MONOGRAFA SOBRE LA INFLUENCIA DE CAMPOS MAGNTICOS EN EL

CRECIMIENTO DE E. coli Y S. cerevisiae Y LA CAPACIDAD DE SOLUBILIZAR

FSFORO EN Pseudomonas sp Y Bacillus sp, DE USO INDUSTRIAL

SANDRA JOHANA HERNNDEZ JIMNEZ

Cd. 1.088.288.470

ESTEFANIA LUCERO DOMNGUEZ TORO

Cd. 1.088.293.270

UNIVERSIDAD TECNOLGICA DE PEREIRA

FACULTAD DE TECNOLOGIA
TECNOLOGIA QUMICA
PEREIRA, RISARALDA
2014

MONOGRAFA SOBRE LA INFLUENCIA DE CAMPOS MAGNTICOS EN EL

CRECIMIENTO DE E. coli Y S. cerevisiae Y LA CAPACIDAD DE SOLUBILIZAR
FSFORO EN Pseudomonas sp Y Bacillus sp, DE USO INDUSTRIAL

SANDRA JOHANA HERNNDEZ JIMNEZ

Cd. 1.088.288.470

ESTEFANIA LUCERO DOMNGUEZ TORO

Cd. 1.088.293.270

Proyecto de Grado Modalidad Monografa presentado como requisito final

para optar al ttulo de Tecnloga Qumica

Director de Trabajo de Grado

Luis Gonzaga Gutirrez

UNIVERSIDAD TECNOLGICA DE PEREIRA

FACULTAD DE TECNOLOGIA
TECNOLOGIA QUMICA
PEREIRA, RISARALDA
2014

Nota de aceptacin
--------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

____________________________
Presidente del Jurado

AGRADECIMIENTOS.
A nuestros padres y hermanos por su apoyo incondicional, al brindarnos
comprensin, recursos, tiempo, paciencia y amor. Por estar en los momentos ms
difciles de nuestra vida estudiantil y animarnos con sus palabras de aliento.
A nuestro Director Luis Gonzaga Gutirrez por tan valiosa ayuda en la bsqueda
de alcanzar la meta. Por ofrecernos su tiempo y asesora en el momento que
necesitbamos con paciencia. Por darnos la oportunidad de trabajar con l y
adquirir nuevos conocimientos. Al profesor Fernando Areiza por su contribucin a
la monografa.
A todos nuestros amigos, por permitirnos pasar momentos felices a su lado,
aprender y recordar con cario nuestro paso por la Universidad Tecnolgica de
Pereira.

GLOSARIO.

Absorvancia: Medida de la intensidad de luz que absorbe la muestra a una

longitud de onda establecida.

Antgeno: Sustancias como protenas y polisacrido que desencadenan la

formacin de anticuerpos.

ATP: El trifosfato de adenosina es una fuente energtica necesaria para

todas las formas de trabajo biolgico.

Campo magntico: Cargas con movimiento, paralelo a una corriente

producida por otras cargas y que experimenta una fuerza perpendicular a
su propia velocidad.

Carga microbiana: Nmero de microorganismos viables presentes en un

elemento determinado.

Clula fotoelctrica: nodo y ctado que convierte la energa luminosa en

energa elctrica.

Colonia bacteriana: Agrupacin de microorganismos originados de una

nica clula y que se incrementan durante un intervalo de tiempo
determinado.

Diploide: Clula somtica que posee dos copias de cada cromosoma.

Densidad de Flujo magntico: Medida de la concentracin de lneas de

flujo en una seccin puntual del circuito electromagntico. Tambin se
define como el flujo magntico por unidad de rea y su unidad es el tesla.

Espectrofotmetro: Instrumento utilizado para cuantificar microorganismos

y sustancias qumicas al medir la longitud de onda.

Espora Bacteriana: Estructura en la que el microbio forma una capsula

que protege al material gentico de las condiciones adversas, como alta
temperatura y escases de nutrientes.

Fimbrias: Grupo de filamentos filiformes cortos que rodean algunas

bacterias gram negativas.

Flagelos peritricos: Apndices similares a pelos sobresalientes de la

pared celular. Permiten al microbio moverse y rodean toda la superficie
bacteriana.

Flujo magntico: Nmero total de lneas de fuerza que atraviesa una

superficie. La unidad del flujo magntico es el voltio segundo (Vs) o weber
(Wb).

Haploide: Clula cuya dotacin gentica consta de solo un par de

cromosomas en su ncleo.

Manitol: Azcar derivado de la manosa o fructuosa.

Medio EMB: Medio Eosina azul de metileno, selectivo para el aislamiento

de enterobacterias y otras bacterias gram negativas.

Meiosis: Es un proceso en que se origina cuatro gametos con la mitad de

los cromosomas de la clula inicial.

Metabolitos secundarios: Mezcla de compuestos qumicos que tiene

distribucin taxonmica restringida y se forman al terminar el crecimiento.

Mitosis: Reproduccin en
original.

Paramagnetismo: Caracterstica de algunos materiales para magnetizarse

al ser sometidos a la accin de un campo magntico, por lo que se imanta
en el mismo sentido del campo.

Pilis: Estructura con forma de pelos, anclados a la membrana de algunas

bacterias. Involucradas en la conjugacin bacteriana.

Plasmlisis: Fenmeno en el que la clula pierde agua, aumentando la

viscosidad intracelular y disminuye el volumen, por lo que la membrana
citoplasmtica se retrae.

Presin osmtica: Tipo de presin celular en la que se evita que pase

solvente a travs de una membrana semipermeable, al ejercer una presin
mayor que la del diluyente puro.

Radicales libres: Molcula o tomo que tiene uno o ms electrones

desapareados y pueden existir en dicha forma. Son molculas reactivas
que producen la oxidacin de las clulas y cambios en el ADN.

la que se forman dos clulas idnticas a la

Transmitancia: Cantidad de luz que atraviesa un cuerpo en una

determinada longitud de onda.

Telsa: Unidad para expresar la densidad del flujo magntico (B). 1 Telsa (T)
= 104 Gauss

RESUMEN.
La estimulacin magntica de microorganismos ha sido de inters investigativo
debido a sus aplicaciones industriales e impacto positivo en el medio ambiente.
Por ello, se ha visto como una alternativa viable para cambiar el crecimiento
microbiano y la capacidad de solubilizar fsforo.
Adems, el crecimiento celular es el parmetro ms importante en el estudio
microbiolgico, ya que es utilizado como base para medir la eficiencia en otras
propiedades de los microorganismos, tales como el metabolismo y la produccin
de sustancias de inters cientfico y tecnolgico. Por tal motivo, se describe la
respuesta al campo magntico de Escherichia coli, el microorganismo ms
estudiado por habitar en ambientes cotidianos para el ser humano, y
Saccharomyces cerevisiae con aplicaciones en la industria alimenticia.
Por otra parte, los microorganismos solubilizadores de fosfatos son de gran
importancia para la industria agrcola. Gracias a ellos las plantas pueden asimilar
el fsforo que no logran procesar por s mismas, ayudando as a su crecimiento.
En este trabajo se profundiza en Pseudomonas sp y Bacillus sp por ser buenos
solubilizadores de fsforo y por su capacidad para degradar los sustratos
De ah, que sea importante recopilar la informacin cientfica disponible, donde se
describen los mecanismos por los cuales las microbios se reproducen y/o
solubilizan fsforo, y la respuesta de Escherichia coli, Saccharomyces cerevisiae,
Pseudomonas sp y Bacillus sp, a campos magnticos con densidades variables y
su aplicacin industrial.

CONTENIDO
GLOSARIO. ............................................................................................................. 5
RESUMEN. .............................................................................................................. 8
INTRODUCCIN ................................................................................................... 14
PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA .................................................................... 15
JUSTIFICACIN .................................................................................................... 16
OBJETIVOS ........................................................................................................... 18
METODOLOGA .................................................................................................... 19
CAPITULO 1.......................................................................................................... 20
MARCO CONCEPTUAL ........................................................................................ 20
1.1

CAMPOS MAGNTICOS. ........................................................................ 20

1.2

CRECIMIENTO MICROBIANO. ................................................................ 24

1.2.1

Nutrientes. .......................................................................................... 24

1.2.2

Actividad del Agua.............................................................................. 25

1.2.3

Temperatura. ...................................................................................... 25

1.2.4

pH....................................................................................................... 26

1.2.5

Oxgeno. ............................................................................................. 27

1.3

CURVA DE CRECIMIENTO CELULAR. ................................................... 29

1.3.1

Fase de Latencia. ............................................................................... 30

1.3.2

Fase de Crecimiento Logartmico o Exponencial. .............................. 30

1.3.3

Fase Estacionaria............................................................................... 30

1.3.4

Fase de Declinacin o Muerte Celular. ............................................. 31

1.4

TIPOS DE REPRODUCCIN EN MICROORGANISMOS. ...................... 31

1.4.1

REPRODUCCIN ASEXUAL. ........................................................... 32

1.4.1.1

Biparticin (divisin binaria). .................................................................. 32

1.4.1.2

Gemacin. ............................................................................................. 33

1.4.1.3

Mitosis. .................................................................................................. 33

1.5 ALGUNOS MTODOS PARA MEDIR CRECIMIENTO CELULAR EN

MICROORGANISMOS. ...................................................................................... 35
1.5.1

Recuento en placa. ............................................................................ 35

1.5.2

Filtracin. ............................................................................................ 37

1.5.3

Nmero ms probable (NMP). ........................................................... 37

1.5.4

Espectrofotometra y escala de Mcfarlan. .......................................... 39

1.5.5 DETERMINACIN DE LA SOLUBILIZACIN DE FOSFATOS EN EL

LABORATORIO. ............................................................................................. 43
1.5.5.1
1.6

MEDIDA DE LA SOLUBILIZACIN DE FSFORO. ................................ 44

1.6.1

En medio slido: ................................................................................. 44

1.6.2

En medio lquido................................................................................. 44

1.7

SOLUBILIZACIN DE FSFORO. .......................................................... 45

1.7.1

Ciclo del Fsforo. ............................................................................... 45

1.7.2

Capacidad de solubilizar fsforo de los microorganismos. ................. 46

1.8
2

Preparacin del inculo. ........................................................................ 43

Resistencia a los Antibiticos. .................................................................. 47

CAPITULO 2 ................................................................................................... 48

ESTIMULACIN MAGNTICA Y CRECIMIENTO MICROBIANO. ....................... 48

2.1

Escherichia coli. ........................................................................................ 48

2.2

Saccharomyces cerevisiae. ...................................................................... 54

CAPTULO 3. .................................................................................................. 59

ESTIMULACIN MAGNTICA Y CAPACIDAD DE SOLUBILIZAR FSFORO. ... 59

10

3.1

Pseudomonas sp. ..................................................................................... 59

3.2

Bacillus sp................................................................................................. 64

3.2.1 GENERADOR DE CAMPO MAGNTICO UTILIZADO PARA

ESTIMULAR Bacillus substitute. ..................................................................... 67
3.3 APLICACIONES INDUSTRIALES DE ESTIMULAR MAGNETICAMENTE
MICROORGANISMOS. ...................................................................................... 69
DISCUSIN GENERAL ......................................................................................... 70
CONCLUSIONES: ................................................................................................. 74
BIBLIOGRAFA ...................................................................................................... 75

11

NDICE DE TABLAS.

Pg.
TABLA 1. Resumen de factores limitantes del crecimiento en microorganismos.. .............................. 28
TABLA 2. Propagacin celular ..................................................................................................................... 34
TABLA 3. NMP para calcular carga microbiana. ....................................................................................... 38
TABLA 4. Modelo de ensayo para calcular NMP. ..................................................................................... 39
TABLA 5. Nmero equivalente de microorganismos en la serie de tubos. ........................................... 41
TABLA 6. Proporcin de reactivos para preparar la escala de McFarland. .......................................... 41
TABLA 7. Procedimientos para medir crecimiento de microorganismos ............................................... 42
TABLA 8. Resumen de parmetros utilizados para estimular magnticamente E. coli ...................... 51
TABLA 9. Resumen de parmetros utilizados para estimular magnticamente S. cerevisiae........... 57
TABLA 10. Resumen de parmetros utilizados para estimular magnticamente Pseudomonas sp.62
TABLA 11. Resumen de parmetros utilizados para estimular magnticamente Bacillus sp. ........... 68
TABLA 12. E.coli sometida a 2 mT. ............................................................................................................. 71
TABLA 13. Crecimiento de S. cerevisiae y efecto de las variables. ....................................................... 72

12

NDICE DE FIGURAS.
Pg.
FIGURA 1. Parmetros bobina de Helmholtz. ........................................................................................... 20
FIGURA 2. Estimulacin magntica usando un Solenoide. ..................................................................... 21
FIGURA 3. Imn superconductor para estimular magnticamente S. cerevisiae. .............................. 22
FIGURA 4. Bobina para la exposicin de cultivos de clulas. ................................................................. 23
FIGURA 5. Bobina para la exposicin de cultivos de clulas en erlenmeyers. .................................... 23
FIGURA 6. Forma de las clulas bacterianas. ........................................................................................... 29
FIGURA 7. Curva de crecimiento microbiano. ........................................................................................... 31
FIGURA 8. Reproduccin asexual por biparticin. .................................................................................... 32
FIGURA 9. Levadura en proceso de gemacin. ........................................................................................ 33
FIGURA 10. Divisin celular por mitosis. .................................................................................................... 34
FIGURA 11. Diluciones sucesivas. .............................................................................................................. 36
FIGURA 12. Colonias rojas de coliformes en medio Tipo-Endo que contiene lactosa........................ 37
FIGURA 13. Fundamento de espectrofotometra en crecimiento celular. ............................................. 40
FIGURA 14. Turbidez de mcfarland comparado con una solucin microbiana y un tubo inocuo. ..... 41
FIGURA 15. Vista de Escherichia coli en microscopio de fuerza atmica. ........................................... 48
FIGURA 16. Reproduccin de clulas haploide y diploide de la levadura S. cerevisiae..................... 55
FIGURA 17. Pseudomona sp con flagelos. ................................................................................................ 60
FIGURA 18. Vase el halo de fsforo solubilizado alrededor de la colonia de Pseudomonas en agar
pikovskaya. ............................................................................................................................................. 60
FIGURA 19. Bacillus sp. ................................................................................................................................ 64
FIGURA 20. Influencia del campo magntico alterno, en el fondo congelacin y su accin
combinada en el crecimiento de Bacillus cereus: A.Es el control; B. Alternando mf; C. Accin
de Bacillus cereus en fro; D. Accin del campo magntico en fro. ............................................. 66
FIGURA 21. Generador de campo magntico. .......................................................................................... 67

13

INTRODUCCIN

El campo magntico es una propiedad fsica que influye en los seres vivos, por lo
que, es de inters cientfico y tecnolgico estudiar cmo acta en
microorganismos y su aprovechamiento en la industria alimentaria, agro y
tratamiento de aguas, entre otros.
Investigaciones fijan su atencin en un parmetro importante de microbiologa, el
crecimiento, ya que las bacterias despus de ser expuestas a campos magnticos
controlados manifiestan cambios en la reproduccin celular afectando el
funcionamiento del organismo expuesto, como sucede con Escherichia coli y
Saccharomyces cerevisiae. Adems, la capacidad de solubilizar fsforo de
bacterias que ayudan a las plantas en la asimilacin del elemento tambin se
cambia, pues experimentos realizados revelan variaciones en Pseudomonas sp y
Bacillus sp. despus de la magneto -estimulacin.
El presente trabajo discute la informacin cientfica recopilada sobre el crecimiento
de Escherichia coli y Saccharomyces cerevisiae, y la capacidad de solubilizar
fosfatos de Pseudomonas sp y Bacillus sp despus de ser sometidos a campos
magnticos.

