UNIVERSIDAD NACIONAL DE

TRUJILLO
FACULTAD DE CIENCIAS AGROPECUARIAS
Escuela de Ingeniera Agroindustrial

ALUMNA:
ANDREA

COLCHADO ROJAS, ADA

CURSO:
GENERAL

MICROBIOLOGIA

CICLO:

IV

TRUJILLO- PERU
2015

Prctica de laboratorio N1: Preparacin de medios de

cultivo. Siembra y aislamiento
1) Resultados y discusiones:

Madigan (2005) argumenta que los microorganismos en la naturaleza no se

encuentran aislados, sino integrados en poblaciones mixtas. Para estudiar a un
tipo de microorganismo especfico es necesario separarlo del conjunto de
poblaciones, obteniendo as un cultivo puro.
Tambin define a un cultivo puro como aquel que contiene un solo tipo de
microorganismo, que procede generalmente de una sola clula. El crecimiento
de esta origina, en medio slido, una masa de clulas fcilmente visible que
recibe el nombre de colonia.
Baron (1996) indica que existen muchos mtodos de aislamiento de
microorganismos, como aislamiento por estra en superficie, por dilucin en
masa, etc. En la prctica realizada se trabaj con el mtodo de aislamiento en
placa por estra en superficie. Segn Tovar, el mtodo permite obtener colonias
aisladas a partir de un nmero de muestra que contenga un elevado nmero de
bacterias. La placa solo permite un medio nutritivo para la bacteria, pues el
cultivo es el que es agregado en forma de estras muy juntas. Con este mtodo
se logra la separacin de bacterias que se encuentran en un cultivo mixto, o
que proceden de muestras homogneas, pero en las que existe un nmero
elevado de dichos microorganismos.
Para Ryan (2004) el fundamento del mtodo es que tras la incubacin de una
mezcla bacteriana en un medio slido, aparezcan colonias separadas, cada
una de las cuales procede de una sola bacteria correspondiente a una
determinada cepa de las presentes en la mezcla original. A partir de cada
colonia de cada tipo presente en ese medio slido (agar) se puede aislar la
cepa correspondiente, obtenindose un cultivo puro.
Para prcticas de laboratorio, las cepas ms utilizadas son Echerichia Coli y
Micrococcus Luteus. La preparacin del cultivo se realiza en una placa Petri, y
como se explic en el mtodo, se realiza una siembra por estras, para obtener
dos tipos de colonias distintos.
Se recomienda obtener el mximo nmero de estras para diluir la muestra y de
esta manera conseguir que en las estras finales se encuentren colonias
aisladas.

FIG. 1 SIEMBRA POR ESTRA.

FIG. 2 CULTIVOS PUROS DE S.P.E.

2) Conclusiones:

En la naturaleza, las muestras que son objeto de estudio poseen mezclas

bacterianas. Para analizar un microorganismo especfico de esta mezcla se
debe realizar un aislamiento, el cual responde a muchos mtodos.
Se determin que el mtodo de aislamiento por estras es uno de los ms
usados y tiles en la obtencin y anlisis de un cultivo puro, y permite en
ciertos casos el anlisis de la morfologa de una colonia.
El mtodo de aislamiento por estras tiene la particularidad de iniciar de la
unidad formadora de colonia (UFC) para su anlisis.

3) Bibliografa:
Madigan M, Martinko J. (2005). Brock Biology of Microorganisms (11th
ed. edicin). Prentice Hall.
Baron S. (1996). Baron's Medical Microbiology (4th ed. edicin).
University of Texas Medical Branch.
Ryan KJ. Sherris Medical Microbiology (4th ed. edicin). McGraw Hill.

