ES QIAamp DSP DNA Blood Mini Kit Handbook

Junio 2012
Manual del kit QIAamp DSP DNA

Blood Mini
50
Versin 2
Para uso diagnstico in vitro

61104
1071108ES
QIAGEN GmbH, QIAGEN Strasse 1, D-40724 Hilden
(Alemania)
Tfno: +49-2103-29-0
R2
1071108ES
Sample & Assay Technologies
QIAGEN: Tecnologas de preparacin de muestras y

ensayos de biologa molecular
QIAGEN es el proveedor lder de tecnologas innovadoras para la preparacin
de muestras y ensayos de biologa molecular que permiten el aislamiento y la
deteccin del contenido de cualquier muestra biolgica. Nuestros productos y
servicios de vanguardia y mxima calidad garantizan el xito desde la muestra
hasta el resultado.
QIAGEN sienta las bases de excelencia en los siguientes campos:
Purificacin de ADN, ARN y protenas
Ensayos de cidos nucleicos y protenas
Investigacin con microARN y ARNi
Automatizacin de tecnologas de preparacin de muestras y ensayos de

biologa molecular
Nuestra misin es ayudarle a superar sus retos y a alcanzar un xito

excepcional. Para ms informacin, visite www.qiagen.com.
ndice
Uso previsto
Resumen y descripcin
Lisis de las clulas sanguneas
Unin del ADN genmico a la membrana de la columna de centrifugacin

QIAamp Mini
5
Purificacin automatizada
Materiales suministrados
Contenido del kit
Materiales necesarios pero no suministrados
Informacin sobre seguridad
10
Almacenamiento y manipulacin de los reactivos
12
Manipulacin y almacenamiento de las muestras
12
Notas importantes
15
Cuestiones importantes antes de comenzar un protocolo
15
Preparacin de reactivos y soluciones tampn
15
Manipulacin de las columnas de centrifugacin QIAamp Mini
16
Elucin de ADN genmico
17
Rendimiento y calidad del ADN genmico
17
Montaje del sistema de vaco QIAvac 24 Plus
18
Protocolos
Aislamiento y purificacin de ADN genmico procedente de muestras de
sangre con un sistema de vaco
20
Aislamiento y purificacin de ADN genmico procedente de muestras de
sangre con una microcentrifugadora
24
Control de calidad
27
Caractersticas del rendimiento
27
Rendimiento en ensayos subsiguientes
28
Smbolos
33
Bibliografa
34
Informacin de contacto
35
Informacin para pedidos
36
Manual del kit QIAamp DSP DNA Blood Mini 06/2012
Uso previsto
El kit QIAamp DSP DNA Blood Mini es un sistema que utiliza la tecnologa de
membrana de gel de slice (tecnologa QIAamp) para el aislamiento y la
purificacin de ADN genmico procedente de muestras biolgicas.
El producto est concebido para ser utilizado por usuarios profesionales, como
tcnicos y mdicos formados en tcnicas de biologa molecular.
El kit QIAamp DSP DNA Blood Mini se ha diseado para el uso diagnstico in
vitro.
Resumen y descripcin
El kit QIAamp DSP DNA Blood Mini utiliza una tecnologa ampliamente
consolidada para ofrecer un mtodo simple y rpido de aislamiento y
purificacin de ADN genmico a partir de muestras de 200 l de sangre
completa.
Los procedimientos QIAamp DSP DNA Blood Mini, diseados para el
procesamiento simultneo de mltiples muestras de sangre, obtienen ADN
purificado listo para su uso. En los procedimientos se puede utilizar sangre
completa fresca o congelada y sangre tratada con citrato o EDTA.
Los sencillos procedimientos QIAamp DSP de centrifugacin y vaco permiten el
procesamiento simultneo de mltiples muestras. Algunos de los
procedimientos de centrifugacin QIAamp pueden ser completamente
automatizados en el QIAcube para una mayor estandarizacin y facilidad de
uso (vase la pgina 6).
No es necesaria la previa separacin de los leucocitos. Los procedimientos no
requieren ni la extraccin con fenol/cloroformo ni la precipitacin con alcohol y
precisan una intervencin mnima por parte del usuario, lo que permite la
manipulacin segura de muestras potencialmente infecciosas. Los
procedimientos estn diseados para minimizar la contaminacin cruzada de
una muestra a otra. El ADN purificado est listo para su uso en una PCR o
cualquier otra aplicacin o puede conservarse a entre 25 C y 15 C para un
uso posterior.
Principios del procedimiento

Cada procedimiento QIAamp DSP DNA Blood Mini comprende 4 etapas:
Lisis de las clulas presentes en la muestra de sangre
Unin del ADN genmico del lisado celular a la membrana de una

columna de centrifugacin QIAamp Mini
Lavado de la membrana
Elucin del ADN genmico de la membrana
Este manual contiene protocolos para 2 procedimientos QIAamp DSP DNA

Blood Mini alternativos: el procedimiento de centrifugacin, para el que se
requiere una centrifugadora, y el procedimiento de vaco, para el que se
requiere una centrifugadora y un sistema de vaco (consulte el organigrama,
pgina 7).
Lisis de las clulas sanguneas

Las muestras se lisan en condiciones de desnaturalizacin a altas temperaturas.
La lisis se realiza en presencia de proteasa QIAGEN (QP) y solucin tampn de
lisis (AL).
Unin del ADN genmico a la membrana de la columna

de centrifugacin QIAamp Mini
Para optimizar la unin del ADN genmico a la membrana de la columna de
centrifugacin QIAamp Mini se aade en primer lugar etanol a los lisados.
Cada lisado se dispensa entonces en una columna de centrifugacin QIAamp
Mini y, a medida que el lisado la atraviesa por efecto del vaco o de la fuerza
centrfuga, el ADN genmico se adsorbe sobre la membrana de gel de slice.
Purificacin automatizada
La purificacin de ADN con el kit QIAamp DSP DNA Blood Mini puede
automatizarse completamente en el instrumento QIAcube. El innovador
QIAcube utiliza tecnologa avanzada para procesar las columnas de
centrifugacin QIAGEN, lo que permite la integracin sin interrupciones de la
preparacin automatizada de muestras de bajo volumen en la dinmica de
trabajo de laboratorio. La preparacin de muestras con el QIAcube se realiza
siguiendo los mismos pasos que en el procedimiento manual (es decir, lisis,
unin, lavado y elucin), por lo que es posible utilizar el kit QIAamp DSP DNA
Blood Mini para la purificacin de ADN de alta calidad.
Para obtener ms informacin sobre el procedimiento automatizado, consulte
la hoja del protocolo correspondiente en www.qiagen.com/MyQIAcube. Las
hojas de protocolo actualizadas se pueden descargar gratuitamente u obtener
a travs del Departamento de Servicio Tcnico de QIAGEN (consulte la pgina
35).
Al automatizar el kit QIAamp DSP DNA Blood Mini en el instrumento QIAcube,
el instrumento quiz procese menos de 50 muestras debido a volmenes
muertos, evaporacin y consumo adicional de reactivo por el pipeteo
automatizado. QIAGEN nicamente garantiza 50 preparaciones de muestras
con el uso manual del kit QIAamp DSP DNA Blood Mini.
Figura 1. El instrumento QIAcube.
Procedimientos de centrifugacin y
vaco del kit QIAamp DSP DNA
Blood Mini
Procedimiento de
centrifugacin
QIAamp
Procedimiento de
vaco QIAamp
Muestra
Muestra
Lea atentamente los protocolos (pginas 22 y 26) antes

de comenzar.
Aada a un tubo de lisis (LT) 20 l de QP, 200 l de muestra y
200 l de AL.
Agite con la agitadora vorticial 15 segundos.
Incube 10 minutos ( 1 minuto) a 56C ( 1C).
Lisis
Aada 200 l de etanol.