14

PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA

Debido al creciente inters de la sociedad por utilizar los recursos naturales de
manera ms responsable, se han buscado mtodos amigables con el ambiente
que permitan adquirir eficiencia en procesos industriales a menor costo con
intervalos de tiempo cortos. Buscar una forma de acelerar los procesos de
crecimiento celular bacteriano y aumentar la capacidad de solubilizar fsforo, es
una opcin viable a travs de la estimulacin magntica de los microorganismos
ya que permite obtener resultados en tiempos menores a los esperados. Por otra
parte, la magneto-estimulacin en ciertas dosis tambin tiene efecto bactericida.
Por lo que su utilizacin puede disminuir la contaminacin microbiana en
alimentos, y con esto reducir la transmisin de enfermedades producidas por
bacterias patgenas (Al-Zeyara et al. 2010). De manera que esta tcnica tiene
aplicaciones en la industria en general.
En un medio en el que se deben ofrecer ms alimentos y productos con cada vez
menos recursos y tierra adecuada para esta actividad, condicionada adems a las
severas limitaciones que le impone el cambio climtico, es urgente y oportuna la
bsqueda de prcticas tecnolgicas alternativas, que se vislumbren como eficaces
y sustentables, capaces de dar salidas a las tpicas de la revolucin verde, incluida
la fertilizacin por sntesis qumica (Patio, 2010). El fsforo despus del
nitrgeno, es el nutriente inorgnico ms requerido por plantas y microorganismos
y adems, en el suelo es el factor limitante del desarrollo vegetal a pesar de ser
abundante tanto en formas inorgnicas como orgnicas.
En Colombia, estimular magnticamente microorganismos es una tarea que poco
se ha investigado. Debido a que la respuesta de las bacterias al campo
electromagntico es muy variable y depende directamente del tiempo e intensidad
del campo magntico suministrado, es importante recopilar la informacin
disponible, que permita tener una idea general sobre lo que es la estimulacin
magntica de microorganismos, que produce en el individuo y como ha sido
implementado en la industria.
Por tal razn, se desea discutir cmo un campo magntico controlado afecta la
capacidad de crecimiento de Escherichia coli, Saccharomyces cerevisiae, y
solubilizacin de fsforo de Pseudomonas sp y Bacillus sp. Para tal efecto esta
monografa se encaminar a estudiar la influencia de campos magnticos sobre
diferentes especies de bacterias para analizar su crecimiento y solubilizacin de
fsforo.

15

JUSTIFICACIN
Debido a que es difcil encontrar tratamientos industriales que resulten benficos
para los recursos naturales porque la mayora contaminan los ecosistemas, ha
crecido el inters por investigaciones que conduzcan al desarrollo de prcticas
ambientalmente amigables, capaces de evitar el crecimiento de bacterias
patgenas, incrementar la proliferacin de microorganismos de inters cientfico y
econmico, y aumentar la solubilizacin de fsforo (Zhang et al. 2002). Por tal
motivo, Zapata et al. (2002) plantean que se deben desarrollar mecanismos
posibilitadores del incremento en la reproduccin celular de organismos de uso
industrial, mediante estimulacin magntica, permitiendo disminuir el tiempo de
fermentacin, aumentar rendimiento y reducir costos en la produccin de
alimentos, enzimas y frmacos, entre otros.
Con ese fin, Ayed et al. (2007) han venido trabajando en la magneto-estimulacin
para cultivar con eficiencia microorganismos utilizando grupos de imanes,
obtenindose como resultado que el campo magntico ha cambiado la tasa de
crecimiento y ayuda a optimizar la elaboracin de productos que son capaces de
fabricar (Zapata et al. 2005). Entre los microbios cultivados con este tipo de
estimulacin se encuentra, E. coli ampliamente analizado por su resistencia a
agentes antimicrobianos y fcil duplicacin (Johnson, 2011; Romero, 2007). Por
otro lado, S. cerevisiae tambin ha sido sometida a campos magnticos, ya que,
es conocida en la elaboracin de alimentos; pero adems es de inters
investigativo por su fcil manipulacin y reproduccin rpida (Blackburn, 2006).
Por otro lado, el fsforo es uno de los elementos (macronutrientes) que las plantas
demandan en cantidades relativamente grandes. Su importancia radica en formar
parte de los fosfatos portadores de energa (ATP-ADP), fosfolpidos, cidos
nucleicos y varias coenzimas esenciales. Las plantas absorben la mayora del
fsforo como ion dihidrogenofosfato H2PO4- y pequeas cantidades como ion
hidrogenofosfato HPO42-. No obstante, la mayor parte del elemento en el suelo,
aproximadamente 95-99%, se encuentra en forma de fosfatos insolubles, los
cuales no pueden ser utilizados por las plantas (Kang et al. 2002).
Como medida para suplir la carencia de fsforo en el suelo se ha recurrido a la
aplicacin de fertilizantes fosfatados. Sin embargo, una considerable cantidad de
estos fertilizantes es convertida rpidamente a compuestos insolubles, lo cual no
resulta til para las plantas por terminar almacenados en el suelo (Narloch et al.
2002). Con el fin de incrementar la presencia del elemento de forma asimilable

16

para las plantas se fija la atencin en Pseudomonas sp como solubilizadoras de

fsforo, ya que, crecen con rapidez y tiene la habilidad de metabolizar variedad de
sustratos (Ruiz, 2007). Al igual que Bacillus sp, porque posibilita la disponibilidad
de fsforo soluble en el suelo y es importante en el ciclo de carbono y nitrgeno
(Zuiga et al. 2011).
Como se ha dicho, resulta til estudiar el crecimiento de bacterias de inters
cientfico y la solubilizacin de fsforo de diferentes microorganismos de uso
agroindustrial, despus de ser sometidos a diversos campos magnticos y analizar
los beneficios de esta prctica amigable con el medio ambiente.

17

OBJETIVOS

OBJETIVO GENERAL
Analizar la influencia de densidades de flujo magntico en el crecimiento de
Escherichia coli y Saccharomyces cerevisiae y en la capacidad de solubilizar
fsforo de Pseudomonas sp y Bacillus sp; comparando respuestas segn la
informacin encontrada.

OBJETIVOS ESPECFICOS

Discutir cmo la estimulacin magntica de E. coli y S. cerevisiae interviene

en el crecimiento celular, segn la informacin cientfica recopilada.
Discutir el efecto sobre la solubilizacin de fsforo, segn la informacin
cientfica disponible, de estimular magnticamente a Pseudomonas sp y
Bacillus sp.
Evaluar la aplicacin industrial de la estimulacin magntica para el
crecimiento de E. coli, S. cerevisiae y solubilizacin de fosforo de
Pseudomonas sp y Bacillus sp.

18

METODOLOGA

1. Recoleccin de informacin: Es realizada mediante las diferentes

herramientas electrnicas proporcionadas por la biblioteca de la
Universidad Tecnolgica de Pereira. Institucin que facilita el acceso a
revistas, libros y bases de datos. Adems, existen diferentes buscadores
acadmicos y sitios especializados.
2. Clasificacin de la bsqueda: Determinar la cantidad de citas
bibliogrficas relevantes y desechar la informacin que no contribuye al
desarrollo del trabajo.
3. Redaccin monografa: Escribir de manera lgica, argumentativa y
organizada, todos los aspectos involucrados con la estimulacin magntica
y los microorganismos en cuestin.

19

CAPITULO 1
1
1.1

MARCO CONCEPTUAL

CAMPOS MAGNTICOS.

Los campos magnticos son generados por cargas en movimiento y medidos por
la intensidad, que se define como la concentracin de lneas de fuerza por
centmetro cuadrado creadas en un campo magntico, y que existe en proporcin
a la accin del campo. La unidad de dicha intensidad es tesla y adopta ese
nombre en honor al cientfico Nikola Tesla (Ball, 2004). La estimulacin magntica
puede ser desarrollada mediante una bobina de Helmholtz que consiste de dos
bobinas circulares de radio R separadas por una distancia igual a su radio (Figura
1). Cada bobina est formada por espiras hechas de un hilo conductor, aislado y
enrollado que produce un campo uniforme en una regin situada entre las dos
bobinas. Lo anterior, es obtenido gracias a que el campo magntico de cada
espira se aade al de la siguiente, por lo que, es agrupado en el centro y hay
incremento de la intensidad en dicho punto (Ramsden, 2006; Alcalde, 2008). En
consecuencia el radio de la bobina y su separacin tiene campo magntico no
homogneo, es decir, todos los puntos poseen diferente intensidad magntica, lo
que hace necesario colocar las muestras que se desean estimular en el centro de
la bobina donde se concentra el campo magntico.

Figura 1. Parmetros Bobina de Helmholtz.

(Ramsden, 2006)

20

Por otra parte, Gaafar et al. (2006) utilizo estimulacin magntica implementando
un solenoide. Este dispositivo es un electromagneto que produce en el interior de
la bobina un campo magntico intenso y homogneo, lo que significa que en todo
el circuito magntico se genera la misma cantidad de campo. Consiste en un
alambre conductor largo enrollado en forma de espiras ubicadas una junto a la
otra (Figura 2), una fuente de voltaje y a veces un ncleo de hierro. (Tipler y
Mosca, 2005; Enrquez, 2000).

Figura 2. Estimulacin magntica usando un solenoide.

(Gaafar et al. 2006)

Otra forma de generar campos magnticos es mediante imanes

superconductores. Consta de electroimanes con la capacidad de soportar altas
dosis de electricidad y fuertes campos magnticos uniformes y estables, difciles
de obtener por otras tcnicas. En comparacin con los electroimanes
convencionales, los superconductores poseen ventajas, entre ellas crear
magnitudes de campo grandes en el orden de 10 T, mayor eficiencia y bobinas
ms compactas al no necesitar canales para la circulacin de refrigerantes (Ford y
Freedman, 2005; Lufkin, 2000).
La Figura 3 muestra el proceso implementado por Iwasaka et al. (2004) para
estimular magnticamente S. cerevisiae utilizando imanes superconductores:

21

Figura 3. Imn Superconductor para estimular magnticamente S. cerevisiae.

(Iwasaka et al. 2004)

Por otro lado, debido a su composicin electroltica, los seres vivos son por lo
general buenos conductores de electricidad. Adems, en los sistemas biolgicos
existen estructuras magnticamente influenciables como los radicales libres que
presentan propiedades paramagnticas y aquellas en las que intervienen
sustancias ferromagnticas. La respuesta de un sistema biolgico a un campo
magntico externo depende tanto de las propiedades magnticas intrnsecas del
sistema como de las caractersticas del campo externo y de las propiedades del
medio en el cual tiene lugar el fenmeno (Heredia et al. 2003).
En las ltimas dcadas, se ha presentado mucho inters en estudiar los posibles
efectos de los campos electromagnticos en sistemas biolgicos complejos y sus
aplicaciones en tratamientos, diagnsticos, monitoreo y control. Los campos
magnticos de bajas intensidades muestran diferencias significativas entre las
muestras tratadas y el testigo, cuando la energa inducida por los magnetos es
mayor que la energa trmica producida en el sistema durante el tratamiento
(Recalde, 2013).
El campo magntico puede aplicarse en la estimulacin de microorganismos de
inters (Figura 4 y 5). A diferencia de otros mtodos es posible utilizarlo sin
grandes variaciones en las lneas tecnolgicas, disminuyendo as notoriamente los
costos en la produccin de la industria alimentaria (Barbosa et al. 2000). En
diferentes lugares del mundo se ha venido estudiando la estimulacin magntica
de microorganismos para aumentar la fuente de biomasa, al igual que la
produccin de metabolitos de inters qumico, farmacutico e industrial,

22

identificando factores que estimulen su produccin a gran escala (Luna et al.

2011).

Figura 4. Bobina para la exposicin de cultivos de clulas.

