regin dorsal. Las decenas se marcan en la oreja
izquierda del ratn siguiendo la misma disposicin de las unidades.

UATE - IPMon

EJEMPLOS:

Manipulating the mouse embryo. Nagy et al., 2003

Figura 2

4. PERFUSIN INTRACARDIACA IN VIVO


Anestesia: Pentobarbital Sdico (100mg/kg) (uso exclusivo para esta tcnica; ver Seccin Anestesia)
Material: Solucin de lavado (PBS 1x o Solucin salina)
Solucin de fijado (Paraformaldehdo 4% en PBS 1x, Formaldehdo 10%, otros dependiendo
de la tcnica histolgica a realizar)
Equipo de perfusin: jeringas o bomba peristltica
Mariposa 22 G (ratn), 20 G (rata)
Volmenes: Solucin de lavado: 10-25 ml (ratn) 50-100 ml (rata)
Solucin de fijado: 50-100 ml (ratn) 400-600 ml (rata)
Restriccin: debido al uso de formaldehdos el procedimiento debe realizarse en una campana de extraccin
de gases.
Descripcin de la tcnica:
1) Anestesiar al animal, una vez alcanzado el plano profundo (chequear reflejos) colocarlo en posicin
decbito supino sobre una placa/rejilla adecuada para la recogida de los lquidos de lavado y fijacin.
2) Estirar y sujetar las extremidades con cinta o agujas.
3) Limpiar la superficie del ratn con etanol 70%.
4) Realizar un corte en la piel a la altura de la porcin caudal del esternn, separar la piel y cortar las
costillas en paralelo a los pulmones para exponer el corazn.
5) Insertar la aguja de la jeringa o de la botella del equipo de perfusin que contiene la solucin de
lavado en el ventrculo izquierdo y profundizar (se puede en algunos casos alcanzar la aorta), fijando
la aguja a este nivel.
6) Realizar una incisin en la aurcula derecha o seccionar vena cava inferior para permitir el escape de
la circulacin de retorno de los lquidos de lavado.
7) Proceder al lavado con la solucin salina o PBS 1x. La velocidad de perfusin de los lquidos de lavado
influir en la correcta fijacin de los rganos, se estima un tiempo mnimo de 5 min en ratn y 10
min en rata para los volmenes anteriormente especificados. En el caso de utilizar el sistema de
perfusin por gravedad, las botellas con los lquidos de lavado y fijacin se deben situar a una altura
de 100 a 120 cm por encima del animal. La prdida de color del hgado es un buen indicativo de que
se est realizando bien la perfusin.
8) Proceder a la perfusin de la solucin de fijado.
Una vigorosa contraccin muscular indica que se estn perfundiendo y fijando bien los tejidos. Cuando se ha
pasado un volumen adecuado de fijador y el animal est rgido retirar la aguja procediendo a la extraccin de
los rganos deseados.

10

CNB, Madrid, Espaa

Figura 3

TCNICAS DE ADMINISTRACIN DE SUSTANCIAS


A TENER EN CUENTA:
USAR LAS AGUJAS MS ADECUADAS. La insercin de grandes agujas puede ser dolorosa y produce
un excesivo dao tisular. Las de pequeo calibre dificultan el pasaje del inculo.
NO RECICLAR MATERIAL. Realizar uso nico de agujas y jeringas. Cambiar de aguja cuando se
inyectan grupos grandes de animales (aprox. 10). Las agujas se desafilan y la puncin se hace ms
dolorosa.
BUSCAR ALTERNATIVAS. Si el procedimiento debe repetirse frecuentemente, considerar la
posibilidad de cateterizar una vena, por ejemplo.
INGRESAR EN LA VIA SELECCIONADA. Ingresar en una va no buscada puede acarrear serias secuelas,
incluso fatales.
ASPIRAR. Retraer el mbolo antes de administrar la sustancia.

VIAS DE ADMINISTRACION PARENTERAL


Implica la ruptura de las barreras naturales del organismo (piel y mucosas) para depositar sustancias en
tejidos o cavidades internas del organismo. Estos mtodos incluyen la inyeccin con depsitos de sustancias
dentro de la piel (va intradrmica ID), o debajo de ella en el tejido subcutneo (va subcutnea SC), en los
11

msculos (va intramuscular IM), en venas (va intravenosa IV), o en cavidades como la peritoneal (va
intraperitoneal IP).

5. SUBCUTNEA (SC)
Esta va es la ms sencilla y mejor tolerada de todas. Presenta una absorcin lenta porque el depsito de las
sustancias se realiza en tejidos poco irrigados.
Anestesia: no requerida
Material: aguja 25 G (ratn y rata)
Lugar de inyeccin: zona dorsal
Volumen mximo: 2-3 ml (ratn), 5-10 ml (rata)
Inyecciones mximas: 2-3 /da
pH de solucin a inyectar: fisiolgico (aprox. 7), consultar Anexo
Descripcin de la tcnica:
1) Depositar al ratn sobre la rejilla permitindole agarrarse de ella con las patas delanteras, y sujetarlo
por la cola.
2) Introducir la aguja por debajo de la piel a 45 en el cuadrante inferior derecho o izquierdo, y
posicionarla de forma paralela al animal para evitar inyectar capas ms profundas (figura 4). No se
debe sentir resistencia al mover la aguja.
3) Inyectar el volumen total de muestra a una velocidad moderada.
4) Antes de retirar la aguja girarla 90 y proceder a su extraccin, esto previene el reflujo de la
sustancia inyectada.
5) Si la sustancia fue inyectada correctamente, se observar la formacin de un abultamiento en el sitio
de inyeccin que ir desapareciendo a medida que el fluido se dispersa.

UATE - IPMon

Figura 4

12

6. INTRAPERITONEAL (IP)
Se utiliza para administrar volmenes relativamente grandes de sustancias solubles. Su utilizacin es muy
comn en pequeos roedores.
Anestesia: no requerida
Material: aguja 27-25 G (ratn)
Lugar de inyeccin: zona ventral, cuadrante inferior derecho
Volumen mximo: 2-3 ml (ratn), 5-10 ml (rata)
pH inoculacin: consultar Anexo
Descripcin de la tcnica:
1) Con el ratn correctamente inmovilizado (evitando cualquier movimiento durante el procedimiento)
inclinarlo caudalmente y trazar una lnea imaginaria que cruce su abdomen transversalmente justo
sobre sus rodillas tal y como se muestra en la figura 5 (lnea negra).
2) Insertar la aguja en el cuadrante inferior, en el lado derecho del animal apenas alejado de la lnea
media (lnea roja). De esta manera se disminuye el riesgo de inyectar en ciego o vejiga urinaria.
3) La aguja debe alcanzar una profundidad de aproximadamente 0.5 cm (ratn) y debe insertarse con
una inclinacin de unos 30 con respecto a la superficie del abdomen.
4) Si ningn fluido es aspirado, proceder a la inyeccin de la muestra.
5) Retirar la aguja y presionar ligeramente la zona de inyeccin.

CNB, Madrid, Espaa

UATE - IPMon

Figura 5

Problemas potenciales de la tcnica:

Las sustancias irritantes pueden resultar fatales.

Algunos disolventes acuosos pueden producir inflamacin de los bordes de los lbulos hepticos.
Produce dolor, fibrosis y adherencias.
13

No se puede asegurar que la sustancia se est administrando en la cavidad en lugar del intestino, vejiga,
msculo u otro rgano
Pueden daarse vasos sanguneos

7. INTRAMUSCULAR (IM)
Se utiliza como una va de administracin sistmica, en estudios de liberacin lenta (formulaciones oleosas) y
en valoracin de vacunas. Se desaconseja esta tcnica en animales pequeos (Ej.: rata, ratn o hmster).
Anestesia: no requerida
Material: aguja 27 G (ratn), 25 G (rata)
Lugar de inyeccin: cudriceps, parte anterolateral del muslo
Volumen mximo: 50 l por sitio de inyeccin (ratn), 300 l (rata)
Inyecciones mximas: 2 por da
pH inoculacin: fisiolgico (aprox. 7), consultar Anexo
Descripcin de la tcnica:
1) Pueden ser necesarias dos personas para el correcto procedimiento de esta tcnica, una para sujetar
al animal y otra para la inoculacin.
2) Inmovilizar al ratn, sujetar firmemente la pata trasera del animal y proceder a la insercin de la
aguja en el sitio de inoculacin (figura 6).
3) Siempre antes de la inoculacin, aspirar ligeramente para comprobar que no fluye sangre en la
jeringa y as evitar la inyeccin en vasos sanguneos.
4) El contenido de la jeringa debe ser expulsado muy lentamente y se debe masajear la zona de
inyeccin cuidadosamente una vez realizada la inoculacin.