Agite con la agitadora vorticial 15 segundos.
Transfiera el lisado a la columna de centrifugacin QIAamp Mini.
Procedimiento de centrifugacin: centrifugue 1 minuto a 6.000 x g.
Unin
Vaco
Procedimiento de vaco: aplique vaco.

Procedimiento de centrifugacin: ponga la columna de centrifugacin
QIAamp Mini en un tubo de lavado nuevo, aada 500 l de AW1 y
centrifugue 1 minuto a 6.000 x g.
Lavado
(solucin
tampn AW1)
Procedimiento de vaco: aada 750 l de AW1 y aplique vaco.

Vaco
Procedimiento de centrifugacin: ponga la columna de centrifugacin

QIAamp Mini en un nuevo tubo de lavado, aada 500 l de AW2 y
centrifugue 1 minuto a la mxima velocidad
(aproximadamente 20.000 x g o 14.000 rpm).
Lavado
(solucin
tampn AW2)
Vaco
Procedimiento de vaco: aada 750 l de AW2 y aplique vaco.
Ponga la columna de centrifugacin QIAamp Mini en un tubo de

lavado.
Elucin
Centrifugue 3 minutos a la mxima velocidad (aproximadamente

20.000 x g o 14.000 rpm).
Ponga la columna de centrifugacin QIAamp Mini en un tubo de
elucin.
Aada 50200 l de AE e incube durante 1 minuto.
Centrifugue 1 minuto a 6.000 x g.
ADN genmico o viral puro
Materiales suministrados
Contenido del kit
Kit QIAamp DSP DNA Blood Mini
N de referencia
61104
Nmero de preparaciones
50*
QIAamp QIAamp Mini Spin Columns with

Mini
Wash Tubes (columnas de
Spin
centrifugacin QIAamp Mini con tubos
de lavado) (WT) (2 ml)
50
ET
Elution Tubes (tubos de elucin)

(1,5 ml)
50
VC
VacConnectors (conectores
VacConnector)
50
LT
Lysis Tubes (tubos de lisis) (1,5 ml)
50
WT
Wash Tubes (tubos de lavado) (2 ml)
3 x 50
AL
Lysis Buffer (solucin tampn de lisis)
12 ml
AW1
Wash Buffer 1 (concentrate) (solucin

tampn de lavado 1 [concentrado])
19 ml
AW2
Wash Buffer 2 (concentrate) (solucin

tampn de lavado 2 [concentrado])
13 ml
AE
Elution Buffer (solucin tampn de

elucin)
25 ml
PS
Protease Solvent (disolvente de

protease)
2 ml
QP
QIAGEN Protease (proteasa QIAGEN)
1 vial
CD
Manual
* Al automatizar el kit QIAamp DSP DNA Blood Mini en el QIAcube, el instrumento quiz
procese menos de 50 muestras debido a volmenes muertos, evaporacin y consumo
adicional de reactivo por el pipeteo automatizado. QIAGEN nicamente garantiza
50 preparaciones de muestras con el uso manual del kit QIAamp DSP DNA Blood Mini.
Contiene clorhidrato de guanidina. No compatible con desinfectantes que contengan leja.

Para ms informacin, consulte la pgina 11.
Contiene azida sdica como conservante.
Volumen de resuspensin 1,2 ml. Vase Preparacin de la proteasa QIAGEN en la pgina

15.
Materiales necesarios pero no suministrados

Siempre que trabaje con productos qumicos, utilice una bata de laboratorio
adecuada, guantes desechables y gafas protectoras. Para ms informacin,
consulte las correspondientes fichas de datos de seguridad de los materiales
(MSDS) que el proveedor del producto pone a su disposicin.
Para los procedimientos de centrifugacin y vaco
Etanol (96100%)
Pipetas* y puntas de pipeta (para prevenir la contaminacin cruzada,

recomendamos encarecidamente usar puntas de pipeta resistentes a
aerosoles)
Guantes desechables
Bloque de calentamiento* para la lisis de muestras a 56 C

(recomendamos el equipo Thermomixer comfort de Eppendorf con
termobloque para tubos de ensayo micro de 1,5 ml)
Microcentrifugadora*
Probeta graduada (50 ml)
Agitadora vorticial
Para el procedimiento de vaco nicamente
Sistema de vaco QIAvac 24 Plus (QIAvac 24 Plus, n de referencia 19413,

QIAvac Connecting System, n de referencia 19419, y Vacuum Pump, n
de referencia 84020) o sistema de vaco de laboratorio genrico
equivalente.
* Para garantizar el correcto procesamiento de las muestras en los procedimientos QIAamp

DSP DNA Blood Mini, recomendamos encarecidamente calibrar los instrumentos (p. ej.,
pipetas y bloques de calentamiento) siguiendo las recomendaciones de los fabricantes.
Esta no es una lista completa de proveedores y no incluye a numerosos proveedores

importantes de suministros biolgicos.
Informacin sobre seguridad

Siempre que trabaje con productos qumicos, utilice una bata de laboratorio
adecuada, guantes desechables y gafas protectoras. Para ms informacin,
consulte las correspondientes hojas de datos de seguridad de materiales
(MSDS). Dichas hojas estn disponibles online en un formato PDF cmodo y
compacto en www.qiagen.com/Support/MSDS.aspx, donde podr encontrar,
ver e imprimir la hoja de datos sobre seguridad correspondiente a cada kit y a
cada componente del kit QIAGEN.
ATENCIN: NO aada leja o soluciones cidas directamente al
residuo de la preparacin de la muestra.
La solucin tampn de lisis (AL) y la solucin tampn de lavado 1 (AW1)
contienen clorhidrato de guanidina, susceptible de formar compuestos muy
reactivos cuando se combina con leja. Si se derrama algn lquido que
contenga estas soluciones tampn, lmpielo con agua y un detergente de
laboratorio adecuado. Si el lquido derramado contiene agentes
potencialmente infecciosos, limpie primero la zona afectada con agua y
detergente de laboratorio y seguidamente con hipoclorito sdico al 1% (v/v). Si
los frascos de solucin tampn sufren algn dao o pierden lquido, use
guantes y gafas protectoras al desecharlos para evitar lesiones personales o
lesiones a terceros.
QIAGEN no ha analizado los residuos lquidos generados por los
procedimientos QIAamp DSP DNA Blood Mini para determinar si contienen
materiales residuales infecciosos. La contaminacin del residuo lquido con
materiales residuales infecciosos es improbable, pero no se puede descartar
completamente. Por consiguiente, el residuo lquido debe considerarse como
infeccioso y manipularse y desecharse segn las normas de seguridad locales.
10
A los diversos componentes del kit QIAamp DSP DNA Blood Mini les
conciernen las siguientes declaraciones de riesgo y seguridad:
Solucin tampn de lisis (AL) y solucin tampn de lavado 1 (AW1)
Contienen clorhidrato de guanidina: nocivo, causa irritacin. Declaraciones de

