SISTEMA ABO- 2014

por Marcelo Russo (Biologa 4to I126).

ABO
El sistema ABO es uno de los sistemas de grupo sanguneo ms importante para una prctica
segura de la transfusin de sangre.
Tal vez sea por eso que es lo primero que aprendemos en nuestros cursos en la Universidad. Quiz
sea por eso tambin que es la primera gran discusin domestica respecto de la sangre que
tenemos, o los que ya saben qu hacemos esta prctica nos preguntan Yo soy B, soy raro no?, yo
soy O siempre di sangre soy el mejor grupo, o alguno se anima a decir yo soy B y mis padres A y O
hay algo raro no?
Karl Landsteiner cmo saben descubri el sistema de grupo sanguneo ABO en 1900 cuando
separ los componentes celulares y lquidos tanto de su sangre como la de sus colegas,
combinndolas entre ellos.
Segn lo indicado por el
signo negativo (-) en la
imagen que ven aqu, no
se observ aglutinacin de
los glbulos rojos cuando
se mezclaron los dos
componentes de los mismos individuos. Sin embargo, la aglutinacin de glbulos rojos s que se
observ en algunas combinaciones, como se indica con el smbolo positivo (+). De los resultados
recogidos de sus estudios, Landsteiner se dio cuenta de que las personas pueden ser agrupadas
segn el patrn de aglutinacin de sus glbulos rojos.
Por ejemplo, el Dr. St. y Sr. Land pertenecan a un mismo grupo. Del mismo modo, el Dr. Plee. y el
Sr. Zar. pertenecan a un segundo grupo diferente, y el Dr. Sturl. y el Dr. Erdh pertenecan a un
tercer grupo. Durante el ao siguiente, Sturle y von Decastello, colegas de Landsteiner
descubrieron un cuarto grupo. Estos cuatro grupos se convirtieron en lo que hoy es conocido
como el sistema de grupo ABO (grupos A, B, AB y O). La nomenclatura aceptada en 1928 por la
Liga de las Naciones fue la de Jansky quin propuso cuatro grupos sanguneos: (A, B, O, AB).
En la actualidad y cmo lo venimos justificando en lecciones anteriores, el sistema tambin tiene
cuatro antgenos, para la nomenclatura ISBT, pero no son los anteriores descritos, sino que se
denominan; 001001 (A); 001002(B); 001003(AB) y 001004(A1).
Con el fin de explicar el fenmeno de la aglutinacin de glbulos rojos, Landsteiner postul
tambin que en la superficie de los glbulos rojos se encuentran dos antgenos diferentes (A y B), y
que de forma "natural" se encuentran los anticuerpos contra estos antgenos en el plasma de
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aquellas personas que no los expresan (Ley de Landsteiner). El factor subyacente que diferencia el
sistema ABO de los dems sistemas, como el sistema Rh.
Adems, los antgenos del sistema se encuentran no slo en los glbulos rojos, sino tambin en la
superficie de otros tipos de clulas y en las secreciones: linfocitos, plaquetas (adsorbidos desde el
plasma), epitelios y endotelios glandulares; en individuos que son "secretores", una forma soluble
de los antgenos de grupo sanguneo ABO se encuentra en la saliva y otros fluidos corporales,
(excepto en el lquido cefalorraqudeo).
De modo que no tendr slo importancia
en el rechazo en las transfusiones de
sangre, sino en los transplantes de otras
clulas, de tejidos y de rganos.
Un nmero de enfermedades puede
alterar el fenotipo ABO de una persona.
Los pacientes pueden "adquirir" el
antgeno B durante una infeccin
necrotizante durante el cual bacterias
liberan una enzima en la circulacin que
convierte el antgeno A1 en un antgeno
B-como (like) Durante este tiempo, los
pacientes no deberan recibir productos
sanguneos que contienen el antgeno B
porque sus sueros todava contienen antiB. Una vez que se trata la infeccin
subyacente, el ABO del paciente vuelve a la normalidad.
Ciertas patologas pueden provocar que los pacientes "pierdan" antgenos de los grupos
sanguneos del sistema. Cualquier enfermedad que aumenta la demanda del cuerpo de glbulos
rojos puede debilitar la expresin de antgenos de grupos sanguneos ABO, por ejemplo, la
talasemia.
Adems los antgenos son alterados en procesos de cnceres hematolgicos (modificndose las
cadenas de azcar que llevan los antgenos de los grupos sanguneos) se ha dado crdito a la
utilizacin de los antgenos A y B como marcadores tumorales de la leucemia aguda, trastornos
mieloproliferativos y mielodisplasia.
Las funciones de los antgenos de grupo sanguneo ABO no se conocen. Las personas que carecen
de los antgenos A y B son sanas, lo que sugiere que cualquier funcin de los antgenos no es
responsable de manifestaciones clnicas importantes, al menos no en los tiempos modernos.
No hay enfermedades que se conozcan como resultado de la falta de expresin de antgenos de
grupo sanguneo ABO, pero la susceptibilidad a una serie de enfermedades se ha relacionado con
el fenotipo ABO de una persona.
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Tales correlaciones siguen siendo controvertidas e incluyen la observacin de que el cncer
gstrico parece ser ms comn en los individuos del grupo A, mientras que las lceras gstricas y
duodenales son ms frecuentes en los individuos del grupo O
(Revisar: Fuchs CS, Mayer RJ. Carcinoma gstrico . N Engl J Med 1995; 333:32-41 en el link:
http://www.nejm.org/doi/full/10.1056/NEJM199507063330107)
Una correlacin se ha establecido entre el fenotipo ABO y el nivel de dos protenas implicadas en
la coagulacin de la sangre; el factor VII (FVIII) y factor de von Willebrand (vWF). Las
investigaciones indican que los individuos del grupo O tienen un 25% menos de FVIII y vWF en su
plasma (Revisar el siguiente link: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/11532189).
Tanto la sntesis, como las propiedades de los antgenos ABO plantea muchas preguntas
importantes sobre su papel, no slo en medicina, sino tambin en muchos otros aspectos de la
biologa y la antropologa.
El hecho de que las frecuencias allicas varen entre diferentes razas plantea preguntas
interesantes sobre la relevancia del sistema del grupo sanguneo ABO en los estudios de
poblacin, antropologa y gentica humana. Gene mixture in a population sample from Buenos
Aires City, Medicina Buenos Aires 2006; 66: 113-118 y Anlisis antropogenticos de los aportes
indgenas y africanos en
muestras hospitalarias
de la Ciudad de Buenos
Aires. Revista Argentina
de
Antropologa
Biolgica
3-1
79:99
(2001)
Los antgenos del ABO
son sintetizados mediante una serie de reacciones enzimticas catalizadas por unas enzimas
llamadas glicosiltransferasas. De hecho, el ltimo paso en la produccin de estos antgenos
requiere una glicosiltransferasa, que est codificada por los alelos funcionales A y B en el locus
gentico ABO.
Otra caracterstica interesante de los antgenos A y B es su presencia en otros animales adems de
en los seres humanos. Les dejo junto a esta leccin un artculo original Blood ties: ABO is a transspecies polymorphism in primates del Department of Human Genetics of Chicago de
gurel 2012.
Las glicosiltransferasas implicadas en la produccin de antgenos A / B en humanos tambin
exhiben los mismos efectos enzimticos en otros animales. Por lo tanto, el sistema de grupo
sanguneo ABO tambin tiene importancia evolutiva.

