1.

ANLISIS INSTRUMENTAL.

A comienzos del siglo XX se comenzaron a utilizar fenmenos distintos de los

utilizados por las tcnicas clsicas para resolver los problemas analticos
presentes en la determinacin de iones metlicos. As, numerosas tcnicas
analticas han sido desarrolladas para el anlisis cuantitativo para la
determinacin de Mercurio y otros metales pesados en muestras reales, estas
incluyen tcnicas como la electroqumica, cromatografa, la fluorescencia
atmica, fluorescencia de rayos X y mtodos espectrofotomtricos han sido
utilizados para el anlisis y determinacin de estos iones en diferentes
muestras (Al-Kady & Abdelmonem, 2013; Zarei et al., 2006). Por ello las
tcnicas clsicas como destilacin, extraccin y precipitacin empezaron a ser
remplazadas, ya que las tcnicas instrumentales son mucho ms sensibles y
selectivas proporcionando resultados muy precisos y con lmites de deteccin
ms bajos. Incluso permite el anlisis de grandes cantidades de muestras y, en
ocasiones, la automatizacin (Skoog D.A., 2005).

Para el anlisis de metales en aguas ambientales, de consumo y residuales,

estos se pueden determinar satisfactoriamente mediante espectrometra de
absorcin atmica con vapor fro (CV-AAS) (Dadfarnia et al., 2002),
espectrofotometra de absorcin atmica con llama o sin llama (AAS) (Moghimi
et al., 2011) y mediante tcnicas colorimtricas utilizando espectrofotometra
de absorcin molecular UV/VIS (Al-Kady & Abdelmonem, 2013; Lee & Choe,
2001; Romberg & Mller, 1997). Los lmites de deteccin de las primeras
tcnicas espectroscpicas son aproximadamente del mismo orden de
magnitud, partes por billn (ppb), mientras que la ltima a pesar de tener
lmites de deteccin ms altos, partes por milln (ppm), resulta una tcnica
ampliamente utilizada debido a su simplicidad, rapidez, bajo costo y de amplia
aplicacin (Al-Kady & Abdelmonem, 2013; Zarei et al., 2006). Dado que se
dispone de un buen nmero de reactivos cromognicos con altas
sensibilidades, es por ello que la espectrofotometra sigue siendo un mtodo
indispensable para la determinacin de Mercurio.

Las limitaciones que se presentan en los laboratorios de investigacin, debida a

la falta de instrumentacin, se pueden superar implementando o desarrollando
mtodos alternativos. Por lo tanto, se puede realizar algunos cambios en
metodologas instrumentales utilizadas cuyo costo sea aceptable y de este
modo poder determinar la concentracin de un analito. Generalmente para el
anlisis de metales en muestras acuosas, se hace empleo de sustancias
qumicas que reaccionen selectivamente con el analito en estudio, ya sea para
concentrarlo o mejorar la sensibilidad del anlisis.

Hoy en da, el desarrollo e implementacin de nuevos mtodos analticos,

deben reducir la cantidad de reactivos txicos utilizados ya que los desechos
producidos son tan importantes como cualquier otra funcin analtica. Algunos
mtodos analticos utilizan reactivos o generan desechos qumicos que son
ms txicos que los analitos de inters. Por lo tanto, hay una gran necesidad
para desarrollar mtodos que son menos perjudiciales para la salud humana y
el medio ambiente (Al-Kady & Abdelmonem, 2013). El desarrollo de mtodos
alternativos de anlisis trae como principal beneficio el estudio de un mayor
nmero de sustancias pues, en ocasiones, la falta de instrumentacin impide el
anlisis de determinados analitos que, debido a su naturaleza, requieren de
tcnicas ms complejas y costosas que las usuales (Lee & Choe, 2001).

1.1.1

Espectrofotometra UV-Vis.

