MICROBIOLOGA GENERAL

CARRERA DE QUMICA FARMACETICA

Sergio Rodrigo Quisberth Barrera M.Sc.

ser_barr@hotmail.com

La Paz Bolivia
27 de abril del 2015

Introduccin
El objetivo de controlar el crecimiento microbiano es
reducir la carga microbiana o el nmero de
microorganismos viables presentes en un material,
alimento o en una solucin.

Introduccin
Esterilizacin: Eliminacin
microorganismos.

muerte

de

todos

los

Sanitizante: Agente que disminuye la carga microbiana total a

un nivel el cual es seguro para la salud de la poblacin.
Desinfectante: Agente que elimina la carga microbiana total en
superficies inanimadas tales como habitaciones.
Antisptico: Agente que controla y reduce la presencia de
microorganismos potencialmente patgenos sobre piel y/o
mucosas.

Introduccin
Criterio de muerte de un microorganismo: Prdida
irreversible de la capacidad de reproduccin en un medio
adecuado. Tambin implica destruccin de la clula
Proliferacin: Desarrollo y crecimiento con incremento
del tamao poblacional del microorganismo
Supervivencia: No hay muerte ni proliferacin,
permaneciendo los microorganismos inactivos o inhibidos.

Introduccin

Sobrevivientes por
unidad de volumen

Logaritmo de los
sobrevivientes por
unidad de volumen

100%

Tiempo (horas)

Cuando una poblacin microbiana se expone a un agente

letal, la cintica de la muerte es casi siempre exponencial.

Introduccin
Factores que afectan el control de los microorganismos
El nmero de microorganismos
El tiempo de exposicin.
La concentracin del agente de control
Condiciones ambientales locales
El tipo de microorganismos
La temperatura
El estado fsico de el microorganismo

Introduccin
El nmero de microorganismos
A mayor nmero de microorganismos o resistencia de la
poblacin se necesitar mayor tiempo de esterilizacin.
Para determinar el nmero de sobrevivientes es
necesario conocer el tamao inicial de la poblacin.
Para establecer los procedimientos de control hay que
considerar dos factores: la tasa de mortalidad y el
tamao de la poblacin inicial

Introduccin
Tiempo de reduccin
decimal (D)
Es el tiempo necesario
para
reducir
la
densidad
de
una
poblacin al 10% del
original a una T
determinada

Introduccin
Caso terico de desinfeccin
Tiempo Supervivientes

Muertes por
unidad de tiempo

Total
muertes

Porcentaje
total de
muertes

1.

1.000.000

2.

100.000

900.000

900.000

90,0000%

3.

10.000

90.000

990.000

99,0000%

4.

1000

9.000

999.000

99,9000%

5.

100

900

999.900

99,9900%

6.

10

90

999.990

99,9990%

7.

999.999

99,9999%

Introduccin

valor-Z (Z)
El valor-Z es el cambio
de temperatura que se
requiere para modificar
el valor D por un factor
de 10.

Introduccin

Introduccin
Efecto de la concentracin del agente de control
Efecto de diferentes concentraciones de fenol sobre una
poblacin de E. coli

Tiempo (minutos)

Introduccin
Condiciones Ambientales
El calor es ms eficaz en un medio cido que en uno
alcalino.
La consistencia del material, acuoso o viscoso, influye
marcadamente en la penetracin del agente.
Las concentraciones altas de carbohidratos aumentan,
por lo general, la resistencia trmica de los organismos.

Introduccin
Condiciones Ambientales
La presencia de materia orgnica extraa reduce la
eficacia de los agentes antimicrobianos :
No permite que el agente llegue al microorganismos
Se combina con el desinfectante y lo precipita
Se combina con el desinfectante y lo inactiva dejando libres
concentraciones tan bajas que no logran el efecto deseado sobre la
poblacin microbiana

Introduccin
La naturaleza del microorganismo
Desinfeccin por UV

Introduccin
La temperatura
La muerte de microorganismos como consecuencia de
un tratamiento a altas temperaturas sigue una cintica
exponencial.
N ufc

dN
dt

tiempo

= - KN

Introduccin
La temperatura
=

D =K

( )

( )
=

( )