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Los grupos sanguneos ABO son heredados, y su modo de herencia se explic por el modelo de
Bernstein de un gen con tres alelos. Segn este modelo existen tres alelos A, B y O en un solo locus
gentico ABO, y que los alelos A
y B son co-dominantes con
respecto al alelo recesivo O.
Esto produce seis genotipos
(AA, AO, BB, BO, AB, y OO), que
resultan en 4 fenotipos (A, B, AB
y O). La frecuencia de los alelos
de A, B, y O varan entre
diferentes razas. Por ejemplo,
antes de que aumentara la
prevalencia de los matrimonios
mixtos con otras razas, los
indios americanos eran todos
del tipo O.
La expresin de los antgenos A y B no es siempre constante sino que flucta durante el desarrollo,
la diferenciacin e incluso durante la carcinognesis de las clulas. El esclarecimiento de cmo se
controla la expresin de estos antgenos es un problema importante tema de investigacin, al
igual que resolver por qu estn presentes de forma "natural" los anticuerpos contra los antgenos
A y B en el plasma de individuos que no expresan esos antgenos.
Los antgenos A y B no son antgenos proteicos, sino oligosacridos con las estructuras qumicas
GalNAc 1-3 (Fuc 1-2) Gal- y Gal 1-3 (Fuc 1-2) Gal-, respectivamente.
Las inmuno-azcares dominantes son GalNAc (N-acetil-D-galactosamina) y D-galactosa para los
antgenos A y B, respectivamente.
La diferencia entre estos dos azcares es que la GalNAc tiene un -NHCOCH3 en la posicin C2,
mientras que la galactosa tiene un -OH en esta posicin.
Una vez que las estructuras qumicas que definen el sistema sanguneo ABO se determinaron,
Watkins y Morgan, y Ceppellini propusieron, por separado, una hiptesis sobre la ruta de
biosntesis de estos antgenos.
Ellos postularon que los antgenos A y B se producen a partir del mismo precursor, el antgeno H,
que es abundante en los individuos del grupo sanguneo O.
Los antgenos A y B estn formados por la accin de las glicosiltransferasas codificadas por alelos
funcionales en el locus gentico ABO (El dogma central del sistema ABO).

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Es decir, el alelo A codifica una transferasa que transfiere una GalNAc al antgeno H sintetizndose
el antgeno A. Del mismo modo, el alelo B codifica la transferasa B que transfiere una molcula de
galactosa al antgeno H dando lugar al antgeno B.
Adems de las transferasas A y B, hay otras glicosiltransferasas con actividad / especificidad 1-3
Gal (NAC) transferasa. Estas incluyen 1-3 Gal-transferasa que sintetiza el eptopo 1-3 Gal (Gal
1-3 Gal 1-4 GlcNAc), la sintasa de isoglobosido b3 que sintetiza la ceramida iGb3 (Gal 1-3 Gal
1-4 GlcCer), y la sintasa del glicolpido Forssman que sintetiza el antgeno Forssman (GalNAc 1-3
GalNAc 1-3 Gal 1-4 Gal 1-4 GlcCer).
Queda por saber si estos los genes de estas glicosiltransferasas estn evolutivamente relacionado
con los genes ABO.
Una
vez
determinada
la
secuencia de nucletidos de los
tres alelos principales de A (A1), B
y O, se pudo deducir la secuencia
de aminocidos de sus regiones
codificantes. Descubrieron que
los alelos O codifican protenas
truncadas debido a la eliminacin
de un solo nucletido (261delG).
Cosa que explicara la no
funcionalidad de los alelos O.
Tambin encontraron que hay
varias
sustituciones
de
nucletidos entre los alelos A y B (4 de las cuales producen sustituciones de aminocidos). Esos
son arginina (R), glicina (G), leucina (L), y la glicina (G) en los codones 176, 235, 266, y 268 en la
transferasa A, y la glicina (G), serina (S), metionina (M ) y alanina (A) en los mismos codones en la
transferasa B.
Adems de los cuatro grupos principales, A1, B (B1), A1B, y O, hay otros subgrupos del sistema
ABO. La clasificacin de estos subgrupos se basa en diferencias en el grado de aglutinacin de los
glbulos rojos con los anticuerpos anti-A, anti-B y anti-AB, en la presencia de anticuerpos anti-A,
anti-B, y anti-AB en el suero y en la secrecin de antgenos A y B en la saliva, entre otros criterios.
Los subgrupos dbiles incluyen A2, A3, Ax, Ael, Aint, Am, Aw, Ax, B3, Bel, Bw, y Bx.

