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CONTROL DE LA
CONTAMINACIN
-GDCONPseudomonas aeruginosa
Cdigo:
GE-PM-002GDCON
Versin:
01
Fecha de
aprobacin:
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Giardia sp y Cryptosporidium sp
MTODO DE Giardia sp y Cryptosporidium sp (FILTRACION, SEPARACIN
INMUNOMAGNETICA Y FLUORESCENCIA)
EPA Metodo 1623.1
CODIGO MM-XX-YYY-GDCON
Fecha: 13/09/2012
Fecha: 17/09/2012
Fecha:
GE-PM-000-GDCON Giardia y
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Criptosporidium
OBJETIVO
colonias
(UFC)
de
ALCANCE
DESCRIPCIN
o
PRINCIPIO Y APLICACIONES
El mtodo de filtracin por membrana es una manera rpida y fcil de estimar poblaciones
bacterianas en el agua. Este mtodo es muy til cuando se estudia grandes volmenes de
muestra o cuando se procesan grandes cantidades de muestras para Pseudomonas de rutina en
el laboratorio.
Un volumen apropiado de muestra de agua es filtrada a travs de una membrana filtrante de
0.45 m que retiene las bacterias presentes en esta y la membrana es transferida a una placa de
Petri, la cual contiene medio de cultivo agar Cetrimide. Este compuesto (cetrimide) es el agente
selectivo contra la flora microbiana acompaante, adems mejora la produccin de pigmentos,
tales como Pseudomonas piocianina y fluorescena , que muestran un caracterstico color azulverde y amarillo-verde, respectivamente.
o
INTERFERENCIAS
La tcnica de filtracin por membrana no es aplicable para agua de alta turbiedad o aguas
residuales por su contenido de metales txicos o compuestos orgnicos.
Debe tenerse cuidado en la homogenizacin de la muestra y en el volumen a filtrar que se elige
de acuerdo a las caractersticas de la muestra.
Desinfeccin de los embudos utilizados en una misma serie.
o
Las muestras deben ser tomadas en recipientes estriles y en caso de ser muestras de agua
potable, se debe adicionar tiosulfato de sodio al 10% para inhibir el efecto del cloro sobre los
microorganismos (0.250 ml de tiosulfato de sodio 10% para un volumen de muestra de 250 ml).
Se debe tomar un volumen de muestra no inferior a 200 ml y conservarse refrigeradas en el
transporte hasta el laboratorio (No llene el recipiente por completo para permitir aireacin y
agitacin al momento del anlisis). Se permite almacenar la muestra por un periodo mximo de
24 horas en refrigeracin.
o
EQUIPOS
Autoclave
Cabina de flujo laminar
Incubadora a 35 1C.
Pipetas de 10 ml estriles
Unidades de filtracin, que incluye los embudos y soportes.
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Criptosporidium
Bomba de vaco.
Membranas filtrantes con cuadricula y tamao de poro 0.45 micras y 47 mm
Medio de Cultivo:
Control calidad: Se realizara un control de crecimiento al medio con una cepa de referencia P.
aeruginosa cada que se inicie un nuevo lote. Los datos deben registrarse en el formato F12-GEPR-002-GDCON
Reactivos
Tiosulfato de sodio
Preparacin: Pesar 10 g de Tiosulfato de sodio y aforar a 100 ml de agua destilada. Esterilizar en
autoclave.
Tampn fosfato
PROCEDIMIENTO
Se debe filtrar 200 ml o menos de agua natrural y 500 ml de agua de piscinas. En cualquier
caso, siempre se reportar con base a 100 ml.
Marcar las placas de Petri de 50 x 12 mm. Con el nmero correspondiente a la muestra, la
fecha y el volumen filtrado.
Con la pinza esterilizada en la llama y fra, colocar los filtros de membrana sobre el
portafiltros desinfectado y fros, de manera tal que la cuadrcula quede hacia arriba. Por cada
lote de membranas se debe llevar a cabo un control de esterilidad y registrarlo en el formato
codificado como F14-GE-PR-002-GDCON.
Colocar el embudo de filtracin.
Mezclar fuertemente la muestra por aproximadamente 25 veces y dispensar el volumen de
muestra a filtrar.
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Criptosporidium
CONTROL ANALITICO
CLCULO
Las colonias de P. aeruginosa son 0.8 a 2.2 mm de dimetro, producen pigmentos amarillosverdes y fluorescen sobre luz UV.
Compute el conteo usando filtros de membrana con 20 a 80 colonias con la siguiente ecuacin:
P. aeruginosa /100 ml: Colonias contadas x 100
ml de muestra filtrada
Si no se observan colonias reportar el conteo como <1 P. aeruginosa /100 ml
Los resultados deben consignarse en la captura de datos primarios de microbiologa codificado
como F1-GE-PA-037-GDCON.
BIBLIOGRAFIA
CLESERI, Lenore S., GREENBERG, Arnold E. y EATON, Andrew D. Standard Methods for the
Examination of Water and Wastewater. 21 Edition. USA. Ed. United Book Press, Inc. TECNICA DE
FILTRACION POR MEMBRANA PARA P. aeruginosa Pg 9-33
Manual Microbiologa 12th Edicin. Merck
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Criptosporidium
DIAGRAMA DE FLUJO
200 500 ml
muestra
Incubar a 35
0.5 C por 48
horas