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ANLISIS MICROBIOLGICO DE AGUA

Welington Vivanco
Laboratorio De Microbiologa. Facultad De Ciencia E Ingeniera En Alimentos. Universidad
Tcnica De Ambato.
RESUMEN
En la prctica se realiz anlisis microbiolgico del agua especficamente de agua empozada
utilizando para esto (agar Chromocult), el cual es un medio selectivos realizo el recuento de
coliformes tanto totales y fecales con la ayuda de calorimetra ya que las colonias de coliformes
totales son rojo salmn y las coliformes fecales son azul violeta, los niveles de contaminacin
encontrados fueron altos
INTRODUCCIN
Los miembros de la familia Enterobacteriaceae son bacilo Gram negativos, inmviles o mviles
con flagelos. Peritricos se desarrollan en medios artificiales y todas las especies forman cido o
cido y gas a partir de glucosa. Su composicin antignica es un mosaico que interrelaciona
serolgicamente varios gneros y aun familias, muchas de estas bacterias son parsitos
de animales y otros patgenos (Alarcn, 2001).

Para enjuiciar la calidad de las aguas se recorre a parmetro fsico qumico y biolgico. Los
parmetros bacteriolgicos tienen mayor importancia para dictmenes higinicos; es preciso hallar
el nmero de grmenes saprfitos o de coli y de bacterias procedentes del intestino humano
como indicadores de la contaminacin.
Conviene destacar la importancia que tienen las cifras de coli y coliformes, pertenecientes a las
enterobacterias que fermentan lactosa con produccin de gas y cido (Prescott, Harley, Klein, & de
la Rasilla, 2004)

Los

coliformes

reagrupan

ciertas

especies

bacterianas

pertenecientes

la

familia

Enterobacteriaceae, de morfologa bacilar, Gram negativas, aerobias anaerobias facultativas,


oxidasa negativa, no espatuladas y que fermentan la lactosa con produccin de cido a 37C en 2448 horas.(Vandevenne & Ribes, 2002)
Las muestras que se tomarn para el anlisis deben ser representativas para poder determinar as su
calidad microbiolgica. Hay normas para las tomadas muestras de aguas segn sus distintas

procedencias (grifos, pozos, depsitos, lagos, ros, manantiales, etc.). Para su recogida debe
utilizarse frascos estriles y debe recolectarse cantidades comprendidas entre 500 y1000 ml. En
todos los casos los envases se llenarn por completo para excluirle aire (Rodriguez, 2010)

Teniendo en cuenta los parmetros mencionados en la prctica se busca analizar la muestra de agua
y as determinar si existe contaminacin o no tomando como referencia a los coliformes
METODOS Y MATERUIALES
Primeramente se procede a esterilizar los materiales a utilizar como tubos de ensayo, cajas Petri y
puntas utilizando un autoclave (All American, USA), luego se prepara agar Chromocult (Merck,
Alemania), este agar no se autoclave, despus se procede con las diluciones seriadas de la muestra
que se obtuvo hasta 10-2 y se inocula 0,1 ml por mtodo de difusin en placa utilizando de bolas
de ltex, este proceso se lo realiza en la cmara de flujo laminar (Streamline, USA). Luego se
incuba en una estufa (Memmert, Alemania) a 30 por 24 horas, luego se realiza en conteo de
colonias y se identifica su coloracin con la finalidad de conocer que microorganismos se han
desarrollado.
RESULTADOS
De las muestras obtenidas de agua residual en dos lugares diferentes (alcantarilla e inodoro) se pudo
obtener diferentes colonias (tabla 1), de lo cual aplicando la ecuacin 1, se puede determinar
Ufc/ml, el cultivo selectivo Chromocult permite diferenciar enterobacterias, las cuales de acuerdo a
su color pueden ser azul-violeta (E. coli), rojo-salmn (Coliformes totales) y blanco o turquesa
(otros gramnegativos).
Clculo de ufc/ml en muestras de agua residual sobre agar Chromocult
Ec. 1
Dnde:
N: # de colonias (30-300)

ufc NFD
=
ml
Vi

FD: factor de dilucin


Vi: volumen inoculado
Ufc/ml: unidades formadoras de colonias por mililitro de dilucin

ufc 9410 0
=
ml
0,1 ml
ufc
3
=9 , 410
ml

Tabla 1. Colonias presentes en medio de Agar Chromocult


Dilucin
Original
10-1
10-2

Nmero de colonias
Blancas
93
5
---

Rojas
13
-----

Elaborado por: Vivanco W. FCIAL.UTA.2014.


Fuente: Laboratorio de Microbiologa I.
En la tabla 1 se muestran valores de Ufc/ml de las muestras, se calcul las ufc/ml solamente para la
dilucin original ya que esta estuvo en el rango de 30 a 300.

