TECNICO SUPERIOR UNIVERSITARIO

EN NANOTECNOLOGIA

UNIVERSIDAD TECNOLOGICA DE TECAMAC.

INGENIERIA EN NANOTECNOLOGIA

MATERIA: QUIMICA ANALITICA

CROMATOGRAFIA

ALUMNO: REYES CRISOSTOMO DAVID AUGUSTO

GRUPO: 3NTA1

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TABLA DE CONTENIDO
Tabla de contenido
Cromatografa.............................................................................................................................3
Tipos de cromatografa...............................................................................................................3
Cromatografia en columna......................................................................................................3
Cromatografa plana................................................................................................................4
Cromatografa de liquidos.......................................................................................................5
Cromatografa de gases.............................................................................................................6
Elucin........................................................................................................................................7
Fase mvil...................................................................................................................................7
Fase estacionaria........................................................................................................................7
Constante de Distribucin...........................................................................................................8
Tiempo de retencin...................................................................................................................8
Factor de Selectividad................................................................................................................9
Altura de Plato.............................................................................................................................9
Difusin Longitudinal...................................................................................................................9
Resolucin de una Columna.....................................................................................................10
Eluyente....................................................................................................................................10
Efectos trmicos en la absorcin de gases..............................................................................10
Nmero de platos......................................................................................................................12

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Cromatografa
La espectroscopia es el estudio del espectro luminoso de los cuerpos, con aplicaciones en
qumica, fsica y astronoma, entre otras disciplinas cientficas. El anlisis espectral en el cual
se basa, permite detectar la absorcin o emisin de radiacin electromagntica de ciertas
energas, y relacionar estas energas con los niveles de energa implicados en una transicin
cuntica.
Las tcnicas cromatogrficas

son muy variadas, pero en todas ellas hay una fase mvil que

consiste en un fluido (gas, lquido o fluido supercrtico) que arrastra a la muestra a travs de
una fase estacionaria que se trata de un slido o un lquido fijado en un slido. Los
componentes de la mezcla interaccionan en distinta forma con la fase estacionaria. De este
modo, los componentes atraviesan la fase estacionaria a distintas velocidades y se van
separando. Despus de que los componentes hayan pasado por la fase estacionaria,
separndose, pasan por un detector que genera una seal que puede depender de la
concentracin y del tipo de compuesto.

Tipos de cromatografa
Cromatografia en columna
la cromatografa en columna es quizs el mtodo ms general, utilizado para la separacin,
a la vez que para la purificacin, de diferentes compuestos orgnicos que se encuentren en
estado slido o lquido.
En este tipo de cromatografa, la fase estacionaria utilizada, es decir, el absorbente, se
coloca en el interior de una columna de vidrio, la cual finaliza con una llave para controlar el
paso de sustancias al exterior de la columna. La fase estacionaria se impregna con el
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eluyente o fase mvil. Seguidamente la mezcla orgnica que nos interesa separar la
depositamos por la parte superior de la fase estacionaria, y as la fase mvil podr ir
atravesando el sistema.
Los compuestos que se encuentran disueltos en la fase mvil, poco a poco saldrn de la
columna cromatogrfica, y se recogen en fracciones. Las fracciones menos polares, que son
por lo general las que se retienen poco o nada en el absorbente, sern las primeras en salir
de la columna. En cambio, las sustancias ms polares, quedan retenidas por ms tiempo en
el absorbente, y a menudo es necesario el uso de diferentes disolventes con la finalidad de
incrementar su polaridad para que sean arrastradas por estos.

