PREPARACION DE MEDIOS DE CULTIVOSLABORATORIO DE

MICROBIOLOGIA
1

AGAR BAIRD PARKER

Medio de alta especificidad diagnstica, selectivo y diferencial para el aislamiento y

recuento de estafilococos coagulasa positiva en alimentos y otros materiales de
importancia sanitaria.
Ingredientes slidos (en gramos)
Digerido
pancretico de
casena

10.0

Extracto de
carne

5.0

Extracto de
levadura

1.0

Cloruro de litio

5.0

Agar

20.0

Glicina

12.0

Piruvato de
sodio

10.0

Telurito potsico

Instrucciones

Suspender 60 g del medio

deshidratado en 940ml de agua
destilada. Dejar en reposo 5 a 10
minutos. Calentar agitando
frecuentemente y hervir durante 1
minuto. Distribuir y esterilizar en
autoclave a 121C (15 libras)
durante 15 minutos. Enfriar a 4550C y agregar 50 ml de la emulsin
de yema de huevo y 10ml de la
solucin de telurito (Cdigo B03601-61). Homogeneizar y distribuir
en cajas de Petri.

0.1

Ingredientes lquidos (ml)

Agua destilada

950

Emulsin de
yema de huevo

50

pH final: 6.8 0.2

Microorganismo
s

Crecimie
nto

E. coli ATCC 25922

Inhibid
o

P. mirabilis ATCC
43071

Bueno

S. aureus ATCC 25923

UNAC - FIQ

Bueno a
excelente

Apariencia

---

Colonias marrones sin zona clara

u opaca alrededor
Colonias negras con borde
incoloro, convexas, rodeadas de
una zona opaca, con una zona
clara externa.

PREPARACION DE MEDIOS DE CULTIVOSLABORATORIO DE

MICROBIOLOGIA

S. epidermidis ATCC
14990

Escaso o
bueno

Colonias negras, de tamao

irregular. Zona opaca alrededor
de la colonia (no hay zona clara).

Siembra
Dejar secar la superficie de la placa preparada y extender 0.1 ml de la dilucin de la
muestra
a
analizar.
Incubacin
24-48 horas a 35-37 C, en aerobiosis.

AGAR CETRIMIDE

Es un medio selectivo utilizado para el aislamiento de Pseudomonas aeruginosa

Frmula* por litro de agua purificada
Digerido pancretico de
20,0 g
gelatina
Cloruro de magnesio
1,4 g
Sulfato de potasio
10,0 g
Glicerol
10,0 ml
Cetrimida
0,3 g
Agar
13,6
pH 7,2 0,2
ALMACENAMIENTO Y VIDA UTIL
Al recibir las placas, almacenarlas en un lugar oscuro a una temperatura entre 2
y 8C, envueltas en su envase original, hasta justo antes de usarlas. Evitar la
congelacin y el calentamiento excesivo. Las placas pueden inocularse hasta su
fecha de caducidad (ver la etiqueta en el paquete) e incubarse durante los
perodos de incubacin recomendados.
Las placas de grupos de 10 placas ya abiertos pueden usarse durante una
semana siempre que se almacenen en un lugar limpio a una temperatura entre 2
y 8 C.
PA-254419.05 - 2
CONTROL DE CALIDAD DEL USUARIO:
Inocular muestras representativas con las cepas siguientes (para obtener los
detalles, vase el documento

UNAC - FIQ

PREPARACION DE MEDIOS DE CULTIVOSLABORATORIO DE

MICROBIOLOGIA
INSTRUCCIONES GENERALES DE USO). Incubar en atmsfera aerobia a 35
37 C y efectuar la lectura de las placas despus de 18 24 y 42 48 h.
Microorganismos
Pseudomonas aeruginosa
ATCC 9027
Pseudomonas aeruginosa
ATCC 27853
Stenotrophomonas
maltophilia ATCC 13637
Escherichia coli ATCC 25922
Staphylococcus aureus
ATCC 25923
Sin inocular

Resultados del crecimiento

Crecimiento con pigmento verde
azulado alrededor de las colonias;
fluorescencia bajo luz UV (254 nm)
Crecimiento con pigmento verde
azulado alrededor de las colonias;
fluorescencia bajo luz UV (254 nm)
Inhibicin de parcial a completa
Inhibicin completa.
Inhibicin de parcial a completa
Ambar plido