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En 1993, se ampli el estudio sobre las bases genticas y moleculares del sistema ABO a varios de
los subgrupos A y B. En
comparacin
con
A101(alelo), el alelo
A201 que es especfico
para el fenotipo A2 tena
dos diferencias.
La primera da lugar a
una
sustitucin
de
aminocido (prolina a
leucina) en el codn 156
(P156L). La otra produce
la delecin de un solo
nucletido, el nucletido
1060 (1060delC), lo que
provoca un cambio en el
marco de lectura y da lugar a una protena que contiene un residuo aminoacdico adicional en el Cterminal (Yamamoto et al., 1992).
El alelo A301 que se especifica para el fenotipo A3 tiene una sustitucin de un nico nucletido
que da lugar a una sustitucin de aminocido, de cido asprtico a asparagina (D291N).
Adems, el alelo Ax01 que
especifica el fenotipo Ax
tiene tambin un cambio de
un nico nucletido que da
lugar, en este caso, a la
sustitucin del aminocido
fenilalanina por isoleucina
(F216I) (Yamamoto et al,
1993a; Yamamoto et al,
1993c).
El alelo B301 es idntico al
alelo B101 a excepcin de
una sola sustitucin de
nucletido que resulta en el
cambio del aminocido de arginina por triptfano (R352W) (Yamamoto et al., 1993a).
Adems de los alelos de los subgrupos dbiles, tambin se pudieron caracterizar mutaciones en
alelos que especifican los interesantes fenmenos cis-AB y B (A). Cis-AB es un fenmeno que se
define por la expresin de ambos antgenos A y B por un solo alelo, a diferencia del trans-AB, en el
cual es la combinacin de los alelos A y B del padre y la madre los que regulan la expresin.
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El alelo cis-AB suele especificar una expresin dbil de A y una expresin menor de B (fenotipo
A2B3) (Yamaguchi et al., 1965, 1966). B (A) fue descubierto cuando se observ que ciertos
anticuerpos monoclonales anti-A reaccionaban con glbulos rojos que anteriormente se haban
tipificados como B. (Treacy y Stroup, 1987). B (A) es similar a cis-AB en el sentido que un alelo
especifica la expresin de los antgenos A y B, sin embargo, B (A) especifica una dbil expresin
del antgeno A, y una fuerte expresin del antgeno B.
Mediante tcnicas de amplificacin (PCR de ADN genmico) y la subsiguiente secuenciacin del
ADN, se identificaron las
mutaciones de los alelos cisAB01 y B (A) 01 (Yamamoto et
al, 1993b;. Yamamoto et al,
1993c), ellos encontraron que
las protenas codificadas por
estos alelos son quimeras entre
las transferasa A-B.
El alelo cis-AB01 tiene una secuencia de codificacin idntica a la del alelo A101, a excepcin de la
mutacin G268A (el ltimo de las cuatro sustituciones de aminocidos que discriminan a la
transferasas A y B es alanina de transferasa B). Por el contrario, el alelo B (A) 01 tienen una
secuencia codificante idntica a la del alelo B101, a excepcin de la segunda de las cuatro
sustituciones de aminocidos que corresponde al aminocido de la transferasa A (glicina en el
codn 235 en lugar de serina).
Resumimos hasta aqu?
Los antgenos ABO no son productos gnicos primarios, son los
productos de reaccin enzimtica de enzimas llamadas
glicosiltransferasas. El sistema ABO se produce como resultado de
polimorfismo de estructuras de hidratos de carbono en complejos de
glicoprotenas y glicolpidos expresados en la superficie de eritrocitos u
otras clulas, o presente en las secreciones, como unidades de glicanos
de glicoprotenas de mucina.
Las estructuras inmunodominantes de los antgenos A y B son GalNAc alfa1-> 3 (Fuc alfa1-> 2) GalGal y alfa1-> 3 (Fuc alfa1-> 2) Gal-, respectivamente, se sintetizan mediante una serie de
reacciones; las transferasas A y B codificadas por los alelos funcionales (A y B alelos) de un nico
gen en el locus ABO, catalizan la ltima etapa de la sntesis, mientras que la transferasa codificada
por el alelo O es no funcional. Por lo tanto, el sustrato aceptor, (antgeno H: Fuc alfa1-> 2-Gal) se
mantiene sin modificacin adicional y la A y la B determinantes estn ausentes en las superficies
de las clulas.
Quin controla aqu? El Gen ABO (9q34.1-q34.2) se organiza en 7 exones, y la secuencia de
codificacin en los siete exones de codificacin abarca ms de 18kb de ADN genmico. Los exones
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varan en tamao desde 28 hasta 688 pb y los exones 6 y 7, los dos exones ms grandes, codificar
la mayor parte de la secuencia de codificacin, 1.062 pb de longitud. La delecin de un solo
nucletido, que se encuentra en un gran nmero (pero no todos) de los alelos S y responsable de
la prdida de la actividad de la enzima, se encuentra en el exn 6. La primera de las siete
sustituciones de nucletidos que distinguen la A y B transferasas , reside en el exn 6 de
codificacin; exn 7, el ms grande de todos, contiene los otros seis sustituciones de nucletidos
que dan lugar a cuatro sustituciones de aminocidos que diferencian la A y B transferasas. Entre
ellos, sustituciones responsables de alteraciones en dos sitios (L 266M y G268A) determinan la A o
B especificidad de la enzima ( Yamamoto y Hakamori ).
En los hemates nada ms?
No, ya decamos que la expresin de genes no est restringida a los tejidos eritroides, se produce
universalmente en la mayora de las clulas epiteliales y endoteliales.
La expresin de los antgenos puede sufrir cambios durante el desarrollo, la diferenciacin y la
maduracin.
La expresin aberrante se observa a menudo en las clulas pre-malignas y malignas humanas. La
unin del factor de CBF / NF-Y a una repeticin de 43 pb (s) dentro de la secuencia minisatlite
situado en la 5'-UTR del gen ABO, aproximadamente -3700 pb en relacin con el sitio de iniciacin
de la traduccin, ha sido implicado en la regulacin de su la transcripcin. (Kominato et al, J. Biol.
Chem. 1997 272: 25.890-25.898).
Estudios muestran que el polimorfismo entre los alelos de la regin impactan respecto a la
variacin de secuencias y / o repetir el contenido, y puede influir en el nivel de expresin (Seltsam
et al Transfusion 2007, 47:. 2330-2335).

Funcin Biolgica
Ninguno de los alelos son prescindibles y no hay inconvenientes fisiolgicos aparentes por el
fenotipo nulo O.
La transfusin incompatible puede provocar la muerte de los pacientes. La HDN (enfermedad
hemoltica del recin nacido), debido a la incompatibilidad ABO es rara.
Un gran nmero de estudios han examinado las asociaciones entre grupos sanguneos ABO y una
variedad de enfermedades o afecciones, pero hasta ahora las observaciones consistentes han sido
pocos. Entre ellos se incluyen la asociacin de los individuos del grupo O de la sangre con una
mayor incidencia de las lceras y el cncer gstrico y el aumento de la susceptibilidad a la
Helicobacter pylori.