riesgo y seguridad: * R22-36/38, S13-26-36-46.
Proteasa QIAGEN (QP)
Contiene subtilisina: sensibilizante, causa irritacin. Declaraciones de riesgo y

seguridad: * R37/38-41-42, S22-24-26-36/37/39-46.
Informacin para emergencias disponible las 24 horas
Informacin mdica para emergencias disponible en ingls, francs y alemn
las 24 horas del da en:
Centro de informacin de toxicologa, Maguncia, Alemania.
Tfno: +49-6131-19240
* R22: nocivo por ingestin; R36/38: causa irritacin en los ojos y la piel; R37/38: causa
irritacin en el sistema respiratorio y la piel; R41: riesgo de lesiones oculares graves; R42:
posibilidad de sensibilizacin por inhalacin; S13: mantngase lejos de alimentos, bebidas y
piensos; S22: no respirar el polvo; S24: evtese el contacto con la piel; S26: en caso de
contacto con los ojos, lvense inmediata y abundantemente con agua y acdase a un
mdico; S36: sese indumentaria protectora adecuada; S36/37/39: sese indumentaria
protectora adecuada; S46: en caso de ingestin, acuda inmediatamente al mdico y muestre
la etiqueta o el envase.
11
Almacenamiento y manipulacin de los reactivos

Las columnas de centrifugacin QIAamp Mini deben conservarse a entre 2 C y
8 C a su recepcin y pueden utilizarse hasta la fecha de caducidad indicada
en la caja del kit.
Todas las soluciones tampn se pueden conservar a temperatura ambiente
(1525 C) hasta la fecha de caducidad indicada en la caja del kit.
La proteasa QIAGEN (QP) liofilizada se puede conservar a temperatura
ambiente (1525 C) hasta la fecha de caducidad del kit sin que su
rendimiento se vea afectado. La proteasa QIAGEN reconstituida permanece
estable hasta un ao si se conserva a entre 2 C y 8 C, pero solo hasta la
fecha de caducidad del kit.
La solucin tampn de lavado 1 (AW1) reconstituida y la solucin tampn de
lavado 2 (AW2) reconstituida permanecen estables hasta 1 ao a temperatura
ambiente (1525C), pero solo hasta la fecha de caducidad del kit.
Manipulacin y almacenamiento de las muestras
Rendimiento normalizado
al de la muestra fresca
(%)
Los crioprecipitados que se forman durante la descongelacin de muestras

congeladas obstruirn la membrana de la columna de centrifugacin QIAamp
Mini. Si los crioprecipitados son visibles, evite aspirarlos durante la aspiracin
de la muestra. Los efectos de congelar y descongelar muestras de sangre en la
purificacin de ADN con el kit QIAamp DSP DNA Blood Mini han sido
determinados (vase la Figura 2).
Fresca
Nmero de ciclos de congelacin/descongelacin
Figura 2. Efecto de la congelacin y descongelacin de muestras de sangre. Se
congel y descongel hasta 3 veces sangre tratada con EDTA y seguidamente se someti a
una purificacin del ADN con el kit QIAamp DSP DNA Blood Mini. Los resultados de
rendimiento de ADN obtenidos estn normalizados respecto al rendimiento de una muestra
fresca (100%). Cada barra en la grfica representa los resultados de 32 rplicas (media
desviacin estndar).
12
La cantidad de ADN purificado en los procedimientos QIAamp DSP DNA Blood

Mini depende del contenido de leucocitos de cada muestra de sangre.
Mediante el procedimiento de centrifugacin o vaco, el ADN genmico se
purifica a partir de 200 l de muestras de sangre de donantes sanos. Para
recoger las muestras de sangre que se van a analizar con los procedimientos
QIAamp DSP DNA Blood Mini se pueden utilizar varios tipos distintos de tubos
primarios y anticoagulantes (Tabla 1).
Tabla 1. Rendimientos relativos medios de ADN en muestras de sangre
recogidas utilizando diversos tipos de tubos primarios y anticoagulantes
Volumen Rendimiento
nominal
medio*
Tubo primario
Fabricante
N de
referencia
BD Vacutainer
9NC
BD
366007
9 ml
6,4 g
BD Vacutainer K3E BD
36847
10 ml
6,6 g
BD Vacutainer K2E BD
367864
6 ml
6,4 g
S-Monovette
EDTA
Sarstedt
02.1066.001
9 ml
6,5 g
S-Monovette
CPDA1
Sarstedt
01.1610.001
8,5 ml
6,3 g
Vacuette K3E
Greiner BioOne
455036
9 ml
6,5 g
Vacuette 9NC
Greiner BioOne
454382
2 ml
6,3 g
El ADN genmico fue purificado a partir de 200 l de muestras de sangre de donantes sanos
(de 4,0 x 106 clulas por ml a 9,0 x 106 clulas por ml).
* Para cada tubo primario, se determina el rendimiento medio a partir de 11 muestras
triplicadas.
Eliminacin de los contaminantes residuales

Mientras que el ADN genmico se mantiene unido a la membrana de la
columna de centrifugacin QIAamp Mini, los contaminantes se eliminan de
manera eficaz primero con la solucin tampn de lavado 1 (AW1) y
seguidamente con la solucin tampn de lavado 2 (AW2).
13
Elucin de ADN genmico puro

El ADN genmico se eluye de la membrana de la columna de centrifugacin
QIAamp Mini con 50200 l de solucin tampn de elucin (AE). El ADN
eluido est listo para su uso en distintos ensayos subsiguientes, incluidos
diversos tipos de ensayos de diagnstico in vitro.
14
Notas importantes
Cuestiones importantes antes de comenzar un protocolo
Al recibir el kit, compruebe que los componentes no han sufrido ningn

dao. Si los blsteres o los frascos de solucin tampn estn daados,
contacte con el Servicio Tcnico de QIAGEN o con el distribuidor local. Si
se derrama algn lquido, consulte la Informacin sobre seguridad
(pgina 10). No use los componentes daados de un kit, ya que su
rendimiento podra verse afectado.
Cambie siempre las puntas de pipeta entre las transferencias de lquidos.

Para evitar la contaminacin cruzada, recomendamos usar puntas de
pipeta resistentes a aerosoles.
Todos los pasos de centrifugacin se realizan a temperatura ambiente

(1525 C).
Use siempre guantes desechables y compruebe regularmente que no se

hayan contaminado con el material de las muestras. Deseche los guantes
si se contaminan.
Para minimizar la contaminacin cruzada, no abra ms de un tubo a la

vez.
No use componentes de kits distintos del que est utilizando a menos que
tengan el mismo nmero de lote.
Procure evitar la contaminacin microbiana de los reactivos del kit.
Para minimizar el riesgo de infeccin con material potencialmente

infeccioso, se recomienda trabajar bajo un flujo de aire laminar hasta que
las muestras estn lisadas.
Este kit solo debe ser utilizado por personal con experiencia en los
mtodos de laboratorio de diagnstico in vitro.
Preparacin de reactivos y soluciones tampn

