PRACTICA: RECUENTO DE MICROORGANISMO VIABLES EN UFC

Felipe Martnez Arbelez

Brayan Stiven Gil Pineda

Laboratorio de microbiologa
L 9-12

DOCENTE
Magda Rodrguez

FACULTAD DE CIENCIAS FARMACEUTICAS Y ALIMENTARIAS

QUIMICA FARMACEUTICA
MEDELLIN
2015

RESULTADOS:
En la determinacin de UFC en microorganismos viables para una muestra
desconocida con la presencia de bacterias coliformes. La tcnica se basa
entonces en contar las unidades formadoras de colonias o UFC presentes
en un mililitro de muestra. Se considera que cada colonia que desarrolla en
el medio de cultivo de eleccin despus de un cierto tiempo de incubacin a
la temperatura adecuada, proviene de un microorganismo o de un agregado
de ellos, de la muestra bajo estudio; ese microorganismo o microorganismos
son capaces de formar la colonia, es decir una UFC. Para que las colonias
puedan contarse de manera confiable, se hacen las diluciones decimales en
4 tubos con caldo peptonado, y para la dilucin de 10 -3 y 10-4 se toma un
mililitro de la muestra y se siembra posteriormente en una caja de Petri con
agar caldo triptona-glucosa para favorecer su reproduccin en este medio y
determinar cuntas colonias crecieron a las 24 y 48 horas y as determinar
el nmero de colonias presentes en la muestra inicial. Prueba presuntiva
Tubos con caldo
peptonado(diluc
in)
10-3

Observacin (24hr)

Descripcin

Despus de
dejar por 24
horas
incubadas a
37 c las
bacterias con
el agar y
favorecer su
reproduccin.
Logramos
evidenciar la
formacin de 8
unidades
formadoras de
colonias en la
caja de Petri
como se
muestra en la
imagen.

10-4

Despus de
dejar por 24
horas
incubadas a
37 c las
bacterias con
el agar y
favorecer su
reproduccin.
Logramos
evidenciar la
formacin de 4
unidades
formadoras de
colonias en la
caja de Petri
como se
muestra en la
imagen y lo
que sugiere
que fueron
creadas a
partir de una
sola bacteria.

Clculos:
Determinadas ya las UFC en los dos tubos de ensayo con las diluciones de
10-3 y 10-4 nos disponemos a calcular el nmero de unidades formadoras de
colonias en la muestra inicial mediante este clculo.
1. Para la dilucin de 10-3
UFC= 8*1000= 8000
*UFC/100mlsln=80
2. Para la dilucin de 10-4
UFC= 4*10000= 40000 *UFC/100MLSLN=400

PRUEBA NMP (NUMERO MAS PROBABLE)

Tubos
CLVBB

Observacin(24hr)

Descripcin

Serie
1(adicin
10ml
muestra)

En la prueba con caldo

de lactosa verde brillante
bilis para las 3 muestras
ms concentradas se
logra evidenciar la
aparicin de unas
burbujas en la campana
de durham y tambin se
observar un precipitado
en el fondo lo cual alude
a que la prueba es
positiva para la
presencia de bacterias
coliformes.
En la prueba con caldo
de lactosa verde brillante
bilis para las 3 muestras
ms diluidas se logra
evidenciar un
desplazamiento en la
campana de durham, y
varia espuma en la
superficie del tubo al
igual que un precipitado
en el fondo lo cual alude
a que la prueba es
positiva para la
presencia de bacterias
coliformes.
En la prueba con caldo
de lactosa verde brillante
bilis para las 3 muestras
ms diluidas pero con la
adicin de menos
cantidad de muestra no
se logra evidenciar
ninguna presencia de
gas, ni precipitado, ni
espuma en los 3 tubos lo
cual alude a que la
prueba es negativa para
la presencia de bacterias
coliformes.

Serie 2
(adicin
1ml
muestra)

Serie 3
(adicin 0.1
ml muestra)

Presencia de E.coly en agar EMB

Caja Petri
con agar
EMB

Observacin (48hr)

Descripcin

Para los 6
tubos de la
serie 1 y 2
que dieron
la prueba
positiva de
presencia
de bacterias
coliformes.

En la prueba
presuntiva para
la cual el NMP
fue 3-3-0 para
microorganismo
s coliformes,
fueron
sembrados en
un agar EMB
para determinar
solo la
presencia de
E.coly que en
este medio
forman un halo
verde con brillo
metlico para el
cual la prueba
solo fue positiva
en 3 tubos, 1
para la serie 1 y
2 para la serie
2.

Anlisis de resultados:
En la determinacin de UFC presentes a partir de una sola bacteria en un
agar blando de triptona-glucosa para favorecer su reproduccin se encontr
que en la dilucin 10-3 de caldo peptonado con la muestra problema por un
tiempo de 24/48 horas e incubadas a 37c el nmero de colonias fue 8 y
que si lo multiplicamos por el factor de dilucin que es 1000 nos da un valor
de 8000 UFC presentes en la muestra inicial y si lo dividimos por 100 ml de
solucin nos da una concentracin de 80 UFC/100ml solucin.
Y para la dilucin de 10-4 de caldo peptonado bajo las mismas condiciones
que la anterior el nmero de colonias encontradas a las 24/48 horas fueron
un total de 4 y que si lo multiplicamos por el factor de dilucin que es 10000
nos da un valor de 40000 UFC presentes en la muestra inicial y si lo
dividimos por 100 ml de solucin nos da una concentracin de 400
UFC/100ml solucin.
-

En la prueba presuntiva para determinar solo la presencia de

microorganismos coliformes y posteriormente encontrar mediante un
agar EMB para las pruebas que dieron positivas de la fermentacin de
la lactosa la presencia de E.coly que es la bacteria ms representativa
en este grupo de bacterias entricas. Se destacan entre el grupo de
bacterias coliformes aquellas que cumplen con los siguientes
requisitos bioqumicos:
Aerobias o anaerobias facultativas
Gram negativas
No esporogenas
Fermentan la lactosa alrededor de los 35 c a partir de las 24 horas.

Para la primera prueba que consista entonces encontrar bacterias

entricas el resultado fue el siguiente:
Pruebas presuntiva positivas para coliformes
Tubos con 10 ml
Tubos 1 ml muestra
Tubos con 0.01 ml
muestra
mestra
3
3
0
Para identificar E. coly en agar EMB
Tubos con 10 ml
Tubos 1 ml muestra
Tubos con 0.01 ml
muestra
mestra
1
2
0