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Fundacin Universidad de Amrica

Extraccin de esencias y separacin de pigmentos naturales


(Clorofila, xantofilas y carotenos)
Dayana Cuta1*, Carolina Banquez2, Andres Diaz3.
Universidad de Amrica.

Resumen
Se extrajeron esencias de origen vegetal, por los mtodos para extraccin de tipo soxhlet y
destilacin por arrastre de vapor (extraccin continua) con disolventes orgnicos, donde se
identificaron caractersticas organolpticas de las mismas tales como el olor y color.
Tras la obtencin de las esencias, se procedi a realizar los protocolos 1 (acetona) y 2 (etanol)
para la extraccin de pigmentos con solventes, para cuantificar por cromatografa los
porcentajes de clorofila y carotenoides encontrados en la muestra vegetal. Finalmente, se
calcula la concentracin de clorofila en las muestras, que fueron resultado de los protocolos ya
establecidos utilizando mtodos espectrofotomtricos.
Palabras claves: Esencias, cromatografa, soxhlet, arrastre de vapor, pigmentos.
Abstract
Essences extracted from plants, by soxhlet and steam distillation methods (continuous
extraction) with organic solvents, where the same organoleptic characteristics such as odor and
color were identified.
After obtaining essences, we proceeded to perform Protocols 1 (acetone) and 2 (ethanol)
pigment extraction with solvents, chromatography to quantify the percentages chlorophyll and
carotenoids found in plant sample. Finally, the chlorophyll concentration in the samples was
calculated protocols established using spectrophotometric methods.
Keywords: Essences, chromatography, soxhlet, steam stripping, pigments.

1. Estudiante 4to semestre de Ing. Qumica 2015(yo_liseth@hotmail.com)


2. Estudiante 4to semestre de Ing. Qumica 2015(carolab-1997@hotmail.com)
3. Estudiante 4to semestre de Ing. Qumica 2015(anderson19951@hotmail.es)

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1. Introduccin
En lo ltimos aos el estudio de los aceites
esenciales ha llamado la atencin de la ciencia,
convirtindose en un rea de investigacin y
desarrollo, por su gran acogida en la industria
farmacutica, cosmtica y de alimentos, entre otras.
La extraccin de las diferentes esencias y pigmentos
de tipo vegetal se pueden realizar empleando
tcnicas y protocolos de extraccin. Los aceites
esenciales por ser voltiles y encontrarse distribuidos
en los frutos y plantas, pueden ser retirados utilizando
destilacin con arrastre de vapor de agua donde se
utiliza principalmente para extraer esencias de limn y
naranja que se aprovechan para la fabricacin de
bebidas refrescantes, o con equipo de tipo soxhlet.
Los pigmentos de materiales verdes se extraen
utilizando los protocolos 1 donde se utiliza la acetona
y el 2 con el etanol, donde los dos son disolventes
orgnicos y que son tiles para separar pigmentos
naturales (clorofilas, xantofilas y carotenos).
La cromatografa es una tcnica utilizada para
analizar e identificar los pigmentos naturales
presentes en una muestra problemas. Con la
realizacin de esta tcnica se obtienen resultados
cromatgrafos y espectrofotomtricos donde se
calculan porcentajes (clorofila a y b, carotenoides) y
concentraciones respectivamente, presentes en una
muestra problema.
2. Marco terico
ESENCIAS:
Son compuestos qumicos intensamente aromticos,
no grasos (por lo que no se enrancian), voltiles
por naturaleza (se evaporan rpidamente), livianos
(densidades de 0.9-0.8), insolubles en agua,
levemente
solubles
en vinagre,
y
solubles
en disolventes orgnicos como alcohol, benceno,
cloroformo, ter, hexano, grasas, ceras, aceites
vegetales, resinas. Son sustancias oleosas,
odorferas y de origen vegetal.
EXTRACCIN:
Constituye una de las tcnicas de separacin de
compuestos ms utilizada en el laboratorio qumico.
El principal objetivo de la extraccin es separar
selectivamente el producto de una reaccin, o bien
eliminar las impurezas que lo acompaan en la
mezcla de reaccin, gracias a sus diferencias de
solubilidad en el disolvente de extraccin elegido.