Preparacin de la proteasa QIAGEN
Aada 1,2 ml de disolvente de proteasa (PS) al vial de proteasa QIAGEN
(QP) liofilizada y mezcle cuidadosamente. Para evitar que se forme
espuma, mezcle invirtiendo el vial repetidas veces. Compruebe que la
proteasa QIAGEN (QP) se ha disuelto por completo.
No aada la proteasa QIAGEN (QP) directamente a la solucin tampn de
lisis (AL).
15
Preparacin de la solucin tampn de lavado 1

Usando una probeta graduada, aada 25 ml de etanol (96100%) al
frasco que contiene 19 ml de concentrado de solucin tampn de lavado 1
(AW1). Conserve la solucin tampn de lavado 1 (AW1) reconstituida a
temperatura ambiente (1525 C).
Mezcle siempre la solucin tampn de lavado 1 (AW1) reconstituida
invirtiendo el frasco varias veces antes de comenzar el procedimiento.
Preparacin de la solucin tampn de lavado 2

Usando una probeta graduada, aada 30 ml de etanol (96100%) al
frasco que contiene 13 ml de concentrado de solucin tampn de lavado 2
(AW2). Conserve la solucin tampn de lavado 2 (AW2) reconstituida a
temperatura ambiente (1525 C).
Mezcle siempre la solucin tampn de lavado 2 (AW2) reconstituida
invirtiendo el frasco varias veces antes de comenzar el procedimiento.
Preparacin de la solucin tampn de elucin

El kit incluye un frasco de solucin tampn de elucin (AE). Para evitar la
contaminacin de la solucin tampn de elucin (AE), recomendamos
encarecidamente utilizar puntas de pipeta resistentes a aerosoles para su
pipeteo y volver a cerrar el frasco inmediatamente despus.
La solucin tampn de elucin (AE) contiene azida sdica como
conservante, la cual presenta absorbencia a 260 nm. Por lo tanto, al
cuantificar el ADN en el eluido midiendo la absorbencia a 260 nm, al
determinar la pureza del ADN en el eluido midiendo la absorbencia a
260 y 280 nm o al controlar la absorbencia en el rango comprendido
entre 220 nm y 350 nm, asegrese de que la muestra para ensayo en
blanco contiene la misma concentracin de azida sdica que el eluido. Por
ejemplo, si prepara el eluido para la medicin de absorbencia diluyendo
50 l del mismo con 100 l de agua, para preparar la muestra para
ensayo en blanco diluya 50 l de solucin tampn de elucin (AE) con
100 l de agua. Utilice agua destilada fresca para las diluciones.
Manipulacin de las columnas de centrifugacin QIAamp

Mini
Dada la sensibilidad de las tecnologas de amplificacin de los cidos
nucleicos, cuando se manipulen las columnas de centrifugacin QIAamp Mini
deben adoptarse las siguientes medidas de precaucin con el fin de evitar una
posible contaminacin cruzada entre las preparaciones de muestras:
16
Dispense la muestra o la solucin cuidadosamente en la columna de

centrifugacin QIAamp Mini. Pipetee la muestra en la columna de
centrifugacin QIAamp Mini procurando no mojar el borde de la columna.
Cambie siempre las puntas de pipeta entre las transferencias de lquidos.

Recomendamos el uso de puntas de pipeta resistentes a aerosoles.
Evite tocar la membrana de la columna de centrifugacin QIAamp Mini

con la punta de la pipeta.
Tras haber realizado todos los pasos de agitacin vorticial con pulsos,
centrifugue brevemente los tubos para microcentrifugadora con el fin de
eliminar las gotas del interior de las tapas.
Abra cada vez solamente una columna de centrifugacin QIAamp Mini y

procure no generar aerosoles.
Lleve guantes durante todo el procedimiento. Si los guantes entran en

contacto con la muestra, cmbieselos inmediatamente.
Elucin de ADN genmico

El volumen de ADN eluido procedente de una columna de centrifugacin
QIAamp Mini puede ser hasta 20 l menor que el volumen de solucin tampn
de elucin (AE) dispensado en la columna. El volumen del eluido recuperado
depende de la naturaleza de la muestra. La solucin tampn de elucin (AE)
debe equilibrarse a temperatura ambiente (1525 C) antes de dispensarla en
la columna. El ADN eluido se recoge en tubos de elucin (ET). Para periodos
de hasta 4 semanas, recomendamos conservar el ADN a entre 2 C y 8 C.
Para el almacenamiento a largo plazo, recomendamos conservarlo a 20 C.
Rendimiento y calidad del ADN genmico

El rendimiento y la calidad del ADN genmico aislado son adecuados para
todos los tipos de procedimientos de deteccin subsiguientes utilizados en el
diagnstico molecular. Los ensayos de diagnstico debern llevarse a cabo
conforme a las instrucciones de los fabricantes.
17
Montaje del sistema de vaco QIAvac 24 Plus

Compruebe que ha montado correctamente la columna de centrifugacin
QIAamp Mini, el conector VacConnector (VC) y la vlvula VacValve (vase la
Figura 3).
Figura 3. Ensamblado de los componentes del kit QIAamp DSP DNA Blood Mini para
el procesamiento al vaco de las muestras.
1. VacValve (suministrada con el sistema de vaco)
2. VacConnector (VC)
3. Columna de centrifugacin QIAamp Mini
Si se emplea el procedimiento de vaco con el sistema de vaco QIAvac 24 Plus,

recomendamos etiquetar los tubos de lisis (LT), los tubos de elucin (ET) y las
columnas de centrifugacin QIAamp Mini segn el esquema de la Figura 4
(vase la pgina siguiente) para no confundir las muestras. Este esquema se
puede fotocopiar y etiquetar con los nombres de las muestras. Si se utiliza un
sistema de vaco distinto o el procedimiento de centrifugacin, recomendamos
utilizar un esquema similar.
18
Fecha: ___________________________________________________________________________
Operador: _______________________________________________________________________
24
23
22
21
20
19
18
17
16
14
13
15
02
01
03
04
05
06
07
08
09
10
11
12
ID del ciclo: ______________________________________________________________________
Figura 4. Esquema de etiquetado para los tubos de lisis (LT), los tubos de elucin (ET)
y las columnas de centrifugacin QIAamp Mini para su uso en el sistema de vaco
QIAvac 24 Plus.
19
Protocolo: Aislamiento y purificacin de ADN genmico

procedente de muestras de sangre con un sistema de vaco
Para el aislamiento y purificacin de ADN genmico procedente de muestras
de 200 l de sangre completa tratada con EDTA o citrato con un sistema de
vaco como el QIAvac 24 Plus.
Cuestiones importantes antes de comenzar
El siguiente procedimiento proporciona instrucciones para procesar una

sola muestra de sangre. No obstante, con el sistema de vaco QIAvac 24
Plus se pueden procesar hasta 24 muestras simultneamente.
Antes de comenzar
Equilibre las muestras de sangre a temperatura ambiente (1525 C) y

compruebe que estn bien mezcladas.
Si se ha formado un precipitado en la solucin tampn de lisis (AL),

disulvalo incubando a 56 C.
Asegrese de que la solucin tampn de lavado 1 (AW1), la solucin

tampn de lavado 2 (AW2) y la proteasa QIAGEN (QP) se han preparado
segn las instrucciones del apartado Preparacin de reactivos y
soluciones tampn en las pginas 15 y 16.
Equilibre la solucin tampn de elucin (AE) a temperatura ambiente