Introduccin
La temperatura
Problema
Determinar el valor del tiempo de reduccin decimal a 116
C (D116) de un microorganismo a partir de los siguientes
datos de supervivencia al tratamiento
Duracin del tratamiento
(min)

Nmero de viables
(UFC/ml)

340.0

10

65.0

15

19.0

20

4.5

25

1.3

D116 8,27 min

Introduccin

La temperatura
Problema
Se ha determinado que para esporas de Clostridium
botulinum suspendidas en buffer fosfato el D121 = 0.204
min, Cunto tiempo llevara reducir una poblacin de
1012 esporas de C. botulinum en buffer fosfato a 1 espora
a 121C?
t f 2,448 min

Introduccin

La temperatura
Problema
Para un microorganismo determinado el valor D104.4 es
113.0 min. y D121.1 es 2.3 min. Calcular el valor z.

Z 9,9o C

Introduccin
Agentes antibacterianos esterilizantes y/o desinfectantes

Provocan prdida de la viabilidad en los microorganismos

Fsicos (calor, radiaciones)
Qumicos (xido de etileno, formaldehdo, agentes oxidantes,
soluciones antispticas.)

Provocan una separacin de los microorganismos de la

sustancia lquida
Filtracin (se eliminan los microorganismos presentes en un
fluido).

Agentes fsicos

Los agentes fsicos ms empleados para destruir o

eliminar microorganismos no deseables son el
calor y la radiacin.
Esterilizacin por calor
Esterilizacin mediante radiaciones

Agentes fsicos
Calor:
Los microorganismos son susceptibles en distinto
grado a la accin del calor.
Provoca desnaturalizacin de protenas, fusin y
desorganizacin de membranas y procesos
oxidativos.
La efectividad del calor como mtodo de
esterilizacin depende de:
Temperatura
Tiempo de exposicin

Agentes fsicos
Calor Hmedo
El calor hmedo produce desnaturalizacin y
coagulacin de protenas. Estos efectos se debe
principalmente a dos razones:
El efecto del agua a altas temperaturas, ya que
produce reacciones de hidrlisis y desestabilizacin de
puentes de hidrgeno.
El vapor de agua posee un coeficiente de
transferencia de calor mucho ms elevado que el aire.

Agentes fsicos
El autoclave es el equipo
ms utilizado en los
laboratorios
para
esterilizar cultivos y
soluciones y que no se
desnaturalicen
a
temperaturas mayores a
100C.

Agentes fsicos
Los autoclaves de laboratorio :
El tiempo de exposicin depende del volumen del
lquido, de tal manera que para volmenes
pequeos (hasta unos 3 litros) se utilizan 20
minutos a 120 C; si los volmenes son mayores
debe alargarse el tiempo de tratamiento.
Usualmente 15 minutos a 121C

Agentes fsicos
Los autoclaves de laboratorio :
Condiciones :

121C durante 15 minutos, con cargas iniciales bajas

121C durante 30 minutos, con cargas iniciales altas

Indicadores:

Fsicos: Temperatura y/o presin

Qumicos: Tira reactiva.

Indicador biolgico: Geobacillus stearotermophilus o Bacillus

stearotermophilus
(D 121C=1.5 minutos)
Tamao del inculo: 104 esporas

Agentes fsicos
Pasteurizacin
LHT (low temperature holding)
30 minutos a 62.8C
HTST (high temperature short time)
15 segundos a 71.6C
UHT (ultra high temperature)
2 a 4 segundos a una temperatura que oscila entre 130 y
150C, seguido de un rpido enfriamiento, no superior a 32 C

Agentes fsicos
Pasteurizacin
Solo destruye patgenos (Coxiella
burnetti, Mycobacterium tuberculosis, etc.)
y reduce flora de deterioro.
NO ES UN PROCESO DE ESTERILIZACIN
Usos: leche, lcteos, jugos de fruta.

Agentes fsicos

Tindalizacin
100 C 30 min, 3 das sucesivos
Proceso discontinuo con perodos de incubacin intercalados
Usos: Esterilizacin de productos de baja resistencia trmica,
cuando no existe otra opcin.