Univ. P. Olavide, Sevilla, Espaa

Figura 6

Problemas potenciales de la tcnica - recomendaciones:


Cojera temporal (es una tcnica dolorosa).
No usar sustancias irritantes, la necrosis tisular que se produce en el lugar de inyeccin ser muy
dolorosa. Para estas sustancias, se recomienda usar va IV.
14

El uso de adyuvantes por esta va es inaceptable.


Si la reaccin al dolor llega a ser violenta, retire la aguja para evitar dolor innecesario o dao fsico,
completar la inyeccin en otro lugar cuando la reaccin haya disminuido y el animal se haya
calmado.
Puede resultar conveniente dividir los volmenes grandes entre diversos puntos.

8. INTRADRMICA (ID)
Se utiliza frecuentemente en estudios de inflamacin, sensibilizacin, diagnstico de flujo sanguneo cutneo
y en inmunologa.
Anestesia: no requerida, pero facilita el procedimiento
Material: aguja 30 G (ratn y rata)
Lugar de inyeccin: zona dorsal
Volumen mximo: 50-100 l por sitio de inyeccin (ratn y rata)
Inyecciones mximas: 6 sitios de inoculacin. Nunca inyectar en el mismo sitio ms de una vez
pH inoculacin: fisiolgico (aprox. 7), consultar Anexo
Descripcin de la tcnica:
1) Pueden ser necesarias dos personas para el correcto procedimiento de esta tcnica, una para sujetar
al animal y otra para la inoculacin
2) Afeitar la/las zona/s a inyectar. La aguja debe situarse casi paralela a la superficie de la piel e
introducirla cuidadosamente unos pocos milmetros dentro de ella, dejando el bisel de la aguja hacia
abajo (figura 7).
3) Una prdida de resistencia al paso de la aguja demuestra que se ha ingresado en la capa subcutnea.
En este caso, retirar la aguja y proceder de nuevo a la inoculacin.
4) Realizar una ligera rotacin de la aguja despus de la inoculacin antes de extraerla, lo que ayudar
a minimizar la prdida del compuesto inyectado.
A

CNB, Madrid, Espaa

www.bioterios.com

Figura 7

15

9. INTRAVENOSA (IV)
Se usa con frecuencia en experimentos farmacolgicos y toxicolgicos de biodisponibilidad inmediata. Es la
va elegida cuando se requiere una muy rpida absorcin de la sustancia o cuando se administran sustancias
irritantes que producen malestar o dolor (pH muy bajo o muy alto). Se debe tener en cuenta la dosis
empleada porque existe posibilidad de que las sustancias lleguen rpidamente y a concentraciones altas a
rganos o sistemas sensibles y vitales. Por ej. las sustancias que producen depresin cardiomuscular o
respiratoria pueden producir efectos fatales.
Anestesia: no requerida
Material: aguja 27-30 G (ratn y rata) y cepo
Lugar de inyeccin: vena lateral de la cola
Volmenes recomendados: 200 -300 l (ratn), 500 l (rata)
pH inoculacin: consultar Anexo
Descripcin de la tcnica:
1) Colocar el animal en el cepo, manteniendo la cola hacia afuera (figura 8). Realizar una correcta
vasodilatacin (usar agua tibia o una luz caliente).
2) Insertar la aguja, con el bisel hacia arriba, en una de las venas laterales de la cola, las cuales se
localizan a ambos lados de la lnea central de manera superficial, de forma paralela a la superficie.
3) Asegurarse de haber ingresado en la vena (aspirar) antes de inocular la sustancia. Si la aguja ha sido
alojada en el lumen de la vena, no se apreciar resistencia al presionar el mbolo de la jeringa de
modo que la muestra fluir sin dificultad en el torrente sanguneo.
4) Una vez inoculada la muestra retirar la aguja y presionar la zona de inyeccin con un algodn para
detener la hemorragia.

UATE - IPMon

Figura 8

16

10. ALMOHADILLAS PLANTARES


Anestesia: puede ser requerida si la inoculacin es realizada por una nica persona. Tambin se puede sedar
al animal sin entrar en un plano anestsico profundo
Material: agujas 27-30 G (ratn), 27 G (rata)
Volmenes mximos de inyeccin: 50 l (ratn), 100 l (rata)
pH de inoculacin: fisiolgico (aprox. 7)
Restricciones: slo se utilizar esta va de administracin en aquellos casos en los que el resto de las rutas de
inoculacin se hayan comprobado no efectivas
Consideraciones especiales:
1) Nunca se inocular en ms de una pata por animal dado que la misma interfiere con la locomocin
2)

Limitar el volumen y concentracin del inculo a los mnimos posibles

3)

Los animales no deben ser alojados en cajas desprovistas de viruta (ej. cajas tipo metablicas)

La monitorizacin del sitio de inyeccin deber ser tan frecuente como sea necesario para detectar de
inmediato reacciones adversas que puedan impedir el acceso del animal al agua y/o comida. En caso de
aparicin de las mismas se proceder con el protocolo de punto final previsto en la CEUA.

VIA DE ADMINISTRACION ENTERAL


Utiliza la forma natural de absorcin (el intestino). Estas sustancias no slo se ingieren por la boca sino que
pueden ser depositadas directamente en otros tramos del intestino como el recto. La sustancia se suministra
en el alimento, en el agua de bebida, o bien se administra de manera forzada utilizando una sonda.

11. ORAL
Comnmente usada para la administracin de compuestos irritantes o imposibles de ser administrados por
otras vas.
Anestesia: no usada porque se requiere el reflejo de deglucin
Material: sonda o catter recto o curvo, con extremo abotonado, de 0.8 mm (ratn), 1-2 mm (rata, cobayo).
Hay sondas metlicas y plsticas, se recomienda el uso de estas ltimas dado que son ms flexibles.
pH de inoculacin: fisiolgico (aprox. 7)
Descripcin de la tcnica:
1) Inmovilizar el animal de forma que la cabeza, el cuello y el trax formen una lnea recta.
2) Medir el tamao de la sonda. Tomar puntos de referencia (figura 9).
17

3) Lubricar las sondas con vaselina o parafina.


4) La sonda debe pasar por el espacio interdental y avanzar suavemente con movimiento rotatorio
hasta el esfago o estmago, aprovechar el reflejo gastroesofgico o deglutorio para pasar
fcilmente por el tracto.

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Figura 9

Problemas potenciales

Ingreso en vas respiratorias (trquea), lo que se confirma por presencia de tos, dificultad
respiratoria (gorjeos o carraspeos), dificultad para avanzar la sonda. Si esto ocurre,
retirar la sonda y volver a intentarlo.

En caso de haber administrado el frmaco accidentalmente en va respiratoria proceder a


la inmediata eutanasia del animal.

La sonda no debe tocar las paredes del esfago ni la mucosa gstrica.

18

IMPACTO DE LOS PROCEDIMIENTOS EN EL BIENESTAR ANIMAL


Los procedimientos que utilicemos en la administracin de sustancias pueden tener un efecto significativo
sobre el bienestar de los animales y el valor cientfico de los resultados. Si se realizan de forma incorrecta
ambos pueden verse comprometidos. Al refinar los procedimientos se proporcionan oportunidades para
mejorar el bienestar y la ciencia.
Tipos de inmovilizacin y el impacto sobre el bienestar segn la va de inoculacin.
Va

N de
dosis

Inmovilizacin

Intra-articular

Intra-cerebral

Intradrmica

Intramuscular

Intranasal

Intraperitoneal

Intra-traqueal

Intravaginal
Intravenosa (no
reodores)
Intravenosa
roedores

En dieta/agua

Cpsulas
Sonda

R
R

M
M

A: anestesia;
* Leve

M : manual;
** Medio

Comentario
Puede daar la articulacin. Es esencial llevarla a
cabo en condiciones estriles. Utilizar solo una vez
Tcnicamente difcil en neonatos. Puede producir
muerte si no se realiza correctamente
Esencial realizarla correctamente para asegurar que
no sea subcutnea
Los efectos irritantes pueden ser un grave problema.
Posible lesin en los nervios. Evitar inyectar en la
fascia o vasos sanguneos. Precaucin con los
adyuvantes. Mltiples inyecciones en diferentes
lugares
No es fcil garantizar que toda la dosis ingrese en las
fosas nasales. Efectos adversos improbables
Las sustancias irritantes producen problemas
graves. Es posible que se inocule algn rgano. No
recomendada en especies mayores a los roedores
Puede producir muerte si la sustancia se administra
equivocadamente o es irritante
Puede resultar difcil retener la sustancia en la vagina
Los efectos tromboembolicos sobre el SNC son
relativamente habituales
Si se inyecta rpido puede que algn trombo alcance
el SNC u otro rgano ocasionando la muerte
Variacin en la dosis ingerida. Baja palatabilidad.
Posible angustia por sed. Es necesario buen
conocimiento de las pautas nutricionales
Depende de la especie. Fcil de administrar