(1525 C) para su uso en el paso 14.
Ajuste el bloque de calentamiento a 56 C para su uso en el paso 4.
Para minimizar la contaminacin cruzada, inserte un VacConnector (VC)

en cada adaptador Luer del sistema de vaco.
Los procedimientos de control de calidad de QIAGEN se basan en las

pruebas funcionales realizadas en el lanzamiento del kit para cada lote
concreto del kit. Por ello, no mezcle reactivos de lotes del kit distintos y no
combine reactivos individuales de diferentes lotes de reactivos.
Compruebe que el frasco de residuos del sistema de vaco est vaco y que
todas las conexiones se han realizado correctamente.
Para informacin detallada sobre el funcionamiento del sistema de vaco,

especialmente acerca de su mantenimiento, consulte el manual
suministrado con el equipo.
20
Manual del kit QIAamp DSP DNA Blood Mini

06/2012
Procedimiento
1. Pipetee 20 l de proteasa QIAGEN (QP) en un tubo de lisis (LT).
Compruebe la fecha de caducidad de la proteasa reconstituida antes de
utilizarla.
2. Aada 200 l de muestra de sangre al tubo de lisis (LT).
3. Aada 200 l de solucin tampn de lisis (AL) al tubo de lisis (LT),
cierre la tapa y mezcle en la agitadora vorticial con pulsos durante
15 segundos.
Para que la lisis sea eficaz, es esencial que la muestra y la solucin tampn
de lisis se mezclen perfectamente hasta obtener una solucin homognea.
Dado que la solucin tampn de lisis (AL) es muy viscosa, asegrese de
aadir el volumen correcto de la misma, ya sea pipetendola
cuidadosamente o utilizando una pipeta adecuada.
lisis (AL).
4. Incube a 56 C (1C) durante 10 minutos (1 minuto).
5. Centrifugue el tubo de lisis (LT) durante 5 segundos a la mxima
velocidad para eliminar las gotas del interior de la tapa.
6. Aada 200 l de etanol (96100%) al tubo de lisis (LT), cierre la tapa
y mzclelo bien en la agitadora vorticial con pulsos durante
15 segundos.
8. Inserte la columna de centrifugacin QIAamp Mini en el
VacConnector (VC) del sistema de vaco. Asegrese de que la
vlvula de vaco principal (entre el sistema de vaco y el colector de
vaco) y la vlvula con tapn de rosca (en el colector de vaco) estn
cerradas. Encienda la bomba de vaco.
Deseche el tubo de lavado (WT) (2 ml) en el que est colocada la columna
de centrifugacin QIAamp Mini en el blster.
El vaco solamente se aplica al sistema de conexin (si se utiliza) y no al
colector de vaco.
9. Dispense cuidadosamente todo el lisado obtenido en el paso 7 en la
columna de centrifugacin QIAamp Mini procurando no mojar el
borde. Evite tocar la membrana de la columna de centrifugacin
QIAamp Mini con la punta de la pipeta.
21
Si se estn procesando varias muestras, no abra ms de un tubo de lisis

(LT) cada vez.
10. Abra la vlvula principal de vaco. Una vez que el lisado haya
atravesado la columna de centrifugacin QIAamp Mini, cierre la
vlvula principal de vaco y abra la vlvula con tapn de rosca en el
colector de vaco para ventilar el colector. Cierre la vlvula con
tapn de rosca una vez que el vaco haya desaparecido del colector.
Tras cerrar la vlvula principal de vaco, el vaco solamente se aplica al
sistema de conexin (si se utiliza) y no al colector de vaco.
Utilice la vlvula con tapn de rosca del colector de vaco para una rpida
eliminacin del vaco.
Si se procesan varias columnas de centrifugacin QIAamp Mini al mismo
tiempo, se recomienda cerrar la vlvula VacValve de cada columna
despus de que el lisado las haya atravesado con el fin de acortar la
duracin de este paso de vaco.
Si al cabo de 10 minutos el lisado an no ha terminado de atravesar la
membrana, coloque la columna de centrifugacin QIAamp Mini en un
tubo de lavado (WT) limpio, cierre la tapa y centrifugue a
aproximadamente 6.000 x g (8.000 rpm) durante 3 minutos o hasta que
haya pasado todo el lisado. Coloque la columna de centrifugacin
QIAamp Mini en otro tubo de lavado (WT) limpio y prosiga con el paso 10
del protocolo en la pgina 25.
Si el lisado sigue sin pasar por la membrana durante la centrifugacin,
deseche la muestra y repita el aislamiento y la purificacin con nuevo
material de muestra empezando por el paso 1 de la pgina 21.
11. Dispense 750 l de solucin tampn de lavado 1 (AW1) en la
QIAamp Mini con la punta de la pipeta. Deje la tapa de la columna
abierta y abra la vlvula de vaco principal. Una vez que la solucin
tampn de lavado 1 (AW1) haya atravesado la columna de
centrifugacin QIAamp Mini, cierre la vlvula principal de vaco y
abra la vlvula con tapn de rosca para ventilar el colector. Cierre la
vlvula con tapn de rosca una vez que el vaco haya desaparecido
del colector.
12. Dispense 750 l de solucin tampn de lavado 2 (AW2) en la
22
Manual del kit QIAamp DSP DNA Blood Mini

06/2012
QIAamp Mini con la punta de la pipeta. Deje la tapa de la columna

abierta y abra la vlvula de vaco principal. Una vez que la solucin
tampn de lavado 2 (AW2) haya atravesado la columna de
centrifugacin QIAamp Mini, cierre la vlvula principal de vaco y
abra la vlvula con tapn de rosca para ventilar el colector. Cierre la
vlvula con tapn de rosca una vez que el vaco haya desaparecido
del colector.
13. Cierre la tapa de la columna de centrifugacin QIAamp Mini, retrela
del sistema de vaco y deseche el VacConnector (VC). Ponga la
columna de centrifugacin QIAamp Mini en un tubo de lavado (WT)
limpio y centrifguela a la mxima velocidad (aproximadamente
20.000 x g o 14.000 rpm) durante 3 minutos para secar
completamente la membrana.
La omisin de la centrifugacin en seco puede producir una inhibicin del
ensayo subsiguiente.
14. Ponga la columna de centrifugacin QIAamp Mini en un tubo de
elucin (ET) limpio y deseche el tubo de lavado (WT) contenedor del
filtrado. Abra cuidadosamente la tapa de la columna de
centrifugacin QIAamp Mini y dispense de 50 a 200 l de solucin
tampn de elucin (AE) en el centro de la membrana. Cierre la tapa
e incube a temperatura ambiente (1525 C) durante 1 minuto.
Centrifugue a 6.000 x g (8.000 rpm) durante un minuto para eluir el
ADN.
Tras realizar este protocolo, siga el procedimiento de mantenimiento del
sistema de vaco (para ms detalles, vase el manual suministrado con el
sistema de vaco).
23
Protocolo: Aislamiento y purificacin de ADN genmico

procedente de muestras de sangre con una
microcentrifugadora
Para el aislamiento y purificacin del ADN genmico de muestras de 200 l de
sangre completa tratada con EDTA o citrato con una microcentrifugadora.
Cuestiones importantes antes de comenzar
El siguiente procedimiento proporciona instrucciones para procesar una

sola muestra de sangre. No obstante, es posible procesar varias muestras
al mismo tiempo, el nmero depender de la capacidad de la
microcentrifugadora utilizada.
Antes de comenzar
Equilibre las muestras de sangre a temperatura ambiente (1525 C) y

compruebe que estn bien mezcladas.
Si se ha formado un precipitado en la solucin tampn de lisis (AL),

disulvalo incubando a 56 C.
Asegrese de que la solucin tampn de lavado 1 (AW1), la solucin

tampn de lavado 2 (AW2) y la proteasa QIAGEN (QP) se han preparado
segn las instrucciones del apartado Preparacin de reactivos y
soluciones tampn en las pginas 15 y 16.
Equilibre la solucin tampn de elucin (AE) a temperatura ambiente