AGAR ENDO

Para el aislamiento de ESCHERICHIA COLI

Agar Endo Cantidades(g)
Peptona de carne
di-potasio
hidrogenofosfato
Lactosa
Sulfito de sodio
Fucsina bsica
Agar
pH 7,5 0,2

10 g
3.5 g
10 g
2.5 g
0.4 g
12.5 g

ALMACENAMIENTO Y VIDA UTIL

Al recibir las placas, almacenarlas en un lugar oscuro a una temperatura entre 2
y 8 C, envueltas en su envase original, hasta justo antes de usarlas. Evitar la
congelacin y el calentamiento excesivo. Las placas pueden inocularse hasta su
fecha de caducidad (ver la etiqueta en el paquete) e incubarse durante los
perodos de incubacin recomendados.
Las placas de grupos de 10 placas ya abiertos pueden usarse durante una
semana siempre que se almacenen en un lugar limpio a una temperatura entre 2
y 8 C.
CONTROL DE CALIDAD DEL USUARIO
Inocular muestras representativas con las siguientes cepas (consultar las
INSTRUCCIONES GENERALES DE USO para obtener instrucciones detalladas).
Incubar las placas en un lugar oscuro durante un perodo de 18 a 24 horas a una
temperatura de 35 2 C en un ambiente aerobio.

UNAC - FIQ

PREPARACION DE MEDIOS DE CULTIVOSLABORATORIO DE

MICROBIOLOGIA

Microorganismos
E. coli

Endo Agar
Colonias de rosa oscuro a
rojizo, brillo verde metlico
Colonias grandes, mucoides,
de color rosa
Colonias desde incoloras
hasta rosa muy plido,
proliferativas
Colonias desde incoloras
hasta rosa muy plido
Colonias desde incoloras
hasta rosa plido
Colonias irregulares, incoloras
Crecimiento nulo o escaso

Enterobacter/Klebsiella
ProteusProteus

Salmonella
Shigella
Pseudomonas
Bacterias gram-positivas

AGAR MCCONKEY
Para el aislamiento de COLIFORMES
Agar Mac Conkey
Peptona de casena
Peptona de carne
Cloruro de sodio
Lactosa
Sales biliares
Rojo neutro
Cristal violeta
Agar

Cantida
des
17g
3g
5g
10g
1.5g
0.03g
0.001g
13.5g

pH 7.1 0.2

Incubacin
Durante 18-48 horas, a 35-37 C, en atmsfera aerbica
CONTROL DE CALIDAD DEL USUARIO:

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MICROBIOLOGIA
Inocular las placas por estra o con hisopo, asegurndose de que con cualquiera de los
dos mtodos se tengan colonias aisladas. Incubar las placas a 35 0.2C durante 18 a
24 hrs. Si no hay desarrollo a las 24 hrs, reincubar las placas por 24 horas ms.

Microorganismos

Colonias

Escherichia coli ATCC 25922

Rojas con halo turbio

Klebsiella pneumoniae ATCC

700603

Rosadas mucosas

Salmonella typhimurium ATCC

14028

Incoloras, transparentes

Shigella flexneri ATCC 12022

Incoloras, transparentes

Proteus mirabilis ATCC 43071

Incoloras, transparentes

Enterococcus faecalis ATCC 29212

Diminutas, incoloras,
opacas

AGAR PLATE COUNT

Para el aislamiento de BACTERIAS AEROBIAS MESFILAS

UNAC - FIQ

PREPARACION DE MEDIOS DE CULTIVOSLABORATORIO DE

MICROBIOLOGIA
Agar Plate Count
Extracto de levadura
Extracto de carne
Peptona de casena
Cloruro de sodio

Cantidad
es
5g
3g
15g
5g

pH 7.2 0.2

CONTROL DE CALIDAD
Comprobar si hay signos de deterioro. El control de calidad debe ser
llevado a cabo con al menos un organismo que demuestre la actuacin
esperada. No usar si el resultado del control del microorganismo es
incorrecto. La lista de abajo ilustra una variedad de actuaciones de las
cepas de control de uso rutinario, que el usuario final puede obtener
fcilmente.