Esta tcnica de fcil acceso, es aplicada para la determinacin de metales

desde hace muchos aos, a pesar de que, presenta ciertas dificultades para la
determinacin de los mismos, particularmente por su poca selectividad y baja
sensibilidad (Snchez Contreras, 2010). La investigacin de diferentes
complejos inorgnicos donde se han evaluado un buen nmero de agentes
quelantes, mediante el uso de surfactantes han permitido mejorar la
selectividad y sensibilidad disminuyendo los lmites de deteccin (Cestari,
Vieira, Lopes, & da Silva, 2004; Fu-Sheng & Fang, 1983; Sarker & Ullaha, 2013;
Soomro, Ahmed, & Memon, 2011; Thakur & Deb, 1999; Varshney, Rafiquee, &
Somya, 2008). Por lo tanto, con objeto de disponer de esta tcnica como
sistema de control para la determinacin de Mercurio se pondr a punto una
metodologa para la determinacin por espectrofotometra UV-Vis empleando
ditizona como agente cromognico en un medio micelar. Por consiguiente esto
permitir mejorar la sensibilidad del mtodo, como lo reportan diferentes
estudios para metales empleando ditizona y medios micelares utilizando
surfactantes (Ingman, 1971; Michalska & Kowal, 1985; Romberg & Mller,
1997; Ueno et al., 1979).

1.1.2

Principios de la espectrofotometra de absorcin molecular UV/VIS.

La espectroscopia emplea la interaccin de la radiacin electromagntica con

la materia, en este caso al estimular el analito que se encuentra en su estado
de energa ms bajo, estado fundamental, puede ocurrir ausencia de absorcin
o una absorcin parcial. La absorcin es una propiedad muy especfica de la

estructura molecular de los diferentes tipos de materiales y cuanto ms

mviles o ms dbilmente unidos estn los electrones, menor ser la magnitud
correspondiente a la diferencia entre los dos estados energticos moleculares;
correspondientemente, menor ser la frecuencia de absorcin y mayor la
longitud de onda. As pues, la absorcin de la radiacin atena el haz de luz
electromagntica en concordancia con la ley de absorcin que se describe a
continuacin (Skoog D.A., 2005).

La ley de absorcin, tambin llamada ley de Beer-Lambert, indica

cuantitativamente la forma en que el grado de atenuacin depende de la
concentracin de las molculas absorbentes y de la longitud de trayecto en
que ocurre la absorcin. Segn la ley de Beer, la concentracin de una
sustancia en solucin es proporcional a la absorbancia (A) de la disolucin.
Cuando una radiacin monocromtica pasa a travs de una disolucin
homognea en una celda, la intensidad de la radiacin emitida depende de la
longitud de la celda (b) y de la concentracin (c) de la disolucin. Como se
expresa en la ecuacin 13.

A=log

P0
=bc Ecuaci n 13
P

( )

Aqu, es la constante de proporcionalidad llamada absortividad molar, dado

que la absorbancia es una cantidad sin unidades, la absortividad tiene las
siguientes unidades Lmol-1cm-1.

Dadas las variaciones de la absortividad segn las condiciones de medida, es

aconsejable calcular su valor en trabajos cuantitativos. As pues, se utilizan
soluciones patrn del analito en el mismo disolvente y a temperatura similar
para obtener la absortividad en el momento de anlisis, posteriormente puede
ser utilizada para el anlisis de muestras desconocidas bajo las mismas
condiciones de anlisis una vez graficada la curva de calibracin. Para asegurar
la fiabilidad de los resultados, estos pueden acompaarse de un anlisis
estadstico que cuantifica los errores asociados a cada punto de la recta, a la
pendiente y ordenada en el origen de la recta (Skoog D.A., 2005).

Al proceso de establecer, tanto de manera cualitativa como cuantitativa, los

errores y la incertidumbre de la medicin se le denomina proceso de validacin
del mtodo analtico. Gracias a este proceso se asegura que cada
determinacin de la concentracin del analito en estudio es la mejor

estimacin del valor real y que esta se encuentra dentro de ciertos lmites de
confianza, establecidos experimentalmente a travs de la interpretacin
analtica y de las herramientas estadsticas.