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Los niveles de factor de von Willebrand, una glicoprotena de la coagulacin, parecen ser
consistentemente alrededor del 25% menor en los individuos del grupo O sanguneo (Jenkins y
O'Donnell, Transfusion 2006 46 1836).
Aspectos serolgico
Serolgicamente (pruebas de tipificacin directa) recuerden que le llamaremos serologa a la
bsqueda de anticuerpos tambin- adems de
Expresin x 1000 spc
Tipo ABO (@)
encontrar las variaciones A, B, AB y O del tipo
Desde
Hasta
A1
Adulto
810
1170
ABO, tambin podemos encontrar variantes
A1 Recin Nacido
250
370
segn sea la carga antignica promedio en los
A2 Adulto
240
290
hemates, como vemos en la tabla (@), cada vez
A2 Recin Nacido
140
850
A1B Adulto
460
290
nos trae menos problema realizar pruebas en los
A1B Recin Nacido
240
100
hemates para demostrar el estatus ABO, porque
A2B Adulto
120
10
los fabricantes de reactivos se han visto
A3
7
4,4
Ax
1,4
1,9
obligados a generar reactivos capaces de
Aend
1,1
1,4
identificar las variables. Hemos documentado
Am
0,2
Ael
0,1
casos de efecto quimera en variante allicas
B
Adulto
610
830
A3, y otros laboratorios lo han reportado
B Recin Nacido
200
320
tambin en casos de Amos, Bmos.
A1B Adulto
310
560
Las variaciones de expresin tambin puede obedecer a la edad (neonatos), en carcinomas,
leucemia, infecciones, enfermedad de Hodgkins, estrs hematopoytico y en la edad avanzada.
Los antgenos del sistema resultan resistentes al tratamiento proteoltico sobre los hemates
intactos, he probado personalmente ejemplares de alelos frecuentes con ficina, papana, tripsina,
pronasa y tampoco hemos logrado modificar la expresin con el tratamiento tiol o DTT.
Entre los indios de Amrica del Sur, mientras que la incidencia del alelo A1, A2 o B es rara, la del
alelo O es 90-100%. La distribucin de los genotipos ABO como las frecuencias de los alelos en una
muestra de poblacin europea chino o blanco fue documentado en un artculo de SP Yip, Blood,
95:1487, 2000.
Si hablamos de mutaciones
Se encuentran clasificadas las ms importantes. Diferentes mecanismos moleculares pueden ser
responsables de fenotipos aparentemente idnticos. Por ejemplo, el fenotipo B3 puede ser
causado por una mutacin sin sentido (alelo A301: D291N), una mutacin de empalme (B303), o la
combinacin de una mutacin sin sentido y una deleccin de un solo nucletido, posiblemente
debido a la recombinacin (A302: V277M y 1060delC).
Los tipos de mutaciones responsables de la gama de subgrupos ABO son diversas: las mutaciones
sustitutivas (A202, A203, A207, A301, A303, Ax01, Ax07, AX12, Ax13, Bx02, Bx03, etc), de cambio
del marco de lectura en mutaciones debido a deleciones de nucletidos (O01 , o02, A206, Ael03,
etc), de cambio del marco de lectura en las mutaciones debidas a las inserciones de nucletidos
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(Ael01, Bw20, etc), las mutaciones de empalme (Ael04, B303, etc), una mutacin del codn de
iniciacin (Aw13), y la recombinacin (A302, Aw07, etc.) otras mutacin de localizacin se han de
seguir encontrado.
Hablemos de la transfeccin por primera vez as lo discutimos en el contexto del sistema ABO,
la transfeccin es una tcnica de la biologa molecular es empleada para introducir fragmentos de
ADN adicional en clulas de mamferos. El vehculo que transporta el nuevo ADN es un virus capaz
de infectar a la clula. La informacin gentica del virus es modificada previamente, sustituyendo
genes que codifican protenas implicadas en la virulencia y en la replicacin del virus por genes de
inters que se desea insertar en el mamfero.
En muchos casos se transfectan genes que codifican protenas con funcin teraputica o genes
necesarios para restaurar una deficiencia gnica. El ADN modificado se conoce como ADN
recombinante. Conviene adems incluir en el ADN recombinante un gen que permita la
identificacin y seleccin de aquellas clulas de mamfero que lo hayan incorporado. Muchas
veces el gen de seleccin es un gen que proporciona resistencia a un antibitico al que la clula de
mamfero sea sensible. La introduccin correcta del ADN recombinante permitir la produccin de
la protena de inters en el mamfero.
La introduccin de una construccin de DNA recombinante en la que se ha situado el CDS
(secuencia codificante) de un gen reportero (luciferasa, 'green fluorescent protein', betagalactosidasa, cloramfenicol acetiltransferasa -CAT-, etc..) bajo una secuencia de regulacin que se
desea estudiar permite medir con facilidad tasas de expresin gnica en diferentes situaciones
experimentales.
Por el contrario, la introduccin de un plsmido que contienen la secuencia codificante (CDS) de
una protena de inters
bajo el control de un
promotor (constitutivo,
regulado,
etc...)
permite la produccin
de la protena deseada
que puede estar o no
etiquetada ('tagged).
En este caso se emplea
la clula como una
factora de sntesis de
protenas a la que se le
introduce en forma de
plsmido la informacin de la protena que se desea sintetice.
Tanto en el primero como en el segundo caso puede ser importante seleccionar las clulas que
han adquirido el plsmido. Para facilitarlo se incluyen en stos genes de resistencia a drogas que
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SISTEMA ABO- 2014

permiten a las clulas que los han adquirido sobrevivir en medios selectivos. Uno de los sistemas
de seleccin ms empleado es el de la resistencia a G418 (resistencia a neomicina) que permite
seleccionar clones celulares de expresin estable. As diferenciaremos entre la transfeccin
temporal o transiente y la transfeccin estable o de larga duracin.
Las tcnicas de transfeccin actuales se pueden clasificar en:
Mtodos qumicos basados en
la formacin de complejos que
las clulas sean capaces de
adquirir e incorporar, bien sea
directamente mediante la ruta
endoctica (fosfato clcico,
DEAE
dextrano) o a las membranas
(lipofeccin).
Mtodo del fosfato clcico
basado en la obtencin de un
precipitado entre el cloruro de
calcio y
el DNA en una solucin salina
de fosfatos. En esta situacin co- precipitan formando unos agregados que son
endocitados/fagocitados por las clulas. Aparentemente el agregado con calcio protege al DNA de
la degradacin por las nucleasas celulares. El tamao y la calidad del precipitado es crtico para el
xito del proceso, que se ve afectado por factores tales como pequeos cambios en el pH de la
solucin, etc...
Otro es el mtodo del deae dextrano, basado en la obtencin de complejos entre la resina DEAE y
el DNA. Los polmeros de DEAE dextrano o polybreno tienen una carga que les permite unirse a
las muy negativamente cargadas molculas de DNA. El DNA acomplejado se introduce en las
clulas mediante choque osmtico mediante DMSO o glicerol. El uso de DEAE dextrano se limita
a las transfecciones transientes.
Uno ms el mtodo de lipofeccin, es la formacin de complejos entre lpidos catinicos y DNA. El
complejo tiene afinidad por la membrana y permite la entrada del DNA en el citosol. Una de las
posibles vas es la incorporacin de liposomas a la membrana y la entrada flip-flap. Existen un gran