Cromatografa plana
La cromatografia plana es un tipo de cromatografia liquida en la que la fase estacionaria esta
extendida sobre la superficie de un plano y la fase mvil fluye a travs de ella. La fase mvil
siempre es un liquido, mientras que la fase estacionaria puede ser un liquido soportado en un
slido (cromatografia de particion) o un slido absorbente (cromatografia de adsorcin,
cambio ionico o exclusin). El flujo de la fase mvil se produce:
Por capilaridad (cromatografia horizontal y ascendente)
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Por capilaridad y gravedad (cromatografia descendente)

Esta clase de cromatografia es considerada la ms simple de todas las tcnicas
cromatograficas. La diferencia principal con la cromatografia en columna es de tipo tcnico,
es decir, difieren en la forma de soportar la fase estacionaria. En lo que se refiere al
fenmeno en que se fundamenta la separacin, es el mismo para ambas tcnicas
En la cromatografa plana, la disolucin de la muestra a separar se sita sobre el plano que
contiene la fase estacionaria en forma de mancha, o a veces de banda, a corta distancia de
uno de los extremos de dicho plano. Una vez seca la mancha o banda, el extremo del plano
prximo a la misma se pone en contacto con la fase mvil, manteniendo todo el sistema
cromatogrfico en una cmara cerrada. La separacin se produce por migracin diferencial
de los componentes de la muestra en la direccin en que se mueve la fase mvil.

Cromatografa de liquidos
La Cromatografa lquida, tambin conocida como Cromatografa de lquidos, es una
tcnica de separacin y no debe confundirse con una tcnica cuantitativa o cualitativa de
anlisis. Es una de las tcnicas analticas ampliamente utilizadas, la cual permite separar
fsicamente los distintos componentes de una solucin por la absorcin selectiva de los
constituyentes de una mezcla.

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En toda cromatografa existe un contacto entre dos fases, una fija que suele llamarse fase
estacionaria, y una mvil (fase mvil) que fluye permanente durante el anlisis, y que en este
caso es un lquido o mezcla de varios lquidos. La fase estacionaria por su parte puede ser
almina, slice o resinas de intercambio inico que se encuentran disponibles en el mercado.
Los intercambiadores inicos son matrices slidas que contienen sitios activos (tambin
llamados grupos ionognicos) con carga electrosttica (positiva o negativa). De esta forma, la
muestra queda retenida sobre el soporte slido por afinidad electrosttica. Dependiendo de la
relacin carga/tamao unos constituyentes de la mezcla sern retenidos con mayor fuerza
sobre el soporte slido que otros, lo que provocar su separacin. Las sustancias que
permanecen ms tiempo libres en la fase mvil, avanzan ms rpidamente con el fluir de la
misma y las que quedan ms unidas a la fase estacionaria o retenidas avanzan menos y por
tanto tardarn ms en salir o fluir. ste es el principio fundamental de la cromatografa. Un
ejemplo notable es la cromatografa de intercambio inico. Las columnas ms utilizadas son
las de slice.

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Cromatografa de gases
La cromatografa de gases es una tcnica cromatogrfica en la que la muestra se volatiliza y
se inyecta en la cabeza de una columna cromatogrfica. La elucin se produce por el flujo de
una fase mvil de gas inerte. A diferencia de los otros tipos de cromatografa, la fase mvil no
interacta con las molculas del analito; su nica funcin es la de transportar el analito a
travs de la columna.
Existen dos tipos de cromatografa de gases (GC): la cromatografa gas-slido (GSC) y la
cromatografa gas-lquido (GLC), siendo esta ltima la que se utiliza ms ampliamente, y que
se puede llamar simplemente cromatografa de gases (GC). En la GSC la fase estacionaria
es slida y la retencin de los analitos en ella se produce mediante el proceso de adsorcin.
Precisamente este proceso de adsorcin, que no es lineal, es el que ha provocado que este
tipo de cromatografa tenga aplicacin limitada, ya que la retencin del analito sobre la
superficie es semipermanente y se obtienen picos de elucin con colas. Su nica aplicacin
es la separacin de especies gaseosas de bajo peso molecular. La GLC utiliza como fase
estacionaria molculas de lquido inmovilizadas sobre la superficie de un slido inerte.
La GC se lleva a cabo en un cromatgrafo de gases. ste consta de diversos componentes
como el gas portador, el sistema de inyeccin de muestra, la columna (generalmente dentro
de un horno), y el detector.

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Elucin

Fase mvil
Fase movil generalmente liquido (o gas) que debe interaccionar con la muestra arrastrandola
a traves de la fase estacionaria.