-Medio deshidratado: crema en polvo, de flujo libre y homogneas.

-Preparado medio: Agar mbar claro.
-Respuesta cultivo tpico despus de72 horas de incubacin a30C

AGAR SABOURAUD GLUCOSADO

UNAC - FIQ

PREPARACION DE MEDIOS DE CULTIVOSLABORATORIO DE

MICROBIOLOGIA
El Agar de Glucosa Sabouraud corresponde a las
recomendaciones de la USP y de la Ph. Eur. para recuento de
hongos y levaduras, ya que se trata de un medio que suministra
todos los requerimiento nutritivos necesarios.

FRMULA (EN GRAMOS

POR LITRO)
Puliripepto
na

10.0

Glucosa

40.0

Cloranfenic
ol

0.05

Agar

5.0

INSTRUCCIONES

Suspender 65 g del polvo por litro de

agua destilada. Reposar 5 minutos y
mezclar hasta uniformar. Calentar
agitando frecuentemente y hervir 1
minuto hasta disolver. Distribuir y
esterilizar 15 minutos a 118-121C.
Mantener en lugar fresco, pues la
exposicin al calor hidroliza los
componentes. Distribuir en placas o en
tubos con cierre hermtico.

pH final: 6.8 0.2 (25 C)

Incubar
Entre 25 37 C de 3 a 5 das

UNAC - FIQ

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MICROBIOLOGIA

AGAR BACILLUS CEREUS SELECTIVO

Mossel concibi este medio para la deteccin y enumeracin de Bacillus cereus en
todo tipo de limentos. Adems del recuento, este medio permite definir determinadas
caractersticas de este microorganismo: la resistencia a la Polimixina B, la produccin
de lecitinasa y la no fermentacin del Manitol.

AGAR BPLS

Para el aislamiento de SALMONELLA

Agar BPLS (Brilliant-greet phenolred lactose sucrose agar)

UNAC - FIQ

Cantida
des

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MICROBIOLOGIA
Peptona de carne
Cloruro de sodio
Lactosa
Rojo de fenol
Verde brillante
Agar

7g
5g
15g
0.04g
0.05g
13g

pH 6.5
Incubacin
Incubar 24 horas a 35-37C.
Microorganismos

AGAR DCLS

(Agar sacarosa desoxicolato citrato lactosa) es un medio moderadamente selectivo

diferencial para el aislamiento de Salmonella, Shigella y vibriones de clera en las
heces y otras sustancias.

UNAC - FIQ

PREPARACION DE MEDIOS DE CULTIVOSLABORATORIO DE

MICROBIOLOGIA
Frmula* por litro de agua destilada
Composicin
Digerido pancretico
de casena
Digerido pptico de
tejido animal
Extracto de carne
bovina
Lactosa
Sacarosa
Desoxicolato de sodio
Citrato sdico
Tiosulfato sdico
Rojo neutro
Agar

3,5 g
3,5
3,0
5,0
5,0
2,5 g
10,5
5,0
0,03
12,0

ALMACENAMIENTO Y VIDA UTIL

Al recibir las placas, almacenarlas en un lugar oscuro a una temperatura entre 2
y 8 C, envueltas en su envase original, hasta justo antes de usarlas. Evitar la
congelacin y el calentamiento excesivo. Las placas pueden inocularse hasta su
fecha de caducidad (ver la etiqueta en el paquete) e incubarse durante los
perodos de incubacin recomendados.
Las placas de grupos de 10 placas ya abiertos pueden usarse durante una
semana siempre que se almacenen en un lugar limpio a una temperatura entre 2
y 8 C.
CONTROL DE CALIDAD DEL USUARIO
Inocular muestras representativas con las siguientes cepas (consultar las
INSTRUCCIONES GENERALES DE USO para obtener instrucciones detalladas).
Incubar las placas en condiciones aerobias a una temperatura entre 35 y 37 C, por un
perodo de 18 a 48 horas. Leer al cabo de 18 a 24 horas e incubar nuevamente en caso
necesario.
Microorganismos
E. coli
Enterobacter/Klebsi
ella
Proteus
Salmonella/Shigella
Pseudomonas
Vibrio cholerae
Bacterias grampositivas