Agentes fsicos
Ventajas
Rpido calentamiento y penetracin.
Destruccin de bacterias y esporas en corto tiempo.
No deja residuos txicos.
Hay un bajo deterioro del material expuesto.
Econmico.

Desventajas
No permite esterilizar soluciones que formen emulsiones
con el agua.
Es corrosivo sobre ciertos instrumentos metlicos.

Agentes fsicos
Calor Seco
El calor seco produce desecacin de la clula,
efectos txicos por niveles elevados de
electrolitos, procesos oxidativos y fusin de
membranas.
La accin destructiva del calor sobre protenas y
lpidos requiere mayor temperatura cuando el
material est seco o la actividad de agua del medio
es baja.

Agentes fsicos
Calor Seco
Indicadores:

Indicadores fsicos y qumicos

Indicador biolgico esporas de Bacillus subtilis var. niger

(D 160C = 0.3 a 1.8 min, Z=20C, tamao del inculo: =105

esporas)

Agentes fsicos

Existen otras formas de

calor seco.
La incineracin se utiliza
para destruir material
descartable contaminado.
La accin directa de la
llama cuando se lleva al
rojo el material de metal.

Agentes fsicos

Agentes fsicos
Ventajas
No es corrosivo para metales e instrumentos.
Permite la esterilizacin de sustancias en polvo y no
acuosas, y de sustancias viscosas no voltiles.

Desventajas
Requiere mayor tiempo de esterilizacin, respecto al
calor hmedo, debido a la baja penetracin del
calor.

Agentes fsicos
Radiaciones
Baja energa

Actividad
antimicrobiana

Alta energa

Dos tipos: Radiaciones ionizantes

Radiaciones no ionizantes

Agentes fsicos
Radiaciones LUV
La radiacin ultravioleta ha sido utilizada por su actividad
germicida esterilizante por ms de 30 aos.
La accin de los rayos ultravioleta se debe a la produccin
de ozono que logra la asepsia, ya que este gas conserva su
accin inhibidora hasta una dilucin de 1 x 40.000.

Agentes fsicos
Radiaciones LUV
Los
aminocidos
aromticos de las
protenas y las bases
puricas y primidinicas,
en particular la timina
del DNA, son los
principales compuesto
blancos afectados por
la accin bactericida de
la accin ultravioleta.

Agentes fsicos

Agentes fsicos
Radiaciones Ionizantes
Caractersticas:
Alta energa, baja longitud de onda
Gran poder de penetracin
Ionizan tomos y molculas
No requieren altas temperaturas

Tipos:
Rayos gamma (60Co o 137Cs)
Rayos catdicos (electrones acelerados)

Agentes fsicos
Radiaciones Ionizantes
Desventajas: Equipo especial, personal entrenado
No todos los materiales resisten el tratamiento
Reacciones no deseadas en alimentos

Agentes qumicos
Antispticos
Alcoholes
Iodo
Peroxido de hidrogeno
rgano-Mercuriales
Colorantes
Bifenoles
Diamidinas
Anilinas
Compuestos de Aminas Cuaternaria
Halofenoles

Agentes qumicos
Alcoholes
Lesionan la membrana celular de los microorganismos
y desnaturalizan protenas. Desorganizan la estructura
fosfolipdica de la membrana.
No destruyen esporas y tienen una accin germicida
lenta.
Los alcoholes de cadena corta tienen un efecto nocivo
mayor que los de cadena larga. Se utilizan en
concentraciones del 50 al 70%.
Los ms utilizados son el etanol e isoproplico.
McDonnell y Russell. (1999) Antiseptics and Disinfectants: Activity, Action, and Resistance. Clin. Microbiol. 12(1):147.

Agentes qumicos
Iodo
Es un agente oxidante que modifica grupos funcionales de
protenas y cidos nucleicos.
Inactiva protenas y enzimas por oxidacin de los grupos SH a S-S.
Se utiliza como desinfectante de la piel (tintura de iodo:
yodo molecular 2% y yoduro de sodio 2% en alcohol), es
irritante.
Es efectivo contra esporas en una concentracin de 1600
ppm de iodo libre.
A 0,25% presenta un valor D = 6,7 min para Bacillus subtilis y
D = 4,0 min para Staphylococcus aureus.
Amer, Mady, Yusef y Sabry. (2013) Determination of decimal reduction time (D-value) of chemical agents used in
hospitals for killing airborne isolated bacteria. Afr. J. Microbiol. Res. 7(26):3321.