Extraccin discontinua: Se la llama tambin


extraccin lquido-lquido, en este caso el
procedimiento consiste en la transferencia de una
sustancia de una fase a otra y se desarrolla entre dos
lquidos inmiscibles, esto quiere decir que son
incapaces de ser mezclados sin la divisin de fases.
Las dos fases lquidas de la extraccin son la acuosa
y orgnica. (Equipo tipo soxhlet o destilacin por
arrastre de vapor)

Extraccin continua: Conocida tambin como


extraccin slido-lquido, en este tipo se dividen uno
o ms componentes de una mezcla slida a travs de
un disolvente lquido. Se desarrolla en dos etapas
distintas. Se lleva a cabo un contacto del disolvente
con el slido que permite la mezcla del soluto o
componente soluble al disolvente. Esto se realiza a
una temperatura ambiente o clida pero en este caso
para impedir la prdida del disolvente se efecta una
ebullicin a reflujo. (Agitando el disolvente en el
embudo de decantacin)

CLOROPLASTOS:
Los cloroplastos fueron identificados como los
orgnulos encargados de la fotosntesis, en ellos se
transforma la energa lumnica en energa qumica,
que puede ser aprovechada por los vegetales.

Clorofilas: Las Clorofilas son compuestos del tipo


tetrapirrol, al mismo grupo pertenecen las ficocianinas
y las ficoeritrinas (pigmentos accesorios en algas
azules y rojas). Constan de cuatro anillos
de pirrol unidos por medio de puentes de metilo (-CH=) lo que constituye una porfirina.

- La clorofila b se diferencia de la clorofila a


solamente por estar sustituido el grupo metilo (--CH3)
del carbono 3 en el segundo anillo pirrlico, por un
grupo aldehido (--CHO). Esta diferencia es suficiente
para causar un cambio notable en la coloracin como
tambin en el espectro de absorcin de esta
molcula. La clorofila a es verde azulada, la clorofila b
es de color verde amarillento.

1. Estudiante 3er semestre de Ing. Qumica 2015(yo_liseth@hotmail.com)


2. Estudiante 3er semestre de Ing. Qumica 2015(jhonatanleonardoinfante@gmail.com)
3. Estudiante 3er semestre de Ing. Qumica 2015(santi.days@hotmail.com)

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Cromatografa lquido-lquido
Cromatografa lquido-slido
-Dependiendo de la naturaleza de la fase esttica y
de la fase mvil se pueden distinguir distintos tipos de
cromatografa
a) Cromatografa slido-lquido. La fase esttica o
estacionaria es un slido y la mvil un lquido.
b) Cromatografa lquido-lquido. La fase esttica o
estacionaria es un lquido anclado a un soporte
slido.
c) Cromatografa lquido-gas. La fase esttica o
estacionaria es un lquido no voltil impregnado en un
slido
y
la
fase
mvil
es
un
gas.
Fuente:
http://www.scielo.br/img/revistas/cr/v35n3/a43fig01.jpg

CAROTENOIDES:
Los carotenoides o tetraterpenoides son una clase de
pigmentos terpenoides con 40 tomos de carbono
derivados biosintticamente a partir de dos unidades
de geranil-geranilpirofosfato, en su mayora son
solubles en solventes apolares y de coloraciones que
oscilan entre el amarillo (por ejemplo el -caroteno) y
el rojo (por ejemplo el licopeno). L. Se clasifican en
dos grupos: carotenos y xantofilas. Los carotenos
solo contienen carbono e hidrgeno, mientras que las
xantofilas contienen adems oxgeno.

d) Cromatografa slido-gas. La fase estacionaria es


un slido y la mvil un gas.
-De acuerdo con el mtodo de separacin. Segn el
tipo de interaccin que se establece entre los
componentes de la mezcla y la fase mvil y
estacionaria podemos distinguir entre:

a) Cromatografa de adsorcin. La fase estacionaria


es un slido polar capaz de adsorber a los
componentes de la mezcla mediante interacciones de
tipo
polar.

CROMATOGRAFA:

b) Cromatografa de particin. La separacin se


basa en las diferencias de solubilidad de los
componentes de la mezcla en las fases estacionaria y
mvil,
que
son
ambas
lquidas.

La cromatografa es un mtodo fsico de separacin


en el que los componentes que se han de separar se
distribuyen entre dos fases, una de las cuales est en
reposo (fase estacionaria, F.E.) mientras que la otra
(fase mvil, F.M.) se mueve en una direccin definida.

c) Cromatografa de intercambio inico. La fase


estacionaria es un slido que lleva anclados grupos
funcionales ionizables cuya carga se puede
intercambiar por aquellos iones presentes en la fase
mvil.

-De acuerdo con el estado fsico la cromatografa se


clasifica:
3. Metodologa
Materiales
Cromatografa de gases: Con fase mvil gaseosa.

Cromatografa gas-lquido
Cromatografa gas-slido

Cromatografa lquida: Con fase mvil lquida.