Puede producir muerte por falsa ruta


N : ninguna;
R : dosis repetida;
S : dosis nica
** * Severo

Impacto sobre el
bienestar
***
***
**

**

*
**
***
*
**
**
*
*
**

19

ANEXO SECCION 1
TABLA 1 - Volmenes de extraccin referidos a Vc (volumen circulante)
Extraccin nica

Extracciones mltiples

% Vc extrado

Perodo de
recuperacin

% Vc extrado en 24h

Perodo de
recuperacin

7.5 %

1 semana

7.5 %

1 semana

10 %

2 semanas

10 %

2 semanas

15 %

4 semanas

15 %

3 semanas

Vc ratn: 72 ml/kg

Vc rata: 68 ml/kg

TABLA 2 - Volmenes de extraccin referidos a Vt (Volumen total)


Extraccin de sangre
Vt (ml)

7.5 % (ml)

10 % (ml)

15 % (ml)

20 % (ml) Mximo in vivo

Ratn (25g)

1.8

0.1

0.2

0.3

0.4

Rata (250g)

16

1.2

1.6

2.4

3.2

Vt: Volumen total: aprox. 6% del peso (en ml)

TABLA 3 - Tamao de aguja para la administracin de sustancias


Especie
Ratn
Rata
Cobayo
Conejo

Intradrmica
27 G
27 G
25 G
25 G

Subcutnea
25 G
25 G
23-25 G
21-25 G

Intramuscular Intravenosa Intraperitoneal


27 G
26-28 G
25-27 G
25 G
25-27 G
23-25 G
25 G
25-27 G
23-25 G
25 G
23-25 G
21-23 G

20

TABLA 4 - Volmenes de inoculacin


Volmenes de administracin segn ruta
(ml/kg excepto *ml/sitio)
oral

IV (Bolo)

IV Perf.

Ratn 10 (50) 10 (40) 20 (80) 0.05* (0.1)*

(25)

Rata

(20)

10 (40)

SC

IP

5 (10) 10 (20)

IM

0.1* (0.2)*

( ) Volmenes mximos
- No ms de 2 inoculaciones IM por da
- No ms de 2 3 inoculaciones SC por da
- IV: no exceder 4% volumen circulante (bolus) o 4 ml/kg/h en perfusin

Valores de pH de las soluciones a inyectar


El pH, por s solo, no es un indicador suficiente del potencial irritante ya que este depende tambin de la
concentracin y del punto de ionizacin (pK) del compuesto. Estos factores, as como la solubilidad,
biocompatibilidad, viscosidad y esterilidad, debern ser valorados antes de proceder a la inoculacin del
compuesto en cuestin por cualquiera de las vas mencionadas. Se recomienda un rango de pH de trabajo de
4,5-8 (Waynforth and Flecknell, 1992) teniendo en cuenta que el grado de tolerancia de pH para las
diferentes vas de administracin es:

Va O > Va IV > Va IP > Va IM > Va SC Va ID


Cuando una solucin presenta desviaciones considerables respecto al pH y osmolaridad fisiolgicas se
emplea la va intravenosa. Esta es la va ms tolerante, tanto a modificaciones del pH, debido a la capacidad
tampn de la sangre, como a la osmolaridad.

21

REFERENCIAS SECCION 1
A good practice guide to the administration of substances and removal of blood, including
routes and volumes. Diehl, KH; Hull, R; Morton, D; Pfister, R; Rabemampianina, Y; Smith, D;
Vidal, JM; Van De Vorstenbosch, C. J Appl Toxicol 2001; 21:15-23.
Ciencia y Tecnologa del Animal de Laboratorio. Ziga, JM; Orellana, JM; Tur, JA. Volumen 2.
Ed. Univ. de Alcal, SECAL, 2008.
Guide for the Care and Use of Lab Animals. Committee for the Update of the Guide for the
Care and Use of Laboratory Animals; National Research Council.
Guidelines for Survival Bleeding of Mice and Rats. OACU, NIH, 2005.
Manipulating the Mouse Embryo. A Laboratory Manual (3rd ed.). Nagy, A; Gertsenstein, M;
Vintersten, K; Behringer, R. Cold Spring Harbor Laboratory Press, NY, 2003.
Refining procedures for the administration of substances. Report of the BVAAWF/ FRAME/
RSPCA/ UFAW joint working group on refinement. Morton, DB; Jennings, M; Buckwell, A;
Ewbank, R; Godfrey, C; Holgate, B; Inglis, I; James, R; Page, C; Sharman, I; Verschoyle, R;
Westall, L; Wilson, AB. Lab Anim 2001; 35:1-41.
Tcnicas de obtencin e inoculacin de muestras. CSIC. CNB. Madrid, Espaa.
Vas de administracin de sustancias en animales de laboratorio. Candela Mariana Ferron.
Extrado de www.bioterios.com
Working with the Laboratory Mouse. AALAS.

22

SECCION 2
RECONOCIMIENTO Y ALIVIO DEL ESTRS Y EL DOLOR
La prevencin y alivio del dolor y estrs en animales de laboratorio es un deber tico y moral,
siendo una de las bases en las que se fundamenta el bienestar animal y las 3Rs de Russell y Burch
(1959). Adems son variables no deseadas en la experimentacin animal por la posible
interferencia con la interpretacin de los resultados. Investigadores, veterinarios y tcnicos
bioteristas son responsables por informarse sobre el correcto reconocimiento, prevencin y manejo
de estos estados en los animales y de tomar las medidas necesarias en cada caso.

SITUACIONES QUE CAUSAN DOLOR


Al momento de disear y proponer un trabajo de investigacin que involucre animales de laboratorio, es
necesario que el usuario prevea las posibles situaciones de dolor, con el fin de tomar las precauciones
necesarias y proponer posibles terapias paliativas.

De manera general se considera que un procedimiento que causa dolor en los humanos, tambin
ser doloroso en animales de experimentacin, sin importar la edad o la especie.

Se describen a continuacin 5 situaciones y diversos ejemplos de procedimientos y condiciones que causan


dolor.
(i) Dolor como resultado de una enfermedad/dao no relacionados a la experimentacin (ej.
enfermedad por vejez; parto)
(ii) Dolor como resultado de procedimientos comunes (ej. inyecciones, implantacin de microchips,
corte de cola para genotipado)
(iii) Dolor como consecuencia de la experimentacin (investigacin en enfermedades, toxinas, ciruga,
etc)
(iv) Dolor como herramienta para dar forma al comportamiento
(v) Dolor como tpico de estudio

23

Ejemplos de condiciones patolgicas o procedimientos que causan dolor


Regin anatmica
sistema

Condiciones o procedimientos

Abdominal

Peritonitis, pancreatitis, hepatitis, colelitiasis, distensin visceral,


obstruccin intestinal, tumor visceral, laparotoma

Cardiotorcico

Miocarditis, neumonitis, infarto de miocardio,


bronquitis, vasculitis, injerto vascular, toracotoma

Dermatolgico

Prurito, quemaduras trmicas o qumicas, celulitis, otitis, tumores


de piel, incisin, pinchazos

Musculo-esqueltico

Sujecin, artritis, periostitis, isquemia, aplicacin de torniquetes,


tendinitis, inflamacin de articulaciones, quemaduras trmicas o
qumicas profundas, machucones, necrosis, fracturas, recoleccin
de injertos de hueso, tumores de hueso, osteotoma, incisin,
craniectoma, enfermedad degenerativa articular

Neurolgico

Encefalitis, meningitis; aplastamiento, ligacin o transeccin de


nervios, tumores de tejido nervioso; neuroma

Ocular

Glaucoma, uveitis, lcera corneal, toma de muestra de sangre


orbital, tumor ocular

Orofacial

Tumores oral , enfermedad articular


temporomandibular,
gingivitis, extraccin dental, pulpotoma, absceso dental

Sistmico

Sepsis, sndrome de debilitamiento general, enfermedades


autoimmune

Urogenital

Pielonefritis, cistitis, falla renal aguda, obstruccin ureteral o


uretral, cateterizacin urinaria, mastitis, ovariohisterectoma,
castracin, tumor urogenital, distocia

neumona,

Esta tabla es ilustrativa, no incluye todos los posibles procedimientos que pueden causar dolor.

CMO DETECTAR SITUACIONES DE DOLOR


La evaluacin del dolor y el estrs en animales es una tarea compleja y desafiante. Una de las caractersticas
de estos estados es el cambio de comportamiento y reflejos naturales, en base a lo cual se realiza su
reconocimiento. Por este motivo es importante un conocimiento profundo de la apariencia y
comportamiento normal, caracterstica de la especie con la que trabajamos.

24

Signos y sntomas de dolor y estrs


1.

Reduccin de la ingesta de comida y agua, prdida de peso, deshidratacin, emaciacin


(adelgazamiento extremo), piloereccin en regin dorsal, postura de encorvamiento

2.

Disminucin del acicalamiento (grooming) y rascado frecuente

3.

Aislamiento social

4.

Agresividad

5.

Ojos hundidos, descargas nasales y/o oculares

6.