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nmero de lpidos que se emplean en lipofeccin, aunque existe una estructura consenso de un
lpido catinico sinttico, a partir de la cual se han diseado muchas variantes (por ej. DOPE). Es
esencial optimizar las condiciones especficas de transfeccin para obtener buenas eficiencias, que
suelen ser en buenas condiciones de entre el 70 y el 90% de las clulas de la placa. Las desventajas
del mtodo es, aparte del elevado precio de los lpidos, el hecho de que no todos los lpidos
funcionan en todos los tipos celulares, y que hay que optimizar el ensayo para cada tipo celular.
Los parmetros a optimizar son la relacin entre lpido y DNA (relacin de cargas), la cantidad de
DNA empleado, el tiempo que se exponen las clulas al complejo y la presencia o ausencia
desuero.
Existen tambin mtodos fsicos
basados en la introduccin
mecnica de las molculas en el
interior de la clula, por
microinyeccin directa, una tcnica
muy efectiva aunque laboriosa. Es
el mtodo que se emplea en la
introduccin del DNA recombinante
en las clulas embrionarias en el
proceso de obtencin de animales
transgnicos y por electroporacin
'biolistic
particle
delivery'.
Introduccin del DNA adherido a
micropartculas que se disparan sobre las clulas.
Una vez introducida la molcula de DNA recombinante en el interior de las clulas producir su
efecto permitiendo, por ejemplo: o seleccionar clulas que hayan incorporado el DNA. Este sera el
caso del aislamiento de clones celulares que presentaran expresin de un determinado producto.
Es posible por la incorporacin en el propio vector de marcadores de seleccin, tpicamente la
resistencia de G418 (neomicina), ... o a las pocas horas o das detectar la presencia de la protena
codificada por el plsmido.
Entonces en el caso ABO (llammosle as) principalmente el Dr. Miyaco Yamamoto de la
Universidad de Gunma (Japn) desde el Instituto de Medicina Preventiva y Personalizada del
Cncer dise un anlisis funcional para examinar los efectos de las mutaciones identificadas
sobre la actividad y la especificidad de las transferasas humanas A y B construyendo plsmidos de
expresin de las transferasas A y B y sus derivados en el vector de expresin eucariota pSG-5
transfectando estos constructos de DNA en la lnea celular de cncer de tero humano HeLa. Las
clulas de esta lnea celular se derivan de un individuo de tipo O y expresan antgenos H en la
superficie celular. Por lo tanto, se esperaba que si las construcciones codifican transferasas
funcionales A / B, los antgenos A / B se produciran y se expresaran en la superficie celular. Estos
antgenos de nueva sntesis seran inmunolgicamente detectados por el uso de anticuerpos antiA y anti-B.
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SISTEMA ABO- 2014

Inicialmente se prepararon los constructos de A101 y B01, que codifican para las transferasas A1 y
B. Cuando se transfectaron estos DNA, los antgenos A y B, respectivamente, aparecieron en la
superficie celular tal y como se esperaba. Tambin se realizaron sobre variantes allicas de O, A2,
A3.
Para pensar y resolver (Al terminar la lectura de la clase)
1) Basado en la combinacin de..alelos, hay . genotipos posibles AA,
AO, BB, BO, AB, y OO, que se traducen en fenotipos, A, B, AB y O.
Por ejemplo, de padres AA y AO, slo resulta posible que los nios tengan un genotipo
. Del mismo modo, de padres con fenotipo AB y O (genotipo OO) los
fenotipos posibles para los nios son slo , y no es posible nios con
fenotipos AB u O (ver los casos de cis-AB como excepcin).
2) Estos antgenos no son antgenos .., sino oligosacridos. Determinados
residuos de que estn unidos por enlaces especficos para formar las
estructuras de estos antgenos. Ms especficamente, la estructura inmunodominante del
antgeno es especificado por la presencia de un residuo de fucosa y un residuo
de GalNAc unido a una galactosa mediante enlaces glucosdicos alfa-1,2 y alfa-1,3. El
residuo de galactosa tambin est unido a la estructura del ncleo interno. En los
antgenos B, el residuo GalNAc del antgeno.se sustituye por un residuo de
. Un antgeno estructuralmente similar se encontr abundantemente en las
personas tipo O, y fue nombrado antgeno H. La estructura inmunodominante del
antgeno H carece tanto de la . del antgeno A como de la .. del
antgeno B unida a la galactosa mediante el enlace alfa 1,3.
Los polimorfismos genticos pueden haber jugado un papel fundamental en la defensa de los
seres humanos contra la invasin de patgenos. Un ejemplo clsico de cmo la variabilidad es de
tal importancia es el gen principal del complejo de histo-compatibilidad (MHC), que codifica para
las protenas que presentan pptidos de antgenos en las clulas-T.
Otro ejemplo es el polimorfismo ABO, que especifica el producto final de antgenos especficos de
oligosacridos. Debido a que los antgenos ABH se expresan en la superficie de diversos tipos de
clulas y tambin se secretan, se ha propuesto la interaccin diferencial con agentes patgenos
infecciosos, en el pasado mediante estudios de asociacin y en los ltimos aos por experimentos
de unin. Los patgenos pueden tener protenas, glicosiltransferasas, y / o glicosidasas de unin a
hidratos de carbono, que reconocen y se unen a antgenos ABH, por lo que el fenotipo ABO del
husped puede potencialmente afectar a la adherencia de patgenos y su invasin.
Tambin puede cambiar la constitucin de la flora bacteriana residente en el intestino, y modificar
la respuesta inmune del husped. Adems, antgenos simples a los de los grupos sanguneos estn
presentes en algunas bacterias, y pueden interactuar con protenas del husped, con capacidad de
unin a carbohidratos, tales como las selectinas, galectinas y siglecs. Tambin pueden interactuar
con los anticuerpos naturales.
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SISTEMA ABO- 2014

A.E. Mourant resume los resultados anteriores de los estudios de asociacin de enfermedades,
incluyendo enfermedades infecciosas, con el polimorfismo ABO de grupos sanguneos en las
Monografas de Oxford en Gentica Mdica (Grupos sanguneos y enfermedades: un estudio de
las asociaciones de enfermedades con los grupos de la sangre y de otros polimorfismos).
En el artculo se mencionaba la mayor incidencia a la infeccin con parsitos de malaria (en las
personas tipo A), la peste (O), y la viruela (A).
Hace relativamente poco tiempo, la susceptibilidad diferencial a los Norovirus haba sido descrita
entre personas con distintos fenotipos ABO. Los Norovirus son la principal causa de gastroenteritis
aguda no bacteriana relativamente leve entre los adultos y son responsables de numerosos
brotes. Los Norovirus se unen a los antgenos H de tipo 1, y los individuos con fenotipo O son ms
propensos a ser infectados por el virus, mientras que aquellos con fenotipo de clulas B tienen un
menor riesgo de infeccin a pesar que diferentes cepas exhiben diferentes patrones de unin y de
susceptibilidad.
Otro ejemplo bien caracterizado es el Helicobacter pylori. Esta bacteria se puede unir a la
estructura del oligosacrido Lewis b (Leb), y por lo tanto, infecta con mayor facilidad a las personas
con ciertos fenotipos ABO y Lewis. Sin embargo, cabe mencionar que varias cepas de H. pylori
tambin utilizan sialoglicoconjugados que no estn relacionados con certeza con los antgenos
Lewis o ABO como receptores que se unen a las clulas husped. Las vas de infeccin no son tan
simples como se crea.
Adems de la unin de agentes infecciosos a los antgenos ABH en las clulas husped, existe
tambin otro tipo de interaccin entre los antgenos ABH los virus y los anticuerpos naturales
frente a los antgenos A / B. Los antgenos ABH se pueden aadir a las protenas virales, mientras
se sintetizan en las clulas productoras de estos antgenos. Los glicolpidos de la membrana de los
virus encapsulados tambin pueden poseer antgenos ABH de las clulas. Debido a que los virus
pueden presentar polimorfismo ABO y el nuevo husped puede contener anticuerpos frente a
antgenos A / B en el suero, el fenotipo ABO de acogida puede afectar a la susceptibilidad a los
virus.
La primera demostracin de esta interaccin se realiz con el eptopo 1, 3Gal y el anticuerpo
contra esta molcula de oligosacridos. Los retrovirus producidos en clulas de ratn expresan el
eptopo 1, 3Gal. El gen GGTA1 que codifica la 1, 3Gal transferasa, una enzima relacionada
evolutivamente con las transferasas A y B, no es funcional en el Homo sapiens y se ha convertido
en un pseudogen. Por lo tanto, los seres humanos no pueden sintetizar el eptopo 1, 3Gal. En
cambio, los humanos poseen anticuerpos contra esta estructura. El anticuerpo anti-eptopo 1,
3Gal en el suero humano podra inactivar los retrovirus que producen las clulas murinas. Al
parecer, este podra ser uno de los mecanismos moleculares que inhiben la infeccin por
retrovirus de ratn al ser humano. Cabe sealar queuna vez la infeccin se ha establecido, el virus
toma el fenotipo de la nuevo husped, y la inhibicin ya no ser eficaz.