-2 Erlenmeyer de 250 mL
-1 Condensador
- 1 Baln de fondo plano esmerilado de 250 mL
- 1 Soxhlet
- 1 Aro

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- 3 Nueces
- 2 Pinzas para baln
- 1 Mortero y mazo
- 2 Mallas de asbesto
- 1 Te en vidrio
- 2 Mangueras
- Papel de filtro
- Papel para cromatografa
- Mortero
- Tubo de centrfuga plstico

Equipos
- Centrfuga
- Espectrofotmetro
- Equipo soxhlet
- Cmara de cromatografa
Reactivos
- Alcohol etlico del 96% p
- Etanol al 80%
- Agua destilada
- Ptalos de rosas, limones, naranjas, flores frutos u
hojas, espinacas o hierbas. El estudiante debe
traerlas.
- Acetona al 80%
- ter de petrleo
4. Procedimientos

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5.1 Distinga en su muestra A qu pigmento


corresponde cada mancha?
- Las manchas observadas en la placa de
cromatografa son de color verde oliva (claro) , verde
oscuro, amarillo (claro) y rojo (claro) que
corresponden a clorofilas tipo b , clorofilas tipo a ,
Xantfilas y Carotenos respectivamente.

5.3 Qu factores pueden afectar al coeficiente de


particion?
- El coeficiente de particin (Rf) se puede ver
afectado por la pureza (concentracion) del solvente
orgnico en la cmara cromatografa, puesto que esto
afecta en el arrastre de los pigmentos.
Por otro lado, dependiendo de la concentracin de
pigmentos que posea la hoja la altura de las
manchas se vern afectadas, debido a que al poseer
una alta concentracin la mancha tiende a ascender.

5.2 Calcular la movilidad relativa de los distintos


pigmentos RF

5.4 Calcular los g de clorofila que hay por gramo


de hoja, extraida con cada uno de los protocolos.

5. Anlisis y Clculos.

Rs
Rf

( )

%PIGMENTOS=

*100

Rf: altura mxima alcanzada por el solvente lnea


de referencia
Rs: altura de la lnea de referencia a la mancha
ACETONA
%Clorofila tipo B =

( 2.8
5.4 )

*100 = 51.85%

%Clorofila tipo A =

( 3.4
5.4 )

*100 = 62.96%

%Caroteno =

( 5.1
5.4 )

*100 = 94.44%

%Xantfilas =

( 4.2
5.4 )

*100 = 77.77%

ETANOL
%Clorofila tipo A =

( 3.1
5.4 )

*100 = 57.4%

%Clorofila tipo B =

( 3.5
5.4 )

*100 = 64.8%

%Caroteno =

%Xantfilas =

( 5.2
5.4 )

*100 = 96.2%

( 4.9
5.4 )

*100 = 90.7%

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ETANOL
ppm clorofila = (absorbancia)*13,14
ppm clorofila = (1.975)*13,14 = 25,96ppm
0.02596g de clorofila 0.55g de hojas
Xg de clorofila 1g de hojas
X=0.0472g clorofila/ g hoja
ACETONA
ppm total de clorofila = (20.2*A645 ) + (8.02*A663 )
ppm=(20.2*1.992)+(8.02*1.976) = 56.07ppm
ppm acetona=ppm total ppm etanol
ppm acetona = 56.07 25.96 = 30.11ppm
0.03011g de clorofila 0.55g de hojas
Xg de clorofila 1g de hojas
X=0.0547g clorofila/ g hoja
5.5 Comparar los resultados obtenidos entre s y con
el resto de los grupos Qu protocolo es el ms
adecuado para el tipo de material vegetal empleado?
Razonar la respuesta
Al comparar las concentraciones de clorofila
obtenidos, se logra deducir que utilizar el protocolo 1
(acetona) es ms conveniente al obtener una mayor
concentracin que al utilizar el protocolo 2 (etanol),
puesto que se obtiene una mejor extraccin de
pigmentos.
5.6 Calcular la concentracin de clorofila (a) en el
extracto inicial de la hoja de espinaca por formula de
Marker. Cuntos mg de clorofila a se han extrado
de la hoja de espinaca?
ppm= 1.976*13.14
clorofila a ppm= 25.96
clorofila total [ppm] = (20.2*1.992)+(8.02*1.976)
clorofila total [ppm] = 56.07

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aceptadas en el pas, como consta en el
Pargrafo Primero del Artculo 22 del decreto
677 de 1995: United State Pharmacopeia
(USP), a la Brittish Pharmacopeia (Inglaterra),
al Codex Francs, a la Farmacopea Alemana
(DAB), a la Europea e internacional (OMS) o
a la que en su momento rija para la Unin
Europea. En todos los casos se aplicarn las
tcnicas establecidas en la edicin vigente de
la farmacopea respectiva.

