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Hematopoese
O ciclo celular, 17
Apoptose, 19
Regulao da hematopoese, 15
Fatores de transcrio, 20
Molculas de adeso, 21
Locais de hematopoese, 11
Referncias, 21
Locais de hematopoese
Nas primeiras semanas da gestao, o saco vitelino o principal local de hematopoese. A hematopoese definitiva, entretanto, deriva de uma populao de clulas-tronco observada pela primeira
vez na aorta dorsal, designada regio AGM (aortagnadas-mesonefros). Acredita-se que esses precursores comuns s clulas endoteliais e hematopoticas (hemangioblastos) aninhem-se no fgado,
no bao e na medula ssea; de seis semanas at 6
a 7 meses de vida fetal, o fgado e o bao so os
principais rgos hematopoticos e continuam a
produzir clulas sangneas at cerca de duas seTabela 1.1
Feto
Lactentes
Adultos
Locais de hematopoese
0-2 meses (saco vitelino)
2-7 meses (fgado, bao)
5-9 meses (medula ssea)
Medula ssea (praticamente todos os ossos)
Vrtebras, costelas, crnio, esterno, sacro e
pelve, extremidades proximais dos fmures
manas aps o nascimento (Tabela 1.1) (ver Figura 6.1b). A medula ssea o stio hematopotico
mais importante a partir de 6 a 7 meses de vida
fetal e, durante a infncia e a vida adulta, a nica
fonte de novas clulas sangneas. As clulas em
desenvolvimento situam-se fora dos seios da medula ssea, enquanto as maduras so liberadas nos
espaos sinusais e na microcirculao medular e,
a partir da, na circulao geral.
Nos dois primeiros anos, toda a medula ssea
hematopotica, mas durante o resto da infncia
h substituio progressiva da medula dos ossos
longos por gordura, de modo que a medula hemopotica no adulto confinada ao esqueleto central
e s extremidades proximais do fmur e do mero
(Tabela 1.1). Mesmo nessas regies hematopoticas, cerca de 50% da medula composta de gordura (Figura 1.1). A medula ssea gordurosa remanescente capaz de reverter para hematopoese e,
em muitas doenas, tambm pode haver expanso
da hematopoese aos ossos longos. Alm disso, o
fgado e o bao podem retomar seu papel hematopotico fetal (hematopoese extramedular).
Clulas-tronco hematopoticas e
clulas progenitoras
A hematopoese inicia-se com uma clula-tronco
multipotente, que pode dar origem s distintas li-
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Clula-tronco
multipotente
CFUGEMM
Clula progenitora
mielide mista
Clula-tronco
linfide
CFUbaso
BFUE
CFUGMEo
Progenitor
de eritrides
CFUE
CFUMeg
Progenitor de
megacaricito
CFU-M
CFUGM
Progenitor
de granulcito
e moncito
CFUEo
Progenitor
de eosinfilo
Timo
CFU-G
B
Eritrcitos Plaquetas
Moncitos Neutrfilos
Eosinfilos Basfilos
Linfcitos
NK
Clulas NK
Figura 1.2 Diagrama mostrando a clula-tronco multipotente da medula ssea e as linhagens celulares que dela se originam. Vrias clulas progenitoras podem ser identificadas por cultura em meio semi-slido pelo tipo de colnia que formam. Baso = basfilo; BFU = exploso de unidade formadora; CFU = unidade formadora de colnia; E = eritride; Eo =
eosinfilo; GEMM = granulcito, eritride, moncito e megacaricito; GM = granulcito, moncito; Meg = megacaricito;
NK = clulas naturalmente citotxicas.
FUNDAMENTOS EM HEMATOLOGIA 13
Auto-renovao
Diferenciao e
desenvolvimento
(a)
Clulas
maduras
Clulas-tronco
Clulas progenitoras
reconhecidas por
tcnicas de cultura
Proliferao reconhecvel
de precursores
de medula ssea
(b)
Figura 1.3 (a) Com a diferenciao crescente, as clulas da medula ssea perdem a capacidade de auto-renovao medida que amadurecem. (b) Uma nica clula-tronco produz, depois de mltiplas divises (mostradas pelas linhas verticais),
< 106 clulas maduras.
