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danny_0920@hotmail.com; andrebernate1243@hotmail.com
Universidad Icesi, Facultad de Ciencias Naturales, Programa Qumica Farmacutica,
Laboratorio de Bioqumica
Santiago de Cali, Colombia
1. RESULTADOS
2. En esta prctica se realiz la
extraccin de ADN a partir de
clulas humanas de la mucosa
oral; que posteriormente se
visualizaron
en
el
espectrofotmetro. Para llevar a
cabo este proceso primero se
recolect 5mL de saliva, de los
cuales se utiliz 2,5mL de esta,
para la debida extraccin y
visualizacin del ADN. Se realiz
con xito el debido protocolo de
adicin de 2,5mL de SDS al 10 %,
50L de solucin de NaCl 5M
(agitar), y 10mL de etanol al 96%
lo cual hace que el ADN se
deshidrate, es decir, pierda
contacto con las molculas de
agua que lo rodean, y lo asla de
la solucin acuosa para dejarlo
libre de impurezas1. Luego se
pudo observar en el tubo falcon
una especie de telaraa de color
blanco con un aspecto pegajoso,
que
formaba
una
mezcla
heterognea con la disolucin de
los reactivos, que tericamente
3.
4. Imagen 1. Condensacin del DNA,
despus de haber agregado SDS y NaCl.
5.
completo
utilizados
para
cuantificar y evaluar la pureza de
ADN,
ARN,
protenas,
etc.
NanoDrop 2000 y 2000c son los
nicos espectrofotmetros de
micro volmenes con tecnologa
de
retencin
de
muestras
patentada que miden volmenes
de muestras tan pequeos como
0,5 l. 2
27. 260/23
0
30. Baseli
ne
correct
ion
28. 0,39
31. 340nm
32.
33.
34.
6.
Posteriormente se extrajeron 5
L del ADN obtenido, junto con el de
otros grupos, y se pas a un gel que
contena agarosa al 1%. Se
adicionaron 1 L de SYBR Green, el
cual es un compuesto orgnico que
se asocia a la molcula de ADN,
interactuando con la hendidura
menor del ADN. Esta molcula se
introduce en la estructura secundaria
de la doble hlice del ADN y se
acopla energticamente a los cidos
nucleicos que lo forman, de manera
que se incrementa la tasa de emisin
fluorescente.3
7. TABLA
1.
Datos
obtenidos
espectrofotmetro NanoDrop.
8. Simpl
e ID
11. Type
14. Conc.
17.
9. l
10.
12. ssDNA
15. 71,7ng
/l
18. A260
(10mm
path)
21. A280
(10mm
path)
24. 260/28
0
13. 33,00
16.
19. 2,173
22. 1,830
25. 1,19
en
la
el
polisacridos
y
dems
sustancias.
Al igual, la concentracin de
ADN es baja, debido a errores
del laboratorio o posibles fallas
del nanodrop.
El transluminador uv presento
fallas al ir a observar la
fluorescencia del ADN en el gel
de agarosa.
El nanodrop tiene la capacidad
de medir muestras muy
concentradas, sin necesidad
de diluirlas.
46.
47.
48.
49.
1. Buscando a etanol 96%: [en
lnea]. [Citado 10 agosto 2015].
Disponible
en:
http://www.cienciaonline.com/2
007/03/10/extraccion-del-adnde-la-saliva/
5.
2. Buscando a NanoDrop: [en
lnea]. [Citado 10 agosto 2015].
Disponible
en:
https://www.thermoscientific.es
/product/nanodrop-20002000cspectrophotometers.html
6.
3. Buscando a SYBR Green: [en
lnea]. [citado 10 agosto 2015].
Disponible
en:
http://www.cultek.com/inf/otros/
50.
51.
52.
53.
54.
55.
56.
57.
58.
59. BIBLIOGRAFA
60.
61.
62.
63.
64.
65.
soluciones/Soluciones-QPCRprotocolos.pdf
7.
8.
9.
10.
11.
12.
13.
14.
15.
16.
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18.
19.
20.
21.
4. Buscando extraccin del ADN:
[en lnea]. [citado 10 agosto
2015].
Disponible
en:
http://www.chilecientifico.cl/cie
ncia-divertida-informacion-
general-103/187-extraccionde-adn.html
22.
5. Buscando
mtodo
de
extraccin del ADN, utilizacin
del NaCl, SDS y Etanol: [en
linea]. [citado 10 de agosto
2015].
Disponible
en:
http://www2.inecc.gob.mx/publi
caciones/libros/530/cap16.pdf
23.
6.
Buscando absorcin de Uv en
el Nanodrop: [en lnea]. [citado
10 de agosto 2015]. Disponible
en:
http://www.juntadeandalucia.es
/agriculturaypesca/ifapa/export/
sites/aquagenet/textos/docs_te
xtos/mat_difusion_y_otros/Tesi
s_Master_Claudia.pdf