Incremento de la frecuencia respiratoria y respiracin forzada

7.

Miccin/defecacin alterada

8.

Automutilacin

9.

Movimientos de retorcimiento, en el caso de dolor abdominal

11.

Movimientos repentinos (escape reflejo) y dificultad para mantener una postura, cuando estn
afectados los miembros (ataxia)

12.

Hipotermia marcada (fro al tacto), en condiciones muy deterioradas

CMO TRATAR Y ALIVIAR EL DOLOR


El alivio del dolor en animales de laboratorio se refiere a disminuir su duracin y/o intensidad, e incluye
medidas preventivas, teraputicas o una combinacin de ambas.
Medidas preventivas: manejo y sujecin apropiados, minimizar el trauma tisular durante la ciruga, uso de
tcnicas mnimamente invasivas.
Medidas teraputicas: uso de anestesia local o general, analgesia, sedacin. El uso de estos mtodos debe
ser acompaado por la evaluacin del tratamiento elegido. Si se administra analgesia pero no se determina
si esta tuvo los efectos deseados, el tratamiento queda inconcluso.
Anestesia general. Se emplea para realizar procedimientos que producen dolor.
Analgesia. Reduce el dolor temporalmente.
Sedacin/alivio de la ansiedad. Los ansiolticos se usan en combinacin con anestsicos generales para
modular, bloquear o aliviar el dolor.

25

ANALGESIA
El objetivo de la analgesia es alcanzar un estado balanceado en el que el animal no se encuentre
imposibilitado por el dolor pero tampoco sea afectado por los efectos secundarios de los
analgsicos.
El empleo de analgesia proporciona ms ventajas que desventajas, tanto del punto de vista tico o de
bienestar del animal, como del cientfico o de fiabilidad de resultados. Existe una amplia variedad de
frmacos y tcnicas analgsicas, y por lo tanto es posible encontrar una opcin adecuada para cada
experimento, sin interferir con los resultados experimentales. Adems es ms probable que las
consecuencias de los procedimientos dolorosos produzcan alteraciones fisiolgicas de mucha mayor
magnitud que las producidas por los analgsicos. Como regla general, los analgsicos deben emplearse antes
de que el animal perciba dolor, lo que se denomina analgesia preventiva. En caso contrario, se produce un
fenmeno de hipersensibilizacin que exacerba la percepcin dolorosa y hace ms difcil mantener una
adecuada analgesia y las dosis tienen que incrementarse.
Cada vez existen ms evidencias que indican que la administracin de analgsicos reduce las consecuencias
de la ciruga, retornndose mucho antes a la situacin prequirrgica; las alteraciones hormonales e
inmunitarias se reducen o normalizan, la ingesta del animal se recupera, la cicatrizacin de las heridas es
ms rpida. Puede considerarse que la anestesia y la analgesia actan como mecanismos protectores frente
a la agresin quirrgica o el manejo intenso.
Por lo general el uso de un nico analgsico es suficiente. Sin embargo en algunos estudios se han observado
resultados ms efectivos cuando se usa analgesia multimodal, as como fenmenos de sinergia. Por ej. el uso
de analgesia con adyuvantes (antidepresivos, antiepilpticos, antagonistas de receptores NMDA) resulta una
alternativa efectiva en el tratamiento del dolor crnico que no responde a la administracin de un nico
agente.

Tipos y efectos de las drogas analgsicas


Opioides (morfina, buprenorfina, butorfanol)
Son los analgsicos ms eficaces, usados para analgesia quirrgica y/o manejo teraputico de dolor
moderado a severo. Existen 2 tipos de opiodes segn el receptor asociado: agonistas de receptores opioides
(morfina, fentanilo) y receptores combinados agonista/antagonista (buprenorfina, butorfanol). Su uso esta
acompaado de efectos no deseados, incluyendo aumento del tono muscular, reduccin de la motilidad del
tracto gastrointestinal (constipacin), depresin respiratoria, cambios de comportamiento (euforia y
disforia, excitacin) y dependencia fisiolgica. En ratones puede producir la ingesta de sustancias no
digestibles como viruta y el consumo de grandes volmenes de comida. Si bien estos efectos secundarios
justifican su desuso, en terapias de corto tiempo los efectos no deseados son manejados con facilidad y no
representan un problema.

26

AINEs (flunixin, meloxicam, carprofeno)


Las drogas anti-inflamatorias no esteroideas (AINEs) se usan para tratar el dolor crnico postoperatorio y la
inflamacin. Estas drogas inhiben varias isoformas de ciclooxigenasas reduciendo la produccin de
prostaglandinas, un componente clave de la reaccin inflamatoria. Presentan pocos efectos secundarios,
aunque se han asociado a ulceracin gstrica, perforacin, falla renal aguda y disminucin de la coagulacin.
En general tienen un efecto de 12 a 24 hs en las dosis recomendadas.

Anestsicos locales (lidocana)


Son efectivos tanto en animales conscientes como sedados. Son de utilidad para reducir el dolor de manera
momentnea en tejidos no daados, y en animales anestesiados como suplemento de la anestesia general lo
que permite reducir sus dosis y facilitar la recuperacin de la misma. Algunas tcnicas asociadas requieren
experiencia (ej. bloqueo de nervios regionales o epidurales); su duracin es muy variable (2-12 hs).
En el anexo 2 se detallan las dosis y duracin de analgsicos comunes usados en ratn (tabla 1).
En la siguiente tabla se ilustra el tipo de analgesia recomendada segn la intensidad del dolor.
Intensidad del dolor

Tipo de analgesia

Bajo

Terapia de agente nico aceptable


AINEs, anestsicos locales, agonistas-antagonistas opioides
Analgesia multimodal a considerar
AINEs en combinacin con adyuvantes (anestsicos locales, agonistasantagonistas opioides, agonistas de receptores 2, antagonistas de
receptores NMDA)
Analgesia multimodal recomendada
Agonistas mu-opiodes + AINEs/ anestsicos locales/ 2 antagonistas
de receptores NMDA

Moderado

Fuerte

Analgsicos usados en la UATE para ratones


Por el momento se encuentra disponible y en uso meglumina de flunixin. Se inyecta por va SC y tiene una
duracin de 12-24 hs. Pertenece a la categora de AINEs, es antiinflamatorio, analgsico y antipirtico. Su uso
en animales de experimentacin es comn.

Modo de preparacin: para obtener un volumen final de analgsico de 10 ml, mezclar 50 l de


flunixin (Niglumine Lab. Calier, 50 mg/ml) y 9.95 ml de agua bidestilada apirgena estril. Usar 0.1
ml por cada 10 g de peso del animal (2.5 mg/kg). Conservar esta mezcla a 4C, protegida de la luz,
no ms de 1 mes de preparado.
Modo de administracin: pesar el animal y cargar la jeringa segn la relacin 0.1 ml/ 10 g de peso,
usando una aguja 25-27 G. Sujetar el animal e inyectar la solucin por va SC (ver Seccin 1, inciso
5).

27

Cabe destacar que es responsabilidad de cada usuario informarse y prever las


situaciones/condiciones que pueden causar dolor y en consecuencia evaluar y
proponer en el formulario CEUA el/los tratamientos ms adecuados para cada caso.

ANESTESIA
El objetivo principal de la anestesia es bloquear la sensibilidad tctil y dolorosa para la realizacin de
procedimientos quirrgicos u otros procedimientos dolorosos. Reduce al mnimo el sufrimiento asociado a la
manipulacin y evita situaciones de dolor, angustia y/o ansiedad en los animales.
La anestesia es un estado reversible producido por frmacos, caracterizado por la ausencia de cualquier tipo
de percepcin sensorial, ya sea dolorosa o no. La administracin de estos frmacos, bien sea uno solo (ej.
isofluorano) o la combinacin de varios (ej. ketamina y xilazina) produce una depresin del sistema nervioso
central (SNC) que impide la llegada o reconocimiento de cualquier estmulo sensorial. En funcin de la dosis,
son capaces de llegar a deprimir suficientemente los centros bulbares, vasomotor y respiratorio, y con ello la
muerte del animal.
Anestesia no equivale necesariamente a analgesia. La anestesia general produce prdida de conciencia y por
lo tanto el animal no puede percibir dolor en ese momento, pero el estmulo doloroso puede ser transmitido
y procesado por el SNC y ser percibido de forma posoperatoria. Algunos anestsicos poseen propiedades
analgsicas como los agonistas 2- adrenrgicos (xilazina); adems los analgsicos se pueden utilizar como
parte del rgimen anestsico.
Los componentes de la anestesia son:

Hipnosis o sueo, implica que el animal esta ausente de su medio circundante

Analgesia o ausencia de percepcin dolorosa

Relajacin muscular, va desde un grado moderado hasta la parlisis (bloqueantes neuromusculares)

Bloqueo de la actividad refleja, que impide respuestas del sistema nervioso autnomo e incluye
alteraciones en la frecuencia y ritmo cardaco, de la produccin de secreciones, etc

