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Laura Aponte*
Angel Guadarrama*
ABSTRACT
Departamento de Botnica Agrcola. Laboratorio de Fisiologa Postcosecha, Facultad de Agronoma, Universidad Central de Venezuela. Apdo. 4579. Maracay 2101. Aragua, Venezuela. E-mail:
guadarramaa@agr.ucv.ve
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COMPENDIO
INTRODUCCION
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Se realizaron los anlisis bioqumicos con la determinacin y caracterizacin de cada una de las enzimas citadas para los estados de madurez ya establecidos. Las enzimas hidrolticas fueron extradas por homogeneizacin de 25 g
de pulpa (semillas + arilo) en 25 ml de NaCl al 10% (pH 6.2) por un
minuto. El extracto crudo fue centrifugado a 15000 rpm por 30 minutos; el
sobrenadante fue removido (extracto enzimtico) para cada una de las enzimas
y realizada la evaluacin de las actividades en forma inmediata o almacenado
bajo congelacin a -15C para su posterior anlisis. La determinacin de la
actividad de la PME fue por el mtodo de Hagerman y Austin (1986), en
donde la mezcla de reaccin consisti de 2.5 ml de solucin de pectina ctrica al
1% (p/v) en cloruro de sodio 0.2 N, ms dos gotas de azul de bromofenol y
0.75 ml del extracto enzimtico; la reaccin se llev a cabo por una hora a 30C,
se midi su absorbancia a 620 nm expresando la actividad en variacin de la
absorbancia / h a 30C.
La evaluacin de la actividad de la poligalacturonasa se realiz por el
mtodo de MacDonnell et al. (1945); la mezcla de reaccin consisti de 2.5 ml
de solucin de cido poligacturnico al 0.2% (p/v) y 0.75 ml del extracto
enzimtico incubndola a 30C por una hora, transcurrido el tiempo se filtr
con papel Whatman 1, se determin la prdida de viscosidad en comparacin al
testigo. La actividad se expres como el porcentaje de la disminucin de la
viscosidad durante una hora a 30C.
La actividad de la celulosa se evalu igual que la poligalacturonasa, sustituyendo solamente el sustrato que fue una solucin de 2.5 ml de carboximetilcelulosa
al 0.2% (p/v) expresando su actividad como el porcentaje de la disminucin de
la viscosidad por una hora a 30C.
A nivel de la caracterizacin cintica de cada enzima con sus mtodos
respectivos, se utiliz una concentracin de sustrato diferente al mtodo original
propuesto varindolas entre 0.06 y 10 mg/ml de solucin. El clculo de la
constante de Michaelis-Menten (Km) y de la velocidad mxima (Vmx) se
realiz por representacin grfica de la ecuacin de Lineaweaver-Burk
(Lehninger, 1982). Para la obtencin del pH ptimo, se realizaron las mediciones de las actividades de las enzimas con sus mtodos respectivos, aunque se
ajustaron las mezclas de reaccin a varios pH iniciales entre 2 a 8 para la
PME, 3 a 9 para la PG y 4 a 8 para la celulasa (Cameron et al., 1995;
Snchez et al., 1998).
150
151
Madurez
Fisiolgica
Maduro
Sobremaduro
1.38
1.75
121.50
115.51
134.22
76.93
13.38
17.70
18.23
15.30
pH
3.14
3.22
3.32
3.74
Carotenoides totales
(mg/100 ml de jugo)
0.27
0.64
0.65
0.48
Clorofila total
(mg/l de solucin)
7.36
3.73
2.92
0.99
Anlisis fsico
Firmeza (mm)
Peso fresco (g)
Anlisis qumico
Slidos solubles (Brix)
Enzima Pectinmetilesterasa
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en donde la PME1 fue de 1.82 mg/ml y para la PME2 fue de 0.76 mg/
ml. En todos los casos observados se evidencian Km, que aunque son de diferentes fuentes, sus valores estn muy por debajo del obtenido para el fruto de
parchita; este hecho sugiere que la PME de este fruto presenta poca afinidad
hacia el sustrato utilizado.
0.09
0.08
Absorbancia/hora
0.07
0.06
0.05
0.04
0.03
0.02
0.01
Verde
Madurez Fisiolgica
Maduro
Sobremaduro
Estado de Madurez
153
0 ,2 0 5
0 ,2
Absorbancia/hora
0 ,1 9 5
0 ,1 9
0 ,1 8 5
0 ,1 8
0 ,1 7 5
0 ,1 7
0 ,1 6 5
0
10
20
30
40
50
60
T e m p e ra tu r a ( C )
154
0.25
0,2 5
0.2
Absorbancia/hora
Absorbancia / hora
0 ,2
0.15
0,1 5
0.1
0 ,1
0.05
0,0 5
0
0
pH
pH
Figura 3. Variacin de la actividad de la Pectinmetilesterasa ( absorbancia / hora) en
frutos de parchita maracuy (Passiflora edulis f. flavicarpa) a diferentes
pH.
Enzima Poligalacturonasa
155
0 ,3 4
0.34
9 0 C
90 C
0.32
Absorbancia / hora
0 ,3 2
Ab so rb a n cia/h o
0.30
0 ,3
0 ,2 8
0.28
100
100C
0.26
0 ,2 6
0.24
0 ,2 4
0.22
0 ,2 2
0.2
0 ,2
T i e m p o ( m in u t o s )
Tiempo (minutos)
10
La temperatura ptima para la PG fue de 30C, ya que hubo mayor disminucin de viscosidad en comparacin con las dems temperaturas (Figura 5), indicando una mayor actividad de esta enzima. Esta temperatura ptima fue menor en
comparacin a la de 45C, ubicada en la lechosa por Chan y Tam (1982).
156
14
12
10
V erde
M a d u r e z F i s i o l g i c a
M a d u ro
S obre M aduro
E s ta d o d e M a d u re z
157
25
20
15
10
0
0
10
20
30
50
40
T e m p e ra tu ra (C )
PrdidaPrdida
de viscosidad
de viscosidad (%/h)(%/h)
18
18
16
16
14
14
12
12
10
10
88
66
44
22
00 0
0
22
44
pH
66
10
pH
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Enzima celulasa
Se realiz el procedimiento indicado en la metodologa para medir actividad de celulasa y en los tres experimentos que se realizaron no se encontr
actividad detectable en ningn estado, por lo que se sugiere que si el fruto de
parchita maracuy presenta actividad de esta enzima, entonces esta expresin ha
de ser nfima. Hasta el momento, aparentemente no se tiene informacin sobre
la celulasa en parchita maracuy, por esta razn no se procedi en su anlisis y
caracterizacin.
REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS
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