5.7 Se han extraido todos los pigmentos?


En esta prctica, utilizando acetona y etanol no se
extrajeron en su totalidad los pigmentos fotosintticos
debido a que no son procedimientos muy eficaces,
dependiento el mtodo usado cambiara la
concentracin de los pigmentos.
5.8 Qu es 13.14 en la frmula de Marker?
El nmero 13.14 que aparece en la ecuacin de
Marker para la determinacin de concentracin de
clorofila (ppm=A(a 665 nm) * 13.14) no es ms que una
relacin (razn) que existe entre la concentracin y la
absorbancia (depende del coeficiente de absortividad
molar), es decir que por cada 13.14 ppm la muestra
tendr una absorbancia equivalente a 1.

DECRETO NMERO 677 DE 1995 (abril 26)


Por el cual se reglamenta parcialmente el
Rgimen de Registros y Licencias, el Control
de Calidad, as como el Rgimen de
Vigilancia Sanitaria de Medicamentos,
Cosmticos, Preparaciones Farmacuticas a
base de Recursos Naturales, Productos de
Aseo, Higiene y Limpieza y otros productos
de uso domstico y se dictan otras
disposiciones sobre la materia.

En el caso de los alimentos se usan los


Cdigos Alimenticios siendo el ms universal
el Codex Alimentarius, que es una publicacin
de la FAO y la OMS y el Food Chemical
Codex de los EEUU.

El CAS NUMBER es una gua internacional


que describe los ingredientes estudiados y
aprobados para uso cosmtico.

Normas internacional ISO 855:2003.

5.9 Interfieren el resto de pigmentos en la


determinacin de clorofila a?

6. Conclusiones
1. Se comprendi la importancia de los diferentes
mtodos de extraccin de esencias utilizados a
nivel de laboratorio e industrial.
2. Se identificaron los compuestos orgnicos
presentes en las esencias extradas.
3. Se clasific, identific y relacin los diferentes
tipos de esencias que se pueden encontrar en el
reino vegetal.
4. Se extrajeron y separaron los diferentes tipos de
pigmentos de cloroplastos por cromatografa de
papel en funcin de su polaridad relativa.
5. Se extrajeron los pigmentos de cloroplastos de
una material vegetal y se determin la cantidad de
clorofila contenida en el mismo.
7. Cuestionario
1. Qu normatividad existe en el pas para las
esencias?
-

En Colombia no hay una farmacopea


nacional, por lo tanto se recurre a las
siguiente
farmacopeas
oficialmente

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2. Componentes qumicos que proporciona el


olor de la esencia, frmulas estructurales
3. Elaborar un paralelo entre esencia natural y
sinttica

Esencia Natural

Esencia sinttica

-Se obtiene de plantas - Son mezclas de


o animales por
diversos productos
procedimientos
obtenidos por
artesanales
procesosquimicos.
-Son llamados aceites esenciales
Sonmaseconomicosqu
e las esencias

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naturales.
Tieneaparenciaaceitos
a concentrado
- Se utilizan en
lapreparacionde
-volatilespor
sustancias
naturaleza, livianos, aromatizantes y
insolubles en agua
saborizantes.
- Solo se obtiene de las-Se sintetiza a partir de
plantas herbaceas,
una sustanciaprimaria
arbustos y arboles
como alcohol o
cidoorganico.

4. Investigar en que consiste la extraccin de


esencias por disolucin de aceites fijos

Los aceites son solubles en grasas y alcoholes de


alto porcentaje. Sobre una capa de vidrio se coloca
una fina pelcula de grasa y sobre ella los ptalos de
flores extendidas. La esencia es absorbida por la
grasa, hasta saturacin de la grasa. Posteriormente
con alcohol etlico, se extrae el aceite esencial.

5. Explique en que consiste la extraccin por fluidos


supercrticos y de ejemplos industriales de
compuestos que se puedan extraer por esta tcnica.
Los fluidos sper ricos presentan ventajas en los
procesos de extraccin, ya que al comportarse como
un lquido facilita la disolucin de los solutos, a la vez
que, su comportamiento como gas permite una fcil
separacin de la matriz. Esto conlleva un proceso de
extraccin ms rpido, eficiente y selectivo que en el
caso de la extraccin lquido-lquido. Adems, se
pueden usar "disolventes verdes" como el
CO2 evitando el uso de los habituales disolventes
clorados de las extracciones lquido-lquido.