Un anestsico ideal debe incluir de forma estable los cuatro componentes antes indicados, sin afectar a
otras funciones orgnicas.
La valoracin del reflejo podal de retirada, provocado por la comprensin de la zona plantar de una
extremidad, as como del reflejo palpebral, permiten ver el grado de profundidad anestsica, que junto a la
evaluacin de las funciones fisiolgicas como frecuencia cardaca, tasa de saturacin de oxgeno y frecuencia
respiratoria, permiten reconocer un correcto funcionamiento de la misma.
La temperatura es un factor que se encuentra fuertemente afectado durante la anestesia, ya que la
depresin del centro termorregulador hipotalmico produce una disminucin de la temperatura corporal. En
animales pequeos como los ratones la prdida de calor durante la anestesia es muy notoria, disminuyendo
28

5-9 C / hora. Para evitar la hipotermia en estos animales se sugiere el uso de sistemas productores de calor
como mantas trmicas durante y despus de terminado el procedimiento.
Existen mtodos de anestesia inhalatoria e inyectable (fija), y diversas drogas de uso aceptado en ambos
casos. La seleccin del mtodo depende de varios factores incluyendo la especie y edad del animal; el tipo y
grado de dolor producido por el procedimiento; la naturaleza y duracin del procedimiento; los efectos
posibles del agente en rganos especficos en el caso de la administracin de drogas o procedimientos que
producen dficit fisiolgico.

Tipos y efectos de las drogas anestsicas


Agentes inhalantes
Isofluorano y halotano
La anestesia inhalatoria involucra la administracin de un agente voltil va tracto respiratorio. Se emplean
en concentraciones de 1-3% en oxgeno (hasta 5% para la induccin inicial), usando un vaporizador de
precisin. Las ventajas de estos agentes incluyen una rpida induccin y recuperacin; mayor control sobre
la duracin de la anestesia; mnimo metabolismo, rpida biotransformacin y excrecin comparado con
anestsicos inyectables, lo cual es deseable en estudios toxicolgicos. Como desventajas se incluyen el costo
y la habilidad del operador para usar los sistemas de administracin de gases; exposicin del operador a los
gases; riesgo de una dosis fatal cuando se usan sistemas abiertos en lugar de vaporizadores.

Agentes inyectables
Barbitricos (pentobarbital sdico, tiopental sdico)
Histricamente han sido los anestsicos ms usados en roedores. Se usan principalmente en estudios
terminales debido a que la recuperacin es prolongada y puede estar acompaada por excitacin. Tienen
bajo efecto analgsico por lo cual es necesario el uso concomitante de otros frmacos. Como ventaja
presentan una duracin prolongada (aprox. 45 min), mayor a la de cualquier otro anestsico inyectable,
siendo la del pentobarbital mayor a la del tiopental; adems causan una mnima depresin cardaca cuando
se usan en las dosis adecuadas. Las desventajas de los barbitricos son que causan depresin respiratoria e
hipotermia pronunciadas; inducen el sistema enzimtico microsomal heptico; la sensacin de dolor se
reduce nicamente en los planos de inconsciencia y puede ser hasta aumentado (hiperalgesia) a dosis
subanestsicas.

Tribromoetanol
En la mayora de los roedores el tribromoetanol produce una buena anestesia quirrgica, con una buena
relajacin muscular y slo una moderada depresin respiratoria. Tiene bajo costo y su venta no es
controlada. Cuando se expone a la luz o a temperaturas >40C esta droga se descompone en 2 productos
altamente irritantes y cuando son administrados va IP pueden causar peritonitis y hasta la muerte. Si se
tienen los cuidados necesarios, esta droga puede usarse satisfactoriamente, por una nica vez en cada
animal.
29

Ketamina
La ketamina pertenece al grupo de las arilciclohexaminas, fenciclidinas o anestsicos disociativos, es un
anestsico general de uso muy amplio en la prctica clnica veterinaria. Farmacolgicamente se define como
un antagonista no competitivo de glutamato sobre receptores NMDA, induce amnesia y anestesia por
disociacin funcional del SNC induciendo una prdida de conciencia, y produce analgesia mediada por su
interaccin con receptores opiceos. Se caracteriza por la produccin de un estado caracterizado por
disociacin y desconexin del individuo con su entorno. Sin embargo, estos compuestos tienen una marcada
tendencia a inducir agitacin y alucinaciones durante el perodo de recuperacin anestsica. Se considera un
anestsico de extraordinaria seguridad y eficacia combinado con otras sustancia depresoras del SNC. Cuando
se usa sola tiene un efecto muy limitado en ratones y otras especies, incluso a dosis elevadas no suele
alcanzar una profundidad anestsica adecuada. Nunca debe usarse sola como anestsico para cirugas
mayores.
A diferencia de otros anestsicos, mantiene reflejos como la deglucin pero produce un grado variable de
rigidez muscular, que puede contrarrestarse si se combina con tranquilizantes. Otro efecto caracterstico de
este frmaco es que induce la produccin de secreciones. En ratn y otros animales de laboratorio, es muy
frecuente el uso de combinaciones de ketamina con acepromazina, diazepam, medetomidina midazolam o
xilazina. La combinacin de frmacos tranquilizantes no slo disminuye los efectos adversos de la ketamina
sino que permiten reducir la dosis empleada y proporcionar una analgesia adecuada.

Tranquilizantes asociados a la ketamina


La ketamina no debe emplearse sola sino asociada a diferentes tranquilizantes.
1. Neurolpticos fenotiaznicos. Este grupo farmacolgico recibe denominaciones diferentes como las
de antipsicticos y tranquilizantes mayores. Son antagonistas competitivos del receptor
dopaminrgico y se caracterizan por deprimir el tronco cerebral e interrumpir las conexiones entre
el crtex y otros niveles inferiores en el SNC. La acepromazina es el derivado fenotiaznico ms usado
en veterinaria. Produce una inhibicin hipotalmica de la temperatura corporal, de la tasa
metablica basal, del balance hormonal y de la alerta. Es un tranquilizante potente, que posee
adems actividad antihistamnica y anticolinrgica que se manifiestan con xerostoma (sequedad de
boca) e inhibicin de la motilidad digestiva (antiespasmdica). Es hipotensor por su accin
antagonista -adrenrgica. Este efecto vasodilatador junto con la inhibicin del centro
termorregulador hace que se pierda temperatura, causando hipotermia.
2. Benzodiazepinas (diazepam, midazolam). Estos frmacos tienen acciones potentes como
tranquilizantes, sedantes y anticonvulsivantes. Los efectos hipnticos de estos agentes no son muy
elevados por lo que se recomienda su uso en sedacin postoperatoria cuando se proporciona una
analgesia efectiva, por ejemplo con el empleo de opioides en el preoperatorio. Su mecanismo de
accin consiste en interactuar especficamente con uno de los receptores del cido -aminobutrico
(GABA), el receptor GABAA, que se localiza en cerebelo, hipocampo y otras zonas cerebrales. Las
benzodiazepinas potencian la accin de la mayora de anestsicos y analgsicos, provocando
tambin una buena relajacin muscular en el animal. Con el uso de antagonistas especficos como el
flumazenilo es posible revertir su accin cuando sea necesario.

30

3. Tranquilizantes 2-agonistas (xilazina, medetomidina). El mecanismo de accin de estos frmacos


consiste en actuar como agonistas de los receptores 2 adrenrgicos y apenas actuar sobre los
receptores 1. Son potentes sedantes y analgsicos e incluso en algunas especies son tambin
hipnticos dependiendo tambin del producto en consideracin. Sus efectos varan de una especie a
otra pero suele producir una analgesia de suave a moderada, adems potencian la accin de la
mayora de frmacos anestsicos. Provocan incoordinacin y disminucin de la respuesta frente a
estmulos externos y a dosis altas incluso ataxia, provocando tambin una buena relajacin
muscular. Son potentes depresores cardiorrespiratorios. Se ha descrito en ratas y ratones que la
combinacin ketamina-xilazina produce hiperglucemia e incremento de la diuresis por lo que se
debera usar con precaucin en caso de problemas renales o de obstruccin de vas urinarias.
En el anexo 2 se presentan ejemplos de drogas anestsicas inhalatorias (tabla 2) e inyectables (tabla 3)
usadas en ratn.