A clula-tronco tem capacidade de autorenovao (Figura 1.3), de modo que a celularidade geral da medula permanece constante em
condies normais de sade. H considervel
ampliao no sistema; assim, uma clula-tronco,
depois de 20 divises celulares, capaz de pro6
duzir cerca de 10 clulas sangneas maduras
(Figura 1.3). As clulas precursoras, no entanto,
so capazes de responder a fatores de crescimento hematopotico com aumento de produo seletiva de uma ou outra linhagem celular de acordo com as necessidades. O desenvolvimento de
clulas maduras (eritrcitos, granulcitos, moncitos, megacaricitos e linfcitos) ser abordado em outras sees deste livro.
Clula-tronco
Matriz
extracelular
Macrfago
Clula adiposa
Clula endotelial
Fibroblasto
Molcula de adeso
Ligante
Fator de crescimento
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extracelulares, como colgeno, glicoprotenas (fibronectina e trombospondina) e glicosaminoglicanos (cido hialurnico e derivados condroitnicos)
para formar uma matriz extracelular, alm de secretarem vrios fatores de crescimento necessrios
sobrevivncia da clula-tronco. Clulas-tronco
mesenquimais so consideradas crticas na formao do estroma.
As clulas-tronco so capazes de circular no
organismo e so encontradas em pequeno nmero
no sangue perifrico. Para deixar a medula ssea,
as clulas devem atravessar o endotlio vascular,
e esse processo de mobilizao aumentado pela
administrao de citoquinas, como o fator estimulante de colnias granulocticas (G-CSF) ou o fator estimulante de colnias granuloctico-macrofgicas (GM-CSF) (p. 107). O processo reverso,
de volta ao lar (homing), parece depender de um
gradiente quimiocintico, no qual o fator derivado do estroma (SDF-1) crtico. Vrias interaes
crticas mantm a viabilidade das clulas-tronco e
a produo no estroma de fator de clulas-tronco
Clula totipotente
Clulas mielides
e linfides
Fgado, etc.
Clula-tronco
epitelial
Clula-tronco
hemopotica
Msculo,
tendo,
cartilagem,
etc.
Clula-tronco
mesenquimal
(b) Clulas-tronco adultas
Tecido
nervoso
Clula-tronco
nervosa
FUNDAMENTOS EM HEMATOLOGIA 15
Regulao da hematopoese
A hematopoese comea com a diviso de uma
clula-tronco: uma das clulas-filhas substitui a
clula-me, como clula-tronco (auto-renovao), e a outra compromete-se em uma linha de
diferenciao. Essas clulas progenitoras comprometidas precocemente expressam baixos nveis de
fatores de transcrio, que podem comprometlas a linhagens especficas. A seleo da linhagem
de diferenciao pode depender tanto de alocao
aleatria como de sinais externos recebidos pela
clula progenitora. Foram isolados vrios fatores de transcrio que regulam a diferenciao
ao longo das principais linhagens celulares. Por
exemplo, PU.1 compromete clulas para a linhagem mielide, enquanto GATA-1 tem um papel
essencial na diferenciao eritropotica e megacarioctica.
Fatores de crescimento
hematopoticos
Os fatores de crescimento hematopoticos so hormnios glicoproticos que regulam a proliferao
e a diferenciao das clulas progenitoras hematopoticas e a funo das clulas sangneas maduras. Podem agir no local em que so produzidos por
contato clula a clula ou circular no plasma. Tambm podem ligar-se matriz extracelular, formando
nichos aos quais aderem as clulas-tronco e as progenitoras. Os fatores de crescimento podem causar
no s proliferao celular, mas tambm podem estimular diferenciao, maturao, prevenir apoptose
e afetar as funes de clulas maduras (Figura 1.6).
Os fatores de crescimento compartilham
um certo nmero de propriedades (Tabela 1.2) e
agem em diferentes etapas da hematopoese (Tabela 1.3 e Figura 1.7).
