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I. OBJETIVOS
Microbiologa Sanitaria I
MICROSCOPIO
El tamao de muchas de las estructuras biolgicas y muchos seres vivos estn fuera
del poder resolutivo del ojo humano (0.1 mm aproximadamente), y por lo tanto, hacen
falta una serie de instrumentos que permitan visualizarlos. Uno de estos instrumentos
es el
Microscopio ptico:
El microscopio, mediante dos sistemas de lentes, el ocular y el objetivo (por este
motivo, muchas veces recibe el nombre de Microscopio Compuesto), permite
visualizar con detalle, estructuras de dimensiones verdaderamente pequeas.
Est compuesto de diferentes partes: Mecnica, ptica y de iluminacin.
A. PARTE MECNICA:
1. Base o pie: Sirve de soporte al microscopio y suele tener el peso suficiente para
darle estabilidad al equipo.
2. Columna: Une la platina a la base y sostiene al condensador y al diafragma.
3. Tubo: Sostiene al ocular y al objetivo y los mantiene separados por la distancia de
trabajo correcta.
4. Brazo: Continuacin de la base o pie que permite movilizar al microscopio con la
mano.
5. Platina: Sostiene las preparaciones con la muestra colocadas sobre una perforacin
central que deja pasar la luz que viene del condensador o del espejo.
6. Pinzas: Sostienen a la lmina portaobjeto con firmeza sobre la platina.
7. Revolver: Permite colocar en posicin de trabajo, alternativamente, los objetivos
que posee el microscopio.
8. Tornillo macromtrico: Mueve la platina o el tubo hacia arriba o hacia abajo,
acercando o alejando rpidamente el objetivo a la distancia de trabajo aproximada con
respecto a la muestra.
Microbiologa Sanitaria I
12. Fuente de luz: Puede utilizarse luz artificial de una lmpara externa o una que se
inserta en la base o pie del microscopio. Cuando se utiliza la lmpara externa se
requiere de un espejo.
13. Espejo: Lo requieren los microscopios que trabajan con lmparas externas y
permite reflejar hacia arriba la luz que debe pasar a travs del diafragma, la platina, la
preparacin y el sistema ptico. El espejo plano se utiliza cuando hay bastante luz y el
cncavo cuando hay poca luz.
14. Condensador: concentra el haz luminoso en la preparacin.
15. Diafragma: regula la cantidad de luz que pasar a travs de la preparacin.
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16. Lentes: Las lentes son el componente ms importante del microscopio; se fabrican
de vidrio u otros materiales transparentes. Pueden ser convexas o cncavas en ambas
superficies, planas en una cara o tener cualquier combinacin de stas dos formas en
su superficie. Las lentes son de dos tipos: positivas y negativas.
Lentes Positivas: Hacen converger los rayos de
formar una imagen real.
Lentes Negativas: Hacen divergir los rayos de luz, sin formar ninguna imagen
real.
El microscopio es el instrumento ms caracterstico de un laboratorio microbiolgico.
Esencial para la observacin de los microorganismos que permiten un amplio rango de
aumentos. Los microscopios son, de dos tipos: de luz y electrnicos, segn el principio
en que se basa su poder de magnificacin.
En los microscopios de luz, el aumento se obtiene por medio de un sistema de lentes
pticos; en los electrnicos se emplea un rayo de electrones, en vez de luz y campos
electromagnticos en lugar de lentes, para lograr la imagen aumentada.
TIPOS DE MICROSCOPIO
Microscopio ptico:
Seguramente es el ms conocido, ya sea por fotos, ilustraciones o porque es el que se
usa en el laboratorio de las escuelas. Est formado por numerosas lentes que pueden
aumentar la visualizacin de un objeto.
Algunos microscopios pticos puede agrandar la imagen por encima de las 2.000
veces. Con este tipo de instrumento se pueden ver tejidos vivos y observar los cambios
que ocurren en un perodo de tiempo.
Microscopio electrnico:
Funciona mediante el uso de ondas electrnicas. El "bombardeo" de electrones permite
obtener imgenes ampliadas de la muestra, las que se proyectan sobre una pantalla
como la del televisor. El microscopio electrnico puede aumentar la imagen de un
objeto entre 50.000 y 400.000 veces.
Microscopio de efecto tnel:
Este microscopio utiliza una especie de aguja cuya punta es tan fina que ocupa un slo
tomo. Esta punta se sita sobre el material y se acerca hasta una distancia
determinada. Luego se produce una dbil corriente elctrica.
Al recorrer la superficie de la muestra, la aguja reproduce la informacin atmica del
material de estudio en la pantalla de una computadora. Los materiales que pueden
observarse con este tipo de microscopio tienen sus limitaciones; deben, por ejemplo,
conducir la electricidad y ser elementos que no se oxiden: como el oro, el platino o el
grafito, entre otros.
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TINCION DE GRAM
Entre los tipos de preparaciones del segundo tipo, hay un mtodo de tincin que se usa
universalmente para distinguir a las bacterias en dos grandes grupos: se trata de la
Tincin de Gram. Es una tincin diferencial que basa su distincin en la estructura
diferente de la pared bacteriana de las bacteria Gram + (pared ms gruesa, y una sola
capa de peptidoglucano) y de las Gram- (pared ms delgada y dividida en dos partes).
El procedimiento y sustancias usadas son:
Colorante bsico Cristal Violeta o Violeta de Genciana: Es el primer
colorante que se echa sobre el frotis previamente preparado. Es un colorante
selectivo que tie a todos los microorganismos. Se deja actuar durante un
minuto y se lava con agua a continuacin.