(beda et al. 2011)

Figura 5. Bobina para la exposicin de cultivos de clulas en Erlenmeyers.

(Villalpanda et al. 2011)

Relacionado con la estimulacin magntica de microorganismos, existen

antecedentes. Fojt et al. (2004) estudiaron el campo magntico con Leclercia
adecarboxylata y Staphylococcus aureus resultando bajo crecimiento bacteriano,
por lo que segn Strask et al. (2002) la exposicin magntica tiene efecto
bactericida. Adems, Streptococcus mutans fue expuesta al magnetismo,
mostrando disminucin del crecimiento celular (Masahiro et al. 2000). En
contraste, Chacn et al. (2006) observaron que en Lactococcus lactis se produjo el
doble del volumen celular en presencia del campo magntico, y con respecto a

23

Streptomyces avermitilis aument la produccin de metabolitos secundarios pero

se inhibi el desarrollo morfolgico del microorganismo (Mei et al. 2011).
Zapata et al. (2002) atribuyeron los resultados anteriormente descritos a varios
factores: posibles alteraciones en la orientacin o estructura de las protenas del
microorganismo, a cambios en el flujo de iones que atraviesan la membrana
plasmtica al modificarse la velocidad de reproduccin celular, a variaciones en la
membrana lipdica y en la sntesis de ADN, produciendo como consecuencia
modificaciones del crecimiento bacteriano.
1.2

CRECIMIENTO MICROBIANO.

Todos los microorganismos requieren condiciones especficas para su ptimo

crecimiento. Adems de las necesidades nutricionales, intervienen factores
externos que permiten su reproduccin y que difieren para cada unicelular. Tales
factores incluyen: Actividad del agua, temperatura, pH y oxgeno. (Alarcn, 2001;
Tucker y Featherstone, 2011).

1.2.1 Nutrientes.
Segn Tortora et al. (2007) los microorganismos exigen nutrientes como carbono,
nitrgeno, azufre, fsforo y otros elementos que varan de un organismo a otro.
Dicha caracterstica est definida por la composicin qumica de la clula, su
estructura gentica y el entorno en el que se desarrollan. Por tal razn, se
encuentran en la naturaleza bacterias que pueden solubilizar fsforo,
biodegradadoras de compuestos orgnicos, fijadoras de nitrgeno o por el
contrario desnitrificadoras, entre otras. En consecuencia, los unicelulares
convierten diferentes sustancias qumicas tomadas del medio y las utilizan
dependiendo de su fisiologa (Alarcn, 2001).
Starr et al. (2004) afirman que los mecanismos por los cuales los microorganismos
obtienen nutrientes, se pueden clasificar en: quimiohetertrofas, quimioauttrofas,
fotoauttrofas, fotohetertrofas:
Las bacterias Quimiohetertrofas son parsitos que adquieren energa de
su husped vivo.

24

 Las Quimioauttrofas se alimentan mediante sustancias orgnicas e

inorgnicas que utilizan como fuente de carbono.
Las Fotoauttrofas se valen, al igual que las plantas, de la fotosntesis para
absorber energa y obtienen carbono del CO2.
Las Fotohetertrofas adquieren energa del sol, pero recibe el carbono de
compuestos orgnicos que provienen de otros seres vivos.
Por otro lado, la investigacin de cepas bacterianas en laboratorios, ha sido
posible por la implementacin de medios de cultivo artificiales ricos en nutrientes
que permiten el crecimiento microbiano a temperatura y pH controlados. Estos
medios poseen los compuestos especficos que necesita cada tipo de
microorganismo existente, por tal razn, es esencial comprender
los
requerimientos nutricionales del organismo en cuestin y suministrar el medio
adecuado. Muestra de ello, es que Escherichia coli puede tener multiplicacin
celular por las siguientes fuentes de alimento: Caldo bilis verde brillante, caldo de
enriquecimiento para enterobacterias, entre otros, y sucede de la misma forma
para todos los microorganismos (Corry et al. 2012).
1.2.2 Actividad del Agua.
Bylund (2003), asegura que el agua representa el 80-90% de la clula microbiana.
Es el compuesto esencial para la proliferacin de microorganismos en todo tipo de
medio de cultivo, ya que, en el se encuentran disueltos los nutrientes que aquellos
organismos aprovecharan de manera independiente.
En ausencia de humedad es imposible que las bacterias logren sobrevivir a menos
que formen esporas. La escasez de agua se produce cuando la presin osmtica
se eleva, aumentando la concentracin de soluto en los medios, lo que causa un
choque osmtico en la bacteria, provocando la plasmlisis e influyendo
negativamente en la proliferacin; adems, afecta las reacciones metablicas por
no disponer de la cantidad de agua necesaria (Forbes, 2009; Tortora et al. 2007).
1.2.3 Temperatura.
Existen microbios en todos los ecosistemas, incluyendo aquellos ambientes que
poseen temperaturas extremas como volcanes y zonas polares. Cuando el
microorganismo est expuesto a temperaturas mayores a la que es capaz de
25

crecer, se afecta las funciones metablicas de la clula, adems de las protenas y

cidos nucledos, llevndola a inactivarse (Romero, 2007). Por tal razn, segn
Tortora et al. (2007) los unicelulares tienen temperatura ptima de crecimiento, es
decir, en la que se manifiesta mejor su proliferacin. Dicha caracterstica permite
clasificarlos en tres grupos principales: sicrfilos, mesfilos y termfilos.
Para los sicrfilos la temperatura ptima est cerca de 15 C.
Los mesfilos se propagan entre 26 y 40 C, siendo la mayora de seres
microscpicos responsables de enfermedades en humanos, animales y
deterioro de alimentos.
Los termfilos entre 50 y 60 C, por lo que viven en climas clidos como
aguas termales.
Sin embargo, es importante resaltar que el crecimiento es menor en las
temperaturas mximas y mnimas del intervalo para cada organismo.
1.2.4 pH.
Determina la concentracin de iones hidrgeno que posee el entorno de un
microorganismo. La mayora de las bacterias crece en pH cercano al neutro, es
decir, entre 6.5 y 7.5. Por otra parte, los hongos proliferan en valores alrededor de
5. Por tal razn, se ha agrupado a los microbios segn su exigencia de pH en
categoras:
Acidfilos.
Neutrfilos.
Alcalfilos o basfilos.
Dicha necesidad a llevado a producir medios de cultivo que contengan la cantidad
de H+ requerido para el crecimiento del organismo en cuestin, valindose de
soluciones buffers como son las peptonas, aminocidos y sales de fosfato (Tortora
et al. 2007).

26

1.2.5 Oxgeno.
El oxigeno es el elemento determinante en la reproduccin celular. Su presencia
establece si crecer o no un ser microscpico, ya que, varia su requerimiento de
las necesidades de cada organismo. Muestra de ello, es que no todos exigen
incluir O2 en el medio para su propagacin (Romero, 2007). Esta caracterstica
permite dividir los microorganismos en seis grupos:
Aerobias. Estrictas y facultativas:
Aerobias estrictas son las que requieren obligatoriamente de oxgeno para
reproducirse, logrando generar ms energa a partir de nutrientes que los
microorganismos anaerobios. Por el contrario, las aerobias facultativas pueden
subsistir sin presencia del compuesto al valerse de la respiracin anaerbica o
mediante fermentacin (Tortora et al. 2007).
Anaerobias. Estrictas y facultativas:
Segn Montoya (2008) y Tortora et al. (2007) las anaerobias estrictas crecen en
ausencia de oxgeno nicamente, pues su existencia en el medio es letal, ya que,
posiblemente acumulan en el citoplasma radicales libres superxido (O 2-) que son
una forma toxica del oxgeno. Sin embargo, las anaerobias facultativas tienen la
capacidad de utilizar parte del elemento que se encuentra disponible en el
entorno, aunque no sea imprescindible para su supervivencia.
Microaeroflicas y Capnfilos:
En contraste, los microaeroflicos necesitan O2 en concentraciones menores a las
requeridas por las anaerobias, porque su multiplicacin se inhibe. Por otro lado,
existen bacterias que requieren concentraciones elevadas de CO2 y se conocen
con el nombre de capnfilos (Montoya, 2008; Tortora et al. 2007).
La tabla 1 muestra un resumen general de los factores que intervienen en el
crecimiento de los microorganismos.

27

Tabla 1. Resumen de factores limitantes del crecimiento en microorganismos.

Fuente (Autores).
CRECIMIENTO
Clasificacin
Caracterstica.
Factor
Quimiohetertrofas
Quimioauttrofas
Nutrientes
Fotoauttrofas
Fotohetertrofas.

Actividad del agua.

Todos los
microorganismos.

Sicrfilos.
Temperatura.

Mesfilos.
Termfilos.
Acidfilos.
Neutrfilos.

pH.
Alcalfilos o basfilos.

Aerobias estrictas.

Aerobias facultativas.
Oxgeno.
Anaerobias estrictas.
Anaerobias Facultativas.

28

Los sustraen de su
husped vivo.
Utilizan sustancias
orgnicas e inorgnicas.
Mediante la fotosntesis y
el CO2.
Por fotosntesis y otros
seres vivos.
80-90% de las clulas. Es
imposible la proliferacin
bacteriana en ausencia
del elemento.
Crecimiento ptimo a
15C
26 40 C
50 60 C
Aunque la mayora de
microorganismos crecen
en pH entre 6.5 y 7.5
existen diferentes
exigencias.
Necesitan
obligatoriamente del
elemento para vivir.
Pueden sobrevivir en
ausencia o presencia de
O2.
nicamente crecen sin
oxgeno.
Proliferan en ausencia o
presencia de O2.

Microaeroflicas.
Oxgeno.
Capnfilos.

1.3

Requieran del elemento

en pequeas
concentraciones.
Necesitan CO2 a elevada
concentracin.

CURVA DE CRECIMIENTO CELULAR.

Las procariotas utilizan reproduccin asexual. Esto es, una clula madre se divide
produciendo dos hijas idnticas genticamente. Lo que lleva a concentrar miles de
clulas en grupos llamados colonias que tienen diferencias en su color, borde,
forma y superficie, caractersticas dependientes del tipo de microorganismo
(Tucker y Featherstone, 2011). Adems, el crecimiento permite clasificar los seres
microscpicos segn su forma en (Figura 6):
Bacilos (alargados).
Cocos (redondos).
Espirilos (hlice rgida).
Vibrios (coma).
Espiroqueta (hlice flexible).

a) Bacilos.

b) Cocos.

c) Espirilos.

d) Vibrios.

Figura 6. Forma de las clulas bacterianas.

(Tortora et al. 2007).

29

e)

Espiroqueta.

Por otra parte, el proceso de multiplicacin se divide en cuatro fases: latencia,

exponencial, estacionaria y muerte (Figura 7), y su duracin depende del
microorganismo (Tucker y Featherstone, 2011).
1.3.1 Fase de Latencia.
Periodo de adaptacin de los microorganismos al medio que lo rodea. Aunque las
clulas no estn inactivas el nmero de ellas aumenta muy poco o nada y la etapa
puede durar de horas a das (Negroni, 2009). Segn Silva et al. (2006) y Romero
(2007), durante esta fase la bacteria produce enzimas esenciales y otras sustancias
que ayudan a su acoplamiento en el medio. Tambin, incrementan su actividad
metablica y se almacena ARN y otros productos que ayudan para el metabolismo.
A medida que va trascurriendo el tiempo de adaptacin comienza su duplicacin de
manera lenta.

1.3.2 Fase de Crecimiento Logartmico o Exponencial.

Terminado el periodo de adecuacin, empieza a notarse incremento de clulas, ya
que, existen condiciones optimas de pH, temperatura y nutrientes. El crecimiento
es mximo en esta etapa llegando a ser constante; por lo tanto, se genera una
relacin lineal entre el tiempo y el nmero de unidades formadas, como ilustra la
Figura 5 (Negroni, 2009). Adems, existe mayor produccin de metabolitos, lo que
la hace la fase para uso industrial. Sin embargo, cuando los microorganismos
atraviesan el crecimiento exponencial, son ms susceptibles a perturbarse por
entornos hostiles que perjudican su reproduccin (Tortora et al. 2007).

1.3.3 Fase Estacionaria.

Romero (2007) y Tortora et al. (2007), aclaran que en esta fase las condiciones
declinan, los nutrientes se agotan, empieza a concentrarse desechos nocivos y el
pH del medio de cultivo cambia a estado cido. Los seres microscpicos terminan
muriendo al generarse un ambiente txico en el que solo las bacterias ms fuertes
logran mantenerse vivas y multiplicarse. Con esto, inicia un periodo de equilibrio
entre clulas vivas y muertas en que los organismos viables tienen actividad
metablica lenta.

30

1.3.4 Fase de Declinacin o Muerte Celular.

A medida que trascurre el tiempo las condiciones empeoran cada vez ms al no
existir nutrientes e incrementarse los desechos txico. Por lo que, las bacterias no
se encuentran en el ambiente propicio para seguir existiendo. Debido a su
entorno, desciende el nmero de organismos de forma exponencial culminando en
muerte total de la poblacin (Tortora et al. 2007).

Figura 7. Curva de Crecimiento Microbiano.

(Tucker y Featherstone, 2011).

1.4

TIPOS DE REPRODUCCIN EN MICROORGANISMOS.

