Widal

1. FINALIDADE
Teste para deteco de anticorpos Anti-Salmonella com a srie de antgenos de
Widal L/B.
2. INTRODUO
Durante o desenvolvimento de certas doenas infecciosas no organismo
humano, alguns microrganismos patognicos promovem a formao de uma
variedade de anticorpos, as aglutininas, que combinadas a antgenos
homlogos ou aglutinognios so capazes de produzir aglutinao dentro de
certas condies controladas, visveis a olho nu. Grunbaum e Widal foram os
pioneiros da aplicao deste princpio imunolgico no diagnstico de doenas
infecciosas. Esta prova ficou universalmente conhecida por Prova de Widal,
posteriormente estendida para incluir outras Salmonelas alm de S. typhi
mediante o uso de antgenos de uma variedade de Salmonella O e H. O
conjunto Widal L/B emprega 4 antgenos de Salmonella distintos que so
encontrados comumente causando febres entricas. A metodologia prope o
uso de uma prova qualitativa rpida em lmina, que caso positiva,
complementada com uma pesquisa quantitativa em tubo, na qual se determina
o ttulo de anticorpos (aglutininas) presentes no soro.
3. IMPORTNCIA CLNICA
Na primeira semana de infeco o melhor meio diagnstico a hemocultura
(positiva em cerca de 80% dos casos). Entre a segunda e terceira semanas, a
coprocultura torna-se o meio diagnstico mais eficaz (positiva em 50-65% dos
casos).Entre a quarta e quinta semanas, o meio diagnstico mais eficaz a
pesquisa de aglutininas (positiva em cerca de 80-85% dos casos).
4. AMOSTRA
a- Preparo do paciente
Apesar do jejum prvio no ser necessrio, recomenda-se sempre que possvel
que o paciente seja instrudo a manter jejum de 8-12h antes da coleta, para
evitar uma possvel ocorrncia de fenmenos interferentes tais como a lipemia.
b- Tipos de amostra
A amostra para a prova o soro (no usar plasma) recm-obtido, separado o
mais rapidamente possvel do cogulo aps a coleta, isento de hemlise ou
lipemia.
c- Armazenamento e estabilidade
Entre a coleta e a execuo da anlise, a amostra deve ser mantida em
geladeira (2-8 oC) .
d- Critrios para rejeio
As amostras que se apresentarem hemolisadas, lipmicas, com indcios de
contaminao microbiana ou de congelamento devero ser rejeitadas.

e- Precaues e cuidados especiais

- Os reagentes destinam-se ao uso diagnstico in vitro, no devendo ser
ingeridos ou entrar em contato com a pele e mucosas;
-Deve-se manipular os reagentes com cautela no sentido de evitar sua
contaminao qumica ou biolgica.
6. MATERIAIS E EQUIPAMENTOS NECESSRIOS (porm no includos)
- Lmina de vidro 10x20 cm;
- Aglutinoscpio ou dispositivo similar de iluminao;
- Pipetas graduadas;
- Tubos de ensaio e estante;
- Banho-maria;
- Cronmetro;
- Soluo fisiolgica formalinizada (5 mL de formalina em cada 100 mL de
soluo salina fisiolgica) .
7. PROCEDIMENTO TCNICO
7.1 Prova em lmina (triagem)
a- Deixar que os reagentes e amostras adquiram a temperatura ambiente;
b- Em uma lmina de vidro transparente de 10x20 cm pipetar em fila 0,08 0,04 - 0,02 - 0,01 - 0,005 mL de soro (usar pipeta de 0,2 mL com graduao
milesimal);
c -Aps agitar bem os antgenos, colocar uma gota do antgeno selecionado
sobre cada gota de soro e misturar bem com um basto ou dispositivo similar;
as
diluies obtidas so respectivamente 1/20, 1/40, 1/80, 1/160 e 1/320;
d- Agitar a placa em movimentos longitudinais suaves 15 a 20 vezes e aps 1
minuto ler os resultados sobre um aglutinoscpio ou dispositivo similar de
iluminao, pesquisando a ocorrncia ou no de aglutinao visvel a olho nu
(no usar microscpio);
e- Resultados: Observar qual a ltima diluio que apresentou aglutinao, e no
caso de ter ocorrido aglutinao , confirmar o resultado atravs da prova em
tubo.
Observao: o procedimento dever ser repetido para cada antgeno testado.
7.2 Prova em tubo (confirmatria)
a-Identificar 9 tubos de ensaio (1/10, 1/20, 1/40, 1/80, 1/160, 1/320, 1/640 ,
1/1280 e controle do antgeno), acrescentando a seguir 0,9 mL de salina ao
primeiro tubo e 0,5 mL ao restante dos tubos ;
b- Pipetar 0,1 mL de soro para o primeiro tubo (1/10) homogeneizando bem, e
a seguir, transferir 0,5 mL desta diluio para o segundo tubo,
homogeneizando e transferindo 0,5 mL da diluio para o prximo tubo e assim
por diante at o oitavo tubo tubo, desprezando ento a ltima alquota ;