1.1.3

Especies absorbentes.

La absorcin de radiacin ultravioleta y visible por parte de las molculas

ocurre en una o ms bandas de absorcin electrnicas cada una de las cuales
se componen de transiciones de un electrn del estado fundamental a uno de
los muchos estados de energa vibratoria y rotacional relacionada con cada
estado de energa electrnica excitado. La absorcin de radiacin por
molculas orgnicas en la regin de la longitud de onda entre 180 y 780 nm
resulta de la interaccin de los fotones y electrones que participan de manera
directa en la formacin de enlaces o que se localizan en torno a tomos como
los de oxgeno, azufre, nitrgeno y halgenos (Skoog D.A., 2005).

Por ejemplo, sistemas de enlaces simples tienden a exhibir transiciones

electrnicas desde orbitales sigma enlazantes a sigma antienlazantes (*) y
ocasionalmente transiciones de electrones no enlazantes a orbitales sigma
antienlazantes (n*), siempre que estos electrones puedan verse
involucrados.

En la regin UV/VIS son comunes las transiciones de orbitales pi a orbitales pi

antienlazantes (*) y transiciones de electrones no enlazantes a orbitales pi
antienlazantes (n*) (Marios & Mercedes, 2011; Pino & Prez, 1983). Por lo
tanto, en la estructura de compuestos cromoforos debe presentar enlaces
dobles (como en los etilenos, acetilenos y carbonilos); pares de electrones
libres de heterotomos asociados a enlaces dobles (grupos carbonilos, nitro y
azo) y enlaces simples junto a heterotomos con pares de electrones libres
(alcoholes, amidas y agua) respectivamente. Existen otros grupos llamados
auxcromos; estos son grupos que no exhiben absorcin por s mismos, pero s
pueden afectar la longitud de onda o la intensidad de la banda de absorcin del
cromforo.

Los metales de transicin tienen orbitales d incompletos y normalmente

exhiben bandas de absorcin en la regin UV/VIS. La longitud de onda de las
transiciones d-d dependen del metal involucrado (nmero de electrones d
inicialmente presentes), el nmero de grupos coordinados, la basicidad de los

tomos donadores de electrones en el ligando y de la geometra de los grupos

coordinados (Pino & Prez, 1983).

Adicionalmente, la habilidad de los metales de formar complejos, en especial

los elementos de transicin, con molculas orgnicas e inorgnicas que
absorben en la regin visible, proporciona la base para el anlisis
espectrofotomtrico cuantitativo. Las absorciones se deben al movimiento de
electrones entre los niveles de energa del complejo metal-ligando. Los
ligandos ms utilizados en estas determinaciones han sido la ditizona,
compuestos azo, ditiocarbamato y tiocianato (Marios & Mercedes, 2011).

1.2
1.2.1

DITIZONA O DIFENILTIOCARBAZONA.
Propiedades fsicas y qumicas.

La 1,5-Difenil-3-tiocarbazona es un reactivo orgnico cuya frmula molecular es

C6H5(NH)2CS(N)2C6H5, generalmente se conoce como difeniltiocarbazona o
ditizona, se abrevia como H2Dz, tiene una masa molecular de 256,33 g/mol,
presenta una apariencia de cristales de tipo ajuga color marrn oscuro, es
inodoro y su punto de fusin es de 168C . Su estructura molecular es la
mostrada en la Figura 3.

Figura 3: Estructura molecular ditizona (Carrasquero-Durn, Domnguez, &

Acosta, 2004).
A partir de la figura anterior se observa que su estructura molecular exhibe
tres grupos funcionales, en primer lugar el grupo tiocarbonilo (1) presenta
transferencia electrnica de tipo - que involucran orbitales 3p transfirindole
estabilidad a la molcula. El segundo grupo funcional importante es el grupo
azo (2) que est constituido por una unin doble entre tomo de nitrgeno (-

N=N-) y el tercer grupo funcional que determina el comportamiento qumico de

la ditizona est representado por ambos anillos aromticos (3), lo cual adems
de conferirle estabilidad a la molcula por efectos resonantes, contribuye junto
con el grupo azo las propiedades de coloracin que exhibe el compuesto
(Carrasquero-Durn et al., 2004).