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SISTEMA ABO- 2014

En los seres humanos, los antgenos ABH se expresan en las neuronas sensoriales primarias de la
parte posterior de los ganglios espinales del sistema nervioso. Sin embargo, poco se sabe acerca
de las funciones que estos antgenos pueden jugar. La situacin es similar con ratones.
El antgeno H se expresa en las
neuronas sensoriales primarias tanto
en el sistema olfativo principal como
en el olfatorio accesorio, mientras
que el antgeno A se expresa en un
subconjunto
de
neuronas
vomeronasales del sistema accesorio
durante el desarrollo.
El profesor St John et al. utilizaron un
mtodo de prdida de funcin como de ganancia de funcin para manipular la expresin de estos
hidratos de carbono en el sistema olfativo y demostraron lo siguiente: (1). En mutantes de ratones
nulos que carecan de la 1,2-fucosiltransferasa (FUT1) y el antgeno H, se produjo un retraso en la
maduracin de la capa glomerular del bulbo olfativo primario (2). La expresin ubicua del antgeno
A en los axones olfativos en ratones transgnicos con un aumento de la funcin, causa un mal
direccionamiento de los axones en la capa glomerular del bulbo olfativo primario y produce un
crecimiento exacerbado de los axones vomeronasales en el bulbo olfativo accesorio.
Aunque no totalmente, estos resultados proporcionan la primera evidencia in vivo que los hidratos
de carbono de la superficie celular tienen un papel especfico en el desarrollo de la conectividad
del nervio olfativo.
Los antgenos ABH no se limitan a los seres humanos, tambin estn presentes en la naturaleza.
Por lo tanto, es posible que los antgenos A / B de la dieta tambin puedan interactuar, dentro del
cuerpo humano, con anticuerpos naturales contra los antgenos y / o con linfocitos que llevan los
anticuerpos, adems de las protenas de unin a carbohidratos.
En su libro titulado "Eat Right 4 Your Type", Peter D'Adamo afirma que el tipo de sangre ABO
humano es el factor ms importante en la determinacin de una dieta saludable, y propuso dietas
distintas para las personas con diferentes grupos sanguneos ABO (CUAC!). Lleg a la conclusin de
que las reacciones a las lectinas (protenas de unin a carbohidratos) presentes en los alimentos
dependen del grupo sanguneo ABO individual y que los alimentos que contienen lectinas
incompatibles y perjudiciales se deberan evitar con el fin de minimizar las reacciones txicas
causadas por las interacciones entre la lectina y el antgeno A/B.
Esta teora fue recibida con mucho escepticismo y crticas de la comunidad mdica y cientfica. Las
principales crticas se han centrado en la falta de evidencia cientfica y las discrepancias con las
normas cientficas. Por ejemplo, las lectinas que poseen alta afinidad a un tipo ABO en particular
son poco comunes en los alimentos, a excepcin de algunas legumbres. Y de hecho no se
presentaron datos para correlacionar los tipos de lectinas presentes en la dieta y su especificidad
ABO.
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SISTEMA ABO- 2014

Incluso si su teora fuese correcta, es imposible proponer Blood type diets ("Dietas segn el
grupo sanguneo) correctas, sin saber qu lectinas (incluyendo aquellas con baja afinidad) se
encuentran presentes o ausentes en los alimentos. A menos que la presencia de lectinas
especficas para cada grupo sanguneo sea demostrada en dietas especficas, la promocin de
estas "dietas de tipo de sangre" es un error. Que podran daar a las personas mediante la
propuesta de dietas que pueden contener algunas lectinas que causaran interacciones
problemticas y / o sugiriendo evitaralgunos alimentos de alto valor nutritivo debido a una
asignacin equivocada.
Adems su opinin acerca de que los tipos de sangre O, A, B, AB se originaron hace 30.000,
20.000, 10.000 y 1.000 aos, respectivamente, tampoco no se ajusta a la actual teora de la
evolucin del gen ABO. A pesar de que su xito de ventas ha contribuido mucho ha aumentar el
inters de la gente por los grupos sanguneos ABO, el Dr. D'Adamo propone una "dieta segn el
tipo sanguneo" que no tiene nada que ver con los grupos sanguneos ABO.
La idea de que el grupo sanguneo ABO est involucrada en la formacin de la personalidad sigue
siendo bastante comn. Esta creencia es especialmente popular en Japn y Taiwn. Una serie de
libros escritos por Masahiko Nomi parecen haber contribuido, en cierta medida, a la popularidad
de esta teora. Los libros muestran numerosos
ejemplos anecdticos, pero el anlisis
estadstico se bas en datos subjetivos y no
objetivos.
Debido a esta falta de objetividad, no creo que
haya sido realmente demostrada cualquier
forma de asociacin entre el polimorfismo ABO
y la personalidad. Todas las afirmaciones hechas
en la actualidad en este sentido parecen ser
infundadas. O al menos no parecen soportar una
evaluacin cientfica.
Los antgenos ABH se expresan en las neuronas
sensoriales primarias de los ganglios de la raz
posterior en el sistema nervioso. Aunque no
existe una conexin directa entre las neuronas
sensoriales y la personalidad, podra ser posible
que el polimorfismo ABO puediera afectar a la
respuesta de estas clulas. Adems de las neuronas, la expresin polimrfica de los antgenos ABH
en otros tipos de clulas, incluyendo los glbulos rojos en la circulacin, algunas clulas del tracto
digestivo, algunas clulas en las vas respiratorias, endocrinas, del sistema urinario y de los
rganos genitales pueden afectar indirectamente a la personalidad.

