TALLER CROMATOGRAFA GASEOSA Y LIQUIDA

ALEXANDER SANTAMARIA
CURSO IMT 307
1) A continuacin se muestran los espectros IR (como lquidos puros o en pastillas de KBr) de
compuestos de frmula global conocida. Determine sus estructuras y asigne las bandas
caractersticas.

2) A continuacin se muestran los espectros correspondientes a los compuestos a-f. Asigne

cada uno de ellos.

TALLER CROMATOGRAFA GASEOSA Y LIQUIDA

1) Defnase los siguientes trminos :

a) Elucin, b) Fase mvil, c) Fase estacionaria, d) Proporcin de particin, e)Tiempo de
retencin, f) Factor de capacidad, g) Factor de selectividad, h)Altura de plato.
2) Enlstense las variables que llevan a un ensanchamiento de banda
3) Cul es la diferencia entre cromatografa lquido-lquido y lquido slido?
4) Describa el mtodo para la determinacin del nmero de platos tericos de una columna
5) Nombre los mtodos generales para mejorar la resolucin de dos sustancias en una
columna cromatogrfica
6) Un cromatograma de una mezcla de las especies A, B, C, y D dio los siguientes datos:
Sustancia
No retenido
A
B
C
D

Tiempo de retencin, min

3.1
5.4
13.3
14.
21.6

Anchura de la base del pico (w), min

0.41
1.07
1.16
1.72

a) Calclese el nmero de platos tericos de cada pico

b) La altura de plato para la columna
c) A partir de los datos anteriores calcule para A, B, C, y D
El factor de capacidad
El coeficiente de particin
d) A partir de los datos anteriores calcule para B y C
La resolucin
El factor de selectividad
e) La longitud de la columna necesaria para separar las dos especies con una resolucin
de 1.5
f) El tiempo necesario para separar las dos especies en la columna del numeral e)
7) Los datos siguientes se obtuvieron por cromatografa de gas lquido sobre una columna
empacada de 40 cm
Compuesto
Aire
Metilciclohexano
metilciclohexeno
tolueno

tR, min
1.9
10.0
10.9
13.4

W
0.76
0.82
1.06

a)
b)
c)
d)
e)

Nmero promedio de platos tericos a partir de los datos

Altura promedio de plato para la columna
El factor de capacidad para cada una de las tres especies
La resolucin para el ciclohexano y el tolueno
Si se desea una resolucin de 1.5 en la separacin de metilciclohexano y metil
ciclohexeno cuantos platos tericos son necesarios
f) Que longitud debe tener la columna del apartado e)
8) Qu es un cromatograma?
9) Cules son los efectos de la inyeccin lenta de la muestra sobre el cromatograma de
gases?
10)
En que difieren la cromatografa planar y de columna?
11)
Indique el orden en el cual los compuestos siguientes podran ser eluidos de una
columna de HPLC que contiene un empaque de fase reversa
a) Benceno, dietil ter, n-hexano
b) Acetona, dicloroetano, acetamida

12)
Indique el orden en el cual los compuestos siguientes podran ser eluidos de una
columna de HPLC que contiene un empaque de fase normal
a) Acetato de etilo. cido actico, dimetilamina
b) Propileno, hexano, benceno, diclorobenceno
13)
Descrbase las diferencias fundamentales entre cromatografa de adsorcin y de
particin
14)
Descrbase las diferencias fundamentales entre cromatografa de permeacin en gel
y de filtracin en gel
15)
Qu tipo de especies se pueden separar por HPLC, pero no por GLC
16)
Un mtodo para la determinacin cuantitativa de la concentracin de los
constituyentes de una muestra analizada por cromatografa de gases es por el mtodo de
normalizacin de rea. En este, es necesario la elucin completa de los constituyentes de
la muestra. As, se mide el rea de cada pico y se corrige por las diferencias en las
respuestas en el detector para los diferentes eluatos. Esta correccin comprende la
divisin del rea por un factor de correccin determinado empricamente. La
concentracin del analito se encuentra a partir de la relacin de su rea corregida con
rea total corregida de todos los picos. Para un cronograma que tiene tres picos se
encontraron las reas relativas de 16.4, 45.2, y 30.2 en el orden de tiempo creciente de
retencin. Calclese el porcentaje de cada compuesto si las respuestas relativas del
detector fueron 0.60, 0.78, 0.88 respectivamente.
17)
Las reas de los picos y las respuestas relativas del detector se deben emplear para
determinar la concentracin de cinco especies presentes en una muestra. Se emplea el
mtodo de normalizacin de rea descrito anteriormente. Las reas relativas y las
respuestas relativas del detector para los cinco picos en cromatografa gaseosa son las
que se indican: calclese el porcentaje de cada componente en la muestra
Componente
A
B
C
D
E

rea relativa de pico

32.5
20.7
60.1
30.2
18.3

Respuesta relativa del detector

0.70
0.72
0.75
0.73
0.78

18)
Los siguientes datos fueron obtenidos por medio de un cromatograma gas lquido,
en una columna de 1.50 m., cuya fase estacionaria es de escualeno. Calcular :
Compuesto
no retenido

tr (min) w (min)
3

benceno (PE 80 C)
hexano (PE 68 C)

10
11

1.1
1.4

a)
b)
c)
d)

El tiempo de retencin corregido (tR') para cada compuesto.

El nmero promedio de platos (N prom.).
La resolucin (R) entre ambos picos y decir si se logra la separacin.
En base a los datos obtenidos grafique un cromatograma, respetando las escalas.
Considere que el hexano es el compuesto que est en mayor concentracin.
e) Cmo se puede mejorar la resolucin entre dos picos prximos en CG?