Lugol: Producto compuesto de yodo y yoduro potsico. Es un mordiente, que
intensifica al Cristal Violeta haciendo que precipite. Se deja actuar un minuto y
se lava con alcohol, el tiempo justo para que no se arrastre el colorante del todo.
Soluciones
aplicadas por
su orden
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GRAM -
Cristal
Violeta
La bacterias se tien en
violeta
Lugol
Complejo CV I se forma
dentro de las bacterias
Alcohol
Safranina
Bacilos Gram-positivos
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Bacilos Gram-negativos
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BACTERIAS
Se considera que las bacterias son los organismos ms pequeos de vida libre
existentes en la naturaleza, ya que son capaces de crecer y reproducirse utilizando
nutrientes del ambiente donde se encuentran. Las bacterias son organismos
extremadamente pequeos.
TIPOS MORFOLGICOS DE LA BACTERIA
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Cocos:
Bacilos:
Espirilos:
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COLORACIN DE BACTERIAS
1. Preparacin de lminas utilizando
el mtodo Gram para la coloracin:
2. Usar laminas limpias y pasarlas
varias veces cortando la llama del
mechero Bunsen.
3. Dejar enfriar la lmina y colocar
sobre ella una gotita de suero
fisiolgico con el inoculador.
4. Esterilizar el
enfriar.
inoculador y dejarlo
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Ocular
N1 : CELULA
10x
LAMINA
Objetivo Aument
s
os
10x
100x
43x
LAMINA:
CELULA DE430x
LA CEBOLLA
OBJETIVO:10X
OCULAR:10X
AUMENTO:100XN2
10x
DESCRIPCION DE LO OBSERVADO:
97x
970x
10x
100x
43x
430x
97x
970x
ncleo de la cebolla
10x
100x
10x
retcula N3
endoplasmtica
43x
430x
97x
970x
10x
100x
N4
OBJETIVO:43X
43x
430x
OCULAR:10X
97x
AUMENTO:430X
10x
DESCRIPCION DE LO OBSERVADO:
970x
N5
10x
16x
43x
688x
97x
1552x
160x
retcula endoplasmtica
pigmentacin de la cebolla
(color violeta)
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OBSERVACIONES A LA CEBOLLA:
Coloracin de Bacterias:
GRUP
O
AMBIENTE
Laboratorio de
Microbiologa
N 1
Huella Digital
CARCTERES DE LAS
COLONIAS
FORM
A
AGRUPACIO
N
GRAM
Tamao: 1mm
Borde: Liso
Elevacin: Plana
Carcter ptico: Opaco
Pigmentacin: Crema
Cocos
Estreptococos
Positivo
Tamao:
Borde: Risoide
Elevacin: Convexa
Carcter ptico:
Cocos
Estafilococos
Positivo
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Trslucido
Pigmentacin: Crema
Tubo N 2
N 2
Cantidad de
crecimiento:
Abundante
Distribucin de
crecimiento: Distante
Tubo N3
Fotocopiadora
N 3
Placa 4
No estril
Tubo N 2
Tubo estril +
Pipeta no estril
N4
Tubo N 3
Tubo no estril
+ Pipeta estril
Pelo
N5
Huella Digital
Cocos
Estreptococos
Diplococos
Cocos
Bacilo
s
Estreptococos
Bacilos
Simples
Positivo
Positivo
Tamao:10mm
Borde: Liso
Elevacin: Convexo
Carac. pticos: Opaco
Pigmentacin: Crema
Cocos
Estreptococos
Negativ
o
Tamao:2mm
Borde: Liso
Elevacin: Plana
Caract. pticos: Opaco
Pigmentacin: Crema
oscuro
Bacilo
s
Estreptobacil
os
Negativ
o
Cocos
Bacilo
s
Estreptococos
Diplococos
Estreptobacil
os
Cocos
Bacilo
s
Estreptococos
Bacilo Simple
Cocos
Estafilococos
Bacilo
s
Diplobacilos
Cantidad de
crecimiento:
Abundante
Distribucin de
crecimiento:
uniformemente
distribuido.
Olor: Ptrido
Cantidad de
crecimiento:
Abundante
Distribucin de
crecimiento: Pelcula
Olor: Ptrido fuerte
Tamao: 1 mm
Borde: Liso
Elevacion: Convexa
Carcter ptico: Opaca
Pigmentacion: Amarillo
Tamao: 3 mm
Borde: Ondulante
Elevacion: Plana
Carcter ptico: Opaca
Pigmentacion: Crema
Positivo
Positivo
Negativ
o
Positivo
IV. DISCUSIONES
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Microbiologa Sanitaria I
V.
V. CONCLUSIONES
Aprendimos que el microscopio es muy importante para el estudio del
microscopio y til as como tambin muy delicado y su manipulacin requiere
mucho cuidado.
Con el mtodo de la coloracin de Gram que fue explicado ya podemos observar
las caractersticas de las bacterias como la forma y la agrupacin.
Ahora sabemos que y un microorganismo Gram positivo aparecer teido de
color azul y un organismo Gram negativo tendr el color rojo.
VI. RECOMENDACIONES
Sostener de manera adecuada el microscopio. Y seguir las instrucciones de las
hojas sobre el manejo del mismo.
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Tratar, en lo posible, que el cultivo no sea viejo; pues eso podra ocasionar que al
hacer la coloracin, las Gram positivas se decoloren.
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