Agentes qumicos
Perxido de Hidrgeno
Es un antisptico dbil, con capacidad oxidante y
formadora de radicales libres.
El perxido de hidrgeno gaseoso se utiliza como
desinfectante de superficies o decontaminante de
gabinetes biolgicos debido a que no posee las
propiedades txicas y cancerigenas del xido de etileno y
formaldehdo.
A 1,5% y pH=3,3 presenta un valor D = 55,2 min para Bacillus
subtilis y D = 3,4 min para Staphylococcus aureus.
Mazzola, Vessoni y S. Martins. (2003) Determination of decimal reduction time (D-value) of chemical agents used in
hospitals for disinfection purposes. BMC Infectious Diseases. 3(24):10.

Agentes qumicos
rgano-Mercuriales
Estos tipos de compuestos se combinan con los
grupos -SH de las protenas, inactivando enzimas.
Dentro de los mercuriales orgnicos se encuentran el
metafen y el mertiolate.

McDonnell y Russell. (1999) Antiseptics and Disinfectants: Activity, Action, and Resistance. Clin. Microbiol. 12(1):147.

Agentes qumicos
Colorantes
Los derivados del trifenilmetano bloquean la
conversin del cido UDP-acetilmurmico en UDPacetilmuramil-pptido.

R = HSO4- Verde Brillante

R = Cl- Verde de Malaquita

Violeta de Genciana

McDonnell y Russell. (1999) Antiseptics and Disinfectants: Activity, Action, and Resistance. Clin. Microbiol. 12(1):147.

Agentes qumicos
Bifenoles
Los derivados de compuestos derivados de dos
fenoles unidos por diferentes puentes.
Aparentemente actuan a nivel de la membrana celular,
se vio que el triclosan desestabiliza la membrana
celular y el hexaclorofeno inhibe la cadena de
transporte de electrones
Triclosan

McDonnell y Russell. (1999) Antiseptics and

Disinfectants: Activity, Action, and Resistance. Clin.
Microbiol. 12(1):147.

Hexaclorofeno

Agentes qumicos
Diamidinas
Son compuestos que vienen en forma de Isetionato,
su mecanismo de accin esta relacionado con el
ingreso de oxigeno en la bacteria pero no esta
descrito del todo.
Clnicamente son empleados en el tratamiento tpico
de heridas superficiales.

Dibromo propamidina
McDonnell y Russell. (1999) Antiseptics and Disinfectants: Activity, Action, and Resistance. Clin. Microbiol. 12(1):147.

Agentes qumicos
Anilidas
Son compuestos que destruyen el carcter
semipermeable de las membranas, generalmente se
usan en Javoncillos y desodorantes.
El compuesto mas empleado es el Triclocarban (3, 4, 4
Triclorocarbanilida) o TCC

Triclocarban
McDonnell y Russell. (1999) Antiseptics and Disinfectants: Activity, Action, and Resistance. Clin. Microbiol. 12(1):147.

Agentes qumicos
Compuestos de Aminas Cuaternaria
Son detergentes que producen dao a nivel de la
membrana celular de las bacterias.
Entre los ms empleados se encuentra el CTAB,
cetrimida y sales de Benzalkonium.

Cetrimida CTAB

Cloruro de Benzalkonium

McDonnell y Russell. (1999) Antiseptics and Disinfectants: Activity, Action, and Resistance. Clin. Microbiol. 12(1):147.

Agentes qumicos
Desinfectantes y/o Esterilizantes
Cloro y Compuestos clorados
Aldehdos
Oxido de Etileno
Compuestos Fenlicos
Biguanidinas

Agentes qumicos
Cloro y sus derivados
El cloro, los hipocloritos y las cloraminas son
desinfectantes que actan sobre protenas y cidos
nucleicos de los microorganismos.
Oxidan grupos -SH, y atacan grupos aminos, indoles y
al hidroxifenol de la tirosina.
El producto clorado ms utilizado es el hipoclorito de
sodio (lavandina), su actividad bactericida se debe al
cido hipocloroso (HClO) y el Cl2 que se forman
cuando el hipoclorito es diluido en agua.
McDonnell y Russell. (1999) Antiseptics and Disinfectants: Activity, Action, and Resistance. Clin. Microbiol. 12(1):147.