DISCUSIN
Las enfermedades entricas causadas por bacterias coliformes se transmiten casi exclusivamente
por contaminacin de origen fecal en aguas y alimentos ya que este tipo de microorganismos se
encuentra radicado de mamferos y animales de sangra caliente, la contaminacin va suministros de
agua es la contaminacin porcentualmente ms importante, habiendo sido anteriormente de
epidemias masivas como fiebre tifoidea y clera, de aqu la importancia de anlisis de bacteria en
aguas de consumo para comprobar la inexistencia de este tipo de bacterias (Prescott et al., 2004)
Los coliformes son bacilos Gram negativos fermentadores de lactosa con produccin de cido y gas
(Koneman & Allen, 2008)
Los coliformes fecales tienen gran significado sanitario y son los que ms interesan en el anlisis
microbiolgico (ICCA, 2001)

Una de las caractersticas de los coliformes fecales es que tiene la capacidad para desarrollarse en
presencia de sales biliares, resistentes a la penicilina pero son sensibles a los cidos.
Tanto coliformes totales como fecales no deben estar presentes en un agua de consumo (OMS.
ACH) lo cual nos indica que el agua empozada no es apta para el consumo ya que podra traer
graves peligros para la salud si la bebemos debido a los coliformes fecales presentes en la misma,
un agua de consumo debe estar libre de estos microorganismos adems de presentar buenas
caractersticas fsicas para que sea aceptable su consumo, en el caso del agua analizada presentaba
ufc/ ml igual a 9,410

lo cual muestra claramente que se sale de la norma establecida

Al utilizar medio selectivo como el medio Chromocult, permite mediante colorimetra diferenciar
entre coliformes totales rojo-salmn y coliformes fecales de coloracin azul-violeta, el cual es el
principal representante Escherichia coli (Koneman & Allen, 2008),
CUESTIONARIO

Qu son las bacterias coliformes?


Los coliformes totales son las Enterobacteriaceae lactosa-positivas y constituyen
un grupo de bacterias que se definen ms por las pruebas usadas para su
aislamiento

que

por

criterios

taxonmicos.

Pertenecen

la

familia

Enterobacteriaceae y se caracterizan por su capacidad para fermentar la lactosa con


produccin de cido y gas, ms o menos rpidamente, en un periodo de 48 horas y
con una temperatura de incubacin comprendida entre 30-37C (Madigan,

Martinko, & Parker, 2003)


A ms de las bacterias coliformes, que otros microorganismos se determinan
durante un anlisis de agua.
La inocuidad del agua no depende nicamente de la contaminacin fecal. Algunos
microorganismos proliferan en las redes de distribucin de agua (por ejemplo,
Legionella), mientras que otros se encuentran en las aguas de origen (el dracnculo,
Dracunculus medinensis) y pueden ocasionar epidemias y casos aislados. Para
otros microbios (por ejemplo, las cianobacterias txicas) deben adoptarse medidas
de gestin especficas. En algunos casos, puede ser adecuado complementar el
recuento de coliformes con mediciones de otros grupos de organismos, por
ejemplo, los estreptococos fecales, el inters se centra en los microorganismos
patgenos, que son los diferentes tipos de bacterias, virus, protozoos y otros
organismos, que transmiten enfermedades como, en el caso de las bacterias se

analiza la presencia de coliformes totales, coliformes fecales, estreptococos fecales

y clostridios sulfito-reductores (Organization, 1987).


Durante un anlisis microbiolgico del agua, aislamos e identificamos los
microorganismos patgenos o nicamente averiguamos si existe contaminacin
de origen fecal? Explique su respuesta.
Solo analizar la presencia de coliformes fecales pues la existencia de estos es

parmetro suficiente para saber que el agua est contaminada


Consulte la norma o legislacin ecuatoriana y otra norma internacional,
comprelas con los resultados obtenidos y emita una conclusin que permita
comprender el porqu de las diferencias o similitudes.
La norma tcnica INEN NTE 1108 menciona que el lmite mximo permisible es
menor a 1Ufc/100ml de muestra, es decir 0,01 Ufc/ml, lo que segn la norma no
debe presentar formacin de colonias para coliformes totales y fecales. Segn la
Norma ACH de la OMS, no debe presentar formacin de colonias para coliformes
totales ni mucho menos fecales, segn NMP es de 200/100ml de muestra.
Como el reglamento interno ecuatoriano se rige a otro estatuto internacional como
es la OMS, es lgico que deba poseer similitudes en cuanto a su rango de
salubridad, la ausencia de coliformes totales y fecales es un indicador de la
inocuidad del agua de consumo, los resultados obtenidos para coliformes totales en
agua de alcantarilla fueron de 4,7x103Ufc/ml y para coliformes fecales (E. coli) fue
de 3,4x103Ufc/ml, lo que indica que esta agua no est apta para el consumo
mientras que para el agua de inodoro el nmero de Ufc fue de cero, debido a la

diminuta cantidad de colonias formadas.


Los parmetros de calidad microbiolgica del agua dependen de parmetros
como el destino final del agua, en este sentido indique que parmetros debe
cumplir el agua para uso domstico o potable, acuicultura, depurada para el
vertido.
Grafico 2.- Parmetros de calidad para agua de consumo.

Fuente: Norma INEN 1108, 2011.

CONCLUSIONES
En la muestra analizada se comprob la existencia de coliformes fecales lo cual quiere decir que el
agua incumple con la norma INEN 1108, el agua puede tener otros usos distintos a la de ser
destinada para el consumo, es muy importante conocer la presencia de este tipo de bacterias sea en
agua como en otro tipo de alimentos ya que pueden ser causantes de epidemias masivas.
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