Prctica de laboratorio N 2: Medios de cultivo slidos:

Agares
1) Resultados y discusiones:

Gonzlez (2012) argumenta que uno de los sistemas ms importantes para la

identificacin de microorganismos es observar su crecimiento en sustancias
alimenticias artificiales preparadas en el laboratorio. El material alimenticio en
el que crecen los microorganismos es el medio de cultivo y el crecimiento de
los microorganismos es el cultivo.
La mayora de las bacterias patgenas requieren nutrientes complejos similares
en composicin a los lquidos orgnicos del cuerpo humano. Por eso, la base
de muchos medios de cultivo es una infusin de extractos de carne y Peptona a
la que se aadirn otros ingredientes.
El agar es un elemento solidificante muy empleado para la preparacin de
medios de cultivo. Se lica completamente a la temperatura del agua hirviendo
y se solidifica al enfriarse a 40 grados. Con mnimas excepciones no tiene
efecto sobre el crecimiento de las bacterias y no es atacado por aquellas que
crecen en l.
Brock (2009) indica que el agar nutritivo es
normalmente para todo tipo de bacteria. Es muy
incluso a relativas altas temperaturas. Adems,
este agar lo hace en la superficie, por lo que se
pequeas.

un medio de cultivo usado

til porque permanece solido
el crecimiento bacteriano en
distinguen mejor las colonias

En un caldo de nutrientes, la bacteria crece en el lquido, y aparece como una

sustancia espesa, con colonias difcilmente observables. El agar nutritivo
contiene normalmente (w/v)
0.5 % Peptona
0.3 % extracto de carne/extracto de levadura
1.5 % agar
0.5% NaCl
Agua destilada
pH casi neutro (6.8) a 25 C.
El objetivo de un agar inclinado es de ser medio diferencial que ayuda a
diferenciar especies de enterobacterias de acuerdo a su capacidad de:
-

Metabolizar lactosa, sacarosa o ambas

Producir acido mediante fermentacin
Producir gas durante la fermentacin

Generar cido sulfhdrico

Se debe examinar la parte superior e inferior del medio y valorar la coloracin:

En el extremo superior:
-

Rojo: No fermentan lactosa, sacarosa o ambas.

Amarillo Fermenta lactosa, sacarosa o ambas

Extremo inferior
-

Rojo: Sin fermentacin, la bacteria es un aerobio obligado.

Amarillo.- Fermentacin, la bacteria es un aerobio facultativo.
Negro.- Produccin de H2S. Grietas, burbujas o elevacin del medio.
Produccin de gas.

FIG. 1 Materiales usados en la prctica

FIG. 1: Preparacin o siembra de un medio de cultivo.

FIG. 3 Siembra en agar inclinado.

2) Conclusiones:
El uso de un medio de cultivo en un microorganismo responde a las
caractersticas del mismo, tales como tasa de crecimiento, cantidad de sustrato
necesario; as como de factores externos como pH, temperatura, etc.
El agar nutritivo es uno de los ms usados dentro de lo que respecta a siembra
en medios slidos, debido a que ofrece una alta viabilidad a los
microorganismos y es poco susceptible al ataque de dichos MO.
En la siembra por agar inclinado se busca ciertas caractersticas que puedan
tener las bacterias dentro del cultivo (fermentacin, produccin de gas, cambio
de color, etc.) y as por literatura poder determinar qu tipo de bacteria es.
Las bacterias que ms son estudiadas en agares inclinados son las
enterobacterias.
3) Bibliografa:
Michael T. Madigan, John M. Martinko, Jack Parker. Cap. 1 de la 8 edicin de
Brock: Biologa de los microorganismos.
Gonzlez C. Concepcin, Torrico C. Gertrudis, Medina A. Mara. Medios de
cultivo en un laboratorio de microbiologa.

Prctica de laboratorio N 3: Espectro antibitico y

antibiograma
1) Resultados y discusiones:

Basualdo (1996) indica que el antibiograma se utiliza para determinar la

sensibilidad de una cepa bacteriana frente a los distintos agentes
antimicrobianos (antibiticos). Esta sensibilidad se puede determinar fcilmente
utilizando el mtodo de difusin del agente antimicrobiano en el agar.
Un antibiograma se puede definir como la prueba de distintos antibiticos en un
solo microorganismo, para analizar cul de todos es ms eficaz en cuanto a la
inhibicin de su crecimiento, reproduccin; y cual ofrece mayor toxicidad
selectiva.

FIG. 1 Ejemplos de antibiogramas.