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SISTEMA ABO- 2014

El gen ABO es uno de los ms de 25.000 genes contenidos en el genoma humano. Sin embargo,
debido a la abundancia y amplia distribucin de los antgenos ABH, no debera sorprender si en el
futuro, los estudios de asociacin del genoma completo (GWAS), tan de moda actualmente,
encuentren una asociacin entre ciertos rasgos de personalidad y los SNPs (polimorfismos de
nucletido simple) ABO.
Lectinas Son lectinas del sistema ciertos productos vegetales que cumplen funciones de transporte
e inmovilizacin de los carbohidratos. Por esto algunas lectinas reconocen carbohidratos que
forman parte especfica de determinantes de grupos sanguneos humanos.
Las lectinas difieren actualmente como protenas o glicoprotenas ubicuas, de origen no inmune,
capaces de reconocer o interaccionar reversiblemente con carbohidratos en solucin o en las
superficies celulares.
La mayora de las lectinas aglutinan eritrocitos de todos los grupos sanguneos, actuando a la
misma dilucin y por lo tanto no son especficas de grupo.
Las especificas aglutinan eritrocitos humanos preferentemente de un determinado grupo
sanguneo. Esta especificidad permite usar las lectinas como reactivo de tipificacin de grupo
sanguneo y en la identificacin de individuos secretores.
Porque se caracterizan por la unin
especfica a los residuos hidratos de
carbono, monosacridos, disacridos o
polisacridos.
Un
puado
de
lectinas
puede
considerarse excelentes reactivos para
anticuerpos. Lectina de Vicia cracca ha
demostrado ser un buen anti-A, lectina de
Dolichus biflorus puede ser utilizado como
anti-A1, y la lectina de Griffonia simplicifolia como anti-B. Lectina
de Vicia graminea se dice que es un buen reactivo tipificacin
como anti-N. Por otro lado, las lectinas que participan en polyagglutination son absolutamente
esenciales como el reactivo de eleccin y estos no pueden an ser sustituidos por anticuerpos de
cualquier tipo.
Eritrocitos con cryptantigens expuestos son significativamente ms sensibles a la aglutinacin por
ciertas lectinas que por anticuerpos policlonales.
Aglutinina de cacahuete (PNA), polibreno, y Glycine max lectinas se utilizan con frecuencia para la
identificacin de diferentes cryptantigens. La aplicacin de lectinas como un reactivo anti-B ha
demostrado ser tan til como policlonal humano o anticuerpos monoclonales de ratn. Adems
de su especificidad, las lectinas son excelentes reactivos debido a su menor costo y la produccin.

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SISTEMA ABO- 2014

Por ejemplo:
Los eritrocitos que poseen antgeno A pueden ser subdivididos en A1 y A2, las clulas rojas del
grupo A que aglutinen con Anti A1 lectina, se consideran del subgrupo, aquellas que no aglutinan
con Anti A1 lectina, se clasifican como A2. Aproximadamente el 80 % de las clulas, son Al y el
restante 20% se consideran A2.
Algunos ejemplos dentro del sistema en la siguiente tabla *
Nombre*
Dolichus Biflorus
Euonymus europaeus
Formes fomentarius
Griffonia simplicifolia I
Helix Aspersa
Helix Promatia
Licopersicon esculentum
Phaseolus lunatus
Sophora japonica

Nombre comn
Dlico gigante
rbol del ursillo
Hongo de pino
Planta trepadora
Caracol de jardn
Caracol comestible
Tomate
Juda de Lima
rbol de la pagoda
japonesa

Azcar inhibido
-D-GalNAc
D-Gal

Antgeno
A
A2 y B
B

GalNac>>GlcNac
GalNac

GlcNac(1-4)GlcNac Oligomero

0 >A Y B
A
B >>A

GalNac
GalNac>Gal

Aplicacin clnica
Lo ms importante es claro la aplicacin del ABO
en las transfusiones sanguneas. Los sujetos que
expresan un antgeno ABO particular toleran ese
antgeno, pero los sujetos que no expresan
producen anticuerpos naturales que reconocen el
antgeno.
Si bien an no vamos a describir profundamente
el tema vale decir que la transfusin sangunea es
una forma de trasplante, en la que sangre
completa o clulas sanguneas de uno o ms donantes se transfieren por va intravenosa a la
circulacin de un receptor. Las transfusiones sanguneas se realizan ms a menudo para reponer
la sangre perdida por hemorragia o para corregir defectos causados por una produccin
inadecuada de clulas sanguneas, lo que puede ocurrir en diversas enfermedades. La principal
barrera para el xito de las transfusiones sanguneas es la respuesta inmunitaria a las molculas de
la superficie celular que difieren entre los sujetos (por eso estamos en el curso).
Como decamos los antgenos ABO se expresan en casi todas las clulas, incluidos los eritrocitos.
Los sujetos que carecen de un antgeno de grupo sanguneo particular producen anticuerpos IgM
naturales contra ese antgeno. Si a los sujetos se les administran clulas sanguneas que expresan
el antgeno diana, los anticuerpos preexistentes se unen a las clulas transfundidas, activan el
complemento y dan lugar a reacciones transfusionales, que pueden poner en peligro la vida
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SISTEMA ABO- 2014

(alguno de ustedes est pensando este conocimiento ya lo tengo! bueno 1) sepa que el curso est
vinculando a un grupo amplio de profesionales y 2) es bueno ver que hay cosas que ya sabemos)
La transfusin puede inducir una reaccin hemoltica inmediata, lo que provoca una lisis
intravascular de eritrocitos, probablemente mediado por el sistema del complemento, y una
fagocitosis extensa de eritrocitos cubiertos de anticuerpos y complemento por los macrfagos del
hgado y del bazo.
Puede aparecer fiebre, shock y coagulacin intravascular diseminada, lo que indica una liberacin
masiva de citosinas ( por ej. TNF o IL-1).
Cmo dijimos los antgenos ABO se expresan en muchos tipos celulares, adems de las clulas
sanguneas, incluidas las clulas endoteliales. Por esta razn, la tipificacin ABO es fundamental
para evitar el rechazo hiperagudo de ciertos aloinjertos de rganos slidos.
La incompatibilidad ABO entre la madre y el feto no suele provocar problemas para el feto,
aunque como dijimos la mayora de los anticuerpos antiglucdicos son IgM y no atraviesan la
placenta hay formas IgG que vamos a estudiar cuando veamos un captulo entero sobre la
aloinmunizacin materna y afectacin perineonatal. Generalmente se presenta en madres grupo
O y fetos grupo A o B. La gran mayora de los pacientes con incompatibilidad por grupo clsico no
sufre Enfermedad Hemoltica Feto Neonatal, cursando con una enfermedad ms bien benigna,
poco intensa donde la hemlisis fetal es escasa en importancia, slo siendo necesario en algunos
casos el tratamiento de la anemia resultante de la enfermedad hemoltica, que en la mayora de
los casos es leve.
Algo que ya intuimos desde el dictado de esta case es que la razn de esta benignidad de la
incompatibilidad ABO se debe a la poca especificidad de los antgenos ABO, los cuales a partir de la
6 semana de gestacin se encuentran en la mayora de los tejidos fetales, incluyendo los
eritrocitos, adems de lugares como la placenta, donde se piensa que hay gran clearance de
anticuerpos maternos.
Un estudio llevado a cabo por investigadores de Nottingham, Inglaterra, determin los efectos in
vitro de incompatibilidad ABO sobre las clulas epiteliales. Para ello, fueron establecidos cultivos
de clulas epiteliales corneales obtenidas de ojos de donantes pertenecientes a 32 cadveres
humanos.
Las clulas epiteliales (100 l de 4 102 clulas por l) fueron incubadas durante 4 horas con
anticuerpos contra los antgenos del grupo sanguneo A, B y AB con o sin complemento. La lisis
celular fue examinada por una prueba quimioluminiscencia. Una vez realizada la incubacin, la
cantidad de clulas que permanecieron vivas fue determinada por un contador de centelleos.
Basados en los datos se cree que la mala compatibilizacin del grupo sanguneo ABO provoca una
lisis significativa en las clulas epiteliales de la crnea. La concentracin del anticuerpo requeridas
para la lisis fueron iguales a las encontradas en suero; estos niveles de anticuerpo tienen pocas
posibilidades de ser alcanzados en las lgrimas y/o acuosidades.
Resultados de las pruebas de tipificacin