19)
Se desea determinar la concentracin de etanol en sangre por el mtodo de
patrn interno. Para ello se procesan (de la misma manera) una serie de soluciones

acuosas patrn de etanol y una muestra de suero: una alcuota de 0.01 mL de cada
solucin se diluyen con 0.1 mL de una solucin patrn de 2-propanol 0.1mg/mL. Se
inyectan 0.1 l de cada solucin en un CG provisto de un detector FID (ionizacin de
llama), un integrador y una columna PEG-400 (polietilenglicol) a 80 C. Los resultados
obtenidos fueron los siguientes:
Patrones

de

etanol

(mg/mL)
0.5
0.75
1.0
1.25
1.5
Muestra de sangre

Medida del integrador

Pico del etanol
Pico del propanol
5518
7563
10350
13935
15628
9862

12754
11893
12084
12870
12314
12604

a) Construir el grfico de calibracin correspondiente y usarlo para determinar la

concentracin de etanol en la muestra de sangre.
b) Qu ventajas tiene emplear las reas integradas de los picos en vez de sus alturas
para realizar la cuantificacin?
20)
Las siguientes aseveraciones se refieren a los distintos modos de HPLC. Indique si
las mismas son verdadera (V) o falsas (F).
a) En cromatografa de adsorcin la fase mvil es no polar.
b) Molculas polares pueden ser fcilmente separadas por cromatografa de adsorcin.
c) El tiempo de retencin de los solutos en cromatografa de exclusin puede ser alterado
cambiando la polaridad de la fase mvil.
d) La exclusin molecular se usa slo para separar molculas grandes.
e) En cromatografa reversa la fase mvil es ms polar que la fase estacionaria.
21)
Indique los componentes principales de la instrumentacin empleada en GC y la
funcin de cada uno de ellos.
22)
Explique cuando conviene utilizar la inyeccin con divisin de flujo y sin divisin de
flujo en GC.
23)
Para qu se someten los analitos a reacciones de derivatizacin en GC?
24)
Explique cuando es posible trabajar a con un programa de temperatura constante
en GC.
25)
Explique por qu todos los compuestos eluidos de la columna aportan seal
analtica cuando se emplea un detector de conductividad elctrica.
26)
Indique cual es el detector ideal para cromatografa de gases y por qu.
27)
Razone por qu es necesario trabajar a alta presin en HPLC.
28)
Indique qu tipo de cromatografa lquida sera ms adecuada para la separacin
de mezclas de compuestos con las siguientes propiedades:
a) Masa molecular mayor de 2000, solubles en agua y con carcter no inico
b) Masa molecular menor de 2000, solubles en agua y con carcter inico
c) Masa molecular igual a 340, soluble en agua y con carcter no inico
d) Masa molecular igual a 1000, soluble en acetonitrilo.
29)
Explique qu diferencia existe entre trabajar en modo de elucin isocrtica y en
modo gradiente.
30)
Explique en qu se diferencia la LC de reparto en fase normal y en fase reversa.
Indique asimismo como aumentara la fuerza de la fase mvil en ambos modos de trabajo.
31)
Indique los componentes principales de la instrumentacin empleada en LC y la
funcin de cada uno de ellos.
32)
La separacin de cuatro vitaminas del grupo de las cianocobalaminas se llev a
cabo mediante LC en fase reversa, de modo que fueron eluidas con tiempos de retencin

de 3,9; 5,1; 7,0 y 8,5 min que correspondan a hidroxocobalamina (Cbl-OH),

cianocobalamina (Cbl-CN), adenosilcobalamina (Cbl-Ade) y metilcobalamina (Cbl-Me),
respectivamente. Se quiere determinar la concentracin de estas cuatro vitaminas en una
muestra de hgado de pollo, para ello se toman 5 g de la misma de los que se extraen las
vitaminas, diluyendo el extracto obtenido hasta 25 mL, inyectndose en el cromatgrafo
un volumen de 20 L, que proporcion un cromatograma cuyos datos en rea aparece en
la tabla siguiente. La tabla muestra asimismo los datos obtenidos para 5 disoluciones
estndar conteniendo los cuatro compuestos en concentraciones perfectamente
conocidas. Para la preparacin de dichas disoluciones se parti de una disolucin
concentrada que contena 10, 25, 20 y 12 ppm de Cbl-OH, Cbl-CN, Cbl-Ade, Cbl-Me,
respectivamente, de la que se tomaron 25, 50, 75, 100 y 125 L y se diluyeron hasta 25
mL, inyectndose en el cromatgrafo un volumen de 20 L de cada una de estas
disoluciones.
rea
Disoluci Disoluci Disoluci Disoluci Disoluci Muestra
n
n
n
n
n
problem
1
2
3
4
5
a
Cbl-OH
10,0
20,3
29,8
41,1
49,5
25,4
Cbl-CN
4,90
10,8
15,1
19,8
24,7
11,3
Cbl-Ade
15,4
29,8
45,8
60,7
75,9
50,4
Cbl-Me
3,90
8,10
11,9
16,1
20,5
15,9
(Rtas.: [Cbl-OH]=0,126 g/g; [Cbl-CN]=0,278 g/g; [Cbl-Ade]=0,331 g/g; [Cbl-OH]=0,24
Especie

g/g)
33)
Los datos de la tabla siguiente se obtuvieron durante la determinacin de
antraceno en salmn, empleando LC en fase reversa y deteccin fluorimtrica. Se adicion
un compuesto como patrn interno a cada disolucin estndar y a la muestra.
Concentracin
de antraceno,
ng/mL
0,1
0,2
0,3
0,4
0,5
Muestra

rea de pico
del analito
25,5
35,9
39,7
55,0
81,8
49,3

rea de pico
del patrn
interno
32,1
31,8
28,4
32,3
40,9
39,4

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