INTRODUCCIN:

Los suministros de agua deben ser analizados en cuanto a la

presencia de microorganismos indicadores especficos, cuya
existencia seala una posible contaminacin con patgenos.
Un indicador muy empleado para la contaminacin microbiana
del agua es el grupo de los microorganismos coliformes. Los
coliformes son indicadores tiles de contaminacin microbiana
porque muchos de ellos habitan en grandes cantidades el
tracto intestinal del hombre y otros animales. Por tanto, su
presencia en el agua indica contaminacin fecal. Los
coliformes son bacilos anaerobios facultativos, gramnegativos,
no formadores de endosporas, que fermentan la lactosa con
produccin de gas a las 48 horas en una incubacin a 36C.
En general, la presencia en una muestra de agua de
coliformes totales, o especialmente de E. coli, indica una
contaminacin fecal que hace el agua no apta para el
consumo humano. Cuando los coliformes se liberan al agua
finalmente mueren, pero no tan rpidamente como algunos
otros patgenos.
Todas las pruebas para determinar coliformes y E. coli en
muestras de aguas se basan en el crecimiento de los
microorganismos presentes en las muestras.
OBJETIVO:
Realizar un anlisis bacteriolgico del agua de la laguna El
Chairel, empleando como indicador los bacilos coliformes,
que determinan si hay presencia de contaminacin
microbiana, mediante el anlisis bacteriolgico cuantitativo,
que analiza y determina la cantidad de colonias por ml. o g.,
1

utilizando medios de cultivo selectivos

seleccionar el crecimiento de una especie.

que

permite

MATERIAL:
- Tubos Durham
- Pipeta de 10 ml
- Matraz Erlenmeyer de 100 ml 250 ml y 500 ml
- Olla de presin
- Parrilla elctrica
- Vasos de Precipitados
- Cajas Petri
- Asa bacteriolgica
- Balanza
- Esptula
- Probeta de 100 ml
- Mechero de Bunsen
- Embudo
- Aluminio
- Muestra de agua
- Agitador
REACTIVOS:
- Caldo Lactosado
- Agar Eosina y Azul de Metileno (EMB)
- Caldo Verde Brillante Bilis al 2%
- Agua destilada

ANLISIS CUANTITATIVO DE COLIFORMES

PROCEDIMIENTO:
PRIMER ETAPA: PRESUNTIVA
Lunes 11
1. Se prepara el medio de cultivo Caldo Lactosado,
pesando 7 g. del medio, se transfiere al matraz y se
disuelve en 500 ml. de agua destilada agitando.
2

2. El medio se transfiere a los tubos durham, utilizando el

embudo, aproximadamente partes del tubo.
3. Se esterilizan en la olla de presin a 15 lb y despus 15
minutos.
4. Se prosigue a sembrar con la pipeta, tomando de la
muestra de agua 1 ml. para cada tubo.
5. Se deja en incubacin por 48 horas.

SEGUNDA ETAPA: CONFIRMATIVA

Mircoles 13
6. Se comienza a preparar el medio de cultivo EMB,
pesando 23 g. del medio en 600 ml. de agua destilada, y
se calienta hasta ebullicin 1 o 2 minutos hasta su
disolucin.
7. Se toman aproximadamente 95 ml. en cada matraz de
100 ml., se tapan con aluminio y se esterilizan de 40
minutos a 1 hora en la olla de presin.
8. Una vez transcurrido este tiempo, se deja enfriar un poco
y se llenan las Cajas Petri con este medio de cultivo, de
modo que tape bien la superficie de la caja.
9. Se espera a que solidifique, y posteriormente se siembra,
esterilizando el asa bacteriolgica y tomando muestra de
los tubos, cada tubo para cada caja.
10.
Se incuban 48 horas.

Jueves 14
11.
Se esterilizan los tubos y se lavan.
TERCERA ETAPA: COMPLETA
Viernes 15
12.
Se prepara el medio de cultivo Bilis Verde
Brillante, pesando 24 g. disueltos en 600 ml., agitando.
13.
Se llenan los tubos aproximadamente a la mitad.
14.
Se colocan en vasos de precipitados, tapndolos con
aluminio y se esterilizan 15 lb/15 minutos.
15.
Posteriormente se siembra en un campo estril, de
las Cajas Petri tomar un poco de muestra con el asa
bacteriolgica y se transfiere a los tubos, una caja para
cada tubo.
16.
Se dejan en la estufa a 37C por 48 horas.

Domingo 17
17.
Se observan los resultados, el cual se obtuvo la
Etapa Confirmativa Completa
4

18.
Se dejan nuevamente los tubos en la estufa por 48
horas.

Martes 19
19.
Se hacen frotis de las muestras, utilizando una
coloracin directa o simple.
20.
Se esteriliza material, se vacan y se lavan los tubos
y las cajas.

RESULTADOS:
Se obtuvo una Etapa Confirmativa Completa, la cual
indica que si hay gran contaminacin fecal debido a los
coliformes. El color del medio utilizado al final, Bilis Verde
Brillante, cambi a un color verde esmeralda, esto debido a la
muestra que se introdujo en cada tubo.

Coliformes observados en el microscopio