Agentes qumicos
Cloro y sus derivados
El hipoclorito de sodio se comercializa en soluciones
concentradas (50-100 g/l de Cloro activo) y Generalmente,
se utilizan soluciones con una concentracin del 0.1-0.5% de
Cloro activo.
Su actividad est influida por la presencia de materia
orgnica.
A 0,025% presenta un valor D = 20,6 min para Bacillus
subtilis y D = 4,7 min para Staphylococcus aureus

Mazzola, Vessoni y S. Martins. (2003) Determination of decimal reduction time (D-value) of chemical agents used in
hospitals for disinfection purposes. BMC Infectious Diseases. 3(24):10.

Agentes qumicos
Aldehdos
Agentes alquilantes que actan sobre protenas,
produce modificacin irreversible de enzimas e
inhibicin de la actividad enzimtica.
Se utilizan como desinfectantes y esterilizantes.
Destruyen esporas.

Glutaraldehido

Paraformaldehido

Formaldehido

Agentes qumicos
Aldehdos
El glutaraldehdo es el nico esterilizante efectivo
en fro.
El formaldehdo como gas se utiliza para
descontaminar edificios, ambientes, etc.
El formaldehdo gaseoso se obtiene por
calentamiento del paraformaldehdo, tiene la
desventaja de ser muy irritante, ser cancerigeno y
perder actividad en ambientes refrigerados.

Agentes qumicos
Oxido de Etileno
Agente alquilante se une a compuestos con
hidrgenos lbiles como grupos carboxilos, amino,
sulfhidrilos, hidroxilos, etc.
Utilizado en la esterilizacin gaseosa, generalmente en
industria farmacutica. Sirve para esterilizar material
termosensibles. Es muy peligroso

Agentes qumicos
Compuestos Fenlicos
Son desinfectantes que provocan lesiones en la
membrana citoplasmtica porque desordenan la
disposicin de las protenas y fosfolpidos.
El fenol no es usado a menudo como desinfectante
por ser muy irritante, por ser cancergeno y por el
resido que queda luego de tratar las superficies.

Agentes qumicos
Compuestos Fenlicos
Los derivados del fenol ms utilizados son el
hexaclorofeno y los cresoles.
Son efectivos a bajas concentraciones contra formas
vegetativas de bacterias.
No son efectivos contra esporas.

Agentes qumicos
Biguanidinas
Son compuestos que a bajas concentraciones afectan
la integridad de la membrana, y que a altas
concentraciones producen congelamiento del
citoplasma.
Entre los mas usados estn: Clorhexidina, Alexidina.

Clorhexidina

Agentes qumicos
Espectro de Actividad
Compuesto
Qumico
Amonio
cuaternario

Bacteria
Gram +

Gram -

Esporas

Hongos y
Levaduras

+++

+/-

+/-

+/-

Aldehdos

+/-

++

++

++

++

Cloro

+++

+++

++

Iodo
Tenso activos

+++
+

+++
+

++
-

++
+

+
-

Alcoholes

Mercuriales

+/-

+++

+/-

+/-

++

+/-

Fenoles

Virus

Resistencia Agentes Qumicos

McDonnell y Russell. (1999) Antiseptics and Disinfectants: Activity, Action, and Resistance. Clin. Microbiol. 12(1):147.

Resistencia Agentes Qumicos

McDonnell y Russell. (1999) Antiseptics and Disinfectants: Activity, Action, and Resistance. Clin. Microbiol. 12(1):147.

Resistencia Agentes Qumicos

McDonnell y Russell. (1999) Antiseptics and Disinfectants: Activity, Action, and Resistance. Clin. Microbiol. 12(1):147.

Resistencia Agentes Qumicos

McDonnell y Russell. (1999) Antiseptics and Disinfectants: Activity, Action, and Resistance. Clin. Microbiol. 12(1):147.