Anestesia en ratones neonatos


Un ratn neonato es aquel que tiene menos de 10 das de edad. Existen mtodos anestsicos fijos,
inhalatorios y fsicos para neonatos. La hipotermia es el mtodo fsico ms usado y provee anestesia y
analgesia por disminucin de la conduccin nerviosa y de la transmisin sinptica. El proceso de
enfriamiento por s mismo puede ser doloroso, y por esta razn se debe evitar el contacto directo con el
agente de enfriamiento. Los neonatos presentan mayor sensibilidad a la anestesia fija, lo que se ha asociado
a alta mortalidad. El canibalismo parental es un problema comn cuando se emplea anestesia en neonatos.
Por este motivo se debe devolver el neonato a su madre recin cuando se haya recuperado totalmente.
Procedimiento. Usar hipotermia como mtodo de anestesia en neonatos de 6 das de edad y en procesos
que tengan una duracin mxima de 30 min.
1) Colocar los ratones neonatos sobre un guante de ltex (o el dedo cortado del guante) sobre aguahielo o un paquete de gel fro en agua.
2) Chequear el plano anestsico por prdida del reflejo podal.
3) Remover los animales y colocarlos sobre un paquete de gel fro cubierto por papel.
4) Al finalizar el procedimiento (no ms de 30 min), entibiar el animal muy despacio ya que el
calentamiento rpido puede daar los tejidos. Colocar los animales sobre mantas trmicas (aprox.
40 C) o en una incubadora (33 C).
5) Retornar los animales con sus madres cuando se hayan recuperado completamente.

Anestsicos usados en la UATE para ratones


Actualmente en la UATE se emplea solamente anestesia fija dado que no estn disponibles los equipos
necesarios (cmara o mscara) para la administracin de anestesia inhalatoria. Las drogas empleadas son
una mezcla de ketamina (100 mg/kg) y xilacina (10 mg/kg), inyectada por va IP, la cual tiene una duracin
aproximada de 30 min. No debe usarse nunca ketamina sola. En el caso de una redosificacin, se debe
emplear 1/3 de la dosis original calculada para la ketamina; la xilacina no se debe redosificar debido a sus
efectos hipotensivos.

31

Modo de preparacin: para obtener un volumen final de anestesia de 2 ml, mezclar 0.4 ml de
ketamina (Vetanarkol, Knig, 50 mg/ml), 0.1 ml de xilacina (Seton, Calier, 20 mg/ml) y 1.5 ml de
agua agua bidestilada apirgena estril. Usar 0.1 ml por cada 10 g de peso del animal. Conservar
esta mezcla a 4C, protegida de la luz, no ms de 1 mes despus de preparado.

Modo de administracin: pesar el animal y cargar la jeringa segn la relacin 0.1 ml/ 10 g de peso,
usando una aguja 25-27 G. Sujetar el animal e inyectar la solucin por va IP (ver Seccin 1, inciso 6).
La administracin por va subcutnea no es recomendable porque produce una demora en el
proceso.

A tener en cuenta
La administracin de anestesia produce:

Falta de reflejo palpebral, por lo que es necesario colocar un ungento oftalmolgico en los ojos para
evitar la desecacin y posible ceguera.
Disminucin de la temperatura corporal, lo que en los ratones esta muy acentuado. Es importante
colocar los animales sobre mantas trmicas y recubrirlos con toallas de papel luego de finalizado el
procedimiento para favorecer su recuperacin, y si es posible tambin durante el mismo.

Anestesia insuficiente?
Debe constatarse en primera instancia falta absoluta de reflejo palpebral. En caso de persistir o
comprobarse una relajacin muscular pobre, movimientos en respuesta a la estimulacin quirrgica y/o
vocalizaciones se deber realizar una redosificacin (ver ms arriba).
Monitoreo de los animales

Al finalizar cualquier procedimiento que requiri anestesia, es importante monitorear la recuperacin


del animal (ej. que se despierte) y es completamente necesario informar al tcnico responsable del
bioterio para que contine su monitoreo posterior (horas despus o al da siguiente).

32

DETERMINACIN DE PUNTO FINAL


El punto final humanitario (humane endpoint) se refiere al criterio usado para finalizar un estudio
experimental con el fin de evitar dolor o estrs en los animales. Estas situaciones se deben
minimizar, eligiendo el punto final ms temprano que a su vez sea compatible con los objetivos del
estudio. La seleccin del punto final se debe realizar en conjunto con el veterinario encargado del
bioterio y la CEUA.
Cmo determinar el punto final
La informacin disponible en la literatura cientfica sobre la determinacin de puntos finales en animales de
laboratorio puede resultar til al momento de definir el punto final para un experimento, pero cada estudio
lleva consigo parmetros clnicos que deben ser vigilados y registrados en base a los cuales se definen los
cambios fisiolgicos o etolgicos que mejor predigan la morbilidad. En muchos casos es necesario realizar
experimentos preliminares o pilotos con un nmero pequeo de animales, particularmente cuando no se
conocen los efectos del tratamiento en los animales. El estudio piloto puede ayudar a determinar la
morbilidad, el tiempo que le lleva a un experimento producir efectos, la frecuencia de observacin de los
animales; adems permite a todos los usuarios involucrados ganar experiencia en las seales y sntomas
esperados.
La decisin de eutanasiar un animal debe ser tomada con un adecuado juicio clnico, tomando en cuenta la
severidad de la condicin, el nivel de dolor o estrs y la potencial prdida de datos valiosos.

PARMETROS USADOS PARA DETERMINAR EL PUNTO FINAL


1. Cambios en la temperatura corporal
La hipotermia es un importante indicador de una condicin deteriorada en diversas enfermedades
infecciosas y estados txicos. Una disminucin de 4-6 C se ha correlacionado con la muerte en
diversos cuadros infecciosos, por lo que el monitoreo de la temperatura sera conveniente en estos
casos. Esto puede realizarse empleando escner infrarrojo o mediante microchips trmicos
implantados.
2. Prdida de peso:
La prdida de peso es uno de los indicadores ms importantes en el deterioro de la salud de un
animal, lo cual refleja un cambio en el consumo de alimento y/o agua. La prdida de peso se debe
comparar con animales control de la misma cepa y edad. Una diferencia en prdida de peso mayor a
20% respecto a los controles se usa comnmente como criterio para eutanasia.
3. Otros cambios etolgicos y fisiolgicos:
Cualquier condicin que resulta en incapacidad prolongada o irreversible para comer o tomar
agua, ej. inmovilidad prolongada, obstruccin de la cavidad oral, dientes faltantes o anormales. Los
ratones no pueden pasar ms de 24 horas sin alimento o agua.
33

Enfermedad o condicin que produce dolor severo o sufrimiento, ej. fracturas, auto-mutilacin,
postura o movimientos anormales, heridas abiertas o lceras, vocalizacin anormal, que no son
aliviados con sedantes o analgsicos.
Disminucin del acicalamiento y apariencia anormal observados en un perodo de tiempo extenso,
ej. pelo hirsuto, alopecia extensa, diarrea prolongada, pelo manchado de orina, prolapso rectal,
extremidades hinchadas, parlisis, u otras anomalas neurolgicas (convulsiones, posicin anormal
de la cabeza, movimientos en crculo).
Condiciones respiratorias severas o continuas, ej. tos, estornudos, descarga nasal con sangre, tasa
respiratoria aumentada, respiracin trabajosa.
Sangrado incontrolable.
Evidencia de infecciones microbianas u otras enfermedades que interfieren con el protocolo
experimental o causan cualquiera de las condiciones anteriores.
Las fichas de puntaje clnico (scoring sheets) pueden ser de utilidad para evaluar la condicin del
animal y determinar el punto final apropiado.
4. Protenas de fase aguda:
El aumento de los niveles sricos de citoquinas y protenas de fase aguda (PFAs) se produce de
manera temprana en respuesta a una infeccin, antes de que se observen cambios etolgicos y/o
fisiolgicos. En animales sanos, las PFAs se encuentran en valores muy bajos o indetectables en el
plasma, las cuales aumentan rpidamente despus de su activacin. En ratones, la citoquina ms
abundante es la amielodie srica A. De todas maneras, se requieren de ms estudios para que la
medida de PFAs se emplee como mtodo prctico para la prediccin de una enfermedad.
En el Anexo 2, se encuentra la descripcin de los parmetros empleados para definir el punto final en reas
especficas de investigacin.
Observacin de los animales. Para poder identificar el punto final en un animal y decidir su eutanasia es
imprescindible la observacin del mismo. Cuando un animal se encuentra en estado potencialmente crtico
durante un experimento, la frecuencia de observacin debe aumentar.

Todas las personas involucradas en un experimento tienen responsabilidad en la ejecucin del


punto final en los animales en estudio. Es recomendable establecer una cadena de reporte. La
persona que realiza la eutanasia debe contar con el aval del veterinario a cargo. Cualquier
observacin de comportamiento o seales inusuales debe ser reportada inmediatamente a la
persona a cargo de tomar la decisin de la eutanasia o de aplicar algn tratamiento que reduzca
el dolor o estrs.