Clula inicial
Proliferao
G-CSF
Moncito
Diferenciao
G-CSF
Neutrfilo
Supresso
da apoptose
G-CSF
G-CSF
Maturao
Clula final
Ativao
funcional
G-CSF
Ativao de
fagocitose,
destruio,
secreo
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Receptores de fatores de
crescimento e transduo de sinal
Os efeitos biolgicos dos fatores de crescimento
so mediados por receptores especficos nas clulas-alvo. Muitos receptores (p. ex., receptor de
eritropoetina [epo-R], GM-CSF-R) pertencem
superfamlia dos receptores hematopoticos, que
dimerizam aps conectarem-se a seus ligantes.
A dimerizao do receptor leva ativao
de uma complexa srie de vias de transduo de
sinais intracelulares: as trs principais so a via
JAK/STAT, a via proteinoquinase ativada por mitognio (MAP) e a via fosfatidilinositol 3 (PI3)
quinase (Figura 1.8; ver tambm Figura 19.2). As
proteinoquinases Janus-associadas (JAK) so uma
famlia de quatro proteinoquinases tirosina-especficas que se associam aos domnios intracelulares
dos receptores de fatores de crescimento (Figura
1.8). Uma molcula de fator de crescimento liga-
FUNDAMENTOS EM HEMATOLOGIA 17
SCF
PSC
IL-3
IL-3
TPO
CFUGEMM
GM-CSF
GM-CSF
BFUEMeg
CFUGMEo
BFUE
EPO
CFUMeg
CFUGM
M-CSF
CFUEo
G-CSF
IL-5
CFUE
Eritrcitos
Plaquetas
CFUM
CFUG
Moncitos
Neutrfilos
Eosinfilos
Figura 1.7 Diagrama do papel dos fatores de crescimento na hematopoese normal. Fatores mltiplos de crescimento
agem nas clulas-tronco primitivas e progenitoras da medula ssea. EPO = eritropoetina; PSC = clula-tronco multipotente; SCF = fator de clula-tronco; TPO = trombopoetina. Para outras abreviaes, veja a Figura 1.2.
O ciclo celular
O ciclo de diviso celular, em geral designado
simplesmente como ciclo celular, um processo
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Fator de crescimento
Membrana plasmtica
Quinase Pl3
JAK
AKT
JAK
STATs
Apoptose
bloqueada
RAS
RAF
MAP-quinase
Ncleo
MYC, FOS
M
Expresso
gnica
Ativao da
expresso gnica
G2
G1
E2F
Rb
p53
Dano no DNA
Domnio de
transativao
Domnio de
ligao com DNA
Amplificador de
seqncia de DNA
RNA-polimerase
+
fatores acessrios
Transcrio
Caixa de seqncia
TATA (promotor)
Gene
estrutural
FUNDAMENTOS EM HEMATOLOGIA 19
Fase M
M
Cdk2
G0
G1
G2
Ciclina
B
Cdk2
Ciclina
E
S
Cdk2
Ciclina
A
A interfase dividida em trs estgios principais: uma fase G1, na qual a clula comea a
orientar-se no sentido da replicao, uma fase
S durante a qual duplica-se o contedo de DNA
(Figura 1.10b) e os cromossomas replicam-se,
e a fase G2, na qual as organelas so copiadas e
aumenta o volume citoplasmtico. Se as clulas
repousarem antes da diviso, elas entram em um
estgio G0 , em que podem permanecer por longos
perodos. O nmero de clulas em cada estgio do
ciclo pode ser avaliado pela exposio da clula a
um agente qumico ou marcador radioativo que se
incorpore ao DNA recm-formado ou por citometria em fluxo.
O ciclo celular controlado em dois checkpoints, que agem como freios para coordenar
o processo de diviso no fim das fases G1 e G2.
Duas classes principais de molculas controlam
esses checkpoints, proteinoquinases ciclina-dependentes (Cdk) que fosforilam alvos proticos
em seqncia e ciclinas, que se ligam s Cdks e
regulam sua atividade. Um exemplo da importncia desses sistemas demonstrado pelo linfoma
de clulas do manto, que resulta da ativao constitucional da ciclina D1, como resultado de uma
translocao cromossmica (p. 222).