Agentes qumicos
EVALUACION DE LA ACTIVIDAD ANTIMICROBIANA
DE LOS DESINFECTANTES Y ANTISEPTICOS
Existen varios mtodos para determinar la actividad
antimicrobiana de los compuestos.
Tcnica de dilucin en tubo.
Tcnica de la placa de agar.

Agentes qumicos
Tcnica de dilucin en tubo
Primero se realizan diferentes diluciones del agente
qumico.
El mismo volumen de cada dilucin se dispensa en
tubos estriles.
A cada tubo se le aade la misma cantidad de una
suspensin del microorganismo utilizado como prueba
(0.5 de la escala de Mac Farland).
Estos tubos inoculados se incuban a la temperatura
ptima de crecimiento del microorganismo utilizado
como prueba durante 24 a 48 horas.

Agentes qumicos
Tcnica de dilucin en tubo
Al cabo del tiempo se examina el crecimiento por
presencia o ausencia de turbidez en el tubo
Crecimiento (+) turbidez
No crecimiento (-) ausencia de turbidez.

Existen diferente metodologas estandarizadas para

determinar la eficiencia de un desinfectante en tubo.
Concentracin inhibitoria mnima CIM.
Medicin de la turbidez a 580 o 530nm de .

Agentes qumicos
Tcnica de la placa de agar
Se inocula una placa que contenga medio de
cultivo slido con el microorganismo utilizado
como prueba.
El agente qumico se coloca en el centro de la
placa, en un cilindro o impregnado en un disco de
papel.
Estas cajas se incuban a la temperatura ptima de
crecimiento del microorganismo utilizado como
prueba durante 24 a 48 horas.

Agentes qumicos
Tcnica de la placa de agar
Al cabo del tiempo se examina el crecimiento y se
mide el halo de inhibicin del crecimiento.
Sensible con halo de inhibicin alto.
Resistente con halo de inhibicin pequeo.

Existen diferente metodologas estandarizadas para

determinar la eficiencia de un desinfectante en tubo.
Concentracin inhibitoria mnima CBM.
Bauer-Kirby.

Agentes qumicos
Tcnica de la placa de agar

Agentes qumicos
Cepas control
Los controles biolgicos mas empleados son cepas de
la coleccin americana (ATCC)
Staphylococcus aureus ATCC 6538
Bacillus subtilis ATCC 6633
Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027

Esterilizacin por Filtracin

Filtracin
La esterilizacin por filtracin se logra por el paso de un
lquido o un gas a travs de una membrana capaz de
retener los microorganismos presentes.
Se emplea para materiales sensibles al calor, como ciertos
medios de cultivo, azcares, soluciones de antibiticos y
otros medicamentos.
Los microorganismos quedan retenidos en parte por el
pequeo tamao de los poros y en parte por adsorcin a
las paredes del poro durante su paso a travs del filtro
debido a la carga elctrica.

Esterilizacin por Filtracin

Filtracin
Debido al pequeo tamao de los virus, nunca es posible
tener certeza de que por mtodos de filtracin que dejan
libre de bacterias, eliminan tambin los virus.
Segn el tamao del poro se puede lograr esterilidad o
reduccin de los microorganismos.
En las plantas de tratamiento de agua se logra remover
hasta el 90-99% de los microorganismos filtrando el agua
previamente floculada y sedimentada.

Esterilizacin por Filtracin

Filtracin

Esterilizacin por Filtracin

La filtracin se utiliza para
Emulsiones oleosas, aceites, algunos tipos de
pomadas.
Soluciones termolbiles: lquidos biolgicos (suero de
animales, soluciones de enzimas, algunas vitaminas y
antibiticos).
Esterilizar
soluciones
oftlmicas,
soluciones
intravenosas, drogas diagnsticas, radiofrmacos,
medios para cultivos celulares, y soluciones de
antibiticos y vitaminas.

Esterilizacin por Filtracin

La filtracin se puede ser a travs de:
Filtros profundos o Filtros de profundidad.
Filtro HEPA (High Efficiency Particulate Air).
Membranas filtrantes.