10 AGAR MANITOL SALADO

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Resultados del crecimiento

Colonias grandes, planas, de color rosa o rojo
con una zona de precipitacin biliar
Colonias grandes, mucoides, de color rosa
Colonias incoloras o rojas dependiendo de la
especie
Colonias incoloras o de color anaranjado plido
Colonias desde incoloras hasta marrn o verde
Colonias de incoloras a rojas
Crecimiento nulo o escaso

PREPARACION DE MEDIOS DE CULTIVOSLABORATORIO DE

MICROBIOLOGIA

Para el aislamiento de STAPHYLOCOCCUS

AUREUS
Es un medio de diferenciacin selectivo para el
aislamiento y el recuento de estafilococos a partir
de muestras clnicas y no clnicas y su
diferenciacin segn la fermentacin de manitol.

Agar Manitol Salado

Peptona de carne
Extracto de carne
Cloruro de sodio
d-manita
Rojo de fenol
Agar

Cantida
des
10g
1g
75g
10g
0.025g
12g

pH 7.4 0.2
Incubacin
De rutina: durante 18-24 horas a 35-37 C, en aerobiosis.
La American Public Health Association (A.P.H.A) recomienda la incubacin durante 3
das a 32 C, en aerobiosis.

Microorganismos

Crecimiento

Caractersticas de las
colonias

Staphylococcus aureus ATCC

25923

Excelente

Amarilla

Staphylococcus epidermidis
ATCC 14990

Bueno

Roja

Escherichia coli ATCC 25922

Inhibido

Inhibido

Klebsiella pneumoniae ATCC

700603

Inhibido

Inhibido

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MICROBIOLOGIA

11 AGAR OGY

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MICROBIOLOGIA

12 MILK PLATE COUNT

USO: Agar leche es recomendado por el British
Standards Institute
para la enumeracin de
microorganismos en leche lquida, helado, leche en
polvo y suero de leche.
PRINCIPIO: Peptona
y
extracto
de
levadura
proporcionan nutrientes esenciales mientras leche
desnatada en polvo es una fuente de casena. La
dextrosa es el carbono fuente de energa. El agar es el
agente de solidificacin.Bacterias proteolticas estar
rodeado por una zona clara de la conversin de la casena en solubles en
compuestos nitrogenados.
Formula en gramos por litro de agua destilada
Frmula (en gramos por litro)
Triptona

5
.
0

Extracto de levadura

2
.
5

Dextrosa

1
.
0

Leche desnatada en polvo (sin

antibiticos)

1
.
0

Agar

1
2
.
0
pH final: 7.2 0.2 (25 C)

CONTROL DE CALIDAD DEL USUARIO

UNAC - FIQ

PREPARACION DE MEDIOS DE CULTIVOSLABORATORIO DE

MICROBIOLOGIA

13 BD YERSINIA SELECTIVA AGAR Y BD AEROMONAS YERSINIA AGAR

USO: Es un medio selectivo de diferenciacin para el aislamiento de
Yersinia enterocolitica y Aeromonas spp. a partir de diversas muestras
clnicas y no clnicas..
PRINCIPI : En BD Aeromonas Yersinia Agar, las especies
Aeromonas producen colonias plidas con centro rojo carmes, similar
a Yersinia. Ambos organismos pueden diferenciarse mutuamente por
medio de la reaccin de oxidasa (positiva slo para Aeromonas).
Formula en gramos por litro de agua destilada
Frmula (en gramos por litro)
Digerido
pancretico
gelatina

10.
0

Sulfato
magnsico

0.001

Digerido
pptico
de tejido animal

5.0

Cristal
violeta

0.001

Extracto de carne
bovina

5.0

Rojo
neutro

0.03

Extracto

2.0

Cefsulodin

0.004

de

de

UNAC - FIQ

PREPARACION DE MEDIOS DE CULTIVOSLABORATORIO DE

MICROBIOLOGIA

levadura

Manitol

20.
0

Irgasan

0.004

Piruvato sdico

2.0

Novobiocin
a

0.002
5

Cloruro sdico

1.0

Agar

12.0

Desoxicolato
sodio

de

0.5

pH final: 7.4 0.2 (25 C)

CONTROL DE CALIDAD DEL USUARIO

Inocular muestras representativas con las cepas siguientes. Incubar las
placas en atmsfera aerobia a 25 2 C o 35 2 C y efectuar la lectura
despus de 20 24 y 42 48 h.