1.2.2

Solubilidad de la ditizona.

La ditizona por ser una estructura molecular orgnica es insoluble en

disolventes polares, pero se disuelve en la mayora de los solventes orgnicos.
Su solubilidad en cloroformo a temperatura ambiente es aproximadamente de
2g/100 mL, y en tetracloruro de carbono alrededor de 0.05g/100mL. Para fines
analticos, estos solventes son los ms ampliamente empleados en la
preparacin de soluciones de ditizona, son exclusivamente usados para anlisis
espectrofotomtrico de metales pesado e incrementar la sensibilidad de
anlisis (Hernandez, 2006; Irving & Nowicka-Jankowska, 1971; Kiwan, 1997;
Litman, Williams, & Finston, 1977). Pero el uso de estos disolventes presenta
una desventaja relacionada con la contaminacin ambiental, debido a que son
disolventes orgnicos clorados muy txicos.

ltimamente existen diferentes trabajos de investigacin informando acerca de

la solubilidad de la ditizona y algunos de sus complejos en medio acuoso por
agregados micelares de surfactantes. Esta propiedad se ha utilizado para el
anlisis espectrofotomtrico de algunos metales (Fu-Sheng & Fang, 1983;
Hernandez, 2006; Khan, Ahmed, & Bhanger, 2005; Luca., 2013; Shar &
Bhanger, 2001). Estos mtodos de anlisis de metales pesados son procesos
alternativos a los mtodos de extraccin con solventes orgnicos clsicos,
adems estos procesos presentan una variedad de ventajas, entre las que se
encuentran la eliminacin de solventes orgnicos txicos, procesos menos
tediosos, mayor eficiencia en el anlisis de los analitos de inters, menor costo
entre otros. Finalmente estos procesos de anlisis contribuyen con el medio
ambiente a la determinacin de metales pesados en matrices acuosas.

La solucin de la ditizona en solventes orgnicos exhibe dos picos, los que

sugieren la existencia de dos formas tautomericas en equilibrio, ver figura 4. El
cambio mostrado en la altura de los picos de los espectros de absorcin visible,
de un solvente a otro, indica un cambio en las proporciones de las formas
denominadas tiol y tiona (Acua Ruiz, 2012; Khan et al., 2005; Pemberton &
Buck, 1981).

Figura 4: Equilibrio tautomrico de la ditizona en solucin (Acua Ruiz,

2012).

El pico de absorcin de mayor longitud de onda corresponde a la forma tiona,

el cual est asociado a transiciones electrnicas de tipo -* en el grupo azo (
N=N-) a aproximadamente 580 nm (Carrasquero-Durn et al., 2004). En la
siguiente figura 5 se puede observar la diferencia de los dos picos
correspondientes a las formas tautomericas de la ditizona en un disolvente
orgnico y muestra la estabilidad de la ditizona con respecto al tiempo.

Figura 5: Espectro de la ditizona (Hernandez, 2006).

Las soluciones de ditizona en solventes orgnicos presentan color verde,

presentando dicrosmo a concentraciones altas (refleja luz verde y transmite

luz roja). Es un reactivo inestable a la luz, al calor, a oxidantes y an al oxgeno

del aire; oxidndose fcilmente a bis 1,5-difenilformazan-3-il-disulfuro (Acua
Ruiz, 2012; Hernandez, 2006; Marios & Mercedes, 2011; Pemberton & Buck,
1981; Pino & Prez, 1983). El producto de oxidacin presenta una coloracin
amarilla. La estructura mostrada en la Figura 6 corresponde a uno de los
compuestos de oxidacin anteriormente mencionado. Igualmente, las
sustancias muy oxidantes, en el medio donde se encuentra disuelta, tambin
pueden oxidarla. Por ejemplo, en la literatura se mencionan algunos agentes
oxidantes de la ditizona, como el hierro (II), el yodo y el talio (III).