e- Precaues e cuidados especiais

- Todas as amostras devem ser manipuladas com extrema cautela, pois podem
veicular diversas doenas infecto-contagiosas (hepatite, SIDA etc.). Seu
descarte deve ser feito preferencialmente aps sua autoclavao devendo-se
evitar sua eliminao diretamente no meio ambiente. Igual cuidado se
recomenda no descarte de outros materiais como ponteiras plsticas, agulhas e
seringas.
5. INFORMAES GERAIS SOBRE O PRODUTO
a- Registro no Ministrio da Sade: 100.970.10026.
b- Princpio de tcnica
O soro em anlise diludo e as diluies
colocadas em contato com
reagentes que contm antgenos somtico (grupo D) e flagelares (a, b e d) de
Salmonella. Aps 1 minuto de agitao o material analisado pesquisando-se
a ocorrncia de aglutinao (prova positiva) ou no. Caso a prova em lmina
apresente-se positiva, deve-se obrigatoriamente haver confirmao do resultado
com a prova em tubo.
c- Reagentes
- Salmonella O Antgeno somtico do grupo D;
- Salmonella A Antigeno flagelar a;
- Salmonella B Antgeno flagelar b;
- Salmonella H Antgeno flagelar d.
Os antgenos flagelares usam como preservativo o formol, e os antgenos
somticos o fenol.
d- Armazenamento e estabilidade
Para fins de transporte o conjunto pode ser mantido em temperatura ambiente
por at 3 dias. No laboratrio deve ser armazenado em geladeira (2-8 oC)
aonde permanece estvel at a data de validade expressa em rtulo desde que
isento de contaminao qumica ou microbiana. No congelar nenhum dos
componentes do conjunto.

c- Preparar as diluies dos antgenos para uso, misturando 1 parte de

antgeno com 19 partes de salina formalizada (5 mL de formalina em cada 100
mL de soluo salina fisiolgica);
d- Adicionar 0,5 mL de antgeno diludo a cada tubo contendo a diluio de
soro (partindo do tubo 2 - 1/20 at o tubo de controle) e agitar a estante;
e- Incubar em Banho-Maria nas seguintes condies:
- Antgeno de Salmonella O: 16-18 horas a 50 oC;
- Antgeno de Salmonella H: 1 hora a 50 oC;
f- Ler os resultados observando cada tubo sob um aglutinoscpio ou dispositivo
similar, verificando a ocorrncia de aglutinao de forma a obter o ttulo (o
ltimo no deve apresentar nenhuma aglutinao, apenas turbidez):
1:20 (tubo 2), 1:40 (tubo 3), 1:80 (tubo 4), 1:160 (tubo 5), 1:320 (tubo 6),
1:640 (tubo 7) e 1: 1280 (tubo 8).
7.3 Precaues e cuidados especiais
- Seguir rigorosamente as condies de incubao;
- Confirmar pela prova em tubo os resultados da prova em lmina;
- Padres de aglutinao obtidos (entre parnteses para a prova em tubo):
4+ : Completa aglutinao (sobrenadante claro)
3+: Cerca de 75% das clulas aglutinadas (sobrenadante claro)
2+: Cerca de 50% das clulas aglutinadas (sobrenadante moderadamente
turvo)
1+: Cerca de 25% das clulas aglutinadas (sobrenadante turvo). Este padro
considerado negativo.

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8. RESULTADOS
Os resultados devem expressar a reatividade da amostra frente aos antgenos
testados, indicando sempre o ttulo obtido. Exemplo:
- Salmonella O (Grupo D - Tifide O): amostra analisada no reagente.
- Salmonella H (Antgeno d - Tifide H): amostra analisada no reagente.
- Salmonella H (Antgeno a - Para A): amostra analisada reagente com ttulo
1:80.
- Salmonella H ( Antgeno b - Para B): amostra analisada no reagente.