14 M. ENTEROCOCUS

Para el aislamiento de ENTEROCOCOS

Agar selective para Enterococos

UNAC - FIQ

Cantidades

PREPARACION DE MEDIOS DE CULTIVOSLABORATORIO DE

MICROBIOLOGIA
Peptona de casena
Peptona de harina de soya
Extracto de levadura
Glucosa
di-potasio hidrogenofosfato
azida de sodio
2.3.5 trifeniletrazolio cloruro
Agar

15g
5g
5g
2g
4g
0.4g
0.1g
10g

pH 7.2

Incubar a una temperatura de 20 - 25 C y 30 35 C

CONTROL DE
ACTIVIDADMICROORGANIS
MO
Escherichia coli

CEPA

RESULTADO

ATCC 25922

Crecimiento escaso a inhibido, colonias

transparentes con o sin halo negro

Enterococcus faecalis

ATCC 29212

Buen crecimiento, colonias con periferia

negra

Streptococcus pyogenes

ATCC 19615

Crecimiento escaso a inhibido

15 AGAR XLD
ElagarXLD(Xilosa, Lisina, Desoxicolato) Es UnMedioselectivodiferencial, utilizadoPara
ElAislamientodiferenciacindepatgenosentricosGramNegativos,
especialmentedelGneroShigella.

UNAC - FIQ

PREPARACION DE MEDIOS DE CULTIVOSLABORATORIO DE

MICROBIOLOGIA
Composicin
Xilosa 3,75 g
L- Lisina 5,0 g
Lactosa 7,5 g
Sacarosa 7,5 g
Cloruro de Sodio 5,0 g
Extracto de Levadura 3,0 g
Rojo Fenol 0,08 g
Desoxicolato de Sodio 2,5 g
Tiosulfato de Sodio 6,8 g
Citrato Frrico de Amonio 0,8 g
Agar 15,0 g
Agua destilada c.s.p. 1000 mL
pH final 7,4 0,2
Fundamento
La degradacin de los carbohidratos presentes en el medio (xilosa,lactosa y sacarosa)
genera la produccin de cido haciendo virar el indicador (rojo fenol) de rojo a
amarillo. En este medio se incorpora la xilosa porque es prcticamente fermentada por
todas las enterobacterias con excepcin de los microorganismos pertenecientes al
gnero Shigella.
Colonias tpicas
Las colonias sospechosas de Shigella sobre el agar XLD son transparentes y parecen
rojas por
el color del medio. Este gnero bacteriano al no fermentar la xilosa, la lactosa, ni la
sacarosa, no da lugar a que el rojo fenol vire a amarillo. Como estos microorganismos
tampoco tienen la capacidad de alcalinizar el medio por la descarboxilacin de la
lisina, no se produce color rojo prpura alrededor de las colonias.
Las colonias tpicas de la Salmonella son de color rojo con el centro negro debido a la
produccin de H2S. Mientras que las de E. coli son grandes, amarillas con o sin
precipitado de
bilis.

UNAC - FIQ

PREPARACION DE MEDIOS DE CULTIVOSLABORATORIO DE

MICROBIOLOGIA
16 AGAR SALMONELLA SHIGELLA
USO: BD Salmonella Shigella Agar o SS Agar (agar Salmonella-Shigella BD) es un
medio selectivo y de diferenciacin para el aislamiento de bacilos entricos patgenos,
en especial los pertenecientes al gnero Salmonella.
PRINCIPIOS Y EXPLICACION DEL PROCEDIMIENTO: Mtodo microbiolgico.
El agar Salmonella-Shigella es una modificacin del agar citrato desoxicolato
descrito por Leifson1. Se le considera un