Los seres vivos, independientemente de la especie, necesitan propagarse, debido

a que es la nica manera de garantizar la prolongacin biolgica. Tal condicin
obliga a que las clulas utilicen su capacidad de transmitir material gentico a sus
descendientes, produciendo seres idnticos a su antecesor (Jaramillo, 2004).
Existen diferentes mecanismos por los que es posible la duplicacin, a
continuacin se exponen algunos de ellos:

31

1.4.1 REPRODUCCIN ASEXUAL.

Se manifiesta principalmente en organismos unicelulares como bacterias y
hongos, entre otros. Consiste en la divisin mittica de la clula implicada, por lo
que es generado uno o varios seres genticamente idnticos al progenitor. Todo
es posible debido a que el individuo tiene la capacidad de fragmentar o
desprender parte de su cuerpo que contiene material gentico y desarrollar un
nuevo individuo. En este tipo de reproduccin no es necesaria la presencia de
rganos reproductivos, esa ventaja hace que los organismos logren propagarse de
forma rpida (Jaramillo, 2004). La reproduccin asexual se manifiesta de las
siguientes maneras:
1.4.1.1 Biparticin (divisin binaria).
En este proceso el cromosoma de la clula madre se replica, separndose hacia
extremos opuestos del individuo (Figura 8). Despus crea la nueva pared entre
ambas porciones de material gentico, produciendo dos clulas que poseen
cromosomas idnticos a su antecesora (Pierce, 2009).

Figura 8. Reproduccin asexual por biparticin.

(Pierce, 2009)

32

1.4.1.2 Gemacin.
Tipo de reproduccin frecuente en levaduras, en el que la clula desarrolla
protuberancias o yemas que pasan por un periodo de alargamiento hasta
desprenderse, formando as un individuo nuevo semejante al progenitor (Figura 9)
(Montoya, 2008; Jaramillo, 2004).

Figura 9. Levadura en proceso de Gemacin.

(Tortora et al. 2007).

1.4.1.3 Mitosis.
Segn Flores (2004) y Passarge (2009), es la divisin propia de las eucariotas.
Tambin conocido como cariocinesis, que genera dos clulas hijas genticamente
idnticas al dividirse el ncleo de forma equitativa. Se desarrolla en varias fases
(Figura 10).
1. Profase: Periodo en que los cromosomas son condensados volvindose
ms cortos y gruesos. Adems, empieza a formarse el huso mittico, el cual
se ocupa de orientar los cromosomas hacia polos opuestos de la clula
mediante los centriolos.
1. Metafase: El huso mittico se forma totalmente como filamentos finos. Los
cromosomas se unen a las fibras del huso, para ser desplazadas al plano
ecuatorial de la clula.
2. Anafase: Se separa el centrmero quedando dos cromtides de cada
cromosoma, que sern extradas hacia los polos de la clula.

33

3. Telofase: El huso es desintegrado al dispersarse las fibras. Se rompe la

membrana nuclear para formar dos nuevas envolturas y es dividido el
citoplasma, adems las cromtides llegan a sus polos.

1. Profase.

2. Metafase.
Huso.

Plano ecuatorial.

3. Anafase.

4. Telofase.

Figura 10. Divisin celular por mitosis.

(Flores, 2004)

La Tabla 2 es un resumen de los tipos de reproduccin celular:

34

Tabla 2. Propagacin celular. Fuente (Autores).

Tipos de reproduccin Celular.
Una clula madre se
divide en partes iguales
Biparticin.
produciendo dos hijas
con
cromosomas
idnticos a la progenitora.
Las
clulas
crean
protuberancias que se
Gemacin.
desprenden
formando
otro individuo.
Tipo de reproduccin en
eucariotas que se divide
Mitosis.
en: Profase, metafase,
anafase y telofase.

1.5

ALGUNOS MTODOS PARA MEDIR CRECIMIENTO CELULAR EN

MICROORGANISMOS.

El crecimiento celular es un parmetro muy importante en el estudio

microbiolgico. Por tal motivo, han sido creadas tcnicas adecuadas,
desarrolladas hace aproximadamente cien aos por cientficos, que posibilitan el
anlisis confiable de resultados (Tortora et al. 2007) obtenidos al estimular
magnticamente microorganismos. A continuacin se citan algunos de ellos:
1.5.1 Recuento en placa.
Es el mtodo ms utilizado. Se basa en presumir que cada clula se divide hasta
formar una colonia. Segn Fojt et al. (2009), en la prctica esto no es verdico, ya
que, en el laboratorio se suele utilizar muestras pequeas de colonias que son
compuestas por ms de una sola clula. De ah que la tcnica se reporte en UFC
(Unidades Formadoras de Colonias), que se conoce como el nmero de bacterias
vivas capaces de formar una colonia.
Para garantizar la lectura correcta del nmero de elementos presentes en cada
caja de Petri, es necesario que las colonias no se encuentren aglomeradas, pues
en esas condiciones es imposible identificarlas individualmente y no se desarrollan
35

de manera adecuada. Por tal motivo, se deben implementar diluciones en

soluciones estriles (Figura 11) que permiten disminuir la carga microbiana y
calcular las UFC de la muestra inicial (Tortora et al. 2007).

Figura 11. Diluciones sucesivas.

(Tortora et al. 2007)

Cada dilucin requiere 9 ml de caldo estril, a los que ser adicionado 1 ml de la

muestra problema, la solucin es homogenizada en un tubo tapa rosca marcado
como Dilucin 10-1 para sembrarlo en caja de Petri (segn el mtodo deseado),
igual que lo muestra la Figura 11. Posteriormente, es tomado 1 ml de la solucin
10-1 para agregarlo en 9 ml de caldo contenido en un tubo de ensayo marcado
como 10-2 y sembrarlo. El proceso es repetido cuantas veces necesite el analista
hasta llegar a la cantidad de microorganismos viables que desee, permitiendo as
su recuento adecuado. Aadido a eso, es preciso escoger un mtodo de siembra
entre las diferentes tcnicas existentes, es decir, por diseminacin y profundidad,
donde la ltima es tambin conocida con el nombre de vertido en placa. (Tortora et
al. 2007). Conjuntamente, es importante sembrar por triplicado, pues este es un
mtodo sensible porque existe muchos factores que intervienen en los resultados
como: Desarrollo de colonias muy pequeas que son pasadas por alto al realizar
el recuento, adems no todas se forman a la misma velocidad en idnticas
condiciones de incubacin (Madigan et al, 2004).

36

1.5.2 Filtracin.
Segn Leiva (2006) este mtodo es frecuente para determinar la carga microbiana
en agua. Se utiliza una membrana estril con poros de 0,45 m que impiden el
paso de las bacterias, por lo que son retenidas en aquel filtro que posteriormente
es incubado sobre un medio selectivo. La tcnica permite saber si la muestra de
lquido posee coliformes totales o fecales, debido a que las colonias desarrollan
cierta coloracin, dependiendo al medio de cultivo. Mostrando dicha caracterstica
esta el agar Endo, que posee sulfito de sodio y fucsina bsica permitiendo crecer
solo bacterias gram negativas, en este medio las colonias de coliformes son
rosadas (Figura 12) ya que el microorganismo tiene la capacidad de fermentar
lactosa.

Figura 12. Colonias rojas de coliformes en medio tipo-Endo que contiene lactosa.
(Leiva, 2006)

1.5.3 Nmero ms probable (NMP).

Desarrollada por la tcnica de fermentacin en tubos mltiples, la cual permite
establecer mediante clculos de probabilidades la presencia y cantidad de
coliformes o microorganismos que no crecen en medios slidos en una muestra
dada. El mtodo se basa en que las bacterias del compuesto a analizar, pueden
separarse agitando el medio de cultivo liquido y de esa manera quedar bien
distribuidas, resultando una suspensin de bacterias homognea. Mediante
diluciones seriadas es inoculada la muestra problema en tubos de ensayo estriles
que contienen el medio adecuado, permitiendo as que solo en algunas diluciones
crezcan bacterias. De esta manera se produce una mezcla de resultados positivos

37

y negativos que permite estimar el NMP de microorganismos presentes (Roldn y

Ramrez, 2008).
La Tabla 3 expresa resultados de una muestra de agua con 95% de confiabilidad,
arrogados por clculos estadsticos al observar 3 series de 5 tubos que revelan ser
positivos (poseen turbiedad y/o produccin de gas) o negativos (ningn cambio,
por lo tanto no existe crecimiento) con respecto a la proliferacin microbiana:

Lmite de confianza de 95 %
Inferior
Superior
9
56
12
65
12
67
15
77
16
80

Combinacin de
positivos
4-2-0
4-2-1
4-3-0
4-3-1
4-4-0

ndice de
NMP/100 ml
22
26
27
33
24

5-0-0
5-0-1
5-0-2
5-1-0
5-1-1
5-1-2

23
30
40
30
50
60

9
10
20
10
20
30

86
110
140
120
150
180

5-2-0
5-2-1
5-2-2
5-3-0
5-3-1
5-3-2

50
70
90
80
110
140

20
30
40
30
40
60

170
210
250
250
300
360

Tabla 3. NMP para calcular carga microbiana.

(Tortora et al. 2007).

38

Ejemplo (Tabla 4.):

Para las series 1,2 y 3 existen 4, 2 y 0 tubos respectivamente, positivos (presencia
de turbidez) lo que significa crecimiento celular. Por lo tanto, segn la Tabla 3, el
nmero ms probable de microorganismos es de 22NMP/100ml y el 95 % de las
muestras con este resultado poseen entre 9 a 56 bacterias.

Tubos

Serie 1

Sin cambio

Turbidez

Turbidez

Turbidez

Turbidez

Serie 2

Turbidez

Sin cambio

Turbidez

Sin cambio

Sin cambio

Serie 3

Sin cambio

Sin cambio

Sin cambio

Sin cambio

Sin cambio

Tabla 4. Modelo de ensayo para calcular NMP.

(Autores)

1.5.4 Espectrofotometra y escala de Mcfarlan.

Cuando los seres microscpicos se reproducen en medios lquidos, estos cultivos
se tornan turbios demostrando as la propagacin. Ya que la turbidez es un
parmetro practico para controlar la carga microbiana, es til implementar
mtodos que permitan determinar la concentracin de microorganismos en medios
de cultivo acuosos, que por tiempo y recursos, no es posible su recuento en placa.
Por ello, se recurre al espectrofotmetro, pues permite medir con exactitud la
cantidad de organismos del medio al tener una solucin lo bastante turbia, es
decir, que existan entre 10 a 100 millones de bacterias por cada mililitro (Tortora et
al. 2007).
El fotmetro mide la intensidad de una fuente luminosa que incurre sobre alguna
superficie. Con microbios, el haz de luz a una longitud de onda determinada,
atraviesa la solucin bacteriana, por lo tanto, entre ms seres se encuentran en la
suspensin, menos luminosidad llegara a la clula fotoelctrica (Figura 13). De
este modo, el detector del instrumento mostrar dicho fenmeno en unidades que
el observador pueda analizar, es decir, % de transmitancia o absorbancia, donde

39

la absorbancia ser til para graficar la curva de crecimiento que permite estimar
la concentracin de microorganismos (Tortora et al. 2007; Delgadillo et al. 2010).

Figura 13. Fundamento de Espectrofotometra en crecimiento celular.

(Tortora et al. 2007).

Por otro lado, la turbidez estndar de 0,5 o escala de Mcfarland, mediante once
alcuotas de BaCl22H20 y H2SO4 almacenadas en tubos de ensayo bien sellados,
permite comparar la solucin bacteriana motivo de anlisis con parmetros ya
establecidos y presumir la cantidad de microorganismos presentes (Figura 14). Se
trata de una serie de tubos con turbidez definida, donde cada solucin
corresponde a una concentracin bacteriana, por lo tanto se toman como base
para establecer la carga microbiana de la solucin motivo de anlisis (Tabla 5). La
exactitud de la escala es verificada mediante fotometra, ya que, a 625 nm la
absorbancia de la turbidez 0,5 debe ser entre 0,08 - 0,1 y de esta manera se
garantiza que concuerde con los valores de concentracin microbiana estipulados
(Perilla et al. 2004).
En la Figura 14 se comparan tres tubos. El a forma parte de la turbidez estndar
de Mcfarland y se confronta con b, la solucin bacteriana motivo de estudio que no
es traslucida porque los microorganismos cuando crecen en medio acuoso

40

producen soluciones opacas o turbias; en contraste c es un tupo inocuo, por lo

que no presenta turbidez.
Nmero de la
turbidez estndar
0.5
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10

Densidad de bacterias
aproximada
correspondiente.
1x108
3 x108
6 x108
9 x108
12 x108
15 x108
18 x108
21 x108
24 x108
27 x108
30 x108

Tabla 5. Nmero equivalente de microorganismos en la

serie de tubos.
Figura 14. Turbidez de

(Perilla et al. 2004)

Mcfarland comparado con

una solucin microbiana y un
tubo inocuo.

Aunque en el mercado se encuentra disponible la turbidez estndar, es posible

prepararla a partir de cloruro de bario al 1,175% (p/v) y acido sulfrico 1% (p/v).
Las cantidades de cada reactivo son las descritas en la Tabla 6 y pueden ser
conservadas durante seis meses, siempre que no se evapore parte de la solucin.

Tabla 6. Proporcin de
reactivos para preparar
la escala de Mcfarland.
(Perilla et al. 2004)

41

Tabla 7. Procedimientos para medir crecimiento de microorganismos. Fuente

(Autores).
Tcnicas para valorar crecimiento celular.
Caracterstica.
Mtodo

Recuento en placa.

Los resultados son

reportados en UFC y el
mtodo propone que se
formada una colonia por
clula.

Filtracin.

Es utilizada generalmente
para recuento de
coliformes en agua.

Nmero ms probable.

Mezcla de tubos que

mediante probabilidades
permiten estimar el
nmero microorganismos
presentes en una
muestra dada.

Espectrofotometra.

Mediante la turbidez de la
suspensin bacteriana a
una longitud de onda
determinada es medida la
cantidad de
microorganismos
presentes.

Turbidez estndar de 0,5

o escala de Mcfarland.

Serie de tubos con

turbidez definida, que se
comparar con los
microorganismos en
medio acuosos para
estimar cualitativamente
la concentracin.