Al tratarse los alimentos de mezclas altamente


complejas lo ms habitual es que los extractos
tambin lo sean por lo cual es muy habitual hablar
de fraccionamiento de extractos. El
fraccionamiento en condiciones supercrticas
consiste en una cada en cascada de la densidad
con la consiguiente precipitacin en cascada de los
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compuestos extrados en los separadores donde


se produce esta disminucin de densidad.
6. Explique en que consiste el proceso de enflorado.

El enflorado es un proceso utilizado para captar las


fragancias de las plantas utilizando grasas inodoras,
y slidas a temperatura ambiente. El proceso puede
ser enflorado en fro en caliente.

ENFLORADO EN FRIO: En el enflorado en fro, se


utiliza una placa de vidrio, que se unta con una capa
de grasa animal, sobre la grasa, se colocan las
materias vegetales, como flores o ptalos o flores. Al
paso de 1 a 3 das, la grasa se habr impregnado
con su aroma. El proceso se repite sustituyendo los
vegetales utilizados por otros ms frescos, y as
hasta llegar al punto deseado de saturacin de
fragancia en la grasa llamada Pomada enflorada.
Tambin puede continuarse el proceso limpiando o
empapando la grasa con alcohol etlico con el fin de
extraer de la grasa las molculas de fragancia y
transferirlas al alcohol. Luego se deja evaporar el
alcohol. Los restos de grasa todava con restos de
aromas, pueden utilizarse para la fabricacin de
jabones aromticos.
ENFLORADO EN CALIENTE
En el enflorado en caliente, las grasas slidas se
calientan mientras las materias vegetales se agitan
resolvindolas con la grasa impregnndola con su
aroma. Al igual que en el enflorado en frio se
sustituyen los vegetales utilizados por otros ms
frescos, hasta conseguir la Pomada enflorada.
Tambin puede continuarse el proceso limpiando o
empapando la grasa con alcohol etlico con el fin de
extraer de la grasa las molculas de fragancia y
transferirlas al alcohol.

8. Referencias
ACERO, D. Luis Enrique, rboles, gentes y
costumbres, Bogot, 2000, Plaza & Jans
AUBAD, L. Aquilino Yamil y Lpez O. Jos R, Texto
Gua de laboratorio de qumica orgnica. Ed.
Universidad de Antioquia 1. ED. 2002.

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BAKER, R. Qumica orgnica de los compuestos
biolgicos. Editorial Alhambra. Espaa. 1980.
BERNAL RAMIREZ, INES. Anlisis de alimentos.
Bogot: Universidad Nacional. 1993.
DOMINGUEZ, X. Mtodos de investigacin
fisicoqumica, 1979, Mxico. 1990.
EGAN, HAROLD. Anlisis de Alimentos de Pearson.
Mxico: CECSA. 1991.
CAREY, Francis. Qumica orgnica fundamental.
Limusa. Mxico. 1990.
BAYLEY, Alton E. Aceites y grasas industriales,
1952.
HWLEY, G.G. Diccionario de qumica de productos
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Ciencias Naturales. Cromatografa.
http://www.areaciencias.com/quimica/cromatografia.ht
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Biomodel. Cromatografa.
http://biomodel.uah.es/tecnicas/crom/inicio.htm.
Universidad de Antioquia. Carotenoides.
http://farmacia.udea.edu.co/~ff/carotenoides2001.pdf.
A. Martnez. Febrero de 2003.
Universidad Nacional de Colombia. Fisiologa
vegetal (Clorofila A vs Clorofila B).

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2. Estudiante 4to semestre de Ing. Qumica 2015(carolab-1997@hotmail.com)
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http://www.virtual.unal.edu.co/cursos/ciencias/200005
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Cogua, M. Orozco.
Universidad Nacional de Colombia. Los
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http://www.virtual.unal.edu.co/cursos/ciencias/200005
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Tipos.co. Tipos de extraccin.
http://www.tipos.co/tipos-deextraccion/#ixzz3i4e9qOxA. Deborah de Urieta.
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%20castellano/extraccio_fona.html.
Revoluciones industriales. Esencias Naturales.
http://www.revolucionesindustriales.com/industriascaseras/esencias.html.
Instituto Ecuatoriano de Normalizacin. Aceite
esencial de limn (Norma ISO 855:2003).
http://www.normalizacion.gob.ec/wpcontent/uploads/downloads/2014/EXTRACTO_2014/A
OC/nte_inen_iso_855extracto.pdf. 2014.

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