SERVICIO NACIONAL DE APRENDIZAJE

CENTRO NACIONAL DE HOTELERA, TURISMO Y ALIMENTOS

TECNLOGO PROCESAMIENTO DE ALIMENTOS
LABORATORIO DE MICROBIOLOGA
INFORME: 02
RESULTADO DE APRENDIZAJE:
FICHA: 905919
INTEGRANTES:JENNIFER
MOSQUERA

INSTRUCTOR: Camila Ubaque

COMPETENCIA:

INTRODUCCIN
De gran importancia en Microbiologa porque
permite diferenciar dos grandes grupos de
bacterias (Gram+ y Gram-), segn se
comporten ante esta tincin. El fundamento
radica en la diferente estructura de la pared
celular de ambos grupos: las bacterias Gram+
tienen una gruesa capa de peptidoglicano en
su pared, mientras que las bacterias Gramtienen una capa de peptidoglicano ms fina y
una capa lipopolisacardica externa. Tras la
tincin con el primer colorante (Cristal violeta)
se efecta un lavado con etanol que arrastrar
al colorante slo en las Gram (-), mientras
que en las Gram (+) el colorante queda
retenido y las clulas permanecern azules.
Las clulas Gram (-) se teirn despus con
un colorante de contraste (safranina) para que
puedan observarse.
OBJETIVOS
Objetivos general Establecer los pasos para la
adecuada realizacin de ensayos de tincin de
Gram en el laboratorio de microbiologa.
Objetivos especficos
Utilizacin de tcnicas sencillas para la
observacin de microorganismos.
Conocer o manejo del microscopio ptico para
la observacin de bacterias (importancia del
objetivo de inmersin).
MARCO TERICO
INCULO: Pequea porcin tomada de una s
SUSPENCIN BACTERIANA: Mezcla

Fecha practica: 03-09-2015

Fecha entrega: 06-09-2015

generada por la presencia de clulas

bacterianas viables y la presencia de una
solucin diluyente.
TINCIN DE GRAM: Es un tipo de tincin
diferencial empleada para la visualizacin de
bacterias en el laboratorio de microbiologa.
Debe su nombre al bacterilogo dans
Christian Gram, quien desarroll la tcnica en
1884.En el proceso de tincin los colorantes
anlicos se fijan en la pared celular de las
bacterias bajo la accin posterior del yodo,
formando un complejo de yodo. Segn este
fundamento las bacterias pueden clasificarse
en Gram negativas y Gram positivas. En las
bacterias Gram positivas, el complejo de
colorante-yodo no se puede eliminar de las
clulas utilizando decolorantes como alcohol o
acetona y las clulas permanecen teidas de
color azul-violeta. En las bacterias Gram
negativas, el complejo colorante-yodo puede
eliminarse y las clulas se tien de color rosa a
rojo debido al contraste generado por la
Fucsina o de color anaranjado con safranina.
MATERIALES, EQUIPOS,
MEDIOS DE CULTIVOS.
EQUIPOS Y MATERIALES
Balanza semianaltica.
Autoclave.
Frascos 100 mL.
Portaobjetos.
Microscopio.
Asa bacteriolgica.
Pipetas Pasteur.

REACTIVOS Y

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LABORATORIO DE MICROBIOLOGA
INFORME: 02
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FICHA: 905919
INTEGRANTES:JENNIFER
MOSQUERA

INSTRUCTOR: Camila Ubaque

COMPETENCIA:

REACTIVOS Y SOLUCIONES
Reactivos
Cristal violeta
Lugol
Alcohol acetona
Fucsina
SafraninaNota: Estos reactivos pueden ser
adquiridos comercialmente, listos para ser
usados.
Soluciones.
Solucin salina fisiolgica 0.85%: Pesar
0.85 g de Cloruro de Sodio y disolver en agua
destilada hasta completar 100 mL de solucin,
agregar el contenido en un frasco y esterilizar
en autoclave a 121C durante 15 minutos.
Luego retirar de la autoclave, dejar enfriar y
refrigerar.
METODOLOGA
Preparacin de frotis:
Colocar una gota de solucin salina en un
portaobjeto limpio (asegrese que est libre de
ralladuras y/o grasa).
Tomar el inculo o la colonia a analizar, con
un asa en aro y ubicarlo sobre el portaobjetos.
Realizar suavemente un movimiento
rotatorio hasta que quede una capa fina que
cubra el centro de la lmina portaobjetos, deje
secar a temperatura ambiente y fijar el
extendido flameando tres veces en la llama del
mechero.
Tincin:

Fecha practica: 03-09-2015

Fecha entrega: 06-09-2015

Agregar cristal violeta sobre la lmina

portaobjetos, dejar actuar durante un (1)
minuto (Este reactivo colorear de violeta las
bacterias Gram positivas).
Enjuagar la lmina portaobjetos con agua
corriente (Evitar el contacto directo del chorro
con el extendido) y dejar secar.
Agregar Lugol, dejar actuar durante un (1)
minuto. Enjuague la lmina portaobjetos con
agua corriente (Evitar el contacto directo del
chorro con el extendido) y dejar secar.
Agregar alcohol acetona y dejar actuar
durante 15 segundos.
Enjuagar la lmina portaobjetos con agua
corriente (Evitar el contacto directo del chorro
con el extendido) y dejar secar.
Agregar safranina y dejar actuar durante 30
segundos. segundos (Este reactivo colorear
de rosado las bacterias Gram negativas).
Enjuagar la lmina portaobjetos con agua
corriente (Evitar el contacto directo del chorro
con el extendido) y dejar secar.
Observar en el microscopio ptico con el
objetivo de 100X, para realizar esta operacin
utilizar aceite de inmersin. (Agregar una (1)
gota de aceite de inmersin sobre el centro de
la lmina portaobjetos y luego enfocar con el
objetivo de 100X).