42

1.5.5 DETERMINACIN DE LA SOLUBILIZACIN DE FOSFATOS EN EL

LABORATORIO.
1.5.5.1 Preparacin del inculo.
En un matraz con 100 ml de caldo de nutrientes se inocula con el cultivo de agar
inclinado de Pikovskaya y se incuba a 30 0,2 C durante 48 h. Las clulas se
separaran del caldo mediante centrifugacin a 10.000 rpm durante 20 min, se
lavan dos veces con agua destilada estril y se resuspenden en agua destilada
estril. Esta suspensin se utiliza como inculo. Todos los pasos se llevan a cabo
en condiciones aspticas. (Ramani, 2011).
Los siguientes medios de cultivo se utilizan para el aislamiento, identificacin y
deteccin de bacterias solubilizantes de fosfato:

Medio de agar / caldo de Pikovskaya (g / l)

Glucosa 10 g; fosfato triclcico (TCP) 5 g; sulfato de amonio 0,5 g; cloruro de
sodio 0,2 g; cloruro de potasio 0,2 g; sulfato de magnesio 0,1 g; extracto de
levadura 0,5 g; sulfato de manganeso, rastrear; ferroso sulfato, traza; agar, se
aaden 15 g a 1 L de agua destilada, el pH se ajusta a 7,0 0,2 antes de la
esterilizacin. Despus de la esterilizacin se aade 50 g/ml ciclohexamida
aspticamente al medio de enfriado (60 C) para inhibir el crecimiento de hongos
(Ramani, 2011).

Agar modificado de Pikovskaya: (g / l)

El medio anterior se modifica mediante la adicin de 4,0 ml de 0,16% de solucin
de azul de bromofenol (en etanol) a 1 litro del medio antes de la esterilizacin. Se
utiliza el medio para la deteccin de fosfato soluble basado en la zona clara de la
solubilizacin de fosfato alrededor de las colonias.
0,02% de NaCl en el medio de agar original del Pikovskaya se sustituye por
diferentes concentraciones (0,04 a 25%) de NaCl.
El pH se ajusta a 7,0 0,2 antes de la esterilizacin (Ramani, 2011).

43

Caldo modificado de Pikovskaya: (g / l)

0,02% de NaCl en caldo de la Pikovskaya fue sustituido por diferentes
concentraciones (0,02%, 0,06, 0,1%, 0,2%, 0,6% y 1%) de NaCl que tiene la CE
correspondiente 2 (2,10, 2,69, 3,35, 4,91, 9,74 y 15,51 mS cm -1 ,
respectivamente, a 25 C) (Ramani, 2011).
Fosfato triclcico (TCP) se sustituye de forma individual por el fosfato ferroso (FP),
fosfato de aluminio (AP) y el fosfato diclcico (DCP) en la cantidad equivalente a
229 mg% de P2O5.
TCP fue reemplazado con los fosfatos de roca (RPS) y harina de hueso (BM) en
cantidad equivalente a 100 mg% de P2O5.
El pH se ajusta a 7,0 0,2 antes de la esterilizacin (Ramani, 2011).

1.6

MEDIDA DE LA SOLUBILIZACIN DE FSFORO.

1.6.1 En medio slido:

En el medio que contiene agar modificado de azul de bromofenol de Pikovskaya
mediante la observacin de zona clara solubilizante TCP (Fosfato triclcico)
alrededor de las colonias. Todas las placas se incuban a 28 C 0,2 C durante
24 h. Se mide la zona de solubilizacin de fosfato que rodea la colonia
(halo). Tamao de la zona clara se calcula restando dimetro de la colonia menos
el dimetro total del halo.

1.6.2 En medio lquido.

La actividad en caldo de Pikovskaya contiene 0,5% de TCP (Fosfato triclcico). En
un matraz que contenga 100 ml de caldo de Pikovskaya se inocula aspticamente
1,0 ml de inculo. Medio no inoculado sirve como control y se incuba a 28 0,2
C durante 21 das bajo condiciones estticas y se agita a 12 intervalos h. 10,0 ml
de medio se retira en cada tercer da y se centrifuga a 10.000 rpm durante 20 min.
El sobrenadante se analiza para determinar su contenido de agua soluble en
fsforo por el mtodo de molibdofosfrico reducida chlorostannous azul cido

44

descrito por Jackson (1973). El pH final del medio se mide utilizando medidor de
pH contra la solucin tampn estndar. El experimento se lleva a cabo por
triplicado.
Entre los gneros bacterianos ms estudiados por su capacidad para solubilizar
fosfatos se encuentran: Pseudomonas, Bacillus, Rhizobium, Burkholderia,
Achromobacter, Agrobacterium, Microccocus, Aerobacter, Flavobacterium,
Azotobacter y Erwinia observando una cantidad considerablemente mayor en la
rizosfera, en comparacin con el suelo no rizosferico (Kumar, 2001). Igualmente,
se ha documentado la actividad fosfato solubilizadora por diferentes hongos
(Prez, 2012).
Fueron seleccionadas Pseudomonas sp. y Bacillus sp. sobre la base de la
tolerancia a la sal y la actividad de solubilizacin de fsforo con diferentes formas
de fosfatos (Ramani, 2011).

1.7

SOLUBILIZACIN DE FSFORO.

1.7.1 Ciclo del Fsforo.

Es el proceso de circulacin del elemento en la corteza terrestre. El P se
encuentra principalmente en la litosfera, tambin existe en huesos fsiles, rocas
fosfatadas y excremento de aves. Las lluvias y los ros disuelven el fsforo
retenido en las diversas fuentes para ser asimilado por las plantas a travs de las
races. El proceso hace que el fsforo sea integrado en los cidos nucleicos para
utilizarlo en el material gentico de los microorganismos. Al morir las plantas, se
reintegra el fsforo al suelo como fosfato soluble por la accin de las bacterias. Sin
embargo, el fsforo puede drenarse por la erosin, llegando al mar donde lo toman
animales y seres humanos para consumo, o como medio para producir
fertilizantes, por lo que el fsforo regresa al suelo (De la llata, 2003; Manahan,
2007).

45

1.7.2 Capacidad de solubilizar fsforo de los microorganismos.

El fsforo es uno de los nutrientes inorgnicos ms requeridos por plantas, ya que
hace parte de las molculas de ADN, ARN y posibilita la transferencia de energa
como ATP (Barroti et al. 2001). En el suelo, el elemento limita la produccin y
rendimiento vegetal aunque se encuentre presente en formas inorgnicas y
orgnicas, debido a que se halla en concentraciones bajas que varan de 5 y 30
mg Kg-1, tales niveles son producidos al reaccionar el fosforo del suelo con iones
de Calcio, Hierro o Aluminio que provocan precipitacin o fijacin, disminuyendo
de esta forma la disponibilidad para las plantas (Fernndez et al. 2004). Adems,
segn Pea y Cardona (2010) su disponibilidad est ligada a la naturaleza del
suelo, donde una variable importante es el pH que debe ser entre 5.5 y 7.9.
Los fosfatos inorgnicos aplicados como fertilizantes qumicos son retenidos en el
suelo y como resultado no son aprovechados por los cultivos. Por ello, se estima
que la solubilizacin de rocas fosfatadas y de otras fuentes de fsforo inorgnico
por los microorganismos del suelo es una opcin para elevar la cantidad del
elemento disponible para las plantas (Fernndez et al. 2004).
La actividad microbiana en la rizosfera es de gran transcendencia, al solubilizar los
fosfatos no disponibles para la planta, los cuales se encuentran bajo formas
orgnicas e inorgnicas. La habilidad para solubilizar los fosfatos se encuentra
presentes en abundantes microorganismos como bacterias, levaduras,
actinomycetes y hongos de vida libre que han sido relacionados con el incremento
en la disponibilidad de fsforo en el suelo. Se ha estimado que entre el 10 - 50 %
de la flora bacteriana existente en el suelo posee la capacidad de solubilizar
fsforo, algunos de ellos con mayor eficacia como Pseudomonas, Micrococcus,
Bacillus y Flavobacterium (Pea y Cardona, 2010). A travs de las aplicaciones de
los biofertilizantes a base de microorganismos solubilizadores de fosfatos, la
disponibilidad de fsforo puede incrementarse y el producto de su accin (fosfato
soluble) puede ser absorbido eficientemente por las plantas (Fernndez et al.
2004).
El fsforo es limitante para la produccin de cultivos y se ha estimado que los
recursos mundiales de fosfato de roca de bajo costo pueden ser agotados para el
ao 2050 (Vance et al. 2003). La falta de fsforo de bajo costo ha sido reconocida
como una potencial crisis futura en la agricultura. La mejora de la absorcin de
fsforo en las plantas y su utilizacin tendr algunos impactos significativos en la
agricultura y en el medio ambiente (Singh y Satyanarayana, 2011).

46

En el laboratorio es evidente que los microorganismos tienen la capacidad de

solubilizar fosfato cuando el medio de cultivo presenta zonas claras, conocidas
con el nombre de halos, que rodean las colonias. Sin embargo, existen
organismos que no forman halos por lo que es necesario realizar pruebas
cuantitativas en medio lquido (Bonilla, 2005).

1.8

Resistencia a los Antibiticos.

Los antibiticos son sustancias producidas por bacterias, hongos y actinomicetos,

que inhiben el crecimiento de otro microorganismo o lo elimina; son de bajo peso
molecular y tambin se pueden obtener por sntesis qumica. La resistencia a esos
agentes se debe a que el organismo ha desarrollado mecanismos que restan
actividad al antibitico o lo hacen intil, por lo que disminuye su sensibilidad (Daz
et al. 2001). Segn, Restrepo et al. (2003) los aspectos que hacen posible esa
resistencia son: mutaciones espontaneas que afectan a los genes codificadores de
la molcula ligada al antibitico, reorganizacin gentica u obtencin de plsmidos
que otra bacteria transfiere permitiendo pasar dicha resistencia de una clula
medre a sus hijas.
Forbes (2009) explica que la resistencia a los frmacos por parte de un
microorganismo se distingue en:
Intrnseca o inherente: Se presenta de forma natural, siendo parte de la
estructura gentica, por lo que es una caracterstica del microorganismo.
Esta particularidad hace posible identificar ciertas bacterias o grupos por
tener resistencia predecible a los antibiticos.
Adquirida: Es impredecible. Puede obtenerse por mutaciones o genes de
otra bacteria, provocando alteraciones en la composicin gentica de la
clula y con ello cambio en su fisiologa y estructura.
La disminucin de la sensibilidad de algunas bacterias a los antibiticos se
produce gracias a que los microorganismos poseen la capacidad de eliminar el
frmaco antes de que este ejerza su accin sobre la clula, tambin pueden
inactivar enzimticamente el medicamento o restringir la entrada del mismo al
microorganismo (Restrepo et al. 2003). Adems, cuando se someten a
estimulacin magntica tambin han demostrado resistencia a los antibiticos
(Ibraheim et al. 2013)

47

CAPITULO 2

ESTIMULACIN MAGNTICA Y CRECIMIENTO MICROBIANO.

2.1

Escherichia coli.

E. coli es el microorganismo mas estudiado por el ser humano. Su descubrimiento

se remonta a 1885, gracias al pediatra Theodor Escherich (1857-1911) quien aisl
la bacteria de las heces de uno de sus pacientes, y por tal motivo se le atribuye
dicho nombre (Johnson, 2011). Se reproduce con facilidad en ambientes
cotidianos para el hombre y animales tales como tierra, agua y plantas, ya que, su
temperatura ptima de crecimiento se encuentra en 37C (Allauca, 2005), lo que la
hace pertenecer al grupo de los mesfilos. Dicha caracterstica vuelve a este
bacilo un ser habitual en el intestino grueso y delgado, por ello es el
microorganismo ms relacionado con enfermedades gastrointestinales usuales en
personas y animales (Koneman y Allen, 2008).
Se identifica por ser miembro de la familia enterobacteriaceae. Es un bacilo gram
negativo, aerobio facultativo que mide 1 x 2 m (Figura 15); goza de una sola
cadena en espiral de ADN, se mueve mediante flagelos pertricos, no produce
esporas y forma fimbrias y pilis (Snchez y Trejo, 2006). E. coli es fermentadora
de lactosa y a partir de glucosa fermenta manitol; adems es positiva para indol y
descarboxilasa de lisina. Tambin, es motivo de investigacin su resistencia a
antimicrobianos y la capacidad de producir toxinas, fortaleza originada en los
plsmidos porque contienen informacin gentica que lo hace posible (Romero,
2007).

Figura 15. Vista de Escherichia coli en Microscopio de Fuerza Atmica.