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PROCEDIMIENTOS ESTABLECIDOS EN LA UATE PARA PUNTOS FINALES


Todo usuario que propone un estudio en el que se anticipa dolor o estrs debe:
1. Estar familiarizado con las seales que indican una morbilidad predecible en el experimento propuesto. Se
recomienda la lectura de trabajos que empleen modelos animales similares al propuesto as como de otras
guas internacionales sobre reconocimiento de dolor/estrs en animales de experimentacin.
2. Proponer un punto final en el formulario CEUA el cual ser discutido con el veterinario a cargo del
bioterio. Los parmetros elegidos para definir el punto final se basarn en experiencia previa o literatura
disponible. Si no existe esta informacin ser necesaria la realizacin de estudios piloto, los cuales tambin
sern propuestos en dicho formulario. Este estudio es til para establecer un sistema que permitir definir el
momento de la eutanasia.
3. Asumir la responsabilidad en la observacin de los animales y la ejecucin del punto final determinado en
cada caso. Cuando los animales se encuentren en estado deteriorado o potencialmente crtico se deber
aumentar la frecuencia de monitoreo.
Funciones de la UATE:
1. Establecer una cadena de reporte con los usuarios y definir la persona que realizar la eutanasia.
2. Cuando el estado de salud de un animal inicie un proceso de deterioro o se detecten signos de dolor, se
reportar al responsable de los mismos quien contar con 48 hs para hacerse cargo del mismo. Cuando el

animal presente las condiciones definidas como criterio de punto final para el estudio en cuestin
ser retirado del bioterio y se proceder a su eutanasia.
3. En conjunto con el usuario determinar la finalizacin temprana de los experimentos en caso que:
(i) Se hayan cumplido los objetivos del estudio antes de lo pensado
(ii) Sea evidente que los objetivos no se cumplirn debido a una condicin deteriorada de los animales
debido a la experimentacin (por ej. falla de un rgano) o la aparicin de condiciones de salud no
relacionadas (infecciones no inducidas) o un diseo experimental errneo, etc.

EUTANASIA
Los animales de experimentacin se sacrifican por diversos motivos: al final de un experimento; si
un experimento en curso provoca efectos indeseados sobre el animal que pueden interferir
disminuyendo el grado de bienestar del individuo, afectando su integridad y posible validez del
ensayo; para obtener sangre u otros tejidos con un fin cientfico; cuando los niveles de dolor,
angustia y sufrimiento sobrepasan el nivel previsto; cuando ya no sean aptos para la cra; animales
no utilizados o aquellos cuyas caractersticas no sean adecuadas (por ej tipo de sexo).
35

El trmino eutanasia significa muerte buena y se considera como un acto de sacrificio


humanitario, que es aquel procedimiento que busca producir el mnimo sufrimiento fsico y
mental en los mismos. El mtodo de eutanasia debe presentar las siguientes caractersticas:
Ser indoloro; conseguir una rpida inconsciencia y muerte; requerir una mnima
inmovilizacin; evitar la excitacin; ser apropiado para la edad, especie y salud del animal;
minimizar el miedo y estrs; ser fiable; reproducible; sencillo; irreversible y seguro para el
operador.
Si bien existe una variedad de mtodos fsicos y qumicos, ninguno de ellos resulta ideal ya que
presentan inconvenientes o dificultades particulares.

Mtodos fsicos (dislocacin cervical, decapitacin)


Producen inmediata prdida de consciencia a travs del trauma fsico del cerebro.
Son los mtodos de eleccin cuando los mtodos farmacolgicos pueden interferir en el
propsito del experimento.
Son rpidos, seguros y posiblemente los que producen menos angustia en el animal.
Requieren entrenamiento y prctica del operador.
Requieren inmovilizacin, lo cual puede causar estrs adicional para algunos animales.

Mtodos qumicos (sobredosis de anestsicos inyectables o inhalatorios)


Es necesario evaluar posibles interferencias con el experimento.
Las manifestaciones por sobredosis de anestsico incluyen: aparicin de arritmias cardacas;
la respiracin se hace mas lenta, superficial e irregular, se vuelve diafragmtica o puede
cesar; el color de la piel y de las membranas mucosas puede ser de plido a ciantico; los
reflejos cardiovasculares, del sistema nervioso central, musculo-esquelticos,
gastrointestinales y oculares estn enormemente disminuidos o abolidos; la presin
sangunea cae rpidamente hasta producir una profunda hipotensin.
Seleccionar agentes que no sean desagradables al ser inhalados, porque algunos pueden ser
irritantes y por ello estresantes.
Las cmaras que se utilicen para la distribucin de estos agentes, deben estar diseadas
adecuadamente, de modo que aseguren la distribucin uniforme del gas y la rpida
exposicin de los animales a una concentracin alta del agente
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Los animales recin nacidos son ms resistentes a la hipoxia, por ello hay que utilizar
mtodos fsicos.

Signos de dolor y angustia


Para asegurar un buen procedimiento de eutanasia es importante reconocer y evitar los signos de
dolor, temor y angustia en los animales. Todo el personal debe entrenarse en el reconocimiento de
estos signos en las especies con las que estn trabajando, cuya valoracin debe basarse
fundamentalmente en las observaciones de la conducta anormal y en respuestas fisiolgicas que
demuestren ansiedad y temor. Dependiendo de las especies pueden incluir: vocalizaciones (no
siempre en el rango audible para humanos), lucha, intentos de huda, agresiones defensivas o
redirigidas, respuesta de paralizacin/inmovilizacin, jadeo, salivacin, miccin, defecacin,
dilatacin de pupilas, taquicardia, sudoracin, contracciones reflejas de la musculatura esqueltica
que originan temblor y otros espasmos musculares. El animal no debe ser sacrificado de modo que
pueda ser visto u olido por otros animales.

Reconocimiento y confirmacin de la muerte


Es esencial estar entrenado para ser capaz de reconocer y confirmar la muerte en todas las especies
con las que se trabaja. Los aspectos ms importantes en el reconocimiento de la muerte incluyen el
cese del latido cardaco y la respiracin, ausencia de reflejos y la disminucin de la temperatura
corporal por debajo de 25C. Si existe alguna duda en la confirmacin de la muerte, se debe utilizar
un segundo mtodo (fsico) para sacrificar al animal.

METODOS DE EUTANASIA USADOS EN LA UATE PARA RATONES


1.

Eutanasia mediante CO2

A concentraciones superiores a 60% el dixido de carbono acta como anestsico y produce rpida
prdida de conciencia. Es muy eficaz para la eutanasia de animales pequeos. Para ratones se
recomienda colocarlos en una atmsfera 70 % CO2, ya que pierden conciencia rpidamente
debido al efecto narctico en el cerebro. En animales conscientes, el 100 % de CO2 puede causar
disnea y angustia. En cambio en cobayos se recomienda el uso de 100 % de CO2.
Los neonatos son particularmente tolerantes al CO2 por lo que no es posible emplear esta
metodologa de eutanasia en animales de hasta 10 das de edad, debindose proceder a utilizar un
mtodo fsico.
Inconvenientes: el CO2 estimula el centro respiratorio, lo que puede causar estrs y ansiedad en el
animal; este gas puede formar cido carbnico al contactar las membranas mucosas nasales lo que
puede producir un efecto de hormigueo o picazn e irritacin moderada.
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Protocolo empleado en la UATE: la eutanasia mediante CO2 se realiza en el lavadero del bioterio.
Mantener los animales en su caja para evitar estrs (mximo 10 ratones). Si esto no es posible,
colocarlos en la caja dispuesta en el lugar para tal fin. Colocar una rejilla y la tapa conectada al
tanque de CO2, manteniendo un espacio abierto suficiente que permita el escape de la presin del
gas al exterior. Inicialmente permitir la salida de un volumen mnimo de gas, de esta manera se
induce la prdida de conciencia en los animales, se reduce el estrs causado por la disnea y el ruido
de la salida del gas. Una vez que los animales estn inconscientes permitir la salida de un mayor
volumen de CO2 a la caja. Cerrar la vlvula del tanque cuando se observe que todos los animales
presentan ausencia de reflejos, y cese de respiracin y latido cardaco. Dejar los animales en
observacin al menos 10 minutos para certificar su deceso antes de proceder al descarte o en su
defecto practicar un mtodo fsico adicional de eutanasia. Descartar los animales segn los
procedimientos de rutina para el material biolgico en la unidad. Es necesario que el operario
permanezca en la sala de la eutanasia durante todo el procedimiento.
2.

Dislocacin cervical

Este mtodo es muy eficaz pero requiere prctica del operador. Se debe asegurar que se produce
una separacin total; cuando se realiza correctamente produce graves lesiones al tronco enceflico
y una inconsciencia inmediata y muerte. En cobayos es ms difcil que en ratones debido a sus
cuellos cortos, con msculos ms fuertes. En ratones y ratas se sita el pulgar e ndice a cada lado
del cuello junto a la base del crneo, y en ese momento con la otra mano se tira rpidamente de la
base de la cola o de los miembros posteriores, produciendo la separacin de las vrtebras
cervicales y el crneo. Corroborar la muerte del animal como se mencion anteriormente.
3.