medio moderadamente selectivo segn el

nivel de inhibicin de los microorganismos
gram
positivos
y
Enterobacteriaceae
diferentes de Salmonella y Shigella, que
inhibe por contenido de sales biliares, verde
brillante y citratos.
En
BD
Salmonella
Shigella
Agar,
la
diferenciacin de los organismos entricos se
logra mediante la incorporacin de lactosa en el
medio. Los organismos que fermentan lactosa
producen cido que, en presencia del indicador
rojo neutro, propicia la formacin de colonias de
color rojo. Los organismos no fermentadores de lactosa forman colonias incoloras.
Este ltimo grupo incluye la mayora de los patgenos intestinales, incluidas
Salmonella y Shigella.
Formula en gramos por litro de agua destilada

CONTROL DE CALIDAD DEL USUARIO

Inocular muestras representativas con las cepas siguientes (para obtener
los detalles, vase el documento INSTRUCCIONES GENERALES DE USO).
Incubar las placas en condiciones aerobias a una temperatura entre 35 y 37
C, por un perodo de 18 a 24 horas.

UNAC - FIQ

PREPARACION DE MEDIOS DE CULTIVOSLABORATORIO DE

MICROBIOLOGIA

17 MUELLER HINTON

USO: BD Mueller Hinton II Agar, disponible en

diversos formatos de placa y tamaos de paquete, se
utiliza en el procedimiento de difusin en disco
estandarizado para la determinacin de la sensibilidad
de organismos aerobios de rpido crecimiento ante
agentes antimicrobianos.
PRINCIPIOS Y EXPLICACION DEL PROCEDIMIENTO: Mtodo microbiolgico.
Dado que los laboratorios de microbiologa clnica utilizaban a principio de los
aos 60 una amplia variedad de procedimientos para la determinacin de la
sensibilidad de bacterias a los antibiticos y agentes quimioteraputicos, Bauer,
Kirby y otros desarrollaron un procedimiento estandarizado en el que se
seleccion como medio de prueba el agar Mueller Hinton, un medio originalmente
diseado para el aislamiento de gonococos1-4. Un estudio colectivo internacional
posterior confirm el valor del agar Mueller Hinton para este propsito debido a
su reproducibilidad relativamente buena del medio, la simplicidad de su frmula y
la riqueza delos datos experimentales que se haban acumulado utilizando este
medio5.
Formula en gramos por litro de agua destilada

ALMACENAMIENTO Y VIDA UTIL

Al recibir las placas, almacenarlas en un lugar oscuro a una temperatura entre 2 y

8 C, envueltas en su envase original, hasta justo antes de usarlas. Evitar la
congelacin y el calentamiento excesivo. Las placas pueden inocularse hasta su
fecha de caducidad (ver la etiqueta en el paquete) e incubarse durante los
perodos de incubacin recomendados.
Las placas de grupos de 10 placas ya abiertos pueden usarse durante una
semana siempre que se almacenen en un lugar limpio a una temperatura entre 2
y 8 C.

CONTROL DE CALIDAD DEL USUARIO

Para el control de calidad del usuario, se deben consultar las normas CLSI
apropiadas6 o, si procede, normas nacionales. Sobre todo deben seguirse los
procedimientos descritos a continuacin en Procedimiento de anlisis,
incluidas las cepas de referencia mencionadas en Materiales no
suministrados. Las placas de agar Mueller Hinton II y los discos de
antimicrobianos utilizados deben analizarse al menos dos veces por semana para
determinar el rendimiento adecuado.
Apariencia del medio sin inocular: de incoloro a mbar claro.

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MICROBIOLOGIA

18 AGAR SPS

Para el aislamiento de CLOSTRIDIUM PERFRINGENS

Agar SPS

Cantidad
es

Peptona de casena
Extracto de levadura
Citrato de fierro III
Sulfito sdico
Polimixina B sulfato
Sulfadiazine sdica
Agar

15g
10g
0.5g
0.5g
0.01g
0.12
14g

pH 7.0 0.2

Los resultados se obtuvieron los siguientes en el rendimiento del medio a partir de

cultivos de tipo despus de incubacin a la temperatura de 35 2Cy 2448Observadodespus de horas.