Interfase
(a)
Contedo de DNA
Apoptose
4c
2c
(b)
G1
G2 M
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Fator de morte,
p. ex., ligante Fas
APOPTOSE
Caspases
Liberao de
citocromo c
Domnio
de morte
Procaspases
Protena
BAX aumentada
Inibe
BCL-2
BCL-2
aumentada
p53
Expresso
do gene BAX
Dano
ao DNA
Drogas citotxicas
Radiao
Fator de sobrevivncia,
p. ex., fator de crescimento
Figura 1.11 Representao da apoptose. A apoptose iniciada via dois estmulos principais: (i) sinal atravs de
receptores da membrana celular como
receptor de Fas ou fator de necrose
tumoral (TNF) ou (ii) liberao de citocromo c da mitocndria. Os receptores de membrana sinalizam apoptose
por um domnio intracelular de morte
levando ativao de caspases que
digerem DNA. O citocromo c ligase protena citoplasmtica Apaf-1,
levando ativao de caspases. A relao intracelular de pr-apoptticos
(p. ex., BAX) e antiapoptticos (p.
ex., BCL-2) da famlia BCL-2 pode
influenciar a liberao de citocromo c.
Os fatores de crescimento aumentam o
nvel de BCL-2, que inibe a liberao
de citocromo c, enquanto o dano de
DNA, ativando a p53, aumenta o nvel
de BAX, que, por sua vez, aumenta a
liberao de citocromo c.
Muitas alteraes genticas associadas a doenas malignas diminuem o ndice de apoptose e prolongam a sobrevida celular. O exemplo mais claro
a translocao do gene da BCL-2 para o locus da
cadeia pesada de imunoglobulina na translocao
t(14;18) no linfoma centro-folicular. A superexpresso da protena BCL-2 torna as clulas B malignas menos suscetveis apoptose. Apoptose o
destino normal da maioria das clulas B que so
selecionadas nos centros germinativos linfides.
Vrias translocaes que levam fuso de
protenas como t(9;22), t(1;14) e t(15;17) tambm
resultam em inibio da apoptose (Captulo 10).
Alm disso, genes que codificam protenas envolvidas na mediao da apoptose quando h dano
ao DNA, como a p53 e a ATM, tambm sofrem
mutaes freqentes e podem ficar inativos em
doenas hematopoticas malignas.
Fatores de transcrio
Fatores de transcrio regulam a expresso gnica
pelo controle da transcrio de genes especficos
ou de famlias de genes. Tipicamente contm ao
FUNDAMENTOS EM HEMATOLOGIA 21
Molculas de adeso
Uma grande famlia de molculas de glicoprotenas, chamadas molculas de adeso, medeia a
ligao de clulas precursoras da medula, leuccitos e plaquetas a vrios componentes da matriz
extracelular, ao endotlio, a outras superfcies e
umas s outras. As molculas de adeso na superfcie de leuccitos so denominadas receptores e
interagem com molculas (chamadas ligantes) na
superfcie de clulas-alvo potenciais. H trs famlias principais:
1. Superfamlia de imunoglobulinas. Inclui
receptores que reagem com antgenos (receptores de clulas T e imunoglobulinas) e molculas superficiais de adeso independentes de
antgenos.
2. Selectinas. So principalmente envolvidas na
adeso de leuccitos e plaquetas ao endotlio
na inflamao e na coagulao.
3. Integrinas. So envolvidas na adeso celular
matriz extracelular, por exemplo, ao colgeno na cicatrizao de feridas e na adeso de
leuccitos e de plaquetas.
As molculas de adeso so importantes no
desenvolvimento e na manuteno da resposta
inflamatria e imunolgica e nas interaes de
plaquetas e leuccitos com a parede dos vasos. A
expresso de molculas de adeso pode ser modificada por fatores extra e intracelulares, e essa
alterao pode ser quantitativa ou funcional. A
expresso dessas molculas pode ser aumentada
por IL-1, TNF, interferon-, ativao de clula T,
adeso a protenas extracelulares e infeco viral.
O padro de expresso das molculas de
adeso em clulas tumorais pode determinar seu
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