(1525 C) para su uso en el paso 15.
Ajuste el bloque de calentamiento a 56 C para su uso en el paso 4.
Los procedimientos de control de calidad de QIAGEN se basan en las

pruebas funcionales realizadas en el lanzamiento del kit para cada lote
concreto del kit. Por ello, no mezcle reactivos de lotes del kit distintos y no
combine reactivos individuales de diferentes lotes de reactivos.
Procedimiento
1. Pipetee 20 l de proteasa QIAGEN (QP) en un tubo de lisis (LT).
Compruebe la fecha de caducidad de la proteasa reconstituida antes de
utilizarla.
2. Aada 200 l de muestra de sangre al tubo de lisis (LT).
3. Aada 200 l de solucin tampn de lisis (AL) al tubo de lisis (LT),
cierre la tapa y mezcle en la agitadora vorticial con pulsos durante
15 segundos.
24
Para que la lisis sea eficaz, es esencial que la muestra y la solucin tampn
de lisis (AL) se mezclen perfectamente hasta obtener una solucin
homognea.
Dado que la solucin tampn de lisis (AL) es muy viscosa, asegrese de
aadir el volumen correcto de la misma, ya sea pipetendola
cuidadosamente o utilizando una pipeta adecuada.
lisis (AL).
4. Incube a 56 C (1C) durante 10 minutos (1 minuto).
6. Aada 200 l de etanol (96100%) al tubo de lisis (LT), cierre la tapa
y mzclelo bien en la agitadora vorticial con pulsos durante
15 segundos.
8. Dispense cuidadosamente todo el lisado obtenido en el paso 7 en la
QIAamp Mini con la punta de la pipeta.
Si se estn procesando varias muestras, no abra ms de un tubo de lisis
(LT) cada vez.
9. Cierre la tapa de la columna de centrifugacin QIAamp Mini y
centrifugue a aproximadamente 6.000 x g durante 1 minuto. Ponga
la columna de centrifugacin QIAamp Mini en un tubo de lavado
(WT) limpio y deseche el tubo contenedor del filtrado.
Si despus de una centrifugacin a aproximadamente 6.000 x g (8.000
rpm) el lisado an no ha terminado de atravesar la membrana, vuelva a
centrifugar a la mxima velocidad (hasta 20.800 x g) durante 1 minuto.
Si el lisado sigue sin pasar por la membrana durante la centrifugacin,
deseche la muestra y repita el aislamiento y la purificacin con nuevo
material de muestra empezando por el paso 1 de la pgina 24.
10. Abra cuidadosamente la columna de centrifugacin QIAamp Mini y
aada 500 l de solucin tampn de lavado 1 (AW1) procurando no
mojar el borde. Evite tocar la membrana de la columna de
centrifugacin QIAamp Mini con la punta de la pipeta.
centrifugue a aproximadamente 6.000 x g durante 1 minuto. Ponga
25
la columna de centrifugacin QIAamp Mini en un tubo de lavado

(WT) limpio y deseche el tubo contenedor del filtrado.
12. Abra cuidadosamente la columna de centrifugacin QIAamp Mini y
aada 500 l de solucin tampn de lavado 2 (AW2) procurando no
mojar el borde. Evite tocar la membrana de la columna de
centrifugacin QIAamp Mini con la punta de la pipeta.
centrifugue a la mxima velocidad (aproximadamente 20.000 x g o
14.000 rpm) durante 1 minuto. Ponga la columna de centrifugacin
QIAamp Mini en un tubo de lavado (WT) limpio y deseche el tubo
contenedor del filtrado.
14. Centrifugue a la mxima velocidad (aproximadamente 20.000 x g o
14.000 rpm) durante 3 minutos para secar completamente la
membrana.
La omisin de la centrifugacin en seco puede producir una inhibicin del
ensayo subsiguiente.
15. Ponga la columna de centrifugacin QIAamp Mini en un tubo de
elucin (ET) limpio y deseche el tubo de lavado (WT) contenedor del
filtrado. Abra cuidadosamente la tapa de la columna de
centrifugacin QIAamp Mini y dispense de 50 a 200 l de solucin
tampn de elucin (AE) en el centro de la membrana. Cierre la tapa
e incube a temperatura ambiente (1525 C) durante 1 minuto.
Centrifugue a aproximadamente 6.000 x g (8.000 rpm) durante un
minuto para eluir el ADN.
26
Control de calidad
Conforme al sistema de gestin de la calidad con certificacin ISO de
QIAGEN, cada lote del kit QIAamp DSP DNA Blood Mini se somete a pruebas
frente a una serie de especificaciones predeterminadas con el fin de garantizar
una calidad constante del producto.
Limitaciones
El rendimiento del sistema se ha comprobado utilizando sangre completa para
el aislamiento de ADN genmico.
Es responsabilidad del usuario validar el rendimiento del sistema para
cualquier procedimiento utilizado en su laboratorio que no haya sido avalado
por los estudios de rendimiento de QIAGEN.
Para minimizar el riesgo de un efecto negativo sobre los resultados
diagnsticos, deben utilizarse controles adecuados para las aplicaciones
subsiguientes. Para validaciones adicionales, se recomiendan las directrices de
la International Conference on Harmonization of Technical Requirements (ICH)
detalladas en ICH Q2(R1) Validation Of Analytical Procedures: Text And
Methodology.
Todo resultado diagnstico que se genere debe interpretarse en combinacin
con otros datos clnicos o de laboratorio.
Caractersticas del rendimiento

Rendimiento del ADN purificado
Se ha determinado el rango lineal del rendimiento de ADN mediante el
procedimiento de vaco QIAamp DSP DNA Blood Mini a partir de sangre de
donantes sanos con recuentos leucocitarios de 3,8 x 106 1,34 x 107 clulas/ml
(vase la Figura 5, pgina 28).
27
Rendimiento (g/muestra)
Recuento leucocitario (x 106 clulas/ml)

Figura 5. Rango lineal del rendimiento de ADN mediante el procedimiento de vaco
QIAamp DSP DNA Blood Mini con 200 l de volumen de elucin. Se determinaron los
recuentos leucocitarios de los donantes sanos, que se hallaban en el rango
3,8 x 106 1,34 x 107 clulas/ml. Se purific el ADN a partir de las muestras de sangre
mediante el procedimiento de vaco QIAamp DSP DNA Blood Mini con un volumen de elucin
de 200 l. Se procesaron 87 muestras triplicadas.
Rendimiento en ensayos subsiguientes