Figura 6: Estructura de uno de los productos de oxidacin de la

ditizona (Marios & Mercedes, 2011).

1.2.3

Quelatos metlicos con Ditizona.

La ditizona es un ligante muy utilizado para la separacin de iones metlicos

en solucin, o para la determinacin de los mismos en muestras acuosas,
formando complejos coordinados de tipo quelato coloreados, que han servido
de base para el desarrollo de mtodos de anlisis espectrofotomtricos en la
regin visible del espectro electromagntico (Ahmed & Alam, 2003; Das & Sen,
2012). Los metales ms utilizados son Fe, Co, Ni, Cu, Zn, Pd, Ag, Cd, Hg, Pb,
entre otros. La mayora de sus iones en disolucin acuosa forman sulfuros
insolubles. Adicionalmente, el procedimiento para medir la absorbancia de los
complejos de ditizona implicaba la extraccin del complejo en un solvente
orgnico (Cooper & Sullivan, 1951; Hernandez, 2006; Hibbard, 1937; Litman et
al., 1977). Los quelatos metlicos de ditizona poseen una baja polaridad,

permitiendo una buena separacin cuantitativa en una fase orgnica con un

nmero adecuado de extracciones. No obstante, dicho procedimiento resulta
tedioso, consume tiempo y no es selectivo. Adems, el cloroformo y el
tetracloruro de carbono se encuentran en la lista de solventes declarados por
la EPA como cancergenos (Marios & Mercedes, 2011).

La Ditizona es bien conocido como un reactivo muy selectivo y sensible para

Mercurio (II), formando complejos de color extrables con alto valores de
absortividad molar (Romberg & Mller, 1997; Ueno et al., 1979).

Las estructuras de los ditizonatos metlicos ha sido determinada mediante el

anlisis de rayos X de los cristales de estos complejos (Irving & NowickaJankowska, 1971; Marios & Mercedes, 2011; Meriwether, Breitner, & Sloan,
1965; Michalska & Kowal, 1985). Dichos estudios demostraron que la molcula
est conformada por dos ligandos bidentados de ditizona coordinados
tetradricamente al ion metlico. Esta unin se realiza mediante un tomo de
azufre y uno de nitrgeno de cada residuo de ditizona, tal como se aprecia en
la Figura 7.

Figura 7: Complejo metalico ditizona-Mercuri(II) (Marios & Mercedes,

2011).

Otra de las caractersticas de los complejos metlicos formados con la ditizona

es la sensibilidad al pH, dado que la ditizona posee un equilibrio cido-base
que cambia la forma qumica de la molcula, la estabilidad y el tipo de enlace
de coordinacin metal ligando. Esta propiedad permite controlar la
selectividad y la sensibilidad del analito de inters encontrando las condiciones
adecuadas de pH, ver figura 8 y tabla 1.

Figura 8: Equilibrio cido base ditizona (Snchez Contreras, 2010).

Los complejos metlicos se forman cuando algunos metales remplazan a uno o

a ambos hidrgenos cidos de la ditizona, los que actualmente se conocen
como ditizonatos primarios y secundarios (Khan et al., 2005; Michalska &
Kowal, 1985; Snchez Contreras, 2010).

Algunos autores sealan la existencia de complejos primarios y secundarios

entre algunos metales y la ditizona. Los primarios son aquellos donde el
complejo se forma a partir de la primera ionizacin de la ditizona, y los
secundarios son aquellos donde la ditizona libera sus dos iones hidronio. La
formacin de este segundo tipo de complejo se da a valores altos de pH y ante
la deficiencia de ligando (Irving & Nowicka-Jankowska, 1971), donde el segundo
protn es reemplazado. Los metales que pueden formar este tipo de complejo
son: Cu, Ag, Au, Bi, Pd y Hg. De estos, el ditizonato primario de mercurio es
color amarillo naranja, mientras que el secundario es morado (Marios &
Mercedes, 2011)