Para entender lo que significa el espectro antibitico, debemos definir a un

antibitico. Botero (1998) describe a un antibitico como toda sustancia que
interfiere en el crecimiento y la supervivencia de los microorganismos mediante
una interaccin especfica (toxicidad selectiva) con alguno de sus componentes
celulares. Debido a esta especificidad, los antibiticos tienen un espectro de
accin limitado; esto es, en general son activos frente a ciertos
microorganismos e inactivos frente a otros, lo que permite usarlos como
agentes selectivos.
De acuerdo con esto, un espectro antibitico evala la accin de una sustancia
ante diversas cepas bacterianas, es decir, analiza la toxicidad que origina en
ciertas bacterias o si es que es un agente activo frente a dicho MO.

FIG. 2 Espectro antibitico (E. coli, S. aureus).

Tanto el espectro antibitico como el antibiograma son de mucha importancia

en microbiologa, puesto que la finalidad no es solo evaluar toxicidad en cepas
bacterianas, sino tambin obtener antibiticos selectivos, capaces de inhibir
ciertos tipos de MO perjudiciales en el hombre sin que inhiba a otros naturales
en el organismo (como la flora intestinal por ejemplo).

2) Conclusiones:
Se determin que un antibiograma es la accin de diversos antibiticos ante
una cepa bacteriana, y que un espectro antibitico es el inverso, es decir, la
accin de un antibitico frente a diversas cepas bacterianas.
Se analiz la finalidad de ambos, llegando a la conclusin que no solo se busca
inhibicin o toxicidad en toda una mezcla bacteriana, sino tambin una
selectividad, para as obtener antibiticos ms eficaces y con menores efectos
colaterales.
3) Bibliografa:
Basualdo J, Coto C, Torres R. Microbiologa Biomdica: Bacteriologa,
Micologa, Virologa, Parasitologa, Inmunologa. Ed. Atlanta, Argentina,
1996.
Botero D, Restrepo M. Parasitosis Humana. 3ra. Ed. Corporacin
para Investigaciones Biolgica, Colombia 1998

Prctica de laboratorio N 4: Coloracin Gram

1) Resultados y discusiones:

Wolin (1993) sostiene que la tincin diferencial requiere el uso de al

menos 3 reactivos qumicos que se aplican en secuencia a un frotis
fijado por calor. El primer reactivo es llamado tincin primaria o
colorante primario. Su funcin es impartir color a todas las clulas.
Con el objetivo de establecer un contraste de color, el segundo
reactivo usado es un agente decolorante, el cual puede decolorar la
clula completa o solo parte de ella. El reactivo final, el colorante de
contraste, le da a las clulas decoloradas un color que contrasta con
el del colorante primario. El colorante de contraste no puede ser
absorbido por clulas que no han perdido el colorante primario. De
esta manera, tipos de clulas o sus estructuras se pueden distinguir
unas de otras en funcin del colorante que es absorbido.
De acuerdo a esto, la tincin diferencial se basa en el carcter cido o
bsico de las partes de la cepa bacteriana, y ya que el ncleo es
cido, es el nico que queda con el tinte, pudiendo as diferenciarse.
Kimball (1986) argumenta que de todas las tinciones diferenciales, la
ms conocida es la C. Gram. Esta tincin divide a las bacterias en dos
grandes grupos: Gram positivas y Gram negativas.

FIG. 5 Materiales usados en la C. Gram.

FIG. 6 Tincin de Gram.

FIG.7 Observacin microscpica de la C. Gram

2) Conclusiones:

La tincin diferencial se fundamenta en el carcter de ciertos

organelos de la cepa bacteriana. Ya que se puede decolorar la clula
completa, el carcter cido del ncleo permite accin de ciertos
colorantes que permiten diferenciar a las diferentes bacterias.
De la tincin diferencial, la C. Gram es la ms conocida y es la que
divide a las bacterias en dos grandes grupos: Gram (+) y Gram (-).
3) Bibliografa:
Wolin, M. 1973. Tratado de microbiologa. 20 Edicin. Editorial
Interamericana, Mxico. Pg. 901.
Kimball, Y. 1986. Biologa. Cuarta Edicin. Addison-Wesley
Interamericana, Wilmington, EU.