INTERPRETAO DOS RESULTADOS

Antgeno

Patologia
Salmonella O
Febre tifide
(Grupo D) Tifide O
Salmonella H
Febre tifide
(Antgeno d) Tifide H
Salmonella H
Febre paratifide
(Antgeno a) - Para A
Salmonella H
Febre paratifide
(Antgeno b) - Para B
*Significativo em indivduos no vacinados

Ttulo significativo
1:80* aps 1:160
indicativo
1:80

11. GARANTIA DA QUALIDADE

A Laborclin obedece o disposto na Lei 8.078/90 - Cdigo de Defesa do
Consumidor. Para que o produto apresente seu melhor desempenho,
necessrio :
- que o usurio conhea e siga rigorosamente o presente procedimento tcnico;
- que os materiais estejam sendo armazenados em condies adequadas;
- que os equipamentos e demais acessrios necessrios estejam em boas
condies de uso , manuteno e limpeza.
Antes de ser liberado para venda, cada lote do produto submetido a testes
especficos, que so repetidos periodicamente at a data de vencimento
expressa em rtulo. Os certificados de anlise de cada lote podem ser
solicitados junto ao SAC - Servio de Assessoria ao Cliente, bem como em
caso de dvidas ou quaisquer problemas de origem tcnica, atravs do telefone
0800-410027. Quaisquer problemas que inviabilizem uma boa resposta do
produto, que tenham ocorrido comprovadamente por falha da Laborclin sero
resolvidos sem nus ao cliente.
12. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS
1. Grunbaum, A.S. Lancet, 2: 208, 1896.

1:80*
1:80*

9. LIMITAES DO MTODO
- Amostras de pacientes que utilizam drogas de abuso podem apresentar
alguma reatividade;
- Vacinao prvia com os antgenos de salmonelas resulta em ttulo de
anticorpos particularmente nos antgenos H;
- Pacientes com doenas hepticas crnicas podem apresentar ttulos de
aglutininas elevados;
- Diferenas de um ttulo a mais ou a menos em amostras coletadas com 1-2
semanas de diferena, ou em amostras repetidas em paralelo no so
significativas, sendo uma margem de erro aceitvel;
- O armazenamento prolongado dos reagentes pode ocasionar a formao de
grumos que no se dissolvem;
- Em climas quentes, as bordas podem sofrer ressecamento, que no deve ser
confundido com aglutinao;
- Nos casos de febre tifide o soro aglutina freqentemente com o antgeno O
da Salmonella do grupo B (paratifide b) mas raramente com o grupo A.

2. Widal, F.; Bull. Soc. Med. Hosp. De Paris 13, 1896.

3. Spink, W.W.; Mc Cullough, N.B.; Hutchings, L.H. Amer. Clin. Path., 24:486,
1954.
4. Voge, H.; Cherubin, C.E. and Millian, S. J. Amer. J. Clin. Path., 53:932,
1970.
5. Protell, R.L., Soloway, R.D.; Martin, W.J.; Schoenfield, and Summerski,
W.H.J. Lancet 22:330, 1970.
6. Syphilis, A Syphilis sinopsis, US Dep. of Health Ed. and Welf, Publ. Health,
Serv. Publ. No 1660, Jan. 1968.
7. Quality Control in Clinical Microbiology, Revised, ASCP Comm. on Continuing
Education, Coun. on Micr., 1968.
8. J. Infec. Dis., 42, 242, 1928.
9. Koneman, Elmer; et al. Diagnostic Microbiology. Lippincott, USA, 5th ed.,
1997.
0.10147

10. CONTROLE DA QUALIDADE

- Materiais necessrios
Controle positivo e negativo obtido normalmente a partir de amostras clnicas .
- Periodicidade
Ao receber o conjunto, efetuar testes usando os controles. Quando da
execuo de uma bateria de testes, recomenda-se a realizao dos controles a
cada bateria de teste.
- Interpretao e avaliao
Uma vez que a funo do controle de qualidade garantir que o material usado
esteja fornecendo resultados compatveis com os esperados e dentro de um
padro de desempenho, espera-se que o controle positivo apresente
aglutinao e que o controle negativo no apresente aglutinao. Amostras
com ttulo conhecido, podem ser usadas para avaliar a sensibilidade do
material, em periodicidade a ser estabelecida pelo prprio laboratrio conforme
seus procedimentos adotados.

Laborclin Produtos para Laboratrios Ltda

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sac@laborclin.com.br

LB 172010 - Rev 05 - 06/2009

Responsvel tcnico:
Elisa Hizuru Uemura - CRFPR 4311
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