El ADN genmico eluido est listo para su uso en distintos ensayos
subsiguientes, incluidos varios tipos de ensayos de diagnstico in vitro (Tablas
26). Se han determinado los efectos del volumen de elucin y del volumen de
eluido utilizado en la PCR sobre el rendimiento de la PCR (vase la Tabla 7).
28
Tabla 2. Tipificacin del HLA con Dynal AllSet+ SSP Assays HLA-A
Low Resolution, HLA-B Low Resolution, DR Low Resolution y DQ
Low Resolution
Locus HLA-A
Locus HLA-B
Locus HLA-DR
Locus HLA-DQ
Genotipo N
Genotipo
Genotipo
A2/A3
B51, B51/
B13 o
B51/B27
DR1/DR3
DQ2
A3/A1
B13/B35
DR3 o
DR3/DR13
DQ2/DQ3
A3/A25
B8/B27
DR3/DR7
DQ6
A2/A24
B7/B13 o
B7/B15
DR7/DR15
DQ2/DQ5
A1/A2
B7/B18
DR4/DR15
DQ2/DQ5
A30/A68
B7/B44
DR4/DR7
DQ3
A2/A32
Otro
DR4
DQ3/DQ6
Otro
DR15
Otro
DR1/DR7
Otro
Genotipo
Se recogi sangre completa de donantes individuales y se purific ADN

genmico a partir de 200 l de sangre completa con el kit QIAamp DSP DNA
Blood Mini. Con Dynal AllSet+ SSP Assays (Dynal Biotech), se identificaron
alelos en los loci indicados en el nmero determinado de individuos. N:
nmero de individuos.
29
Tabla 3. Genotipificacin del factor V Leiden (FV) con el kit LightCycler

Factor V Leiden Mutation Detection
Genotipo
Nmero
Natural
17
FV G16191 A heterocigtico
13
FV G16191 A homocigtico
Se recogi sangre completa de 30 donantes individuales y se purific ADN

Blood Mini. El estatus allico en el locus FV G1691 A se determin con el kit
LightCycler Factor V Leiden Mutation Detection (Roche Group).
Tabla 4. Genotipificacin del factor V Leiden (FV) mediante PCR
convencional y anlisis Pyrosequencing con el kit PSQ-96 SNP-Reagent
en el instrumento Pyrosequencing PSQ 96MA
Genotipo
Nmero
Natural
17
FV G16191 A heterocigtico
13
FV G16191 A homocigtico

Blood Mini. El estatus allico en el locus FV G1691 A se determin mediante
PCR convencional y anlisis Pyrosequencing con el kit PSQ-96 SNP-Reagent en
el instrumento Pyrosequencing PSQ 96MA (Biotage).
30
Tabla 5. Genotipificacin de protrombina (PT) mediante PCR

convencional y anlisis Pyrosequencing con el kit PSQ-96 SNP-Reagent
en el instrumento Pyrosequencing PSQ 96MA
Genotipo
Nmero
Natural
30
PT G20210A heterocigtico
PT G20210A homocigtico

Blood Mini. El estatus allico en el locus PT G20210 A se determin mediante
PCR convencional y anlisis Pyrosequencing con el kit PSQ-96 SNP Reagent en
el instrumento Pyrosequencing PSQ 96MA (Biotage).
Tabla 6. Anlisis de los polimorfismos de la ApoE T112C y C158T
mediante PCR convencional, con secuenciacin del amplicn mediante
el kit BigDye v1.1 Ready Reaction Cycle Sequencing y separacin en el
instrumento ABI PRISM 3100 Genetic Analyzer
Genotipo
Nmero
ApoE*3/*3
ApoE*3/*4
Otro

Blood Mini. El anlisis de los polimorfismos de la ApoE T112C y C158T se
realiz mediante PCR convencional, con secuenciacin del amplicn mediante
el kit BigDye v1.1 Ready Reaction Cycle Sequencing y separacin en el
instrumento ABI PRISM 3100 Genetic Analyzer (Life Technologies Corporation).
31
Tabla 7. Efectos del volumen de elucin y el volumen de eluido utilizado

en la PCR sobre el rendimiento de la PCR
Volumen de eluido por 50 l de PCR*
Volumen de elucin
2 l
5 l
10 l
50 l
100%
100%
100%
100 l
100%
100%
97%
200 l
100%
100%
100%
* Los valores indican las tasas de resultados positivos de la PCR y representan la media de
48 muestras.
Estabilidad del eluido

En las pruebas de almacenamiento con eluidos generados con el kit QIAamp
DNA Blood Mini, un kit de laboratorio de uso genrico que utiliza la misma
tecnologa, se puso de manifiesto que el ADN eluido con columnas de
centrifugacin QIAamp Mini en la solucin tampn AE y conservado a 5 C o a
20C era estable durante 8 aos (Figura 6). No obstante, los estudios a largo
plazo sobre la estabilidad de los eluidos obtenidos con el kit QIAamp DSP DNA
Blood Mini an no han concluido.
M
28C
-20C
Figura 6. Estabilidad a largo plazo de ADN aislado y purificado con columnas de

centrifugacin QIAamp Mini. El ADN se purific con el kit QIAamp DNA Blood Mini, se
eluy en 200 l de solucin tampn AE y se conserv a una temperatura entre 2 C y 8 C o
a 20 C durante 8 aos. Las muestras de ADN se analizaron en un gel de agarosa teido
con bromuro de etidio. M: marcador.
32
Smbolos
<N>
Contiene suficientes reactivos para <N> preparaciones de

muestras
Fecha de caducidad
Dispositivo mdico de diagnstico in vitro
A su recepcin
Abrir en el momento de la entrega; conservar las columnas de
centrifugacin QIAamp Mini a 28 C
Nmero de referencia
Nmero de lote
Nmero de material
Componentes
Contiene
Nmero
Volumen
Limitacin de temperatura
Fabricante
Anotar la fecha actual tras aadir etanol al frasco

Aadir
33
Liofilizado
Reconstituir en
Etanol
Clorhidrato de guanidina
Subtilisina
Dirige a
Consultar instrucciones de uso
Nota importante
Bibliografa
QIAGEN mantiene online una extensa base de datos actualizada de
publicaciones cientficas en las que se utilizan los productos de QIAGEN. Las
exhaustivas opciones de bsqueda permiten al usuario encontrar los artculos
que necesita, ya sea mediante una bsqueda sencilla con una palabra clave o
especificando la aplicacin, el rea de investigacin, el ttulo, etc.
Para obtener una lista bibliogrfica completa, visite la base de datos
bibliogrfica online de QIAGEN en www.qiagen.com/RefDB/search.asp o
pngase en contacto con el Servicio Tcnico de QIAGEN o con su distribuidor
local.
34
Informacin de contacto
En QIAGEN nos enorgullecemos de la calidad y disponibilidad de nuestra
asistencia tcnica. En nuestros departamentos de Servicio Tcnico trabajan
cientficos expertos con amplia experiencia en los aspectos prcticos y tericos
de las tecnologas de preparacin de muestras y ensayos de biologa molecular
y en el uso de los productos de QIAGEN. Si tiene alguna duda o experimenta
alguna dificultad con el kit QIAamp DSP DNA Blood Mini o con productos de
QIAGEN en general, no dude en ponerse en contacto con nosotros.
Los clientes de QIAGEN son una valiosa fuente de informacin sobre los usos
avanzados o especializados de nuestros productos. Esta informacin es de
utilidad para otros cientficos adems de para los investigadores de QIAGEN.
Por este motivo, le animamos a ponerse en contacto con nosotros si tiene
cualquier sugerencia sobre el rendimiento de nuestros productos o sobre
nuevas aplicaciones y tcnicas.
Para recibir asistencia tcnica y solicitar ms informacin, consulte nuestro
Centro de Asistencia Tcnica en www.qiagen.com/Support o pngase en
contacto telefnico con uno de los departamentos de Servicio Tcnico de
QIAGEN o distribuidores locales (vase la contraportada o consulte
www.qiagen.com).
QIAGEN GmbH, QIAGEN Strasse 1, D-40724 Hilden, Alemania
35
Informacin para pedidos