(Klinth et al. 2012)

48

Para cultivar en laboratorio, es necesario a 37 C utilizar como medio de cultivo

agar EMB, que es especfico y da una tonalidad caracterstica de este
microorganismo: verde metlico brillante. Este agar es el ms utilizado, ya que,
contiene azul de metileno actuando como agente inhibitorio del crecimiento de
bacterias gram positivas (Alarcn, 2001). Sin embargo, es capaz de crecer en
muchos otros medios sintticos como agar cromognico, base de agar endo, agar
eosina azul de metileno, caldo lactosado, entre otros (PANREAC, 2009).
En lo referente a la estimulacin magntica E. coli ha sido objeto de varios
estudios, entre ellos se ha observado la respuesta del crecimiento del bacilo, como
se describe a continuacin:
Segn Shin-ichiro et al. (2002) y Zhang et al. (2002), E. coli fue expuesta a
campos magnticos durante el periodo de crecimiento exponencial resultando en
muerte bacterial al presentarse disminucin de clulas, en comparacin con el
control, por lo que, los investigadores sugieren que la estimulacin ocasiona
cambios en el metabolismo de la clula y varia el pH del medio Luria Bertani a
bsico, porque E. coli toma los aminocidos y los transforma en sustancias como
el amoniaco. Adems, al afectar la proliferacin del microorganismo tambin existe
interferencia en la actividad oxido-reductiva y esa variacin se incrementa a
medida que aumenta el tiempo de exposicin (Strask et al. 2002).
Asimismo, mediante un ensayo Fojt et al. (2004) comparan los efectos de la
estimulacin magntica con la viabilidad del bacilo, mediante conteo de UFC. En
esta ocasin E. coli fue expuesta al campo magntico en la fase logartmica,
encontrando que el nmero de unidades disminuye, en equivalencia con el control,
de manera exponencial al aumentar dos variables: tiempo de exposicin y
densidad de flujo magntico. La causa de muerte bacterial no es clara, pero se
presume, se debe a posibles cambios biolgicos como es la alteracin en el
transporte de iones y formacin de radicales libres producidos por la estimulacin
electromagntica, adems concluyeron que dicho efecto empieza desde el
momento en que se enciende el campo magntico.
De la misma forma, Wenjin et al. (2009) encontraron como el nmero de UFC se
ve afectado negativamente cuando incrementa el tiempo de estimulacin
electromagntica y aumenta la temperatura a la que es realizado este ensayo (25
a 40 C), producindose dao en la superficie de las clulas implicadas. Sin
embargo, una vez E. coli ha logrado adaptarse al ambiente hostil, empieza a
disminuir la cantidad de bacterias inhibidas. Segn Filipic et al. (2012) E. coli
responde dependiendo la densidad de flujo magntico, por ejemplo, a 17 mT se

49

afect el crecimiento de manera negativa, pero a 5 y 50 mT la influencia fue

menos pronunciada. Aun as, la estimulacin magntica aument los niveles de
ATP y la actividad enzimtica, que se presume es manifestada al luchar E. coli por
adaptarse al entorno, por la presencia del campo magntico.
En otro caso, Bajpai et al. (2014) demostraron como utilizar la estimulacin
magntica aadiendo un sustrato con propiedades de magnetizacin afecta el
crecimiento de esta poblacin bacteriana, pues los resultados revelaron inhibicin
en un 83 % al pasar 4 h de exposicin. No obstante, confirmaron que sin
implementar el sustrato tambin se influye negativamente en la propagacin de E.
coli porque causa dao en su membrana desintegrndola y produciendo liberacin
de material intracelular (Bajpai et al. 2012). Asimismo, segn Kamel et al. (2013), a
40, 80, 120 y 160 mT produce disminucin de clulas viables y variaciones en la
sensibilidad a ciertos antibiticos.
Debido a los resultados, Belyaeva (2011) afirm que tales efectos dependen
directamente de las variables fsicas y biolgicas que forman parte del entorno que
envuelve al microorganismo al ser estimulado magnticamente. Por tal razn, E.
coli disminuye la tasa de crecimiento cuando es tratada a 2 mT y con tiempos de
exposicin de 4,6 y 8 horas, y pasadas 24 horas el nmero de clulas bacterianas
aumenta, por lo que, los investigadores opinan que el microorganismo posee
capacidad de adaptarse al campo magntico (Segatore et al. 2012).
Por otro lado, segn la densidad de flujo magntico y tiempo de exposicin ser el
efecto en las clulas expuestas. Muestra de ello, es que en algunos casos E. coli
sometida a este tipo de estimulacin electromagntica no han sufrido ningn tipo
de transformacin en su capacidad de multiplicarse como lo afirman Del Re et al.
(2003). Y Segn Esmekaya et al. (2013), a 2 mT y 24 horas la exposicin al
campo no produce ningn cambio en la viabilidad de las clulas, pero s afecta su
morfologa al formarse poros y desintegrar la membrana.
Por el contrario, Nawrotek et al. (2014) y Fijakowski et al. (2014) encontraron que
la exposicin al campo magntico incrementa la reproduccin celular de E. coli.
Del mismo modo, un estudio realizado por Nascimento et al. (2003) mostr que la
magneto-estimulacin puede influir positivamente la multiplicacin en presencia de
glucosa, al incrementar la entrada del azcar por la membrana celular, disminuir la
fase estacionaria y aumentar el tiempo que E. coli permanece en periodo de
crecimiento logartmico.
Es evidente que los resultados cambian dependiendo del campo magntico
aplicado, por tal razn Babushkina et al. (2005) aseguran que utilizar frecuencias

50

bajas produce incremento de la proliferacin bacteriana. Tambin, Gaafar et al.

(2006) concluyeron que el tiempo de exposicin hace variar drsticamente el
crecimiento de este bacilo, por lo que, depende en mucho del tiempo como factor
clave. Por ello, Rodrguez et al. (2006), hallaron modificacin en el crecimiento
bacterial a 0,1 Tesla y 6,5 horas, al manifestarse incremento de 100 %
comparndolo con el control no estimulado.
En la siguiente tabla se describe la respuesta de E. coli al ser sometida a
diferentes campos magnticos:

Tabla 8. Resumen de parmetros utilizados para estimular magnticamente E. coli

Fuente (Autores).

Autor(es)

Tiempo de
exposicin
(minutos)

Temperatura
(C)

Densidad de
campo
magntico
(mT)

Medio de
cultivo.

Efecto sobre
el
crecimiento.

Belyaev
(2011)

15

No aplica

0,021

Caldo
Luria

Inhibicin

Bajpai et
al. (2012)

30,60,120,
240

100

Medio
Luria
Bertani

Inhibicin

100

Medio
Luria
Bertani
con
hidroxiapat
ita y
magnetita.

Inhibicin

5,17,50.

Medio
Luria
Bertani.

Inhibicin

10

Caldo TY y
Agar
nutritivo.

Inhibicin

Bajpai et
al. (2014)

Filipic et
al. (2012).

Fojt et al.
(2004)

30, 120,
240

0 -25

30

37

37

28 + 0.5

20 - 25

51

Gaafar et
al. (2006)

Kamel et
al. (2013).

Shinichiro et
al. (2002)
Strasak et
al. (2002)

Wenjin et
al. (2009)

Zhang et
al. (2002)

Del Re et
al. (2003)

360 -960

1440,
2880, 4320

720

0 -12

0 -60

0 -1500

3480

Agar
nutritivo.

Inhibicin

40, 80, 120,

160

Agar
MacConke
y y caldo
nutritivo.

Inhibicin

5200 -6100

Medio
Luria
Bertani.

Inhibicin

20 - 25

2.7 -10

Caldo TY y
Agar
nutritivo.

Inhibicin

25 - 40

45, 450 3.500

Medio
Luria
Bertani.

Inhibicin

50,100,200,
400,600

Preparado
con:
Extracto
de carne,
peptona,
extracto de
levadura,
Cloruro de
sodio y
agua
destilada.

Inhibicin

0,1 - 1

Medio
Luria
Bertani.

Ningn
cambio

Medio
Luria
Bertani
con FeCl3.

Ningn
cambio

37

No aplica

43

No aplica

37

Esmekaya

et al.
(2013)

1440

No aplica

52

1080

No aplica

25

Medio
Luria
Bertani.

60

No aplica

25 -34

No aplica

Incremento

480

No aplica

0.5

Caldo
glucosa.

Incremento

30 -150

No aplica

30

No aplica

Incremento

100 -1000

Agar
nutritivo,
peptona y
extracto de
carne.

Incremento

Caldo
Mueller
Hinton.

Incremento

Babushkina

et al.
(2005)

Incremento

Fijakowski

et al.
(2014)
Nascimento

et al.
(2003)

Nawrotek
et al.
(2014)

Rodrguez

et al.
(2006)

Segatore
et al.
(2012)

60 - 720

0 -24

No aplica

37 + 0.3

53

2.2

Saccharomyces cerevisiae.

El gnero Saccharomyces fue expuesto por primera vez en 1838 por Meyer. Con
el paso de los aos, se han realizado cambios del mismo hasta clasificarlo en dos
principales grupos: Saccharomyces sensu stricto y Saccharomyces sensu lato. La
categora sensu stricto enlaza las levaduras relacionadas con S. cerevisiae en su
origen o historia evolutiva, conocido como filogenia; adems este tipo de
microorganismos se caracteriza por ser utilizado en la industria alimentaria. Por
otra parte, el grupo sensu lato encierra todos los dems miembros del gnero
(Fleet, 2006).
Saccharomyces cerevisiae es eucariota, anaerobia facultativa, la forma de su
clula es elipsoidal de aproximadamente 5 m de dimetro, posee una
temperatura optima de crecimiento entre 37-40 C y se reproduce por gemacin
multilateral, ms o menos cada 90 minutos. Adems, la levadura puede
propagarse como haploide o diploide y sufrir mitosis (Dickinson y Schweizer,
2004: Pez, 2010).
Las clulas haploides existen de dos tipos: a y . Para la formacin de diploides
(a/) se requiere elementos haploides de ambas tipologas a y que se conjugan
entre s cuando cada una forma protuberancias que logran fusionarse al entrar en
contacto. Al llegar el momento en que los nutrientes se agotan, las clulas
diploides atraviesan la meiosis formando cuatro esporas capaces de germinar al
poseer de nuevo condiciones favorables para su crecimiento. Sin embargo, se
generan como haploides, dos del tipo a y dos (Figura 16) (Dickinson y
Schweizer, 2004).
La figura siguiente describe el proceso de reproduccin de los tipos de clulas
mencionadas:

54

Seudohifas.

Diploide.
(a/)
Fase
Estacionaria.

Esporulacin.

Conjugacin.

Fase
Estacionaria.

Haploide.
() y (a)
Filamentos
Invasivos.

(Dickinson, 2004)

Figura 16. Reproduccin de Clulas Haploide y Diploide de la Levadura S. cerevisiae

(Dickinson y Schweizer, 2004)

55

S. cerevisiae puede crecer en diferentes medios de cultivo dentro del laboratorio.

Con este objetivo, ha sido implementado los siguientes agares: Glucosa y patata
que es til en la identificacin y recuento de la levadura en productos alimenticios,
BHI, nutritivo, Maltosa Sabouraud y agar diferencial. Tambin algunos
presentados en el mercado como agar o caldo: extracto de malta para aislamiento
y otros fines, Glucosa Sabouraud, entre otros (PANREAC, 2009).
Por otra parte, las levaduras han sido de inters investigativo porque son
eucariotas unicelulares, fciles de manipular y con capacidad de reproducirse de
maneras rpidas. Adems, S. cerevisiae es extensamente estudiada por su uso
en alimentos, entre ellos vino y pan, por lo que se considerada muy til en la
elaboracin de diferentes tipos de vveres que enriquecen las mesas de muchos
hogares (Blackburn, 2006). Esto es posible, debido a que son utilizadas sustancias
de desecho que provienen de la fermentacin alcohlica, tales como etanol y
dixido de carbono, y contribuyen a producir los comestibles (Tortora et al. 2007).
La estimulacin magntica de S. cerevisiae ha mostrado resultados variables:
Novk et al. (2007) y Otabe et al. (2009), encontraron que el campo magntico
adems de disminuir el nmero de UFC, retarda el crecimiento de esta levadura
cuando elimina parte de ellas, mientras otras clulas, se adaptan al ambiente
adverso en el que se encuentran. Por ello, Iwasaka et al. (2004), afirma que la
exposicin al campo magntico tiene efecto bactericida. Tambin, Markkanen et
al. (2001) hallan como la radiacin UV, junto con este tipo de estimulacin
electromagntica, tiene mayor capacidad de disminuir la cantidad de clulas
presentes de S. cerevisiae, comparndolo con la falta de electro-estimulacin.
Por otro lado, segn Egami et al. (2010) el efecto depende del tiempo y la
intensidad del campo magntico suministrado. En vista de ello, Anton-Leberre et
al. (2010) afirman que la interaccin con el campo magntico a 16 T y 8 horas, no
produce cambios en la forma en que se propaga S. cerevisiae o su sistema
biolgico. Al igual, Ruiz et al. (2004) hallan que el crecimiento de S. cerevisiae
puede ejecutarse sin ninguna variacin. Adems, El-Gaddar et al. (2013) y Ruiz et
al. (2010) concordaron que las clulas expuestas siguen su ciclo natural.
En contraste, observaron a S. cerevisiae antes, durante y despus de la
estimulacin magntica, concluyendo que existe un ligero incremento en la
proliferacin de esta levadura resultando positivo para su propagacin (Motta et al.
2001). Tambin, han implementado densidades de campo diferentes, resultando
que a 20 mG (mili-Gauss) y 30 segundos de exposicin magntica la

56

concentracin celular aumento 30% con respecto al control (Zapata et al. 2002).
Segn Zapata et al. (2005), en un estudio desarrollado en Medelln, Colombia,
hallaron que el cultivo de S. cerevisiae puede superar el efecto inhibitorio del
campo magntico y aprovechar mejor el sustrato (miel virgen de caa), por lo que,
fue observado aumento en el volumen celular en un 14%, en comparacin con el
control, con menor consumo de miel virgen (medido por el mtodo antrona).
Asimismo, mostrando como este tipo de estimulacin magntica intensifica el
nmero de individuos, a 25 mT se obtuvo aumento en el crecimiento de S.
cerevisiae entre 8.7 a 43.1 %, concluyendo que el volumen celular depende del
tiempo de exposicin al campo (Oliveira et al. 2010), y con este incremento de la
poblacin, mejorar la produccin de etanol (Deutmeyer et al. 2011).
En la siguiente tabla se describe la respuesta de S. cerevisiae al ser sometida a
diferentes campos magnticos:
Tabla 9. Resumen de parmetros utilizados para estimular magnticamente S.
cerevisiae. Fuente (Autores).
Autor(es)

Tiempo de
exposicin.
(minutos)

Temperatura
(C)

Densidad de
campo
magntico
(mT)

Medio de
cultivo.

Efecto
sobre el
crecimiento.

Egami et
al. (2010)

240

No aplica

2930

Agar YPD.