Fase estacionaria
Fase estacionaria, generalmente solida, su funcion es retener la muestra, posee cierta
porosidad.

Constante de Distribucin
Los equilibrios de distribucin implicados en cromatografa se describen por ecuaciones
simples que suponen la transferencia de un analito entre las fases estacionaria y mvil. As
para una especie A
La constante de este equilibrio K se denomina como la constante de distribucin y se define
como:
k=

CS
CM

Donde:
CS= Concentracin molar de analito en la fase estacionaria
CM= concentracin molar de analito en la fase mvil.

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Tiempo de retencin
Tiempo de retencin tR: tiempo que tarda cada sustancia en abandonar el sistema
cromatogrfico.

Factor de Capacidad
Es un parmetro ( k ) que se utiliza para describir las velocidades de migracin de los
analitos en las columnas y se interpreta considerando que mientras mayor sea el valor de
este factor menor es la velocidad de migracin de los solutos en la columna. Para una
especie A, el factor de capacidad k A se define como:
k A=

KAVS
VM

Donde:
KA= constante de distribucin
VS= volumen de la fase estacionaria
VM= es el volumen de la fase mvil.

Factor de Selectividad
El factor de capacidad ( ) de una columna, es un trmino que define que tan selectiva es
una columna para separar dos picos.
Entonces el factor de selectividad de una columna para dos especies A y B se define como:
=

KB
K

donde:
KB= factor de capacidad del compuesto B.
k A= factor de capacidad del compuesto A, que es el menos retenido.
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Altura de Plato
Mediante la altura equivalente de un plato terico (HEPTA), se puede hacer una comparacin
entre una columna de relleno y una de platos. A partir de este dato, se puede determinar cul
es la altura del relleno mediante el nmero de platos tericos. Esta magnitud se puede
determinar por la siguiente ecuacin:

Donde:
Z: altura del relleno.
N: nmero de platos tericos.

Difusin Longitudinal
Este es un trmino mas importante en cromatografa de gases. Se debe a que las molculas
del soluto se mueven en distintas direcciones en la fase estacionaria debido a la porosidad
de las partculas que la forman. Esto hace que algunas molculas del soluto salgan
retrazadas de la columna respecto a la mayora.

Resolucin de una Columna

La resolucin (RS) de una columna consiste en una medida cuantitativa de su capacidad
para separar dos analitos, esto si se toma en cuenta el ensanchamiento de los picos, as
como la magnitud de este valor si permite asegurar el distanciamiento de dos picos.

Donde:
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WA y WB= anchos de banda de las bandas A y B respectivamente.

Eluyente
Relativo a la capacidad de una sustancia para limpiar o diluir Eficiencia de una Columna.

Efectos trmicos en la absorcin de gases

Los efectos trmicos que pueden producir variaciones de la temperatura a lo largo de la
columna de absorcin se deben a:
El calor de disolucin del soluto (incluyendo calor de condensacin, calor de mezcla y calor
de reaccin) que puede dar lugar a la elevacin de la temperatura del lquido.
El calor de vaporizacin o condensacin del disolvente.
El intercambio de calor sensible entre las fases gas-lquido.
La prdida de calor sensible desde los fluidos hacia los dispositivos de enfriamiento interiores
o exteriores o a la atmsfera a travs de las paredes de la columna.
Elucin por gradiente: los distintos analitos son eludos con incremento de la composicin de
la fase mvil en la fase ORGANICA
Mtodo de Gradiente de Elucin: Es un trmino que se utiliza para describir el proceso
mendiante el cual se cambia la composicin de la fase mvil. Pueden efectuarse de dos
maneras:

A baja presin

A alta presin

Cuando se desarrolla un anlisis usando el mtodo de gradiente se debe tener presente dos
objetivos:

Obtener la mejor resolucin de los componentes de la muestra en el menor tiempo

posible.
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Asegurar alta precisin y exactitud.

Para obtener buenos resultados con el mtodo de gradiente debemos seguir cinco pasos
fundamentales:

Determinar la composicin inicial y final del solvente.

Ajustar el tiempo del gradiente.

Determinar la forma del gradiente (lineal, cncava o convexa).