Decapitacin

La falta inmediata de riego sanguneo al cerebro y la anoxia subsiguiente se cree que dejan la
cabeza rpidamente insensible. En la UATE se emplea la decapitacin nicamente para la eutanasia
de neonatos. Se realiza empleando tijeras afiladas que produzcan un corte inmediato.
Mtodos NO ACEPTABLES para la eutanasia de roedores
Bajo ninguna circunstancia se sacrificarn roedores mediante hipotermia (por ej. en congelador),
gas nitrgeno genera hipoxia pero tarda mucho en conseguir la inconsciencia; asfixia o
ahogamiento; ter o cloroformo son extremadamente

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ANEXO SECCION 2
2.1. Analgesia y anestesia
TABLA 1 - Analgsicos de uso comn en ratn
Droga
Buprenorfina*

Dosis

Duracin

0.05-0.1 mg/kg SC/IV

6-12 hs

Butorfanol*

15 mg/kg SC

Morfina*

2 -5 mg/kg SC

Flunixin
Meloxicam
Carprofeno

4 hs
1-4 hs

2.5 mg/kg SC

12-24 hs

1-2 mg/kg SC/O

12-24 hs

5 mg/kg SC/IP

24 hs

SC: subcutnea, IV: intravenosa, IP: intraperitoneal, O: oral


*Presentan efecto analgsico y sedante. Si se administra de forma posoperatoria
se debe controlar el animal por posible acumulacin de efectos sedantes de los anestsicos y
analgsicos.

TABLA 2 - Anestsicos inhalatorios usados en ratn


Drogas de efecto anestsico general
Droga
Isoflurano
Recomendado
Halotano
ter

Comentarios
Para corta duracin requiere una cmara
Para mantenimiento requiere
vaporizador calibrado
Costoso
Requiere vaporizador calibrado
Barato
Uso no autorizado

Ambas drogas producen una adecuada


anestesia, de duracin variable (minutos
a horas), y una adecuada analgesia. Son
potentes depresores cardiorrespiratorios.

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TABLA 3- Anestsicos inyectables usados en ratn


Drogas con efectos disociativo, sedante/hipntico y/o ansioltico
Droga

Dosis y va

Duracin

Comentarios

Barbitricos sedantes/hipnticos
Tiopental sdico
Pentobarbital

25-50mg/kg IV
50 mg/kg IP
30-40mg/kg IP
sedacin

40-60mg/kg IP

5-10 min

Depresin respiratoria e
hipotermia. Analgesia pobre

30 min

Depresin respiratoria
Analgesia pobre

anestesia

Ketamina (disociativo) + droga ansioltica


Ketamina +
diazepam
Ketamina +
acepromazina
Ketamina +
midazolam

100mg/kg ket +
5mg/kg diaz. IP
44mg/kg ket +
0.75mg/kg ace. IP
100mg/kg ket +
5mg/kg mid. IP

20-30 min
20-30 min
20-30 min

Sedacin/inmobilizacin
Analgesia adecuada
Solo sedacin
Analgesia adecuada
Inmobilizacin
Analgesia adecuada

Otros
Hidrato de cloral

60-90 mg/kg IP

No probada

Procedimientos terminales

Propofol

12-26mg/kg IV

5-7 min

Analgsico pobre

2.2. Puntos finales


Seleccin de punto final en reas especficas de investigacin
1. Produccin de anticuerpos monoclonales en ratones
Este procedimiento esta cayendo en desuso, siendo suplantado por metodologas in vitro; esta
prohibida en algunos pases y en otros se requiere una especial justificacin.
En caso de emplear animales, se deben considerar los siguientes parmetros para definir el punto final:
Aumento de peso debido a la acumulacin de fluido asctico en el abdomen
Dependiendo de la condicin del animal, se permite realizar un mximo de 2 extracciones de fluido
asctico, siendo el segundo un proceso terminal. Estos procedimientos se deben realizar bajo
anestesia general.
40

2. Investigacin en cncer
Puntos finales recomendados:
Cuando la masa tumoral alcanza un tamao tal que interfiere con funciones corporales normales o
produce dolor debido a su localizacin (tumores slidos)
Prdida de peso mayor a 20% comparado con animales control de igual edad y cepa
Ulceracin/infeccin en la zona del tumor
Trauma auto-inducido
El tamao del tumor no puede exceder el 5% del peso normal del animal para un pasaje tumoral rutinario o
10% para animales en experimentos teraputicos (10% representa un tumor subcutneo de flanco con un
dimetro de 17 mm en un ratn de 25g o 35 mm en una rata de 250g).

3. Estudios toxicolgicos
i. Toxicidad aguda
En la mayora de los estudios toxicolgicos, el investigador esta interesado en las interacciones primarias o
secundarias entre el compuesto y las clulas y tejidos del organismo y no en los efectos terciarios
(deshidratacin, anorexia, etc.) los cuales pueden causar la muerte del animal. Por ello es importante
recolectar datos en las primeras etapas de los efectos clnicos; datos recolectados de un animal moribundo o
cualquier animal sin observar representan informacin perdida.
Para el diseo experimental (lo que incluye la determinacin de puntos finales) es sumamente importante
contar con previa informacin sobre el compuesto a emplear respecto a los efectos que puede producir y el
tiempo que lleva en aparecer, y si estos no estn disponibles entonces es necesario buscar informacin
sobre compuestos de la misma clase o de estructuras qumicas similares.
El uso de experimentos piloto para determinar los puntos finales es de especial valor cuando se emplean
compuestos con efectos desconocidos. Adems, es necesario realizar estudios sobre rangos de dosis, lo cual
permite definir potenciales rganos blanco, efectos adversos y reducir el nmero de animales. Actualmente
el uso de la dosis letal 50 (LD50) no esta recomendada y esto ha sido avalado por las entidades que regulan la
produccin de compuestos farmacuticos (OECD, 1987; IRAC, 1993).

4. Estudios de enfermedades infecciosas, ensayos de vacunas


Se han establecido como criterio de punto final los siguientes parmetros
Disminucin de temperatura corporal 4C
Disminucin de peso corporal de 20% respecto a animales control de igual edad y cepa
En infecciones sistmicas: pelo desordenado e hirsuto, descargas oculares, letargo, encorvamiento,
ataxia, temblores, cianosis, hipotermia

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Ejemplo de scoring sheet: infeccin con leishmania


i. Toda anormalidad observada en los animales por los usuarios o los tcnicos del bioterio sern registradas
en los scoring sheets
ii. Los animales en experimentacin sern pesados semanalmente por el investigador responsable.
iii. Los registros de observacin animal se encontrarn en la sala donde se encuentren los animales.
El scoring sheet cuenta con 3 partes; en cada una de ellas dar puntaje de 0-3 segn las observaciones
realizadas.
i. Cambios en el peso corporal
0

Normal

Prdida de peso < 10%

Prdida de peso 10-15%

Prdida de peso >20%

Normal

Falta de acicalamiento

Pelo algo hirsuto, descarga nasal u ocular

Pelo muy hirsuto, postura anormal

Normal

Cambios menores, rengueo de pata inoculada

Movilidad reducida, inactivo

Auto-mutilacin,
vocalizaciones

ii. Apariencia fsica

iii. Comportamiento

inmovilidad

total,

Puntaje de punto final: cuando se alcanza un puntaje total 3, se proceder a la eutanasia del
animal.

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REFERENCIAS SECCION 2
Anestesia y analgesia
Ciencia y Tecnologa del Animal de Laboratorio. Ziga, JM; Orellana, JM; Tur, JA. Volumen 2. Ed.
Univ. de Alcal, SECAL, 2008.
Curso CHEA, Uruguay Uso y manejo de animales de laboratorio.
Depresores del sistema nervioso central y anestesia en roedores de experimentacin. Molina, AM;
Moyano, MR; Pea, FJ; Lora, AJ; Moreno, S; Serrano, JM. Dpto. Farmacologa, Toxicologa, y
Medicina legal y forense. Facultad de Veterinaria. Univ. de Crdoba, Espaa. RECVET. Vol. III, N 9,
2008.
Laboratory Animal Medicine and Science - Series II. Laboratory Animals: Rodent Anesthesia &
Analgesia. V-9054. Murray, KA; Pekow, C; Borkowski, GL, 2000.
Recognition and Alleviation of Pain in Laboratory Animals, National Research Council, National
Academies Press, 2009.
Standard Operative Procedures: Mouse Anesthesia and Analgesia Guidelines, Univ. of Michigan,
USA, 2007.
Eutanasia
Recomendaciones para la eutanasia de los animales de experimentacin: Parte 1 y 2. Close, B;
Banister, K; Baumans, V; Bernoth, EM; Bromage, N; Bunyan, J; Erhardt, W; Flecknell, P; Gregory, N;
Hackbarth, H; Morton D; Warwick, C, 1995. Elaborado para la Comisin Europea.
Puntos finales
CCAC on: choosing an appropriate endpoint in experiments using animals for research, teaching and
testing, 1998.
Guidelines and policy for determination of humane endpoints for animals used in research. Univ. of
Virginia, 2007.

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