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SISTEMA ABO- 2014

Adems de seguir estrictamente las recomendaciones de los fabricantes y despus de tener en
cuenta las circunstancias de hallazgos infrecuentes o discrepantes, observemos los resultados
esperados en pruebas directas (suero reactivo/ hemates de prueba) e inversas (suero/hemates
reactivo)

Generalidades
Habitualmente se emplean para el agrupamiento directo reactivos diagnstico in vitro
monoclonales de diversos linajes celulares
isotipo IgM, por ejemplo: 9113D10 o
BIRMA-1(Anti-A) ; 9621A8 o LB-2 (Anti-B);
152D12/9113D10 o ES-4/ES-15(Anti-AB).
Dentro de la batera de ensayos existen
pruebas directas en portaobjeto, en
soportes/microplacas,
con
reactivos
disecados, con reactivos lquidos, una
novedosa modalidad
de
aglutinacin
utilizando
nanotecnologa
(desde la perspectiva
de imantacin de
hemates)
est
avanzando entre los
mtodos y tambin la
tcnica
de
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SISTEMA ABO- 2014

aglutinacin en columnas de exclusin en gel Sephadex.
La imagen aqu representa un estudio del Estado Nacional de Chile sobre el uso de tcnicas sobre
ABO y 164 laboratorio que completaron la encuesta al comienzo de un proceso que ya tiene lugar
de centralizacin de la especialidad. En la llamada tabla 6 se observa el porcentaje de
concordancia entre las tcnicas.
En el caso de la prueba inversa, es importante considerar que los hemates podrn tener un origen
comercial o de factura in house con controles.
La imagen que recortamos del mismo estudio muestra la distribucin (foto de aquel momento) de
los reactivos hemticos del ABO.
En sucesivas clases vamos a desarrollar los mtodos de control de calidad de los reactivos. Pero
aprovechemos para recordar que tendremos en cuenta como mnimo: Controlar en la recepcin:
1) condiciones de embalaje, temperatura y caducidad, 2) validacin antes que estn disponibles
para su uso: a) Chequear la conformidad con los criterios utilizados al licitar b) Examinar un
nmero de frascos
al
azar,
para
asegurar: - que el
volumen
es
correcto - que la
etiqueta es clara que el inserto del
envase es el correcto c) Evaluar aspecto, especificidad, potencia y avidez.
Las pruebas de biologa molecular SSP- PCR con o sin la adicin de tcnicas de revelado
fluorescencia tambin se estn extendiendo en la actualidad y le dedicaremos un captulo
especialmente (un ejemplo de perfil: 01, 02, B, A, A2, AW04, AW11, BW03, Ael02, AX01, AX04,
B302, Bw19, 045, AW08, 050, Aw06, A302, Ael01, 008, A205, AX10). Les dejo en un archivo
adjunto el pster del prximo foro de biloga molecular en banco de Sangre a realizarse en el
2015. (Molekulare Blutgruppen-Forum)
Los anticuerpos lquidos se hallan diluidos en una solucin buffer que contiene potenciadores
qumicos, adems la formulacin generalmente incluye azida de sodio 0.1% (w/v), material bovino
y porcino.
Tienen esterilizado por filtracin por ejemplo a 0.22 mm. Se hallan coloreados, por ejemplo el
reactivo Anti-A est coloreado por ejemplo con Patent Blue Violet y el reactivo Anti-B est
coloreado con Quinoline Yellow.
Todos los resultados obtenidos en las pruebas sobre glbulos rojos (directas), excepto las
realizadas sobre muestras de sangre de infantes, deberan ser confirmadas por una prueba sobre
suero (inversa), usando glbulos rojos conocidos como A1, A2, B y O.
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SISTEMA ABO- 2014

Cualquier discrepancia entre las pruebas en glbulos y en suero debe ser investigada y resuelta
antes de informar el grupo sanguneo. Si se utiliza sangre entera con bajo hematocrito se
recomienda ajustar la concentracin de glbulos rojos (35-50%) antes de realizar la prueba en
lmina.
Para la deteccin de muestras dbiles de Ax se recomienda realizar la lectura microscpica y/o un
perodo de incubacin de 15 minutos. Los antgenos ABO no se encuentran completamente
expresados al momento del nacimiento; por lo tanto, las pruebas que involucran glbulos rojos de
cordn o neonatales deben ser interpretadas con particular cuidado. En la tcnica en tubo se debe
tener cuidado cuando se resuspende el botn celular ya que una agitacin excesiva puede
disgregar las aglutinaciones dbiles y producir resultados falso negativos. Nunca dejar el
sobrenadante tras los lavados lmpidos. Es importante emplear la fuerza g y tiempo recomendados
durante la centrifugacin, ya que una excesiva centrifugacin puede conducir a dificultades para
resuspender el botn celular, mientras que una centrifugacin insuficiente puede resultar en
aglutinaciones que se disgregan con demasiada facilidad.
La expresin de algunos antgenos eritrocitarios puede disminuir en intensidad durante el
almacenamiento, especialmente en aquellas muestras coaguladas o anticoaguladas con EDTA. Los
mejores resultados se obtienen cuando se ensayan muestras frescas.
Pueden obtenerse resultados falso negativos o falso positivos debido a la contaminacin de los
materiales empleados en la prueba, temperatura incorrecta de incubacin, almacenamiento
inadecuado de los materiales, omisin de reactivos de la prueba o ciertas patologas.
Se recomienda el uso de un reactivo control durante el agrupamiento de glbulos rojos, en detalle
observaremos los procedimientos en la clase de Control de Calidad.

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