Ajustar la velocidad del flujo para mejorar la resolucin.

Regresar a las condiciones iniciales la columna.

La bomba enva el solvente a travs de caos de dimetro pequeo, generalmente de acero

inoxidable, hacia la vlvula inyectora. Esta consiste en una vlvula de varias vas que permite
introducir en el flujo de solvente, la muestra contenida en un aro o loop de volumen calibrado.
Luego de que se produzca la separacin en la columna, los componentes de la mezcla
pasan por el detector. Este produce una seal elctrica proporcional a la cantidad de materia
y esa seal es enviada al registrador que realiza un grfico de intensidad en funcin del
tiempo (cromatograma). Idealmente, se trata de picos gaussianos y cada pico corresponde a
un componente de la muestra original. El integrador calcula adems el rea correspondiente
a cada pico, la cual es proporcional a la cantidad de sustancia.
Dado que los detectores de HPLC son no destructivos, es posible recuperar los productos
que salen de l. De esta manera, dependiendo del tamao del loop de inyeccin, de la
columna, y del tipo de bomba, es posible realizar adems de separaciones analticas,
cromatografas preparativas.
Criterios para la eleccin del solvente:

Disponible comercialmente

Precio

Pureza y Estabilidad. En la actualidad contamos con productos de calidad de pureza

cromatogrfica. Bajo contenido de impurezas.

Disolver la muestra

Misible con otros solventes para formar mezclas tiles

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No degradar o disolver la fase estacionaria

Tener baja viscosidad para reducir las cadas de presin

Ser compatible con el detector utilizado. Transparencia ptica (cuando se usan

detectores UV)

Filtracin y Desgasificacin de solventes

Determinacion de # de platos

Para conocer el nmero de platos de una columna de destilacin hay que tener en cuenta
las caractersticas de la alimentacin:
DESTILACIN BINARIA: en este caso se puede optar por varios mtodos, entre ellos:
- Sorel: se trata de un mtodo analtico en el que se van realizando balances de materia
y energa plato a plato.
- Lewis: es una simplificacin del mtodo anterior. Se aplica la condicin de reflujo molar
constante, esto es posible cuando los calores de vaporizacin de los componentes de la
alimentacin son aproximadamente iguales.
- Mc Cabe-Thiele: consiste en un mtodo grfico y es el ms extendido acadmicamente
por su simplicidad.

Nmero de platos
Una caracterstica importante de un sistema crornatogrfico es su eficiencia, expresada
como una cantidad adimensional y llamada nmero efectivo de platos, Nef .
Refleja el nmero de veces que el soluto se reparte entre las dos fases durante su pas a
travs de la columna. El nmero efectivo de platos se puede definir del cromatograma de una
sola banda, como

Nef = L/H = (tR/)2 Donde L es la longitud de la columna, H es la altura del plato,

tR es el tiempo ajustado para la elucin del centro de la banda y es la variancia de la
banda en unidades de tiempo. El ancho en la base del pico, (determinado con las
intersecciones de las tangentes a los puntos de inflexin con la lnea base), es igual a
cuatro desviaciones estndar suponiendo una distribucin gaussiana ideal (Fig. 2.2).
La porcin superior del pico determina la lnea tangente, lo que minimiza cualquier
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contribucin de un segmento con coleo (o cabeceo).

Frecuentemente es ms sencillo medir el ancho a la mitad de la altura del pico
W1/2. y de ah obtener =0.425W1/2
La medicin del ancho del pico a la mitad de su altura es menos sensible a la asimetra
del pico, ya que el coleo frecuentemente se muestra por debajo de la
localizacin de la medida.
El nmero de platos es solamente una indicacin de si ha sido bien rellenas una
columna; no puede predecir adecuadamente el rendimiento de la columna bajo todas las
condiciones. Est diseado para ser principalmente una medida de las contribuciones
cinticas al ensanchamiento de la banda. Otras contribuciones al ancho del pico como
los efectos extracolumna y factores termodinmicos (como el coleo de los picos que se
discutir a continuacin), pueden desempear un papel importante.

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