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MICROBIOLOGIA

19 AGAR NUTRITIVO
Medio de cultivo utilizado para propsitos generales,
para el aislamiento de microorganismos poco exigentes
en lo que se refiere a requerimientos nutritivos.
Su uso est descripto en muchos procedimientos para
el anlisis de alimentos, aguas y otros materiales de
importancia
sanitaria.

Fundamento
Por las caractersticas de sus componentes es un medio usado para el cultivo de
microorganismos poco exigentes en sus requerimientos nutricionales. No contiene
inhibidores del desarrollo bacteriano. La pluripeptona es la fuente de carbono y
nitrgeno para el desarrollo bacteriano. El agregado de cloruro de sodio permite el
enriquecimiento con sangre de carnero u otras sustancias para facilitar el cultivo de
microorganismos exigentes.

Frmula (en gramos por litro)

Pluripeptona

Instrucciones

5.0

UNAC - FIQ

Suspender 31 g de polvo por litro de agua

destilada. Mezclar y dejar reposar 5

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MICROBIOLOGIA

Extracto de carne

Cloruro de sodio

Agar

3.0

8.0

minutos. Calentar suavemente agitando y

hervir 1 o 2 minutos hasta su disolucin.
Distribuir y esterilizar a 121C durante 15
minutos.

15.0

pH final: 7.3 0.2

Siembra
En superficie o por la tcnica de pour plate, segn el uso a que se destine.
Incubacin
En aerobiosis, a 35-37 C durante 24 horas.

20 AGAR MIO
Medio
usado
para
la
identificacin
de
Enterobacteriaceae en base a su movilidad,
actividad de ornitina decarboxilasa y produccin de
indol.

Fundamento
Medio de cultivo semislido, altamente nutritivo debido a la presencia de extracto de
levadura, peptona y triptena. Adems, la triptena aporta grandes cantidades de
triptofano, sustrato de la enzima triptofanasa, para la realizacin de la prueba del indol.
La dextrosa es el hidrato de carbono fermentable, la ornitina es el sustrato para la

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PREPARACION DE MEDIOS DE CULTIVOSLABORATORIO DE

MICROBIOLOGIA
deteccin de la enzima ornitina decarboxilasa, el prpura de bromocresol es el
indicador de pH, que en medio alcalino es de color prpura y en medio cido es
amarillo.
Por su composicin, es posible detectar 3 reacciones en un mismo tubo: movilidad,
presencia de ornitina decarboxilasa e indol.
La movilidad se demuestra por un enturbiamiento del medio o por crecimiento que
difunde mas all de la lnea de inoculacin.
La reaccin positiva a la ornitina est dada por un color prpura del medio. Debido a la
fermentacin de la glucosa se reduce el pH produciendo una condicin cida y
originando que el indicador de pH prpura de bromocresol vire al amarillo. La presencia
de acidez, otorga condiciones ptimas para la actividad de la enzima ornitina
decarboxilasa, la cual decarboxila la ornitina presente. Por decarboxilacin, se
alcaliniza el medio, con el consecuente viraje del indicador hacia el color prpura.
El indol, es producido a partir del triptofano por los microorganismos que contienen la
enzima triptofanasa. El desarrollo de un color rojo luego de agregar unas gotas de
reactivo de Kovacs o de Erlich, indica un resultado positivo.
Frmula (en gramos por litro)
Dextrosa

1.0

Extracto de levadura

3.0

Peptona

10.0

Triptena

10.0

Clorhidrato de Lornitina

5.0

Agar

2.0

Prpura de
bromocresol

Instrucciones
Suspender 31 g del polvo en un
litro de agua destilada. Calentar a
ebullicin hasta completa
disolucin. Distribuir en tubos y
esterilizar 15 minutos a 121C.

0.02

pH final: 6.5 0.2

Siembra
A partir de un cultivo puro del microorganismo en estudio, inocular por puncin
profunda con ansa recta.
Incubacin
En aerobiosis, durante 18-24 horas a 35-37 C.