Inhibicin

430

No aplica

120

Caldo YPD

Inhibicin

Inhibicin

Markkanen

et
al.
(2001)
Novk et
al. (2007)

24

24 - 26

0 -10

Caldo
extracto de
malta.

Otabe et
al. (2009)

1800

No aplica

10

Agar YPD.

Inhibicin

9000 -14000

Agar YPD y
medio
peptonaglucosa.

Inhibicin

Iwasaka
et
al.
(2004)

960

No aplica

57

AntonLeberre et
al. (2010).

480

No aplica.

16000

Agar YEPD.

Ningn
cambio

El-Gaddar
et
al.
(2013)

4320

No aplica

500

Agar YEPD.

Ningn
cambio

Ruiz et al.
(2004)

1440 y
4320

23

0.35 y 2.45

Caldo
YPD

Ningn
cambio

Ruiz et al.
(2010)

60 y 4320

No aplica

0.35,1.4,2.45

Caldo
YPD.

Ningn
cambio

100 y 200

Extracto de
levadura y
peptona.

Incremento

Incremento

Deutmeyer

et
al.
(2011)

1500

No aplica

Motta et
al. (2001)

1440

No aplica

110 y 220

Agar
Sabouraud
Glucosado

Oliveira et
al. (2010)

480 -960

No aplica

25 -34.3

Agar YM

Incremento

Zapata et
al. (2002)

0.5

No aplica

0.002

Agar
Sabouraud

Incremento

Zapata et
al. (2005)

No aplica

0.025

Agar
Sabouraud.

Incremento

58

CAPTULO 3.

ESTIMULACIN MAGNTICA Y CAPACIDAD DE SOLUBILIZAR FSFORO.

Bacterias que tienen la capacidad de solubilizar compuestos ricos en fsforo, que
no est disponible para las plantas, mediante su actividad fisiolgica secretan
cidos orgnicos y enzimas denominadas fosfatasas, que propician la liberacin
del fsforo para que las plantas puedan aprovecharlo. Adems, estas bacterias
tienen la facultad de promover el crecimiento vegetal a travs de la sntesis
de hormonas reguladoras del crecimiento, como el cido indolactico, as como
de inhibir el crecimiento e incidencia de patgenos de hbito radical, mediante
la secrecin de sustancias de tipo antibiticas. El estudio sobre este fenmeno ha
permitido entender cmo las bacterias pueden superar la estrategia teraputica
mediante intercambio gentico, generando as un aumento en la capacidad de
solubilizar fsforo (Snchez et al. 2012).

3.1

Pseudomonas sp.

Pseudomonas sp. es un Bacilo Gram negativo, aerobio, no formador de esporas.

Puede presentar de 1.5 a 5 m de largo y, un dimetro de 0.5 a 1 m. Las
especies de este gnero son mviles, debido a las presencia de 1 o ms flagelos
polares (Figura 17). Es oxidasa y Catalasa positiva, no fermentadores de lactosa.
La mayora de especies del gnero, no crecen bajo condiciones cidas (pH 4.5 o
menor). El gnero Pseudomonas es bien conocido por su versatilidad metablica y
plasticidad gentica. Las especies de Pseudomonas, en general, crecen
rpidamente y presentan habilidad para metabolizar una gran variedad de
sustratos. (Ruiz, 2007).

59

Figura 17. Pseudomona sp con flagelos.

(Carrin et al. 2010)

P. putida es conocido por su capacidad para degradar una amplia variedad de

compuestos orgnicos recalcitrantes, y es por lo tanto importante para el
tratamiento de aguas residuales (Ogunseitan, 1996).

Figura 18. Vase el halo de fsforo solubilizado alrededor de la colonia de Pseudomonas

en agar pikovskaya.
(Naik et al. 2008)

60

En lo referente a estimulacin magntica, segn Anaya et al. (2011), al someter

Pseudomonas sp. a campos magnticos de 0.015, 0.03 y 0.06 mT y diferentes
tiempos de exposicin se evidencia un aumento en el crecimiento bacteriano.
Pseudomonas sp. se hizo pasar por imanes para estimulacin magntica de
microorganismos. Recibi una induccin magntica de 0.12 T. Se inocul una
muestra de bacterias tratada en el intervalo de 0.01-0.16 T junto a antgenos de
Bacillus cereus y Pseudomonas aeruginosa. El incremento de la proliferacin
microbiana ha permitido proponer su uso como ayudante inmunolgico para la
obtencin de sueros policlonales antibacterianos y sugerir su empleo en otros
inmunobiolgicos (Martnez, 2004).
Segn Ibraheim et al. (2013) al someter Pseudomonas aeruginosa a un campo
magntico controlado de 4 mT y 50 Hz hubo una disminucin en la sensibilidad
de las clulas expuestas a los campos magnticos. Estos resultados indican que
la viabilidad de las clulas tratadas durante 14 horas disminuy en comparacin
con las clulas no expuestas causando inhibicin. Se evidenci un incremento en
la sensibilidad de las clulas estudiadas a norfloxacina y la ciprofloxacina.
Tambin las clulas estimuladas a 14 h se hicieron ms resistentes a estos
antibiticos. Todo esto indica que hay efectos del campo electromagntico
utilizado en la accin del medicamento sobre la clula bacteriana a travs de la
inhibicin de la sntesis de protenas, sntesis de la pared celular, la transcripcin
de ARN y la replicacin de ADN, la sntesis de protenas y con ello aumento en la
solubilizacin de fsforo.
Por otra parte, la fuerza magntica alta en Pseudomonas aeruginosa gener
sensibilidad a los antibiticos durante un corto perodo de tiempo (4-6 horas) y
aument su resistencia al mismo antibitico a largo plazo de exposicin (18-20 h)
mostrando, por lo tanto, efecto positivo en la capacidad del microorganismo de
degradar fsforo insoluble. Adems, las enzimas bacterianas como TDA
(Triptfano desaminasa), GLU (glutamato), ARA (angiotensina), se efectan por
el campo magntico (Kamel et al. 2013).
Segatore et al. (2012) observaron que los efectos de la exposicin a campos
magnticos de baja frecuencia (2 mT; 50 Hz) sobre la tasa de crecimiento y la
sensibilidad a los antibiticos de P. aeruginosa influenci significativamente la
tasa de la cepa cuando se incub en presencia de concentraciones
subinhibitorias de amikacina. En particular, a las 4, 6, y 8 h de incubacin el
nmero de clulas disminuy significativamente en las bacterias expuestas a

61

campos electromagnticos y de la misma manera la solubilizacin de fsforo.

Adems, a las 24 h de incubacin, el porcentaje de clulas de Pseudomonas
aureginosa aument en los grupos tratados con respecto al control.
En la siguiente tabla se describe la respuesta de Pseudomonas sp. al ser
sometida a diferentes campos magnticos:

Tabla 10. Resumen de parmetros utilizados para estimular magnticamente

Pseudomonas sp. Fuente (Autores).

Autor(es)

Tiempo de
exposicin.

Temperatura
(C)

Densidad
de campo
magntico
y
frecuencia
(Hz)

Anaya et
al. (2011)

No aplica

No aplica

0.015 mT
0.03 mT
0.06 mT

No
aplica

Aumento en el
crecimiento

Martnez
(2004)

0.3m/s

37

0.01-0.16

RPMI

Aumento en el
crecimiento.

Caldo
nutritivo

Disminucin de la
sensibilidad y
degradacin de
fosfato.

Ibraheim
et al.
(2013)

Kamel et
al. (2013)

Kamel et
al. (2013)

14 h

2-20 h

4-6 h

Medio
de
cultivo.

Efecto

37

4mT
50Hz

37

400, 800,
1200 y
1600
Gauss

Caldo
nutritivo

Disminucin en el
crecimiento,
aumento en la
fase logartmica

37

400, 800,
1200 y
1600
Gauss

Caldo
nutritivo

Se genera
sensibilidad
antibitica

62

Kamel et
al. (2013)

Segatore
et al.
(2012)

Segatore
et al.
(2012)

18-h

4, 6, y 8 h

24 h

Caldo
nutritivo

Aumenta la
resistencia
antibitica y la
capacidad de
degradar fsforo.

37

2 mT
50 Hz

Caldo
Mueller
Hinton

Disminucin del
nmero de clulas.
Sin cambio en la
actividad
antibitica.

37

2 mT
50 Hz

Caldo
Mueller
Hinton

Sin cambio en la
actividad
antibitica.

400, 800,
1200 y
1600
Gauss

37

63

3.2

Bacillus sp.

El gnero Bacillus pertenece a la familia Bacilliaceae, e incluye ms de 60

especies de bacilos. Este gnero est formado por microorganismos bacilares
Gram positivos, formadores de endosporas, quimiheterotrofos que normalmente
son mviles y rodeados de flagelos periticos. Son anaerobios o aerobios
facultativos, catalasa positiva. Las clulas bacterianas de este gnero tienen un
amplio tamao que vara 0,5 a 2,5 m x 1,2-10 m. Se encuentra comnmente en
suelos y plantas donde tienen un papel importante en ciclo del carbono y el
nitrgeno (Lozada, 2010).
Conjuntamente, los Bacillus formadores de esporas aerobias son
quimiohetertrofos verstil. En algunas ocasiones, fermentan los hidratos de
carbono en una reaccin mixta que produce tpicamente glicerol y butanodiol.
Algunas especies, como el Bacillus megaterium, no requieren factores de
crecimiento orgnico, mientras que otros pueden requerir aminocidos, vitaminas
del grupo B, o ambos. La mayora son mesfilos, con temperatura ptima entre 30
y 45 grados, pero algunos termfilos con ptima de hasta 65 grados. Otros son
psicrfilas, capaces de crecer y esporular a 0 grados. Se encuentran ms en un
intervalo de pH de 2 a 11. En el laboratorio, en condiciones ptimas de
crecimiento, las especies de Bacillus exhiben tiempos de generacin de unos 25
minutos (Kenneth, 2012)
En la Figura 19 se muestran Bacillus sp. Vistos desde un microscopio.

Figura 19. Bacillus sp.

(Quintero, 2009)

64

Estimular magnticamente Bacillus sp. facilito la disponibilidad de los nutrientes,

algunas especies del genero Bacillus son capaces de solubilizar el fsforo
contenido en compuestos no asequibles, hacindolo disponible, mejorando por
tanto, el rgimen fosfrico de los suelos. Para la aplicacin de esta tecnologa una
muestra de Bacillus sp. son sometidos al campo electromagntico de 4,0 mT con
frecuencia de 25 Hz durante 2 h (Ziga et al. 2011).
Campos magnticos de 5.2 a 6.1 T retrasan la muerte celular en cultivos
estacionarios de Bacillus subtilis (Gu et al. 2012). Segn Nakamura et al. (1997)
se desarroll un biosistema imn superconductor, que puede proporcionar un
campo magntico de 0,5-7 T, donde las reacciones biolgicas pueden llevarse a
cabo bajo condiciones de temperatura controlada. El crecimiento aerbico
Bacillus subtilis, se investig bajo (5.2 a 6.1 T) campos magnticos homogneos
(7 T) y no homogneos. En la fase estacionaria, el nmero de clulas en un
campo magntico no homogneo fue aproximadamente dos veces mayor que la
de la referencia no estimulada, lo que indica que la magnitud de la disminucin en
el nmero de clulas se redujo por el campo magntico de alta densidad. La
disminucin ms lenta en el nmero de clulas en un campo magntico se
present debido a la tasa de muerte ms lenta de las clulas vegetativas. La
inhibicin de la formacin de esporas a partir de las clulas vegetativas tambin se
observ en un campo magntico, que se refleja en la reduccin de la actividad de
la fosfatasa alcalina. Transformadas genticamente B. subtilis produce una mayor
concentracin de un antibitico lipopptido, surfactina, y por lo tanto aumenta la
capacidad de degradar fosfato en la fase estacionaria en un campo magntico no
homogneo debido al mayor nmero de clulas alteradas en el campo magntico.
Por otra parte, Gu et al. (2012) demostraron que al someter Bacillus subtilis a
densidades de campo magntica altas (5.2 - 6.1T) y frecuencia de 0 -0.03 Hz se
inhibi completamente el crecimiento ocasionando la muerte y con ello afectando
la accin de Bacillus subtilis sobre el fsforo.
Los estudios experimentales de Ramn et al. (2005) mostraron un aumento en el
crecimiento de Bacillus subtilis a 800 Hz a campos magnticos de 1 kHz con un
perodo de 2 segundos. La intensidad del campo magntico fue de entre 0,8 y 2. 5
mT. En contraste, el grupo de Bacillus expuestas al campo magntico mostraron
poca o ninguna cohesin; las clulas parecan estar distribuidas homogneamente
por toda la muestra. Estos resultados sugieren que los patrones de crecimiento y
de degradacin de fosfato de Bacillus subtilis pueden ser alterados como resultado
de los efectos inducidos por el campo magntico.

65

Estudios realizados por Raichenko et al. (2012) dieron como resultado en todos
los casos estudiados un retardo en el crecimiento en Bacillus cereus durante el
perodo de 1 - 2 das, seguido de la restauracin del crecimiento de la poblacin al
someterlos a un campo magntico de 30 - 50mT durante 2 a 15 minutos (Figura
20).