Esterilizacin por Filtracin

Filtros profundos o Filtros de profundidad
Estn elaborados de un material fibroso (papel,
asbesto o fibra de vidrio) dispuesto al azar, de manera
que dentro de la estructura del filtro se crean vas
tortuosas donde pueden quedar retenidos la mayora
de los contaminantes presentes.
En este tipo de filtros la retencin de las partculas se
produce por una combinacin de absorcin y de
retencin mecnica en la matriz.

Esterilizacin por Filtracin

Filtros profundos o Filtros de profundidad

Esterilizacin por Filtracin

Filtro HEPA (High Efficiency Particulate Air)
Compuesto por pliegues de acetato de celulosa que
retienen las partculas (includos los microorganismos)
del aire que sale de una campana de flujo laminar o
ambiente.
Remocin hasta el 99.97% de partculas mayores de 0.3
micrones de dimetro.
Se usan en cabinas o habitaciones de flujo laminar
(Industria de Alimentos o Farmaceutica).

Esterilizacin por Filtracin

Filtro HEPA (High Efficiency Particulate Air)
Salida de aire

Entrada
de aire

Protege la
muestra, el
operador y el
medio ambiente

Esterilizacin por Filtracin

Filtracin de ambientes (Salas Blancas)
Las salas blancas, llamadas tambin salas limpias o de
ambiente controlado son un instrumento imprescindible
en determinados procesos de produccin e investigacin.
En la industria alimentaria la contencin de partculas y la
contencin bacteriolgica son requisitos imprescindibles
para la garanta de calidad del producto.
En el mbito de la industria farmacutica, su funcin es
garantizar la calidad en operaciones de fabricacin y
control.

Esterilizacin por Filtracin

Filtracin de ambientes (Salas Blancas)
Numero mximo de partculas permitidas x m iguales a o sobre
Grado

A
B
C
D

En descanso
>=0.5m
>=5.0m
350
0
3500
0
350000
2000
3500000
20000

En operacin
>=0.5m
>=5.0m
3500
0
350000
2000
3500000
20000
No definido
No definido

Grado A y B corresponde a clase 100, M 3.5, ISO 5

Grado C corresponde a clase 10000, M 5.5, ISO 7
Grado D corresponde a clase 100000, M 6.5, ISO 8
OMS. (2002) Clasificacin del Aire en la Unin Europea, gua para Buenas Prcticas de Fabricacin.

Esterilizacin por Filtracin

Filtracin de ambientes (Salas Blancas)
Grado Tipos de Operaciones para preparaciones aspticas.
A

Preparacin asptica y relleno

Condiciones ambientales para actividades requeridas en el Grado A

Preparacin de Soluciones para ser filtradas

Manipulacin de componentes despus del lavado

OMS. (2002) Clasificacin del Aire en la Unin Europea, gua para Buenas Prcticas de Fabricacin.

Esterilizacin por Filtracin

Filtracin de ambientes (Salas Blancas)
ISO
Clase

1
2
3
4
5
6
7
8

Velocidad del Aire a nivel

mesa en FPM

Cambios de Aire
por Hora

Riguroso

70 - 130

>750

Riguroso

70 - 130

>750

Riguroso

70 - 130

>750

Riguroso

70 - 110

500 - 600

Riguroso

70 - 90

150 - 400

Intermedio

25 - 40

60 - 100

Intermedio

10 - 15

25 - 40

3-5

10 - 15

Controles

Menos riguroso

OMS. (2002) Clasificacin del Aire en la Unin Europea, gua para Buenas Prcticas de Fabricacin.

Esterilizacin por Filtracin

Membranas filtrantes
Filtros elaborados generalmente de acetato o nitrato
de celulosa con poros de tamao uniforme.
Tiene como ventaja que, al conocer exactamente el
tamao de poro que presentan, se pueden seleccionar
filtros capaces de retener la totalidad de los
microorganismos presentes en una solucin.
Sin embargo, se saturan rpidamente y la velocidad de
filtracin a travs de ellos es lenta.

Esterilizacin por Filtracin

Membranas filtrantes
La mayor parte de los filtros de membrana se pueden
esterilizar en autoclave y manipular aspticamente al
ensamblar el equipo
Los filtros de membrana se utilizan en:
La esterilizacin de lquidos.
En el anlisis microbiolgico de aguas.

Esterilizacin por Filtracin

Membranas filtrantes

Preguntas??