Producto
ndice
N de
referencia
QIAamp DSP DNA

Blood Mini Kit (50)
Para 50 preparaciones de ADN:

Columnas de centrifugacin QIAamp
Mini, conectores VacConnector,
proteasa QIAGEN, reactivos,
soluciones tampn y tubos de
recogida
61104
QIAvac 24 Plus
vacuum manifold*
Colector de vaco para el

procesamiento de 1 a 24 columnas
de centrifugacin: colector de vaco
QIAvac 24 Plus, conexiones Luer,
acoplamientos rpidos
19413
Vacuum Pump*
Bomba de vaco universal
84020
Accesorios
Si desea obtener informacin actualizada sobre la licencia y las exenciones de

responsabilidad especficas del producto, consulte el manual o la gua de
usuario del kit de QIAGEN correspondiente. Los manuales y las guas de
usuario de los kits QIAGEN estn disponibles en www.qiagen.com o pueden
solicitarse al Servicio Tcnico de QIAGEN o a su distribuidor local.
* Para el uso con protocolos de vaco.
36
Marcas comerciales: QIAGEN, QIAamp, QIAcube, artus, Pyrosequencing (QIAGEN Group); ABI PRISM, BigDye (Life Technologies
Corporation); BD, Vacutainer (Becton, Dickinson and Company); Bio-One, Vacuette (Greiner Bio-One); Dynal, AllSet+ (Dynal Biotech);
Eppendorf (Eppendorf AG); LightCycler (Roche Group); Monovette, Sarstedt (Sarstedt AG & Co.). Incluso en aquellos casos en los que no se
indica de manera explcita, no debe asumirse que las marcas comerciales, nombres registrados, etc., no estn protegidos por la ley.
Acuerdo de Licencia Limitada para el kit QIAamp DSP DNA Blood Mini
La utilizacin de este producto implica por parte de cualquier comprador o usuario del producto la aceptacin de los siguientes trminos:
1.
El producto puede utilizarse nicamente conforme a los protocolos suministrados con el producto y a este manual y para su uso exclusivo con
los componentes incluidos en el kit. QIAGEN no ofrece licencia alguna bajo ninguna de sus propiedades intelectuales para incorporar o utilizar
los componentes contenidos en este kit con componentes no incluidos en el mismo, excepto segn se describe en los protocolos
proporcionados con el producto, en este manual y en los protocolos adicionales disponibles en www.qiagen.com. Algunos de estos protocolos
adicionales han sido suministrados por usuarios de QIAGEN para usuarios de QIAGEN. Estos protocolos no han sido rigurosamente
comprobados u optimizados por QIAGEN. QIAGEN ni los garantiza ni ofrece garantas de que no infrinjan los derechos de terceros.
2.
Aparte de las licencias expresamente especificadas, QIAGEN no garantiza que este kit ni su(s) uso(s) no infrinja(n) los derechos de terceros.
3.
Este kit y sus componentes tienen licencia para un solo uso y no pueden ser reutilizados, reacondicionados ni revendidos.
4.
QIAGEN renuncia especficamente a cualquier otra licencia, explcita o implcita, distinta de las licencias expresamente especificadas.
5.
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cumplir este Acuerdo de licencia limitada o cualquier otro derecho de propiedad intelectual en relacin con este kit y/o sus componentes.
Para obtener los trminos actualizados de la licencia, visite www.qiagen.com.

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Sample & Assay Technologies

ES QIAamp DSP DNA Blood Mini Kit Handbook

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Junio 2012

Manual del kit QIAamp DSP DNA

Para uso diagnstico in vitro

Sample & Assay Technologies

QIAGEN: Tecnologas de preparacin de muestras y

Purificacin de ADN, ARN y protenas

Ensayos de cidos nucleicos y protenas

Investigacin con microARN y ARNi

Automatizacin de tecnologas de preparacin de muestras y ensayos de

Nuestra misin es ayudarle a superar sus retos y a alcanzar un xito

Lisis de las clulas sanguneas

Unin del ADN genmico a la membrana de la columna de centrifugacin

Contenido del kit

Materiales necesarios pero no suministrados

Informacin sobre seguridad

Almacenamiento y manipulacin de los reactivos

Manipulacin y almacenamiento de las muestras

Cuestiones importantes antes de comenzar un protocolo

Preparacin de reactivos y soluciones tampn

Manipulacin de las columnas de centrifugacin QIAamp Mini

Elucin de ADN genmico

Rendimiento y calidad del ADN genmico

Montaje del sistema de vaco QIAvac 24 Plus

Caractersticas del rendimiento

Rendimiento en ensayos subsiguientes

Informacin para pedidos

Manual del kit QIAamp DSP DNA Blood Mini 06/2012

Manual del kit QIAamp DSP DNA Blood Mini 06/2012

Principios del procedimiento

Lisis de las clulas presentes en la muestra de sangre

Unin del ADN genmico del lisado celular a la membrana de una

Elucin del ADN genmico de la membrana

Este manual contiene protocolos para 2 procedimientos QIAamp DSP DNA

Lisis de las clulas sanguneas

Unin del ADN genmico a la membrana de la columna

Manual del kit QIAamp DSP DNA Blood Mini 06/2012

Figura 1. El instrumento QIAcube.

Manual del kit QIAamp DSP DNA Blood Mini 06/2012

Lea atentamente los protocolos (pginas 22 y 26) antes

Aada 200 l de etanol.

Procedimiento de vaco: aplique vaco.

Procedimiento de vaco: aada 750 l de AW1 y aplique vaco.

Procedimiento de centrifugacin: ponga la columna de centrifugacin

Procedimiento de vaco: aada 750 l de AW2 y aplique vaco.

Ponga la columna de centrifugacin QIAamp Mini en un tubo de

Centrifugue 3 minutos a la mxima velocidad (aproximadamente

ADN genmico o viral puro

Manual del kit QIAamp DSP DNA Blood Mini 06/2012

QIAamp QIAamp Mini Spin Columns with

Elution Tubes (tubos de elucin)

Lysis Tubes (tubos de lisis) (1,5 ml)

Wash Tubes (tubos de lavado) (2 ml)

Lysis Buffer (solucin tampn de lisis)

Wash Buffer 1 (concentrate) (solucin

Wash Buffer 2 (concentrate) (solucin

Elution Buffer (solucin tampn de

Protease Solvent (disolvente de

QIAGEN Protease (proteasa QIAGEN)

Manual del kit QIAamp DSP DNA Blood Mini 06/2012

Contiene clorhidrato de guanidina. No compatible con desinfectantes que contengan leja.

Contiene azida sdica como conservante.

Volumen de resuspensin 1,2 ml. Vase Preparacin de la proteasa QIAGEN en la pgina

Materiales necesarios pero no suministrados

Pipetas* y puntas de pipeta (para prevenir la contaminacin cruzada,