21 AGAR BASE SANGRE

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MICROBIOLOGIA
Medio para propsitos generales, para el aislamiento y
cultivo de numerosos microorganismos.Con la adicin
de sangre, el medio es til tanto para el aislamiento y
cultivo de microorganismos aerobios y anaerobios
nutricionalmente exigentes a partir de una gran
variedad de muestras, como para la observacin de
reacciones
de
hemlisis.
Tambin, este medio de cultivo, puede utilizarse como
medio base para preparar el medio agar chocolate.
Fundamento
La infusin de msculo de corazn y la peptona, otorgan al medio un alto valor
nutritivo, que permite el crecimiento de una gran variedad de microorganismos, an de
aquellos nutricionalmente exigentes. El cloruro de sodio mantiene el balance osmtico.
El agregado de sangre al medio de cultivo, en concentracin final de 5-10 %, aporta
nutrientes para el crecimiento bacteriano, y permite detectar hemlisis.
Frmula (en gramos por litro)
Infusin de msculo de corazn
Peptona

375.0
10.0

Cloruro de sodio
Agar

5.0
15.0

pH final: 7.3 0.2

Instrucciones
Suspender 40 g del polvo en un litro de agua destilada. Dejar reposar 5 minutos y
mezclar perfectamente hasta obtener una suspensin homognea. Calentar con
agitacin frecuente y hervir 1 minuto. Esterilizar 20 minutos a 121C. Enfriar a 45-50C
agregar sangre desfibrinada al 5%. Homogeneizar y distribuir en placas.
Preparacin de la placa de Agar Sangre: aadir en forma asptica un 5% de sangre
estril desfibrinada a temperatura ambiente, el agar debe estar a 45C.
Preparacin de Agar Chocolate: despus de aadir la sangre y agitando
frecuentemente se mantiene el medio de cultivo a 80C por 10 minutos hasta que
adquiera un color pardo chocolatado.
Siembra
Por inoculacin directa del material en estudio, sobre la superficie del medio de cultivo.
Incubacin
El tiempo, temperatura y atmsfera de incubacin, dependern del microorganismo
que se quiera aislar.

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MICROBIOLOGIA

22 CITRATO SIMONS
USO:
Medio
utilizado
para
la
diferenciacin de enterobacterias, en
base a la capacidad de usar citrato
como nica fuente de carbono y energa.
PRINCIPIO:
En el medio de cultivo, el
fosfato monoamnico es la nica fuente
de nitrgeno y el citrato de sodio es la
nica fuente de carbono. Ambos
componentes son necesarios para el desarrollo bacteriano. Las sales de
fosfato forman un sistema buffer, el magnesio es cofactor enzimtico. El
cloruro de sodio mantiene el balance osmtico, y el azul de bromotimol es
el indicador de pH, que vira al color azul en medio alcalino. El medio de
cultivo es diferencial en base a que los microorganismos capaces de utilizar
citrato como nica fuente de carbono, usan sales de amonio como nica
fuente de nitrgeno, con la consiguiente produccin de alcalinidad.
El metabolismo del citrato se realiza, en aquellas bacterias poseedoras de
citrato permeasa, a travs del ciclo del cido tricarboxlico. El
desdoblamiento del citrato da progresivamente, oxalacetato y piruvato. Este
ltimo, en presencia de un medio alcalino, da origen a cidos orgnicos que,
al ser utilizados como fuente de carbono, producen carbonatos y
bicarbonatos alcalinos. El medio entonces vira al azul y esto es indicativo de
la produccin de citrato permeasa.
Formula en gramos por litro de agua destilada

Siembra
A partir de un cultivo puro de 18-24 horas, sembrar en superficie un inculo
ligero , usando una ansa sin arrastrar el agar. Incubacin: A 35-37 C, durante
24-48 horas, en aerobiosis. Algunos microorganismos pueden requerir hasta 4
das de incubacin.
Resultados :
Positivo: crecimiento y color azul en el pico, alcalinidad.
Negativo: el medio permanece de color verde debido a que no hay desarrollo
bacteriano y no hay cambio de color.

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MICROBIOLOGIA

BIBLIOGRAFIA
o

http://es.scribd.com/doc/8614571/Manual-de-Medios-de-Cultivo

VILCHEZ UCEDA,Vctor. Manual de Practicas de Microbiologa. p.32-38

http://www.unavarra.es/genmic/microgral/manual%20practicas%20micagral.pdf

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