Figura 20. Influencia del campo magntico alterno, en el fondo congelacin y su accin
combinada en el crecimiento de Bacillus cereus: A.es el control; B. alternando MF; C.
accin de Bacillus cereus en fro; D. accin del campo magntico en fro.
( Raichenko et al. 2012)

Segn Jin et al. (2009) Bacillus subtilis en medio de agar nutritivo fue expuesto a
campos magnticos de 0,085 a 0,092 T durante 12h, generando resultados
diferentes en cada etapa. El cultivo se compar con el grupo de control en el
campo geomagntico normal. El valor experimental de densidad ptica de este
aerobio fue significativamente ms alto que el del grupo de control de 3h a 9h. Sin
embargo, despus de 11 h, no hubo diferencia notable con respecto a los valores
de densidad ptica entre los dos grupos .El contenido de oxgeno disuelto en el
medio agar nutritivo sometido a estimulacin magntica durante 12 h produjo un
aumento del 15% en promedio y no hubo diferencia significativa en comparacin
con el control. Los resultados mostraron que los campos ferromagnticos
aumentaron el contenido de oxgeno disuelto en agar nutritivo significativamente.
Estos hallazgos sugieren que los efectos de los campos magnticos estticos
sobre Bacillus subtilis se relaciona con el oxgeno disuelto.

66

En una investigacin realizada por Wu et al. (2007) sobre la reaccin bioqumicafisiolgica de Bacillus subtilis. se incub esta bacteria bajo las intensidades de
campo magntico de 100mT y 500mT. Encontrndose fermentacin de
carbohidratos bajo la fuerza del campo magntico de 500 mT durante 24h.

3.2.1 GENERADOR DE CAMPO MAGNTICO UTILIZADO PARA ESTIMULAR

Bacillus substitute.

Figura 21. Generador de campo magntico.

(Gu et al. 2012)

Este equipo se compone de dos partes: la unidad generadora de ELF- EMF

(Frecuencias extremadamente bajas Campos electromagnticos) que contiene
unas bobinas. La otra es el amplificador de corriente.
Con el fin de asegurarse de que las bobinas generan ELF- EMF uniforme, la
corriente elctrica entra primero al amplificador, de manera tal que la corriente que
finalmente se transporta a las bobinas es estable. La temperatura se controla a
37C (Gu et al. 2012).

67

En la Tabla 11 se describe la respuesta de Bacillus sp. al ser sometida a

diferentes campos magnticos:
Tabla 11. Resumen de parmetros utilizados para estimular magnticamente
Bacillus sp. Fuente (Autores).

Autor(es)

Gu et al.
(2012)

Ziga et
al.(2011)

Wu et al.
(2007)

Nakamura
et al.
(1997)

Ramn et
al. (2005)

Tiempo de
exposicin.
(minutos)

1080-1440

240

1440

No aplica

2 seg

Temperatura
(C)

37

No aplica

Densidad de
campo
magntico y
frecuencia

Medio de
cultivo.

Efecto

5,2 - 6,1T

Extracto
de
levadura
y peptona

Retrasan la
muerte
celular

No aplica

Facilitan la
disponibilida
d de
nutrientes

100T y 500T

No aplica

Aumentan la
capacidad
para
degradar
cido rojo

7T

Extracto
de
levadura
y peptona

Reduccin
de la
actividad de
la fosfatasa
alcalina

0,8 y 2. 5 mT
y 800 Hz

No aplica

Alteracin
de los
patrones de
crecimiento

30 - 50mT

Medio
nutritivo

Aumento en
el
crecimiento

4mT y 25 Hz

No aplica

37

No aplica

Raichenko

et al.
(2012)

2-15

37

68

3.3

APLICACIONES INDUSTRIALES DE ESTIMULAR MAGNETICAMENTE

MICROORGANISMOS.

En lo relacionado con campo magntico y crecimiento microbiano en la industria

se cuentan con algunos informes. Hofmann (1987) plantea que debido a los
mltiples resultados de inhibicin, es decir, disminucin del nmero de individuos o
desactivacin de los mismos, es posible implementar esta tcnica para beneficio
de la industria alimenticia, ya que, permite esterilizar los vveres sin alterar su
sabor u otras caractersticas que incluyen las organolpticas, importantes para los
consumidores. Adems, el mtodo ayudara a desinfectar artculos plsticos, que
por su composicin qumica, no pueden ser introducidos en autoclave. Cambiando
de esta manera la tcnica que por dcadas ha sido implementada, como mtodo
de control de bacterias contaminantes en procesos alimenticios, es decir, los
productos qumicos (Baruj y Tufano, 2012).
Tambin, los microorganismos estimulados magnticamente tienen uso en
biorremediacin al ser mezclados con elementos o sales de Na, K, Ca, Mg, P y Cl
(Bitz y Jones, 1996). Incluso en tratamiento de agua disminuye costos, al tomar
una masa del lquido que contiene microbios contaminantes y exponerlo al campo
magntico. Esto es posible debido a que la tcnica mata los seres microscpicos
existentes, por lo que, qumicos txicos usualmente utilizados en agua, sern
manejados en menor cantidad y su impacto ambiental ser consecuente a dicha
disminucin (Sanderson, 1997). Sin embargo, aumentar el nmero de algunos
microorganismos ha sido til para incrementar la produccin de protenas y otras
sustancias por parte del ser microscpico (Chen et al. 2010) lo que hace posible
utilizarlo en agricultura (Wan-kei, 2012).
La estimulacin magntica de microorganismos que descomponen molculas
complejas de material orgnico facilita la absorcin de elementos hacia las plantas
(Ziga et al. 2011). De igual modo la estimulacin magntica de microorganismos
contribuye significativamente a la aceleracin del proceso de compostaje (Santilln
et al. 2010).
Los tratamientos magnticos pueden ser utilizados en la preservacin de los
alimentos, mejorar su calidad sensorial, propiedades reolgicas y estimular
procesos fermentativos. Adems, es necesario profundizar en la genotoxicidad
manifestada en algunos sistemas biolgicos tratados con campo magntico
(Anaya et al. 2011).

69

DISCUSIN GENERAL

El crecimiento microbiano es una medida importante en microbiologa porque

permite analizar otras propiedades de los organismos unicelulares. Para que un
microorganismo se propague requiere ptimas condiciones, su entorno debe
contar con los requerimientos nutricionales, pH, agua, oxgeno y temperatura que
exige el individuo, la unin de todos los componentes posibilitan la reproduccin
de las distintas formas de vida celular, ya sea por biparticin, gemacin o mitosis.
En el laboratorio es posible determinar la carga microbiana de muestras mediante
tcnicas creadas por cientficos expertos en el tema. Esos mtodos son tiles para
cuantificar microorganismos estimulados magnticamente y as establecer el
impacto del campo magntico en los individuos expuestos. Los organismos
responden a campos magnticos debido a que poseen en su sistema estructuras
que se magnetizan al ser expuestas al electromagnetismo. La estimulacin
magntica se produce implementando una bobina de Helmholtz, un solenoide o
utilizando imanes superconductores.
La magneto-estimulacin de E.coli y S. cerevisiae son ejemplos de la influencia
que tiene el campo magntico en el crecimiento de las bacterias. Es notable que el
tiempo que permanece el microorganismo bajo el magnetismo, la temperatura y la
intensidad de este, son factores importantes, pues de ello depender en gran
medida el efecto del campo magntico sobre el individuo.
Cuando el campo magntico produce muerte bacterial, siempre va acompaado
de cambios en el entorno o la estructura del microorganismo que producen tales
efectos. Despus de la estimulacin magntica, E. coli presenta algunas
diferencias como: alteracin en el transporte de iones debido a que cambia la
velocidad de reproduccin celular, variacin del metabolismo lo que ocasiona en el
medio de cultivo aumento de pH a bsico afectando el crecimiento con ello,
desintegracin de la pared celular produciendo liberacin del material interno
porque se forman poros que permiten la salida del mismo.
Para E. coli el ambiente se torna hostil desde el momento que se enciende el
campo magntico, sin embargo, la bacteria tiene la capacidad de adaptarse al
entorno difcil, por lo que a medida que transcurre el tiempo disminuye el nmero
de bacterias inhibidas, eleva los niveles de ATP y la actividad enzimtica. Someter
microorganismos a campos electromagnticos en todos los casos no produce

70

inhibicin celular. Tambin, puede ser sometida la bacteria sin ningn tipo de
cambio o incrementar el nmero de individuos presentes hasta en 100%, porque el
periodo en que la bacteria permanece en la fase estacionaria es mas largo.
Por otra parte, en el caso de S. cerevisae se destacan algunos aspectos con
respecto a su respuesta a la estimulacin electromagntica: La levadura sometida
al campo magntico sufri inhibicin del crecimiento celular, aunque tiene la
capacidad de adaptarse al ambiente con magnetismo. Tambin es notable que
utilizar radiacin UV y electromagnetismo para inhibir la proliferacin de
microorganismos es una alternativa viable, pues presenta resultados ms
eficaces. Al igual que E.coli, la levadura S. cerevisiae puede incrementar el
volumen celular tras ser sometida a campos magnticos, notndose aumentos de
8.7 hasta 43.1% lo que es de gran utilidad en la industria alimentaria y de etanol,
pues se conoce a este organismo unicelular como ayudante en la fabricacin de
diferentes productos.
La Tabla 12 refleja la dependencia del crecimiento con otras variables. Aunque en
los tres casos E.coli fue sometida a 2 mT, el tiempo de exposicin
electromagntica fue diferente para cada estimulacin, afectado el crecimiento de
forma distinta.

Tabla 12. E.coli sometida a 2 mT.

Autor(es)

Gaafar et
al. (2006)
Esmekaya
et al.
(2013)
Segatore
et al.
(2012)

Tiempo de
exposicin
(minutos)

Densidad
de campo
magntico
(mT)

Efecto
sobre el
crecimiento.

360 -960

Inhibicin

1440

Ningn
cambio

0 -24

Incremento

Otro caso que confirma este hecho es el de S.cerevisiae sometida a periodos de

tiempo que se relacionan, pero a diferentes densidades de flujo magntico,

71

provoco resultados distintos con respecto al crecimiento de la levadura como se

observa en la Tabla 13.

Tabla 13. Crecimiento de S. cerevisiae y efecto de las variables.

Autor(es)

Tiempo de
exposicin.
(minutos)

Densidad
de campo
magntico
(mT)

Efecto
sobre el
crecimiento.

Iwasaka et
al. (2004)

960

9000 14000

Inhibicin

AntonLeberre et
al. (2010).

480

16000

Ningn
cambio

Oliveira et
al. (2010)

480 -960

25 -34.3

Incremento

Por otro lado, el fsforo soluble es un elemento esencial para las plantas ya que
restringe la produccin de los cultivos, por ello, el suelo se vale del ciclo del P para
recircular el nutriente. Existen bacterias solubilizadoras de fosfatos que tienen la
capacidad de producir sustancias antibiticas, por lo tanto esas propiedades estn
relacionadas. Cuando Pseudomonas sp. es sometida a la estimulacin magntica
incrementa su resistencia a los antibiticos, concluyendo que su capacidad de
solubilizar fsforo aumenta. Tambin se presenta el caso contrario, disminucin de
la oposicin al agente, notando que todos los resultados van ligados al tiempo y la
intensidad de campo magntico suministrado.
La exposicin magntica de colonias del gnero Bacillus sp. a demostrado el
doble de crecimiento de la bacteria comparndolo con el microorganismo no
estimulado, produciendo mayor concentracin de antibiticos, en consecuencia
superior capacidad de solubilizar el fsforo para ser asimilado por las plantas,
revelando que el campo magntico altera esta propiedad en Bacillus sp. Muestra
de ello es que la magneto estimulacin produce que el bacilo tenga una fase de
muerta ms lenta, aunque inhibe la formacin de endosporas
En la industria es posible aprovechar la estimulacin magntica de
microorganismos. Implementarlo en el sector alimenticio es viable debido a que

72

produce inhibicin celular, por lo que los microorganismos no contaminaran los

alimentos. Adems, utilizarlo para esterilizar artculos que no pueden ser
sometidos a altas temperaturas ahorrara parte del dinero invertido en utensilios
microbiolgicos desechables u otros elementos que deben mantenerse inocuos.
Otras ventajas de la tcnica es que disminuye el impacto negativo de los
productos qumicos en el medio ambiente, pues los agentes txicos sern
utilizados en menor medida al ser remplazados por la electroestimulacin; tambin
los microorganismos estimulados pueden ayudar a la absorcin de nutrientes de
las plantas para la industria agro.

73

CONCLUSIONES:

Segn la informacin cientfica encontrada es posible implementar una

gama amplia de densidades de flujo magntico y tiempos de exposicin al
campo, que permiten producir resultados variables con respecto a la
multiplicacin celular de microorganismos. Sin embargo, identificar la mejor
respuesta a la estimulacin magntica depende de lo que pretendemos al
utilizar la tcnica, es decir, inhibicin o incremento del volumen microbiano
como se evidenci en E. coli y Saccharomyces cerevisiae.
Evitar el crecimiento de agentes patgenos en la industria alimentaria,
tratamiento de aguas y diversos sectores de produccin, es de inters
internacional, ya que, controlar este tipo de contaminacin permite frenar la
propagacin de enfermedades por tener efecto bactericida. Por otro lado,
incrementar el volumen celular permite aprovechar la actividad metablica
de diversos microorganismos de uso industrial, lo que sucede con
Saccharomyces cerevisiae, pues implementar el mtodo aumentar la
produccin de sustancias de inters semejantes a etanol. Adems, en
biorremediacin es posible beneficiarse de microbios degradadores de
compuestos contaminantes, permitiendo recuperar hectreas de suelo para
agricultura.
Al someter microorganismos solubilizadores de fsforo como Pseudomonas
sp. y Bacillus sp. a campos magnticos controlados se puede mejorar su
capacidad de degradacin y metabolizacin, ayudando as a mejorar los
procesos de compostaje y
a la disponibilidad de fsforo para el
metabolismo de las plantas.
La solubilizacin de fsforo en casi todas las circunstancias, se encuentra
ligado al metabolismo y el crecimiento. Una de las dificultades
experimentales en estudios de crecimiento es discernir condiciones
relacionadas con el metabolismo.
El uso de campos magnticos puede modificar la actividad antibitica que
poseen los microorganismos, siendo as una alternativa viable para ayudar
a la produccin de frmacos.

74

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