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Fecha practica: 03-09-2015
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Gotas
de
safranina.
4
5

TCNICA ANALTICA
MTODO

NORMATIVIDAD

MXIMO PERMISIBLE
CONFORMIDAD

Solucion salina

Preparacion de
frotis, tincion.
VALOR

Cumple

T: Temperatura

DISCUSIN DE RESULTADOS

TABLA DE RESULTADOS
DATOS DE LA MUESTRA: Especificar la
informacin ms importante de la muestra
analizada.
Muestra: frotis
Clculos de resultados:
Para los casos que se requiera, especificar los
resultados de los ensayos obtenidos,
detallando la informacin consignada en la
siguiente tabla:
1
2
3

TABLA DE RESULTADOS
frotis

PARMETRO EVALUADO
UNIDADES DE EXPRESIN
RESULTADO

gotas
Gotas
de
cristal violeta.
Gotas
de
lugol
Gotas
de
acetona.

En la figura 1 se puede apreciar

Staphylococcus ssp
Gram positivos que se encuentran en racimos,
pares y e cadenas cortas con forma redonda
(coco). Esta bacteria se observa de color
violeta ya que en el proceso de tincin donde
se le agrego los diferentes colorantes como
cristal violeta y fucsina bsica, quedaron

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COMPETENCIA:

teidas; aun cuando se les retir el exceso de

colorante con agua destilada y alcohol
de 95, tomando este color caracterstico que
se le denomina a las bacterias que lo
presentan Gram positivas. Estas bacterias
presentan este color ya que la envoltura celular
de las bacterias Gram-positivas cubren la
membrana citoplasmtica y una pared celular
compuesta por una gruesa capa de
peptidoglicano, que rodea a la anterior. La
pared celular se une a la membrana
citoplasmtica mediante molculas de cido
lipoteicoico. La capa de peptidoglicano le
proporciona una gran resistencia a estas
bacterias y es la responsable de
retener el tinte durante la tincin de Gram al
poseer una gran proporcin de este polmero
complejo (murena) la cual no la hace
susceptibles a la accin del solvente orgnico,
sino que este acta deshidratando los poros
cerrndolos, lo que impide que pueda
escaparse el complejo cristal
violeta, y manteniendo la coloracin azulviolcea. A diferencia de las Gram-negativas,
estas bacterias no presentan una segunda
membrana lipdica externa.

Fecha practica: 03-09-2015

Fecha entrega: 06-09-2015

En la figura 2 es posible observar bacterias

con forma de bacilo (forma de barra o vara) y
de color rosadas, lo que indica que son
bateras Gram negativas. Esta coloracin se
debe a las caractersticas que poseen las
bacterias Gram negativas en su pared celular.
Debido a que las bacterias Gram negativas
poseen en su pared
celular una capa delgada de peptidoglicano
(murena) unida a una membrana externa
formada por protenas, fosfolpidos y
polisacridos, la cantidad de colorante cristal
violeta y del mordiente lugol que retiene es
mnima, en comparacin a las bacterias Gram
positivas, que
tiene varias capas de peptidoglucano unido a
la membrana plasmtica, donde se encuentra
el cido lipoteicoico, y ms en la superficie, el
cido teicoico por lo cual el complejo de las
molculas de cristal violeta, lugol y cido
teicoico que se forma en la pared celular de las
Gram positivas, es muy difcil de remover, lo
que no sucede con las Gram negativas, porque
el cristal violeta y el lugol no reaccionan con el
cido teicocio, debido a que las bacterias
Gram negativas en su pared celular no lo
tienen. Por otra parte, la membrana externa
que poseen las bacterias Gram negativas es
soluble en compuestos orgnicos como a la
mezcla de alcohol y acetona, por lo tanto al
momento de agregar el decolorante alcohol
95, el complejo de cristal violeta y lugol se
perdi. De igual forma, las bacterias Gram
negativas tomaron su color rosado, debido a
que se le agrego el colorante de contraste
llamado Fucsina para colocarlas en
manifiesto.

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INSTRUCTOR: Camila Ubaque

COMPETENCIA:

CONCLUSIONES
Las bacterias que se observaron salieron de
color rojo y eso quiere decir que salieron Gram
negativas y supimos como manejar la tincin
de Gram.
Se identifico la morfologa de las bacterias en el
microscopio.

Fecha practica: 03-09-2015

Fecha entrega: 06-09-2015

Disponible:
http://es.scribd.com/doc/52811425/Tincionesen-Microbiologia-Seminario. Citado:19/11/2013
Martnez Roberto. (2009). Bacteria gram
positiva [En lnea].
Disponible:
http://martinezroberto.blogspot.com/Citado:
19/10/2013.

BIBLIOGRAFA

Fuentes cibernticas: Fuentes derivadas de

pginas de internet,

Daz Camilo (2011). Definicin de tincin. [En

lnea].

guia
de
laboratio-1.
desinfeccion.pdf

Limpieza